(1)試験 管 内水銀 イオ ン還元実 験
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(2) 604. 倉. ら れ るDL‑α‑ト. コ フ ェ ロ ー ル(ビ. 橋. タ ミ ンE）,及. 康 二 郎 1). 還 元 試料 の調 製方 法. び ス ー パ ー オ キ サ イ ドア ニ オ ン を 用 い て 水 銀 イ. (1). L‑ア. ス コ ル ビ ン 酸(ビ. オ ンの 試 験 管 内 還 元 実 験 を行 い 添 加 モ ル 濃 度 と. コ ル ビ ン 酸 を3mlの. 水 銀 イ オ ン 還 元 率 と の 関 係 を 求 め,各. に 溶 か し 即3HgCl2試. 々 の選 元. 力 に つ い て 比 較 検 討 し た. 又,マ. 0〜10μMの. ウ ス 肝 ホ モ ジ ネ イ トの 超 遠 沈 後 の 上 清. 分 画 に つ い て,細. 胞 質 内 ペ ル オ キ シ ソー ム 中 の. (2). 203HgC1. 遊 離 す る 条 件 の 試 料 を 作 成 し,先. mMの. の3物. 質 と同. 様 な 還 元 実 験 を 行 い 比 較 検 討 し た の で報 告 す る. 材. 料. と 方. コ フ ェ ロ ー ル(ビ. (3). 法 (DMSO)に. 実. 験 試. 薬1mlを. 放 射 性 標 識 塩 化 第 二 水 銀(203HgCl2,. ol(和. 光 純 薬,一. 純 薬,特. 級),. 級),. dicyclohexyl. 特 級),. dimethyl. sulfoxide(和. polyvinylpyrrolidone. MnO250%,. CuO. 40%),. Co2O3. II(半 芥 化 学,. L‑cystein塩. 酸 塩(和. 実 験 試 験 管. (OMEGA. I(半 15%,. MnO2. TSA. 5 CuO. マ ウ ス 肝 ホ モ ジ ネ イF:マ 8.5%saccharose. rolidone(pH v)の. 間の濃. ウ スの 肝 臓 を. 11%polyvinylpyr. 4.0)(PVP溶. 液)に. て20%(w/. ホ モ ジネ イ トを テ フ ロ ン ホ モ ジナ イ ザ ー を 78,600g,. 分 画21)に は,ペ. 級),消. 液 と,燐. 30分 超 遠 沈 後 の 上 清. ル オキ シソームか らカタラーゼが. 酸 緩 衝 液(44mM,. pH. 6.8)(PB溶. 液). に て カ タ ラ ー ゼ が 上 清 に 遊 離 す る条 件 に て 同 様 に 作 成 し た 上 清 液 を採 集 した 。 2). 737). 203HgC12水 (1)L‑ア. 器 具. 溶液 の調 製方法. ス コ ル ビ ン 酸, Di‑α ー ト コ フ ェ ロ ー ル. 及 び ス ー パ ー オ キ サ イ ドア エ オ ン に よ る 還 元 に. ミ キ サ ー,テ. ツ ロ ン ホ モ ジナ イ ザー. ELEC.. (HITACHI. 共 に 溶 か し20), 203HgC12試. 余 り 遊 離 し な い 上 清 分 画22)が 得 ら れ る.そ の 上 清. 井 化 学,. 60%,. 6と. 用 い て 作 成 し,. 級),. Ag2O. 光 純 薬,特. ほ う シ リ コ ー ン(TOSHIBA, 2). 井 化 学,. 井 化 学,. Hopcalite. 30%,. (4). 弁 化 学,. 光 純 薬,特. sulfoxide. 添 加 後 の 濃 度 は, 0〜200mMの. 