モノカプリンとクエン酸およびポリリン酸の併用によるPseudomonas aeruginosaに対する抗菌作用
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(2) 182. モ ノカプ リンの 抗 菌. 実. 方. 験. 法. 1.供 試 薬剤 と供 試 菌 モ ノカプ リン (MC10)は 理研 ビタ ミン油株 式会社 よ り提供 され た高純 度 試 料 で あ り,そ の他 の 薬 剤 はす べ て市 販 の 試薬 を用 い た。 これ らの うち クエ ン 酸 (CA)は ナ トリウ ム塩 と して, ポ リリ ン酸 7。. (PP)は カ リウム塩 として pH. 0に 調 整 して用 い た。 式菌 として は Pscaご οποηαs aCγ agjη osa 供言. 2。. ATCC 10145を 用 い た。. 抗 菌作用 力 の 検 定. 肉 エ キ ス・ペ プ トン寒天培 地 で37°. C,24時 間培養 した. %gjπ ο sα Ps.α θγ. の 細 胞 を無菌 水 に浮遊 させ (生 菌数 約 108 cellS/ml),こ れ に適 当量 の 薬剤 を 添加 し (pH 7。. 0),主 として50° C, 5分 間加 熱処理 した。. この処理 細 胞液 を肉 エ キ ス・ ペ プ トン培地 に 2%と な るよ うに植 菌 し,微 ‐ 生物 自動 発育 記録装 置 (Bio Scanner OT― BS一 24型. )を 用 い て 37° Cで の. 発育 経 過 を記録 した。 その 発育 経過 は模 式 図 で示 す とFig。 1の 様 にな る。 図. ‖T鷲 胤fd. incubatlon tlme(hr). F18o l. Typical grOwth curve of Ps.. αθγ πgJπ θsa in nutrient broth. obtained by the automatic growth recording apparatus. (Bio Scanner OT一 BS-24)。.
(3) 183. 加 藤 信 行 中 1は 無処理 , 2は 薬 剤無添加 で50° 在下 で50°. C,5分 問処理 , 3,4は 適 量 の薬 剤 存. C,5分 問処理 した ものの 発育 経過 で あ る。図 に示 した様 に加 熱単. 独処理 あ るい は薬剤存在下加 熱処理 を行 った細 胞 は無処理 の 細 胞 に比 べ て発 育遅廷 がみ られ るが,発 育速度 は全 く同様 で あ った。 この 発育 の遅 れ を lag. timeの 延 長時 間 (pr01ongatbn of lag time)と 定義 し, この値 を もって薬剤 の抗菌作用 力 とした。 また同 じ薬剤処理 細 胞液 につ い て常 法 に よる平板 培養 法 に よ り生菌数 (生 存菌数 )の 測定 も行 った。. 実 験 結 果 お よび 考 察 につ い て種 々 の生菌数 レベ ルの 細 胞 浮遊 液 を肉 エ キ ス・ Pso αθγ agJη ο sα ペ プ トン培 地 に植 菌 し,そ の 発育 経過 よ り lag timeの 延長 時間 を求 め る と. Table lの 様 な結果 が得 られ た。 この表 か ら生菌 数 が10-1に な る と約 1。 6時 間 の lag timeの 延 長 時 間 が示 され た。 す なわ ち 1.6時 間 の lag timeの 延 長 は 1ケ タの生菌数低 下 に相 当 して い る。 Table lは 薬 剤無処理 の細 胞 につ い ての 生菌数 と lag timeの 延 長 時 間 の相 関関係 で あ るが,薬 剤処理 細 胞 に つ い て も同様 な相 関関係 が得 られ た (後 述 )。. Taじ ble lo Relationship between prolongation of lag ti】. of Ps. αθγπgJη οsα Prolongation of lag time. 0. 7. 6.3 7.8 9。. 4× 4× 1.4× 1.4× 1。 4× 1。. 6. 3.1 4。. Viable counts per rrll. (hr). 1。. ne and viable counts. .. 4. 1。. 1。 1。. 108 107 106 105 104 4 × 103 4× 102.
