クリーンアップ

抽 出 液 は 濃 硫 酸 処 理 -シ リ カ ゲ ル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ 又 は 多 層 シ リ カ ゲ ル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ で 妨 害 物 質 を 取 り 除 い た 後 、液 を 二 分 し 、一 方 を PCDDs/PCDFs 用 に 、他 方 を Co-PCBs 用 と し 、そ れ ぞ れ ア ル ミ ナ カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ で PCDDs/PCDFs と Co-PCBs の 分 画 を 行 う が 、 同 定 及 び 定 量 の 操 作 条 件 に よ っ て は 、 抽 出 液 を 分 け な い で 行 う こ と も 可 能 で あ る 。 GC/MS 分 析 で 妨 害 が あ り 更 に ク リ ー ン ア ッ プ が 必 要 な 時 、又 は 、ア ル ミ ナ カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ の 代 わ り に 活 性 炭 カ ラ ム 高 速 液 体 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ (HPLC)又 は 活 性 炭 シ リ カ ゲ ル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ を 行 う が 、 特 に PCDDs/PCDFs と ノ ン オ ル ト PCBs を 分 画 す る 時 に は HPLC が 有 効 で あ る 。

な お 、以 下 に 示 す 手 順 は 標 準 的 な も の で あ り 、精 製 の 効 果 を 十 分 得 る こ と が 確 認 さ れ た 方 法 で あ れ ば 、 必 ず し も こ の と お り で な く て も よ い 。

4.3.1 硫 酸 処 理

(1) 4.2(3)の 抽 出 液 を 分 液 漏 斗 (300mL)に ヘ キ サ ン 50～ 150mL で 洗 い 込 み な が ら 移 し 入 れ 、 濃 硫 酸 を 適 量 加 え 、穏 や か に 振 と う し 、静 置 後 、硫 酸 層 を 除 去 す る 。こ の 操 作 を 硫 酸 層 の 着 色 が 薄 く な る ま で 3～ 4 回 繰 り 返 す (注 23)。

(2) ヘ キ サ ン 層 を ヘ キ サ ン 洗 浄 水 50mL で 3～ 4 回 洗 浄 し 、ほ ぼ 中 性 に な っ た ら 、無 水 硫 酸 ナ ト リ ウ ム で 脱 水 後 、 濃 縮 器 で 約 5mL に 濃 縮 し 、 窒 素 気 流 に よ り 最 終 溶 液 100μ L と し 、 こ れ に ヘ キ サ ン 約 2mL 加 え た も の を シ リ カ ゲ ル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ の 試 料 液 と す る 。

(3) 操 作 ブ ラ ン ク 試 験 用 、 ト ラ ベ ル ブ ラ ン ク 試 験 用 、 2 重 測 定 用 の 抽 出 液 も 同 様 に 操 作 し て シ リ カ ゲ ル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ の 試 料 液 と す る (注 17)(注 18)。

4.3.2 シ リ カ ゲ ル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ

(1) シ リ カ ゲ ル カ ラ ム の 充 て ん 物 を ヘ キ サ ン で 洗 浄 後 、液 面 を 無 水 硫 酸 ナ ト リ ウ ム の 上 面 ま で 下 げ る 。

(2) 4.3.1(2)の 試 料 液 を パ ス ツ ー ル ピ ペ ッ ト 等 で カ ラ ム に 静 か に 注 ぎ 入 れ 、液 面 を カ ラ ム 上 端 ま で 下 げ る 。

(3) ヘ キ サ ン 5mL で 濃 縮 器 を 洗 浄 し 、洗 液 は カ ラ ム 内 壁 を 洗 い な が ら 入 れ る 。こ の 洗 浄 操 作 を も う 一 度 繰 り 返 す 。

(4) ヘ キ サ ン 3mL を カ ラ ム に 流 入 し た 後 、ヘ キ サ ン 150mL の 入 っ た 滴 下 用 分 液 ロ ー ト を ク ロ マ ト 管 の 上 部 に 装 着 し 、 ヘ キ サ ン を 約 2.5mL/min(毎 秒 1 滴 程 度 )の 速 度 で 流 下 さ せ る 。 (5) (4)で 得 ら れ た 溶 出 液 を 濃 縮 器 で 約 5mL に 濃 縮 す る 。 充 て ん 部 の 着 色 が ひ ど い 場 合 は 、 再