摘 出 し, 光. K‑30(PVP,半. 40,000),. Hapcalite. L‑ascorbic. superoxide(半. 0〜2.0. 度 に な る 様 に し た.. DL‑α‑tocopher‑. 18‑crown‑6(準. MW=abt,. %),. 級),. methanol(99.6%,和. potassium. 特 級),. lμCi=. Amersha㎜), 京,特. 添 加 後 の 濃 度 は,. 懸 濁 し て モ ル 銘1:2でdicyclo. 1). 薬. DL. ス ー パ ー オ キ サ イ ドア ニ オ ン(O2‑);超. hexy118‑crown. び1.236μg. タ ミ ンE);. メ タ ノー ル に 溶 か し. 酸 化 力 リ(KO2)を3mlのdimethyl. 験 材 料. 光 純 薬KK,東. を3mlの. 2試 薬1mlを. 実. acid(和. 添 加 後 の 濃 度 は,. 問 の 濃 度 に な る様 に し た.. 1.. 0.839μg及. 藥1mlを. コ フ ェ ロ‑ル. カ タ ラー ゼ が 上 清 分 画 へ 余 り遊 離 しな い 条 件 と. L‑ア ス pH6.8). 間 の 濃 度 に な る 様 に し た.. DL‑α‑ト. ‑α‑ト. タ ミ ンC);. 燐 酸 緩 衝 液(44mM,. TYPE. 66P),イ. ブ ラ ー(5ml用,作. SM‑3),超. 遠 沈機. ン キ ュ ベ ー タ ー,小 業 環 境 測 定 用,柴. 型バ. 用 い た203HgCl2試. 薬:. 1μCiの. 化 第 二 水 銀(203HgC12, 燐 酸 緩 衝 液(44mM,. 田 科 学,. こ れ は,最. 放 射 性 標 識塩. 0.839μg)を pH. 終4mlで,. 6.8)に. 総 量1mPで 溶 か し た.. 1.033Mの. 水 銀 イオ ン. メ ッ シ ュ 孔100〜150km),ミ. ゼ ッ トイ ン ピ ン ジ. 溶 液 とな る 。. ャ ー(柴. 気 ポ ン プ(IWAKI. (2) 肝 ホ 醗 ジ ネ イ トに よ る環 元 に 用 い た 203HgCl 2試 薬: 1μCi(1.236g)にL‑シ ステ イ. CO.. 細 科 掌, D‑2型),空. AP‑0322),気. 体 流 量 計,ピ. ラ ス チ ッ ク 試 験 管(栄. ン チ コ ッ ク,プ. 研 チ ュ ウ ブ1号),ウ. シ ン チ レ ー シ ョ ン カ ウ ン タ ー(ALOKACO.. ェル. ン 塩 酸 塩 を モ ル 比1:200で. JDC. 水 を 加 え た 。こ の 調 製 法 は,シ. ‑701) 3). にHg++を 実 験 動 物(肝. dd系 2.. 齢). 即 ち(図1)の. バ プ リ ン グ 条 件 を(表1)に. 作 成 し安 定 化. ご と く,シ. ス テ イ ン の2.193mg/. mlと203HgCl2の10μCi/ml(12.36μg/ml. 試 料 の調 製方 法 還 元 試 料 と203HgC12試. 結 合 さ せ,‑S‑Hg‑S‑を. 薬 の 調 製 方 法,並 示 す。. 留. ス テ イ ン のSH基. さ せ る も の で あ る.. ホ モ ジ ネ イ ト作 成). ♀ マ ウ ス(13週. 加 え た 後,1m2蒸. びに. N. HCl)を. NaOHで. 作 成 し て 等 量 加 え,後. in 0.5 で0.5Nの. 中 和 し て か ら 総 量 を 蒸 留 水 で10mlに. し.