(4) 184. モ ノカプ リンの抗菌. Table 2. Effect of citric acid and polyphosphoric acid on the antibacterial. activity of monocaprin against Ps. αθγagJπ Osα 。 Prolongation of lag time(hr). CA(%) 0。 1 0。. 100 μg/ml 200. 7. 1.1. 2。. 8. 5.5 5.9. 1,000 2,000. PP(%). 0.5. 0。 1. 0.5. 1.2. 2.1. 1。. 0. 2.7. 2。. 9. 6。. 3. 3.6. 10.2. 2. 10。 3. 8。. 7。. 9. >12 C for. The cells were treated in distilled water with each drug at 50°. 5 Πline The treated cells were inoculated into nutrient broth at a rate. of 22,and incubated at 37・ Co Lag time was calculated from the recorded growth curve.. MC10:mOnOcaprin CA:citric acid(Na salt) PP:polyphosphoric acid(K salt). Pso αθγ agJπ ο sα. ゜ に対 して モ ノカフ ン を単独 あ る い は クエ ン酸 または ポ. リリ ン酸 の 存在下 50°. ￨リ. C, 5分 問処理 した時 の抗菌 作 用 力 を Table 2に. 示し. た。 モ ノカプ リ ンは単独 で も濃度 の上昇 と共 に作 用 力 が増大 し,1,000μ g/ml で5。 5時 間 の lag time延 長 時 間 (生 菌数 10-3∼ 10-4低 下 )が 見 られ たが. ,. そ の抗菌作用 力 は著 る し く強 い とは言 えな い。 そ して モ ノカプ. ￨リ. ン とクエ ン. 酸 あ る い は ポ リリ ン酸 を併 用 して処理 す る と,そ れ ぞれ の単独処理 に よる. lag timeの 延 長 時 間 を加 えた値 (相 加効 果 )よ り大 きな lag timeの 延 長 が 見 られ,併 用 した 2薬 剤間 にお け る相 乗効 果 が認 め られ た。 そ してそ の効 果 はモ ノカプ リ ン 200μ g/ml一 ―クエ ン酸 0。 リリ ン酸 0。. 5;ん ,. モ ノカプ リ ン 200 μg/ml― 一 ポ. 5%の 組合 せ で強 く見 られ た。 また クエ ン酸 ,. ポ リリン酸 は単独. 処理 で 同等 の lag timeの 延 長効 果 が あ ったが,モ ノカプ リンヘ の 添加効 果 は若千 異 って い た。 薬剤一 加 熱併 用効 果 につ い ての研 究 は 多 く 抗生物 質. 4∼. 6). ,無. 7∼. 機化 合物. 10). ,.
