第二章 神経障害性疼痛への TRPV1 チャネルの関与
2.2 結果
31
32
Figure 19 Double-labeling immunohistochemistry of TRPV1 and NF200 in L4-L5 DRG neurons from rats with CCI.
The L4-L5 DRG neurons were obtained from CCI rats at 2 weeks after surgery. (A)
NF200-immunoreactive neurons (green). (B) TRPV1-immunoreactive neurons (red). (C) Merged image: double-labeled neurons (arrowheads) appear as yellow staining. Scale bar: 50 μm.
Table 2 The number of DRG neurons that express TRPV1 and/or NF200 in rats with CCI.
(A) Positive for TRPV1 only, (B) TRPV1 and NF200 double-labeled, (C) Positive for NF200 only.
(A) NF200 (B) TRPV1
(A)
TRPV1+
(B)
TRPV1+ / NF200+
(C)
NF200+
Small (< 25 µm)
Medium (25-45 µm)
Large
(> 45 µm) 0 2 155
130 9 13
282 27 241
33
2.2.2 CCIラットの神経障害性疼痛に対するBCTCの効果
神経障害性疼痛へのTRPV1チャネルの関与を調べるため、選択的TRPV1チャネル遮断薬 のBCTCをCCIラットに投与し、疼痛閾値の変化を調べた。結果をFigure 20及びFigure 21 に示す。BCTC投与前のCCIラット及びShamラットの疼痛閾値は、それぞれ約0.6 g及び 約16 gであった。Shamラットの疼痛閾値よりもCCIラットのそれは低く（P<0.01）、CCI ラットでもPSLマウスと同様に神経障害性疼痛の発症が示された。
Figure 20 Effects of BCTC on neuropathic pain in rats with CCI.
Baseline PWT to VF filaments were determined before drugs administration, and PWTs were reassessed at each time points. Results are expressed as the median force (g) required to induce paw withdrawal, and vertical bars represent 1st and 3rd quartiles (n=8/group). P<0.01 vs. CCI/vehicle group (Mann-Whitney’s U-test). P<0.05, P<0.01 vs. CCI/vehicle group (Dunn’s test).
0 1 2 3 4
0.1 1 10 100
Vehicle
Vehicle
BCTC 10 mg/kg BCTC 100 mg/kg
## ## ## ##
CCI Sham
Time post BCTC (h)
P W T ( g )
34
BCTC経口投与後（10あるいは100 mg/kg）、CCIラットの疼痛閾値は、投与1時間後に 溶媒対照群、BCTC 10及び100 mg/kg投与群で、それぞれ約0.6 g、約1.4 g（P<0.05）及び
約2 g（P<0.01）になった。さらに投与2時間後では、それぞれ約0.6 g、約1 g（P>0.05）及
び約2 g（P<0.01）になった。これらの結果から、BCTCはCCIラットの神経障害性疼痛を
軽減することが示された。
Figure 21 BCTC attenuated the maintenance of neuropathic pain in rats with CCI.
In order to make Figure 20 clear, the PWTs (g) were plotted before, 1, 2 and 4 hour after BCTC administration. Bars represent median, and vertical bars represent 1st and 3rd quartiles (n=8).
P<0.05, P<0.01 vs. CCI/vehicle group (Dunn’s test).
Before administration
0.1 1 10 100
PWT (g)
1hr
0.1 1 10 100
PWT (g)
2hr
0.1 1 10 100
PWT (g)
Sham
Vehicle 10 100
CCI
Vehicle
BCTC (mg/kg)
4hr
0.1 1 10 100
PWT (g)
Sham
Vehicle 10 100
CCI Vehicle
BCTC (mg/kg)
35
2.2.3 PSLマウスの神経障害性疼痛に対するBCTCの効果
PSLマウスの神経障害性疼痛に対するTRPV1チャネル遮断薬BCTCの効果をFigure 22及
びFigure 23に示す。BCTC投与前のPSLマウス及びShamマウスの疼痛閾値は、それぞれ約
0.008 g及び約0.4 gであった。Shamマウスの疼痛閾値よりもPSLマウスのそれは低値であ
った（P<0.001）。
Figure 22 Effects of BCTC on neuropathic pain in mice with PSL.
Baseline PWT to VF filaments were determined before drugs administration, and PWTs were reassessed at each time points. Results are expressed as the median force (g) required to induce paw withdrawal, and vertical bars represent 1st and 3rd quartiles (n=10/group). P<0.001 vs.