(3) 試 験 管 内水銀 イオ ン還 元実験 た.各. 3. L‑Cystein塩. 酸 塩. 203Hg++. 605. 実 験 に は,. 1.0mlず. つ 用 い た.. 還 元 実 験. 水 銀 イ オ ン還 元 装 置 を(図2)に 1). 示 す。. 37℃ に 調 整 し た イ ン キ ュ ベ ー ター に 入 れ て. あ る,小. 型 バ ブ ラ ー に,放. (203HgCl2)溶1液1mlと,調 を入 れ て,活. 射性塩 化第二水 銀 整 し た 還 元 試 料3ml. 性 炭 を 通 した 室 内 空 気(約22℃). を 空 気 ポ ン プ で 小 型 バ プ ラー 内 に 送 入 して, 0.5 1iter/分/バ ブ ラー の 流 速 で5分. 間,パ ブ リン グ を. 行 い,還. 元 反 応 を捉 進 す る と 共 に,還. たHgOガ. ス の 反 応 液 か らの 放 出 を促 し た.. 元 で生 じ. スー パ ー オ キ サ イ ドア ニ オ ン に つ い て は,(図 2‑B)に 図1. シ ス テ イ ン水 銀複 合 体10mlの 作 成 方 法. A通. B. 図2. ス ー パ. あ る よ うに,三. 方活 栓 につ なが った小. 型 注 射 器 内 に203HgC12試. 薬 を 入 れ て お き,バ ブ. リン グの 直 後 にバ ブ ラー 内 のO2‑溶. 液 に 注 入 した.. 常 の 水 銀 イ オ ン 還 元 装 置. ー. オ キ サ. イ. ド ア ニ オ. ン に. お け. る 付. 加 装 置. 水 銀 イ オ ン還 元 装 置 ⑤ イ ンキ ュ ① 空 気 ポ ンプ ② ピ ンチ コ ッ ク ③ 気 体 流 量 計 ④ 反 応 混 合 溶液 を入 れて い る小 型 バプ ラー べー ター ⑥0.5%シ ス テ イ ン水 溶 液 ⑦ ⑧ ホ ップ カラ イ トフ ィル ター ⑨6%KMpO疏 酸 酸性 溶液 ⑩ 203HgCl2水 溶 液 が 入 っ て い る小 型 注 射 器 ⑪ 三 方 活栓 ⑫O2‑溶 液 → 空 気 の 流 れ を示 す..
(4) 606. 倉. 橋. こ れ は ス ー パ ー オ キ サ イ ドア ニ オ ン が 水 と反 応 し て,分. 解 す るの を 防 ぐた め で あ る. 示 す様. ブ リン グ時 間 は30分 間 で 、 イ ン キ ュ ベ ー. タ ー の 調 整 温 度 は37℃ と0℃ で あ る. 2). バ ブ ラ ー か ら生 じ たHgOは,. ン 溶 液 を通 して,ミ. O3 15%Ag2O 60%,. CuO. 50%,. 5%),ホ 40%)を. わ た り詰 め,両. 0.5%シ. ス ト状 態 のHg++を. ホ ッ プ カ ラ イ トI(MnO2. CuO. 各 々 同 じモ ル 濃 度 に つ い て還 元率 を3回 測 定 し,平 均 値 及 び 標 準 偏 差(SD)を. 30%,. Co2. 求 め た.. 5.. マ ウ ス肝 ホ モ ジ ネ イ ト超 遠 沈 上 清 分 画 の カ. 1). 試 料 を20℃ に てperborate法. ステ イ 捕 獲 後,. タラー ゼ活性 の測 定 に て カ タ ラー. ゼ 活 性 を 測 定 し た.. ップ カ ラ イ トII(MnO2. ガ ラ ス 管6mm内. (注;分 母 の 放 射 能 は 添 加 放 射 能 の そ れ と ほ ぼ 等 しか っ た.). 肝 ホ モ ジ ネ イ トに つ い て は,(表1)に に,バ. 康 二 郎. 径 に40m旧に. 端 を 脱 脂 綿 で 塞 い だ フ ィ ル ター. 2). 試 料 を1owry法. に て 蛋 白濃 度 を灘 定 し た.. 3). 1)及. らカ タ ラー ゼ 比 活 性 度(PU/. g)を. 算 出 し た.. び2)か. に,こ の 順 に 通 し て, Hg0を 酸 化 吸 着 し た.