(5) 185. 加 藤 信 行 ガ ス殺菌 剤. 11∼ 13キ. 有機酸 ,ア ル コー ル, ア ル デ ヒ ド等. 5,13,14∼ 20キ. 界面 活性. 剤 :'21)に つ い ての報告 が あ り,対 象微 生物 につ い て もか び胞子 9'13∼. 15,17,18),細. 細菌. 5∼ 7,10∼. 菌 胞子. 12,21)が. 4,16,li,20). 8キ. 酵母. 検 討 され て い る。 その 中 で 中鎖 あ. る い は長 鎖 の 脂肪酸 につ い て は Michenerら. が細菌 胞子 に対 して検 討 して. い るにす ぎな い。 著者 らは既 に脂肪酸 お よ びその エ ステ ルの加 熱併 用効 果 剤処理 )を 主 として Escん θγjcん jα. cο. (50°. ι Jを 対 象 に検 討 し,10. Cに おける薬. 6ぁ るい はそれ. 以上 の生菌数 の低 下 を認 め る と共 に, この 薬 剤一 加 熱併 用効 果 に対 す る種 々 22)。. の影 響 因子 の 作 用 につ い て報告 して い る. また同 時 に他 の グラ ム陰性 細菌. に対 す る薬剤 一― agJη θ sα 寸し,Pse αθγ 加 熱併 用効 果 も検 言. に対 して モ ノカプ. リ ン, ラ ウ リ ン酸 ,モ ノ ラウ リンが か な り強 い抗菌作用 を示 す こ とも認 め て. 22t ゜ンとクエン いる またモノカフ 酸またはポリリン 酸の併用により 常温で ￨リ. グラ ム陰性 細菌 (Pse αθγ agJπ ο sα を除 く)に 対 して強 い抗 菌作 用 を示 す こ 1∼. とも幸風告 して い る. 3)。. 本実験 は薬 剤併 用処理 を50° Cで 行 うとい う薬剤併 用 と薬剤― 加 熱併 用 を同 agJπ ο sα 時 に行 った もの で あ り, その 結果薬 剤抵抗 1生 の 非常 に強 い Ps.α θγ. Taし lЭ le 3。 RelatiOnship between prolongation of lag tilne and viable counts. determined with same sample.. Drug. Pr010ngation of. (concentratbn). MC10(1,000 MC10(200). lag time(hr). μg/ml). CA(0.5%) MC10(1,000)+ CA(0。 5) MC10(1,000)+ CA(0。 1) MC10(200)十 CA(0.1). Viable counts per ml. 0. 7. 1.0× 108. 5. 2. 1。. 2. 1.3× 107. 3。. 0. 4。. 10。 3. 5。. 1 × 107 0× 102. 7。. 7. 4.7× 103. 5。. 4. 1。. The test cOndition was the same as that shOwn in Table 2。 lnitial viable cOunt : 1 .9× 108/ml. 6× 105. 2。. 5× 105.
(6) 186. モ ノカプ リンの抗 菌. Table 4。 EIffect of temperature on the antibacterial activities of monocaprin and citric acid against Ps. αθγagJπ θsα 。. remperature(° C). Pr010ngation of lag time(hr). Drug. 37. 45 09. 0. 0. 0。. 6. 3. MC10(1,000 μg/ml). 0. 0.2. 5。. 4. 10. .8. CA(0.5%). 0. 0。. 3.0. 6. .4. CA(0。. 0. 0.1. 1。. 0。 1. 1.8. 9.2. 1). MClo(1,000)+CA(0.1). 7. 0. 5 ・1. >12. The cells were treated in distilled water at various temperatures for 5 rrlin.. に対 す る顕 著 な抗 菌作 用 が 見 出 され た。 次 に薬剤処理 を行 った細 胞 につ い て lag timeの 延 長 時 間 と生菌数 の 関係 を Table 3に 示 した。 各種 濃度 の 薬 剤処理 細 胞 において lag timeの 延 長 時 間 よ り予 想 され るほ ど実 際 の生菌数低 下 は起 って い な い (こ の傾 向 は クエ ン 酸単独処理 の場 合 強 く見 られ た )。. しか し両 者 はほぼ一 致 してお り, この こ. とよ り lag timeの 延 長時 間 で示 され た抗菌 作 用 は薬 剤処理 に よる生菌 数低 下 す なわ ち殺菌作 用 に よる もの で あ る と言 え る。 最 後 に薬剤処理 温度 を変 えた場 合 の抗 菌作 用 力 を検 討 した結 果 を Table 4 に示 した。 この 表 よ り37° 45°. Cで の薬 剤処理 で は抗藤i作 用 は まった く見 られず. ,. Cで 処理 して も作 用 力 は微 弱 で あ り,50° C処 理 で は じめ て強 い抗菌作 用. 力 を示 す こ とを認 め た。 また 55°. C処 理 で は薬 剤無添加 で｀もか な りの抗菌 作. 用 が 見 られ,薬 剤単独 処理 で強 い作 用 力 を示 し,薬 剤併 用効 果 は判 然 と しな か った。 この様 に薬 剤処理 温度 が抗菌作 用 力増大 に大 き く寄 与 して い る こ と が半J明 したが,処 理 温度 が 50°. Cを 越 え る と加 熱 のみ に よる大 きな lag. time. の延 長 が 見 られ,薬 剤 の作 用 力 は判定 しに くくな って い た。 要. 約. 食品衛 生上 重要 な微 生物 で あ る Psθ πごοποηαS菌 に対 す る薬 剤併 用処理 を.
