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R 

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^CH₃， X 

= 

^Y 

= 

^{CN: (CN)2Cob(III){ 10‑(S03}一)CSAsp2C16}7C1ester  R 

= 

C3H7' X 

= 

Y 

= 

CN: (CN)2Cob(III){ 10‑(S03一)CSAsp2C16}7C3es^包r R 

= 

_CH3， X 

= 

CN，Y 

= 

H20: [(CN)(H20)Cob(III){ 10‑(S03^一)CSAsp2C16}7C1ester]CI04  R 

= 

^C3H7' X 

= 

^CN，Y 

= 

H20: [(CN)(H20)Cob(llI){ 10‑(S03 ‑)CSAsp2C16} 7C3ester]CI04 

b)  試料の調整

電子スペクトル

(CN)2 Cob(III)(1 0・Ac)7C1es町を種々の溶媒に溶解して電子スペクトルを測定し，検 量線を作製した。最終濃度:8.0 x 10‑5‑‑‑1.0 x 10‑⁴mol dm‑3 次に 1.0x 10‑¹mol dm‑3 

のN+C5^Ala2C16クロロホルム貯蔵液から75μLを1臼nLサンプルピン中にとり， 1.0 x  10‑2mol dm‑³の(CN)2Cob(III)(10‑N+C5Asp2C16)7C1esterクロロホルム貯蔵液をサンプ ルピンに15μLとって2モル%になるように混合した。この溶液を24時間室温で減圧下

に乾燥して薄膜を形成した。サンプルピンに1.0x 10‑2mol dm‑³ 1)ン酸緩衝液 [pH7，  μO.l(KCl)] 5.0mLを加えVortex撹持器により激しく撹祥した後，プロープ型ソニケー

ターにより超音波照射を行った (30W，3分)。この溶液を20仇mのフィルターに通し て超音波照射の際に照射チップより混入したチタン粉末を除く操作を3回行い，穏や かにセルに移して電子スペクトルを測定した。

試料濃度:N+C5^Ala2C16 ^1.5 x 10‑3mol dm‑³， (CN)2Cob(lII)(10‑N+C5Asp2C16)7C1ester  3.0 x 10‑5mol dm‑3. 

同様な操作を(CN)2Cob(III)(10・N+C5Asp2C16)7C3ester^{について行った。}

また， (S03 ‑)C5^Ala2C 16と(CN)2Cob(III){10‑(S03

づ

_C5Asp2C16} 7C1ester^{の組合せについ} て， (S03

づ

_C5Ala2C16^と(CN)2Cob(III){10‑(S03

づ

_C5Asp2C16} 7C3ester^{の組合せについて}

も上記と同様な操作を行い試料を調整した。

示発走脊熱畳分析

1.0 x 10一lmoldm‑3_のN+C5^Ala2C16のクロロホルム貯蔵液から1臼nLサンプルピン中 に50μLとり， 1.0 x 10‑2mol dm‑³の(CN)2Cob(III)7C3ester^{貯蔵液から}1臼nLサンプルピ ン中に10μLとり，サンプルピンに2モル%となるように混合した。この溶液を24時間 室温で減圧下に乾燥して薄膜を形成した。サンプルピンに1.0x 10‑2mol伽1‑31)ン酸 緩 衝 液 [pH7，μO.l(KCl)] 5.0mLを加えVortex撹祥器により激しく撹持した後，プロ

ープ型ソニケーターにより超音波照射を行った (30W，15分)。この溶液を2

∞

^nmのフ

ィルターに通して超音波照射の際に照射チップより混入したチタン粉末を除く操作 を3回行い，穏やかにセルに移して示差走査熱量分析を測定した。

試料濃度:(S03一)C_SAla2C₁₆1.0 x 10‑3mol dm‑3， (CN)2Cob(III)7C3ester 2.0 x 10‑⁵mol  dm‑3. 

また， (S03一)C_SAla2C₁₆と(CN)2Cob(III){ 10‑(S03一)C_SAsp2C16} 7C₁esterの組合せにつ いて， (S03一)C_SAla2C₁₆と(CN)2Cob(III){ 10‑(S03 ‑)C

s

^Asp2C 16} 7C3esterの組合せについ ても上記と同様な操作を行い試料を調整した。

蛍光偏光度 (分散系)

1.0 x 10‑¹mol dm‑3_のN+C_SAla2C₁₆クロロホルム貯蔵液から50μLを1臼nLサンプルピ ン中にとり， 1.0 x 10‑2mol dm‑3の[(CN)(H20)Cob(III)7C3ester]Cl04クロロホルム貯蔵 液をサンプルピンに10μLとって2モル%になるように混合した。この溶液を24時間室 温で減圧下に乾燥して薄膜を形成した。サンプルピンに1.0x 10‑2mol dm‑3 _1)ン酸緩 衝 液 [pH7，μ0.1(KCl)] 5.0mLを加えVortex撹持器により激しく撹排した後，ダンシ

ルヒスタミンメタノール貯蔵液10μLをマイクロシリンジで注入し，この溶液を穏や かにセルに移して蛍光偏光度を測定した。

試料濃度:(803^一)C_SAla2C₁₆1.0 x 10‑3mol dm‑3_， [(CN)(H20)Cob(III)7C3ester]Cl04 

2.0 x 10‑⁵mol dm‑3_{，ダンシルヒスタミン} 2.0x 10‑⁵mol dm‑3. 