そ の 後6%KMnO4酸 出 した. 4.. 結. 性 溶 液 を通 して か ら室 内へ放 1.. 還 元 さ れ たHg0の. 測 定 方 法,並. 3種 の 還 元 物 質 に よ る 添 加 モ ル 濃 度 と水 銀. び に還元率. イ オ ンの 還 元. の 算出 方法. 3種 還 元 物 質 の 添 加 モ ル 濃 度 と水 銀 イ オ ン還. ホ ッ プ カ ラ イ トI,ホ. ッ プ カ ラ イ トIIフ ィル. ター に 酸 化 吸 着 され た203Hg0及 留203Hg++,シ. 果. びバ ブ ラ ー 内 残. ス テ イ ン 溶 液 中203Hg++は,各. を デ ィ ス ポ ー ザ ブ ル 試 験 管 に 入 れ て,ウ. 々. ェルシ. 元 率 を(表2)及. び(図3)に. 質 の 還 元 力 の 比 較 を(表3)に 1). 示 す.又,. 3物. 示 す.. L‑ア ス コ ル ビ ン 酸(ビ タ ミンC)に. よ る還 元. 添 加 モ ル 濃 度 と還 元 華 の 間 に は,(図3,. A). ン チ レー シ ョ ン カ ウ ン タ ー に て放 射 能(cpm)を. に 示 され る様 に,シ グ モ イ ドの 関 係 が 得 られ た。. 測 定 し,下. 50%還. 記 の 式(左. た 放 射 能 を 示 す)に. 辺 は何 れ も測 定 し算 出 し て 還 元 率 を 算 出 し た.. (ホ ッ プ カ ラ イ トI+ホ ップ カ ラ イ トI+ホ ン 溶 液+バ. ブ ラ ー)×100=水. 2). ステイ. 銀 イ オ ン還 元率. 表1. 得 られ. た.. ップ カ ラ イ トII)/(ホ. ッ プ カ ラ イ トII+シ. 元 の モ ル 濃 度 は2.48±0.13μMが. DL‑α ートコ フ ェnー. ル(ビ タ ミンE)に. よる. 還元 添 加 モ ル 濃 度 と還 元 率 の 間 に は(図3,. 試 料 の 調整 方 法. B)に.
(5) 試験 管 内 水銀 イ オ ン還 元実 験. 607. 示 さ れ る様 に, L‑ア ス コル ビ ン酸 と同 様 に シ グモ. 外 に ガ ス が 発 生 し た.こ. イ ドの 関 係 が 得 られ た. 50%還. イ ドア ニ オ ンが,不 均 化 反 応10)を起 こ し て,以 下. 0.05mMで 3). 元 の 濃 度 は0.71±. あ っ た.. ス ー パ ー オ キ サ イFア. の 反 応 式 に て,酸 ユ オ ン に よ る還 元. プaン. グ以. 素 ガ ス と過 酸 化 水 素(H2O2). 2O2‑+2H+→H2O2+O2 添 加 モ ル 濃 度 と還 元 率 の 閥 に は(D3, 示 され る様 に,直. C)に. 線 関 係 が 得 ら れ た. 50%還. の 濃 度 は 外 挿 で274.6±28.6mMで. 表2‑A. ー パ ー オキサ. が 生 じた もの と考 え ら れ た.. スー パ ー オ キ サ イ ドア ニ オ ン 溶 液 に 放 射 性 塩 化 第 二 水 銀 水 溶 液 を 注 入 す る と,バ. れ は,ス. 元. あ っ た.. L‑ア ス コ ル ビ ン 酸 に よ る 添 加 モ ル 濃 度 と 水 銀 イ オ ン還 元 率. 表2‑B. A. L‑ア ス コ ルピ ン酸 添 加 モ ル濃度. B. DL‑α‑ト. C. スー ハ ー オキ サ イ ドア ニ オ ン添 加 モ ル濃 度. 〓. DL‑α‑ト コ フ ェ ロ ー ル に よ る 添 加 モ ル 濃 度 と水 銀 イ オ ン還 元 率. 表2‑C. スー パ ー オ キサ イ ドア イ オ ンに よ る添加 モ ル 濃度 と水 銀 イ オ ン還 元率. 図3. 表3. コフ ェ ロー ル添 加 モ ル濃 度. 〓. 〓. 3種 の還 元 物 質 の 添加 モ ル濃 度 と水 銀 イオ ン 還 元率. 3種 還 元 物 質 に よる水 銀 イオ ン還 元 の 比較.