度 、 シ リ カ ゲ ル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ の 操 作 を 繰 り 返 す 。

(6) 操 作 ブ ラ ン ク 試 験 用 、 ト ラ ベ ル ブ ラ ン ク 試 験 用 、 2 重 測 定 用 の 抽 出 液 も 同 様 に 操 作 し て ア ル ミ ナ カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ 用 の 試 料 液 と す る (注 17)(注 18)。

4.3.3 多 層 シ リ カ ゲ ル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ (注 24)

(1) 多 層 シ リ カ ゲ ル カ ラ ム の 充 て ん 物 を ヘ キ サ ン で 洗 浄 後 、液 面 を 無 水 硫 酸 ナ ト リ ウ ム の 上 面 ま で 下 げ る 。

(2) 4.2(3)の 抽 出 液 を パ ス ツ ー ル ピ ペ ッ ト 等 で カ ラ ム に 静 か に 注 ぎ 入 れ 、 液 面 を カ ラ ム 上 端 ま で 下 げ る 。

(3) ヘ キ サ ン 5mL で 濃 縮 器 を 洗 浄 し 、洗 液 は カ ラ ム 内 壁 を 洗 い な が ら 入 れ る 。こ の 洗 浄 操 作 を も う 一 度 繰 り 返 す 。

(4) ヘ キ サ ン 3mL を カ ラ ム に 流 し た 後 、ヘ キ サ ン 120mL の 入 っ た 滴 下 用 分 液 ロ ー ト を ク ロ マ ト 管 の 上 部 に 装 着 し 、 ヘ キ サ ン を 約 2.5mL/min(毎 秒 1 滴 程 度 )の 速 度 で 流 下 さ せ る 。 (5) (4)で 得 ら れ た 溶 出 液 を 濃 縮 器 で 約 5mL に 濃 縮 す る 。 充 て ん 部 の 着 色 が ひ ど い 場 合 は 、 再

度 、 多 層 シ リ カ ゲ ル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ の 操 作 を 繰 り 返 す 。

(6) 操 作 ブ ラ ン ク 試 験 用 、 ト ラ ベ ル ブ ラ ン ク 試 験 用 、 2 重 測 定 用 の 抽 出 液 も 同 様 に 操 作 し て ア ル ミ ナ カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ 用 の 試 料 液 と す る (注 17)(注 18)。

Ａ . PCDDs 及 び PCDFs

4.3.4-A ア ル ミ ナ カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ (注 25)

(1) ア ル ミ ナ カ ラ ム ク ロ マ ト 管 の 液 面 を 無 水 硫 酸 ナ ト リ ウ ム の 上 面 ま で 下 げ 、4.3.2 又 は 4.3.3 で 調 製 し た 試 料 液 の 適 量 を 静 か に 移 し 入 れ 、少 量 の ヘ キ サ ン で 数 回 洗 い 込 み 、液 面 を 無 水

硫 酸 ナ ト リ ウ ム の 上 端 ま で 下 げ た 後 、 2%(v/v)ジ ク ロ ロ メ タ ン 含 有 ヘ キ サ ン 100mL を 約 2.5mL/min(毎 秒 1 滴 程 度 )で 流 し て 第 1 画 分 を 得 る 。こ の 画 分 に は PCBs が 含 ま れ る 。こ の 画 分 は 分 析 が 終 了 す る ま で 保 管 す る 。

(2) 次 に 50%(v/v)ジ ク ロ ロ メ タ ン 含 有 ヘ キ サ ン 150mL を 約 2.5mL/min で 流 し て 第 2 画 分 を 得 る 。 こ の 画 分 に PCDDs/PCDFs が 含 ま れ る 。

(3) 第 2 画 分 を 濃 縮 器 で 約 5mL に 濃 縮 後 、更 に 窒 素 気 流 に よ り 0.5mL 程 度 ま で 濃 縮 し た も の を 測 定 用 試 料 液 又 は 4.3.5-A や 4.3.6-A で の ク リ ー ン ア ッ プ 用 試 料 液 (注 26)と す る 。測 定 用 試 料 液 は 、PCDDs/PCDFs の シ リ ン ジ ス パ イ ク を 検 量 線 作 成 時 と 同 程 度 の 濃 度 (注 27)に な る よ う 添 加 し 、 ノ ナ ン (注 4)0.5mL を 加 え 、 再 度 窒 素 気 流 で 一 定 量 (20～ 100μ L)に し た も の を PCDDs/PCDFs の GC/MS 分 析 用 試 料 と す る 。