また， (S03 ‑)C_SAla2C₁₆と[(CN)(H20)Cob(III){1 0‑(S03 ‑)C

s

^Asp2C16} 7C₁ ester]CI0₄の 組合せについて ，(S03

づ

C_SAla2C₁₆と[(CN)(H20)Cob(III){10‑(S03一)C_SAsp2C_16}7C3ester] 

α0

₄の組合せについても上記と同様な操作を行い試料を調整した。

(超音波照射系)

(S03一)C_SAla2C₁₆を1.0x 10‑2mol dm‑3リン酸緩衝液 [pH7，μO.I(KCl)] 5.^仇nLに溶解 し， Vortex撹祥器により激しく撹排した後，プロープ型ソニケーターにより超音波 照射を行った (30W，15分)⁰  20^仇mのメンプレンフィルターに通して超音波照射の際

に照射チップより混入したチタン粉末を除く操作を3回行い，この溶液に1.0x 10‑2mol 

也n‑3_の[(CN)(H20)Cob(III)7C3ester]ClO^{4メタノール貯蔵液}10μL，続いてダンシルヒス タミンメタノール貯蔵液10μLをマイクロシリンジで注入し，溶液を穏やかにセルに 移して蛍光偏光度を測定した。

試料濃度:(S03一)CSAla2C161.0 x 10‑3mol dm‑3_， 

[(CN)(H20)Cob^(lII)7C3es也r]CI0₄ 2.0 x 10‑⁵mol dm‑3，ダンシルヒスタミン 2.0x 10‑⁵mol dm‑3. 

また， [(CN)(H20)Cob(III){ 10‑(S03一)CSAsp2C16}7C3ester]CIO ⁴についても同様な操 作を行い試料を調整した。

7.2  電子スペクトルによるミクロ極性の評価

一般的に疎水性ピタミン

B

₁₂類を種々の溶媒に溶解した場合，電子スペクトルの 吸収極大 (α帯 :590 ‑‑‑600nm，γ帯 :370‑‑‑375nm) は溶媒の極性に依存し，極性が 増加すると短波長シフトすることが知られている96心。この性質を利用して疎水性ピ

タミン

B

₁₂周辺のミクロ極性について評価した。まず，(CN)2Cob(III)(10‑Ac)7C1es^闘 をベンゼン，塩化メチレン，アセトン，アセトニトリル，エタノール，メタノール に溶解し，電子スペクトルを測定して α帯のシフトから検量線を作製した。次に，

N+CSAla2C16が形成する二分子膜ベシクルに(CN)2Cob(III)(10‑N+CSAsp2C16)7Cnester (n = 1，3)を取り込ませて電子スペクトルを測定した。電子スペクトルの吸収極大 (α 帯)を図7.1に示す。また， (503 ‑)CSAla2C16が形成する二分子膜ベシクルに(CN)2Cob (111) { 10‑(S03一)CSAsp2C16}7Cnester(n ⁼ 1，3)を取り込ませた場合の電子スペクトルの 吸収極大(α帯)を図7.2に示す。

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0.1  0.2  0.3  0.4  0.5  0.6  0.7  0.8  0.9  1.0 

ETN 

図7.1 新規カチオン性ピタミン B₁₂人工脂質の α帯と溶媒の極性パラメータ

E r

^N値

との関係

1 .ベンゼン;2.塩化メチレン;3.アセトン;4.アセトニトリル;

5.エタノール;6.メタノール

A: (CN)2Cob(III)(10・N+C₅Asp2C₁₆)7C₁ester B:  (CN)2Cob(III)(10^・N+C₅Asp2C₁₆)7C₃ester

(CN)2Cob(III)(10・Ac)7C₁esterを種々の溶媒に溶解し検量線を作製した。矢印は N+C₅Ala2C₁₆ベシクル中での値

g u 

議

録

17000 

16900 

16800 

16700 1‑

o 

0.1  0.2  0.3  0.4  0.5  0.6  0.7  0.8  0.9  1.0 

ETN 

図7.2 新規アニオン性ピタミン B₁₂人工脂質の α帯と溶媒の極性パラメータ

E r

^N値

との関係

1.ベンゼン;2.塩化メチレン;3.アセトン;4.アセトニトリル;

5.エタノール;6.メタノール

A: (CN)2Cob(III){ 10・(50₃^一)C_SAsp2C_16}7C₁ester  B:  (CN)2Cob(lII){ 10・(S03一)C_SAsp2C_16}7C₃ester 

