日本農芸化学会中四国支部・日本生物工学会西日本支部 両学会支部合同若手研究者交流シンポジウム
生物機能開発研究の新展開
-中四国地区大学若手研究者の世界への発信、地方への貢献-
日時：2004年6月11日（金）14:20~18:00（終了後、懇親会（無料）） 場所：鳥取大学工学部大学院棟２F大講義室
http://www.tottori-u.ac.jp/main/japanese2/map_tottori.htm
プログラム
開会の辞（14:20-14:25）
（１）「海藻由来ハロゲン化酵素の魅力 ̶ユニークな構造、高い安定性、広 がる応用̶」
鳥取大学工学部 大城 隆 先生（14:25-15:05）
（２）「微生物酵素及び酵母の糖鎖生合成経路を利用した糖タンパク質糖鎖の リモデリング」
香川大学農学部 竹川 薫 先生（15:05-15:45）
（３）「Ｘ線小角散乱法を用いた低活性超好熱アーキア由来リコンビナント酵 素の活性化機構の解明」
徳島大学工学部 郷田秀一郎 先生（15:45-16:25）
休憩（16:25-16:35）
（４）「環境バイオとケミカルバイオテクノロジー」
広島大学大学院先端物質科学研究科 加藤純一 先生（16:35-17:15）
（５）「世界へ発信続ける酢酸菌・PQQ」
山口大学農学部 外山博英 先生（17:15-17:55）
閉会の辞（17:55-18:00）
世話人・連絡先
大城 隆（鳥取大学工学部生物応用工学科；〒680-8552鳥取市湖山町南4-101) （TEL/FAX 0857-31-5269，E-mail：[email protected]）
日本生物工学会西日本支部長 和泉好計（鳥取大学工学部生物応用工学科) （TEL/FAX 0857-31-5267，E-mail：[email protected]）
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1. Littlechild, J. and Garcia-Rodriguez, E. (2003) Coordination Chemistry Review, 237, 65-76.
2. Shimonishi, M., Kuwamoto, S., Inoue, H., Wever, R., Ohshiro, T., Izumi, Y., and Tanabe; T.
(1998) FEBS Lett., 428, 105-110.
3. Ohshiro, T., Hemrika, W., Aibara, T., Wever, R., and Izumi; Y. (2002) Phytochemistry, 60, 595- 601.
4. Ohshiro, T., Littlechild, J., Garcia-Rodriguez, E., Isupov, M. N., Iida, Y., Kobayashi, T., and
Izumi, Y. (2004) Protein Science, 13, 1566-1571..
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