(4) 4.3.2 又 は 4.3.3 で 調 製 し た 操 作 ブ ラ ン ク 試 験 用 、 ト ラ ベ ル ブ ラ ン ク 試 験 用 、 2 重 測 定 用 の 試 料 液 も 同 様 に 操 作 し て GC/MS 分 析 用 試 料 と す る (注 17)(注 18)。

4.3.5-A 活 性 炭 カ ラ ム 高 速 液 体 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ (HPLC)(注 28)

(1) HPLC に 活 性 炭 カ ラ ム を 装 着 し 、 あ ら か じ め ト ル エ ン で 十 分 に カ ラ ム を 洗 浄 し 、 次 に ヘ キ サ ン を 流 し て 十 分 に ヘ キ サ ン で 置 換 し た 後 、4.3.4-A の (3)で 得 た 第 2 画 分 の ク リ ー ン ア ッ プ 用 試 料 液 (0.1mL)(又 は 4.3.2(5)や 4.3.3(5)で の PCDDs/PCDFs 用 の 試 料 液 を 濃 縮 し た も の )を HPLC カ ラ ム に 注 入 し 、溶 離 液 を 30%(v/v)ト ル エ ン 含 有 ヘ キ サ ン と し て 20 分 間 流 し 、 そ の 時 の 溶 出 液 40mL を 分 取 し 第 1 画 分 と す る 。4.3.2 又 は 4.3.3 の 試 料 液 の 場 合 、こ の 画 分 に は PCBs が 含 ま れ る 。

(2) 次 に オ ー ブ ン を 50℃ に 加 温 し 、 reverse flow で ト ル エ ン を 移 動 相 と し て 15 分 間 流 し 、 そ の 時 の 溶 出 量 30mL を 分 取 し て 第 2 画 分 と す る 。 こ の 画 分 に は PCDDs/PCDFs が 含 ま れ る 。 (3) (2)で 得 ら れ た こ の 画 分 を 濃 縮 器 で 約 5mL に 濃 縮 し 、 更 に 窒 素 気 流 で 0.5mL 程 度 ま で 濃 縮

後 (注 22)、 PCDDs/PCDFs の シ リ ン ジ ス パ イ ク を 検 量 線 作 成 時 と 同 程 度 の 濃 度 (注 27)に な る よ う に 添 加 し 、 ノ ナ ン (注 4)0.5mL を 加 え 、 再 度 窒 素 気 流 に よ り 一 定 量 (20～ 100μ L)に し た も の を PCDDs/PCDFs の GC/MS 分 析 用 試 料 と す る 。

(4) 4.3.4-A の (4)又 は 4.3.2 や 4.3.3 で 調 製 し た 操 作 ブ ラ ン ク 試 験 用 、 ト ラ ベ ル ブ ラ ン ク 試 験 用 、 2 重 測 定 用 の 試 料 液 も 同 様 に 操 作 し て GC/MS 分 析 用 試 料 と す る (注 17)(注 18)。

4.3.6-A 活 性 炭 カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ (注 28)

(1) ト ル エ ン で 十 分 洗 浄 し 、 ヘ キ サ ン で 置 換 し た カ ラ ム に 、 4.3.4-A の (3)で 得 た 第 2 画 分 の ク リ ー ン ア ッ プ 用 試 料 液 (0.1mL)(又 は 4.3.2(5)や 4.3.3(5)で の PCDDs/PCDFs 用 の 試 料 液 を 濃 縮 し た も の )を カ ラ ム に 注 入 し 、 25%(v/v)ジ ク ロ ロ メ タ ン 含 有 ヘ キ サ ン 150～ 200mL を 2.5mL/min で 第 1 画 分 を 溶 出 す る 。 4.3.2 や 4.3.3 の 試 料 液 の 場 合 こ の 画 分 に は PCBs が 含 ま れ る 。

(2) 次 い で 、 ト ル エ ン の 200mL で 第 2 画 分 を 溶 出 す る 。 こ の 画 分 に PCDDs/PCDFs が 含 ま れ る 。 (3) トルエ ン層 を 濃 縮 器 で約 5mL に 濃 縮 し 、更 に窒 素 気 流 によ り 0.5mL 程 度 ま で濃 縮 後 (注 22)、