PSL/vehicle group (Wilcoxon’s test). P<0.05 vs. PSL/vehicle group (Dunnett’s test).
Time post BCTC (h)
P W T ( g )
0 1 2 3 4
0.001 0.01 0.1
1 Vehicle
Vehicle
BCTC 10 mg/kg BCTC 30 mg/kg BCTC 100 mg/kg Sham
PSL### ### ### ###
36
BCTC経口投与後（10、30あるいは100 mg/kg）、PSLマウスの疼痛閾値は、投与1時間後 に、溶媒対照群、BCTC 10、30及び100 mg/kg投与群で、それぞれ約0.02 g、約0.014 g（P>0.05）、
約0.02 g（P>0.05）及び約0.07 g（P<0.05）となった。これらの結果から、BCTCはPSLマウ
スでもCCIラットと同様に神経障害性疼痛を軽減することが示された。
Figure 23 BCTC attenuated the maintenance of neuropathic pain in mice with PSL.
In order to make Figure 22 clear, the PWTs (g) were plotted before, 1, 2 and 4 hour after BCTC administration. Bars represent median, and vertical bars represent 1st and 3rd quartiles (n=10).
P<0.05 vs. PSL/vehicle group (Dunnett’s test).
Before administration
PWT (g)
0.001 0.01 0.1 1
1h
PWT (g)
0.001 0.01 0.1
1
2h
PWT (g)
0.001 0.01 0.1 1
Sham
Ve hicle 10 30 100
PSL Ve hicle
BCTC (mg/kg)
4h
PWT (g)
0.001 0.01 0.1 1
Sham
Ve hicle 10 30 100
PSL Ve hicle
BCTC (mg/kg)
37
2.2.4 CCIラットの神経障害性疼痛に対するresiniferatoxinの効果
神経障害性疼痛へのTRPV1チャネルの関与を調べるため、神経障害性疼痛を発症したCCI ラットに、カプサイシン誘導体resiniferatoxin（RTX）0.3 mg/kgを皮下投与し、投与後1、4 及び7日目に疼痛閾値を測定した。結果をFigure 24及びFigure 25に示す。
Figure 24 Effects of resiniferatoxin on neuropathic pain in rats with CCI.
Baseline PWT to VF filaments were determined before drugs administration, and PWTs were reassessed at each time points. Results are expressed as the median force (g) required to induce paw withdrawal, and vertical bars represent 1st and 3rd quartiles (n=6-8/group). P<0.05, P<0.01 vs.
CCI/vehicle group (Mann-Whitney’s U-test). P<0.05 vs. CCI/vehicle group (Mann Whitney’s U-test).
0 1 2 3 4 5 6 7
0.1 1 10 100
RTX or vehicle, s.c.
## ## ## ##
Days post RTX
P W T ( g )
VehicleVehicle RTX 0.3 mg/kg RTX 0.3 mg/kg Sham
CCI
38
CCIラットの疼痛閾値は、投与前（Day 0）のそれと比べ、投与後1日目（Day 1）から4 日目（Day 4）は変化しなかった。一方、投与後7日目（Day 7）のCCIラットの疼痛閾値は、
溶媒対照群及びresiniferatoxin投与群で、それぞれ約0.6 g及び約4 g（P<0.05）となり、
resiniferatoxin投与群で高値を示した。Shamラットにresiniferatoxinを投与しても、投与後1
日目から7日目で、疼痛閾値は変化しなかった。これらの結果から、resiniferatoxinはBCTC と同様にCCIラットの神経障害性疼痛を軽減することが示された。
Figure 25 Resiniferatoxin attenuated the maintenance of neuropathic pain in rats with CCI.
In order to make Figure 24 clear, the PWTs (g) were plotted before (Day0), 1, 4 and 7 days after resiniferatoxin (RTX) injection. Bars represent median, and vertical bars represent 1st and 3rd quartiles (n=10). P<0.05 vs. PSL/vehicle group (Mann Whitney’s U-test).
Day 0
0.1 1 10 100
PWT (g)
Day 1
0.1 1 10 100
PWT (g)
Day 4
0.1 1 10 100
PWT (g)
Vehicle RTX Vehicle RTX
Sham CCI
Day 7
0.1 1 10 100
PWT (g)
Vehicle RTX Vehicle RTX
Sham CCI
39