(CN)2Cob(III)(1 O‑Ac)7C₁ esterを種々の溶媒に溶解し検量線を作製した。矢印は (50₃

づ

^C_S^Ala2C16ベシクル中での値

いずれの系においても疎水性ピタミン B₁₂は脱溶媒和されていることがわかる (図7.1，図7.2)。図7.1より N+C₅Ala2C_I6が形成する二分子膜中において(CN)2Co b(III)  (1 0‑N+C₅Asp2C_I6)7C₁ es町はメタノールよりも極性が高い場に， (C N)2 Co b( III)( 10・

N+C5Asp2C_I6)7C₃esterはアセトニトリルと同程度のミクロ極性の場に存在しているこ と が わ か る 。 ま た ， 図7.2より (50₃^一)C₅Ala2C₁₆が 形 成 す る こ 分 子 膜 中 に お い て (CN)2Cob(III){ 10・(50₃‑)C₅As p2C 16} 7 C₁ es町はメタノールよりも極性が高い場に，

(CN)2Cob(III){ 10・(50₃^一)C₅Asp2C_I6}7C₃esterはアセトニトリルとエタノールの間の極 性の場に存在していることがわかる。この結果から，新規ピタミン B₁₂人工脂質は

カチオン性，アニオン性ともに疎水性ピタミン B₁₂の周辺置換基がプロピルエステ ルのほうがより疎水的なミクロ環境に存在しているといえる。すなわち，周辺置換 基のアルキル基の長さが長くなるほどより疎水的な雰囲気にピタミン ^B₁₂は存在し

ていると判断される(図7.3)。

A  B 

図7.3 二分子膜中において推定される疎水性ピタミン B₁₂の存在位置

A:周辺置換基がメチルエステルの場合， B:周辺置換基がプロピルエス テルの場合

7.3  示差走査熱量分析

第5章では新規カチオン性ピタミン B12人工脂質とN+C₅Ala2C16ベシクルおよび新 規アニオン性ピタミン ^B12人工脂質と(S03一)C₅Ala2C16ベシクルがそれぞれ相互作用

していることを示した。そこで本節では(CN)2Cob(III)7C3es町と(S03‑)C₅Ala2C16ベシ クルの相互作用について示差走査熱量分析により検討し，共有結合系と非共有結合 系の比較を行った。はじめに分散水溶液中での結果を図7.4に示し，続いてこの溶液

を超音波照射したものについての結果を図7.5に示す。

図7.4に示すDSCサーモグラムより，分散水溶液では共有結合系について(CN)2Cob (III){ 10・(S03一)C₅Asp2C16}7C3esterが混合されることにより相転移温度に変化がみら れる(図7.4のB)のに対し，非共有結合系では(CN)2Cob(III)7C3esterが混合されても相 転移温度の変化は観察されない(図7.4のA)。とのことから共有結合系の方が二分子 膜構造をより乱していると考えられる。一方，超音波照射系では分散溶液と比較す

ると，相転移温度が低温側に移行し相転移温度幅も広くなっている。また相転移エ ンタルピーも大幅に減少している。これは超音波照射により多重層ベシクルから単 一層ベシクルへの会合形態、の変化が起っていることを示している。図7.5のDSCサー モグラムではいずれの系についても二つのピークが観察されている。 (S03一)C₅A1a 2C16単独のDSCサーモグラムについても二つのピークが観察されていることから(図 7.5のA)，混合二分子膜系(図7.5のB，C， D)における二つのピークは(S03一)C₅Ala2C16 単独の単一層二分子膜ベシクルと疎水性ピタミン B12類が混合した単一層二分子膜 ベシクルのピークがそれぞれ観察されているとは考えにくい。児玉らはリン脂質を 水 中 に 分 散 さ せ ， 超 音 波 照 射 に よ り 形 成 さ せ た 単 一 層 二 分 子 膜 ベ シ ク ル に つ い て DSC測定を行った結果，二つのピークが観察され，高温側のピークは測定を重ねる ごとに大きくなることを観察している106)。彼らは動的光散乱の測定により二分子膜 ベシクルの平均粒径が増大するという結果と併せてこの現象を説明している。すな わち，相転移温度以下において小さな単一層二分子膜ベシクルが融合し，大きな単 一層二分子膜ベシクルが形成されたためであると結論している。このことから，

(S03一)C₅Ala2C16の単一層二分子膜ベシクルについても相転移温度以上では安定に存 在するが，相転移温度を挟んだ温度変化に対しては非常に敏感であり，低温では融 合をおこすと考えられる。実際に相転移温度を挟んだ10回のDSC測定を行うと，次

‑179‑

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(分散系) (S03一)C₅Ala2C₁₆および混合二分子膜のDSCサーモグラム

図7.4

A:実 線(S03一)C₅Ala2C₁₆単 独 ， 破 線(CN)2Cob(III)7C₃es町を2mol%混合

B:実 線(S03‑)C₅Ala2C 16単 独 ， 破 線(CN)2Cob(III){1 0・(S03‑)C₅Asp2C_16} 7C₃esterを 2mol%混合

~ 0.8 

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ドキュメント内 九州大学学術情報リポジトリ (ページ 79-88)