PCDDs/PCDFs の シ リ ン ジ ス パ イ ク を 検 量 線 作 成 時 と 同 程 度 の 濃 度 (注 27)に な る よ う に 添 加 し 、 ノ ナ ン (注 4)0.5mL を 加 え 、 再 度 窒 素 気 流 に よ り 一 定 量 (20～ 100μ L)に し た も の を PCDDs/PCDFs の GC/MS 分 析 用 試 料 と す る 。

(4) 4.3.4-A の (4)又 は 4.3.2 や 4.3.3 で 調 製 し た 操 作 ブ ラ ン ク 試 験 用 、 ト ラ ベ ル ブ ラ ン ク 試 験 用 、 2 重 測 定 用 の 試 料 液 も 同 様 に 操 作 し て GC/MS 分 析 用 試 料 と す る (注 17)(注 18)。

Ｂ . Co-PCBs

4.3.4-B ア ル ミ ナ カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ (注 25)

(1) ア ル ミ ナ カ ラ ム ク ロ マ ト 管 の 液 面 を 無 水 硫 酸 ナ ト リ ウ ム の 上 面 ま で 下 げ 、4.3.2 又 は 4.3.3 で 調 製 し た 試 料 液 の 適 量 を 静 か に 移 し 入 れ 、少 量 の ヘ キ サ ン で 数 回 洗 い 込 み 、液 面 を 無 水 硫 酸 ナ ト リ ウ ム の 上 端 ま で 下 げ た 後 、ヘ キ サ ン 40mL を 約 2.5mL/min(毎 秒 1 滴 程 度 )で 流 し て 第 1 画 分 を 得 る 。 こ の 画 分 に は 直 鎖 炭 化 水 素 が 含 ま れ る 。

(2) 次 い で 、 5%(v/v)ジ ク ロ ロ メ タ ン 含 有 ヘ キ サ ン 120mL を 約 2.5mL/min で 流 し て 第 2 画 分 を 得 る 。 こ の 画 分 に は PCBs が 含 ま れ る 。

(3) 第 2 画 分 を 濃 縮 器 で 約 5mL に 濃 縮 し 、更 に 窒 素 気 流 に よ り 0.5mL 程 度 ま で 濃 縮 し た も の を 測 定 用 試 料 液 又 は 4.3.5-B や 4.3.6-B で の ク リ ー ン ア ッ プ 用 試 料 液 (注 26)と す る 。 測 定 用 試 料 液 は 、Co-PCBs の シ リ ン ジ ス パ イ ク を 検 量 線 作 成 時 と 同 程 度 の 濃 度 (注 27)に な る よ う に 添 加 し 、 ノ ナ ン (注 4)0.5mL を 加 え 、 再 度 窒 素 気 流 で 一 定 量 (20～ 100μ L)に し た も の を Co-PCBs の GC/MS 分 析 用 試 料 と す る 。

(4) 更 に 50%(v/v)ジ ク ロ ロ メ タ ン 含 有 ヘ キ サ ン 160mL を 約 2.5mL/min で 流 し て 第 3 画 分 を 得 る 。こ の 画 分 に PCDDs/PCDFs が 含 ま れ る 。原 則 と し て こ の 画 分 は 測 定 し な い が 、分 析 が 終 了 す る ま で 保 管 す る 。

(5) 4.3.2 又 は 4.3.3 で 調 製 し た 操 作 ブ ラ ン ク 試 験 用 、 ト ラ ベ ル ブ ラ ン ク 試 験 用 、 2 重 測 定 用 の 試 料 液 も 同 様 に 操 作 し て GC/MS 分 析 用 試 料 と す る (注 17)(注 18)。

4.3.5-B 活 性 炭 カ ラ ム 高 速 液 体 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ (HPLC)(注 28)

(1) HPLC に 活 性 炭 カ ラ ム を 装 着 し 、 あ ら か じ め ト ル エ ン で 十 分 に カ ラ ム を 洗 浄 し 、 次 に ヘ キ サ ン を 流 し て 十 分 に ヘ キ サ ン で 置 換 し た 後 、4.3.4-B の (3)で 得 た 第 2 画 分 の ク リ ー ン ア ッ プ 用 試 料 液 (0.1mL)(又 は 4.3.2(5)や 4.3.3(5)で の Co-PCBs 用 の 試 料 液 を 濃 縮 し た も の )を HPLC カ ラ ム に 注 入 し 、移 動 相 と し て ヘ キ サ ン を 4 分 間 流 し 、そ の 間 の 溶 出 液 8mL を 分 取 し て 第 1 画 分 と す る 。 こ の 画 分 に は ノ ン オ ル ト 及 び モ ノ オ ル ト 体 以 外 の PCBs が 含 ま れ る 。 (2) 次 い で 移 動 相 と し て 50%(v/v)ジ ク ロ ロ メ タ ン 含 有 ヘ キ サ ン を 20 分 間 流 し 、 そ の 間 の 溶 離