(7) 加. 藤. 信. 187. 行. 比 較 的 温 和 な加 熱 条件 下 で行 っ た。 ・ そ の 結 果 モ ノ カフ り 50°. ￨リ. ン とク エ ン酸 あ る い は ポ リ リ ン酸 を組 合 せ る こ とに よ. C, 5分 間 の 処 理 で 薬 剤 感 受 性 の 非 常 に低 い. Ps.α θγagJπ οsα. に対 し. て 強 い抗 菌 作 用 を示 す こ と を見 出 した。 そ して そ の 抗 菌 作 用 は殺 菌 作 用 に 基 づ くもの で あ る こ とが 判 明 し た 。 また この 薬 剤併 用 に よ る抗 菌 作 用 力 は 45°. C以 下 で は微 弱 で あ る こ と も認 め られ. た。. 献. 文. 1)加 2)加 3)加. 藤 ,芝 崎 :防 菌 防徹 誌 ,. 3,355(1975).. 藤 ,芝 崎 :防 菌 防徹 誌 ,4,254(1976). 藤 ,芝 崎 :防 菌 防徹 誌 ,. 5,473(1977).. 4)York,Go Y.:Appl.Microbiol。 , 14,451(1966)。 5) Michener,Ho D。 ,Thompson, Po A.,Lewis,Jo C.:Appl.MicrObiol。 , 7, 166(1959, 。 6) Heinemann, B。 ,Voris,L., Stumbo,C.R.:F00d Technol。 , 19, 592 (1965).. 7)Wyatt,L.R。 ,Waites,Wo M.:J.Gen.MicrObiol。 , 89,337(1975). 8)Cheng,M.Ko C.,Le宙 n,R.E.:J:Food Sci。 , 35,62(1970). 9)Kohl,F.:FOod Technol。 , 25,1176(1971)。 10)Toled。 ,R.T。 ,Escher,F.E。 ,Ayres,Jo C.:Applo MicrObiol。 , 26, 592(1973)。. 11)McConnell,J.E.W。 ,C011ier,C.P。. :Food Eng。 ,. 34(12),96(1962)。. 12) Kuzminsky, Lo N.,HOward, G.L。 , Stumbo, C.R.:J.F00d Sci., 34, 561(1969)。 13) Lategan,Po M。 ,Vaughn,R.H.:J.Food Sci., 29,339(1964).. 14)Garibaldi,J.A.:F00d TechnOle, 23,1031(1968)。 15) Thomas, S., Russell,A.D.:Appl.Microbiole, 28,331(1974)。 16)Splittstoesser,Do F。 ,Lienk,L.L。 ,Wilkinson,M.,Stamer,J.R.:Appl. Microbiol., 30,369(1975)。. 17)Parkinson,J.C。 ,Pickett,Jo M.:J.Appl.Bact。 , 27,471(1964)。 18) Tsuchido,T。 ,Ozawa,0。 , Shibasaki,I.:Jo Fermento Technol。 , 53,363 (1975)。. 19)芝 崎 ,飯 田 :食 品 工 誌 , 15,447(1968)..
(8) 188. モノカプ リンの抗 菌. 20)Shibasaki,I.,Tsuchido,T.:Acta Ahmentaria, 2,327(1973). 21)BriggS,A。 ,Yazdany,S.:J.Appl.Bact。 , 37,623(1974)。. 22)加 藤 ,芝 崎. :醸 工 ,. 53802(1975)。.
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図
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