液 40mL を 分 取 し て 第 2 画 分 と す る 。 こ の 画 分 に は モ ノ オ ル ト 体 PCBs が 含 ま れ る 。

(3) 更 に 溶 離 液 を 30%(v/v)ト ル エ ン 含 有 ヘ キ サ ン と し て 20 分 間 流 し 、 そ の 時 の 溶 出 液 40mL を 分 取 し 第 3 画 分 と す る 。 こ の 画 分 に は ノ ン オ ル ト 体 PCBs が 含 ま れ る 。

(4) 最 後 に オ ー ブ ン を 50℃ に 加 温 し 、 reverse flow で ト ル エ ン を 移 動 相 と し て 15 分 間 流 し 、 そ の 時 の 溶 出 量 30mL を 分 取 し て 第 4 画 分 と す る 。こ の 画 分 に は PCDDs/PCDFs が 含 ま れ る 。 (5) 第 1～ 第 3 画 分 を そ れ ぞ れ 濃 縮 器 で 約 5mL に 濃 縮 し 、 更 に 窒 素 気 流 で 0.5mL 程 度 ま で 濃 縮

後 (注 22)、Co-PCBs の シ リ ン ジ ス パ イ ク を 検 量 線 作 成 時 と 同 程 度 の 濃 度 (注 27)に な る よ う に 添 加 し 、 ノ ナ ン (注 4)0.5mL を 加 え 、 再 度 窒 素 気 流 に よ り 一 定 量 (20～ 100μ L)に し た も の を 各 Co-PCBs の GC/MS 分 析 用 試 料 と す る 。

(6) 4.3.4-B の (4)又 は 4.3.2 や 4.3.3 で 調 製 し た 操 作 ブ ラ ン ク 試 験 用 、 ト ラ ベ ル ブ ラ ン ク 試 験 用 、 2 重 測 定 用 の 試 料 液 も 同 様 に 操 作 し て GC/MS 分 析 用 試 料 と す る (注 17)(注 18)。

4.3.6-B 活 性 炭 カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ (注 28)

(1) ト ル エ ン で 十 分 洗 浄 し 、 ヘ キ サ ン で 置 換 し た カ ラ ム に 、 4.3.4-B の (3)で 得 た 第 2 画 分 の ク リ ー ン ア ッ プ 用 試 料 液 (0.1mL)(又 は 4.3.2(5)や 4.3.3(5)で の Co-PCBs 用 の 試 料 液 を 濃 縮 し た も の )を カ ラ ム に 注 入 し 、 25%(v/v)ジ ク ロ ロ メ タ ン 含 有 ヘ キ サ ン 150～ 200mL を 約 2.5mL/min で 溶 出 す る 。4.3.2 や 4.3.3 の 試 料 液 の 場 合 こ の 画 分 に は Co-PCBs が 含 ま れ る 。 (2) こ の 画 分 を 濃 縮 器 で 5mL に 濃 縮 し 、更 に 窒 素 気 流 で 0.5mL 程 度 ま で 濃 縮 後 (注 22)、Co-PCBs

の シ リ ン ジ ス パ イ ク を 検 量 線 作 成 時 と 同 程 度 の濃 度 (注 27)に な る よ う に 添 加 し 、ノ ナ ン (注 4)0.5mL を 加 え 、 再 度 窒 素 気 流 に よ り 一 定 量 (20～ 100μ L)に し た も の を Co-PCBs の GC/MS 分 析 用 試 料 と す る 。

(3) 4.3.4-B の (4)又 は 4.3.2 や 4.3.3 で 調 製 し た 操 作 ブ ラ ン ク 試 験 用 、 ト ラ ベ ル ブ ラ ン ク 試 験 用 、 2 重 測 定 用 の 試 料 液 も 同 様 に 操 作 し て GC/MS 分 析 用 試 料 と す る (注 17)(注 18)。

５ 試 験 操 作