(6) 608. 倉. 又,各. 々 の 平 均 値 は , Welchの. 橋. 康 二 郎. 方 法 でP<0.05 考. で有 意 で あ った. 2.. マ ウ ス 肝 ホ モ ジ ネ イ ト超 遠 沈 上 清 分 画 の カ. 3種 の 還 元 物 質 に つ い て;. タ ラ ー ゼ 比 活 性 度 と塩 化 第 漏 水 銀 の 還 元 率 PVP溶. 液 及 びPB溶. 液 を用 い て 作 成 し た. 察. L‑ア ス コ ル ビ ン 酸(ビ タ ミ ンC)は. 壊 血 病の 予. ,肝 ホ モ ジ ネ イ ト超 遠 沈 上 清 分 画 の カ タ ラー ゼ 比 活. 防 と治 療 に な る と古 くか ら認 め ら れ て お り,強. 性 度 と,水. 水 素 を放 出(電 子 を2個. 4)に 1). 銀 イ オ ン 還 元 率 を(表4)及. 示 す.. の. L‑デ ヒ ドロア. ス コル ビ ン 酸 に な る.そ の 中 間 体 と し て ラ ジ カ. カタ ラーゼ 比活 性度. て い る237.. %PVP(pH. 6.8)燐 酸 緩 衝 液 に て 作 成 した 上 清. 4.0)に. あ り, 8 .5%sac.. 11. て 作 成 し た 上 清 分 画 は,. 97.7±31.7PU/gで. 今 回 の 実 験 で は, 2.48μMの のHg++の50%還. 濃 度 で,約1μM. 元 が 行 わ れ , 3物 質 の 中 で は 最. も還 元 力 が 強 か っ た.. あ った .前 者 は 後 者 の ほ ぼ12. 倍 で あ り, P<0.01(n=3,. 又L‑ア ス コル ビン酸 の 添 加 モ ル 濃 度 と水 銀 イオ. 3)で 有 意 で あ っ た.. ン の 還 元 率 の 問 に シ グ モ イ ドの 関 係 が得 られ た. マ ウ ス 肝 ホ モ ジ ネ イ ト上 清 分 画 に よ る 塩 化. こ と は, L‑ア ス コ ル ビ ン酸 が 間 与 す る 反 応 は ,あ. 第二 水 銀 の還 元. る 濃 度 に 達 す る と急 速 に そ の 反 応 が 強 く な り,. (1) ペ ル オ キ シ ソ ー ム か ら カ タ ラ ー ゼ を上 清 分 画 に 遊 離 さ せ な い 方 法,期. 9 .0)を 嗣. 30分 間 の 超 遠 沈 後 の 上 清 分 画 に. よ る還 元 率40.127±0.038%で ゼ を 遊 離 させ る 条 件,即 (pH 6.8)を. あ とは 急 速 に 飽 秘 す る こ とが 考 え られ る 、. ち8.5%sacchar‑. 11%polyvinylpyrrolidone(pH. い て78,600g,. あ り,カ ち44mM燐. DL‑α‑ト コ フ ェ ロー ル は 脂 溶 性 物 質 で あ り,最 初 は 抗 不 妊 因 子 と して の 作 用24)が 中 心 で あ っ た が,そ. の後 抗酸 化物 質 としての作 用が 注 目され. タ ラー. て き た25).L‑ア ス コ ル ビ ン酸 と 同 様 に 生 体 内 に発. 酸緩 衝液. 生 す る ラ ジ カ ル の ス カ ベ ン ジ ャ ー と して の 作 用. 用 い た 上 清 分 画 に よ る還 元 率 は,. 0.020±0.003%で. 前 者 は 後 者 よ り6.4倍 高 い還 元. 率 を得, Welchの. 方 法 で, p<0.05で. 有意 で あっ. た (2). 放 出)し,. ル を も つ モ ノ ヒ ドロ ア ス コ ル ビ ン 酸 が 報 告 さ れ. 分 画 は, 1,213±121PU/gで. ose,. い 還 元 作 用 を も っ て い る.酸 化 さ れ る と2個. マ ウ ス 肝 ホ モ ジ ネ イ トの 超 遠 沈 上 清 分 画 の. 44mM(pH. 2). び(図. や 脂 肪 の 酸 化 を防 ぐ作 用 が,報 告 され てい る26)27). DL‑α‑ト コ フ ェ ロー ル の 構 造 は,飽 和 イ ソプ レ ノ イ ド側 鎖 と ク ロマ ン環 か ら な っ て お り鋤 ,構 造 的 に は1molの. 8.5%sac.. 11%PVPの. 上 清 分 画 の0℃. で の 還 元 率 は0.020±0.004%で 0.127±0.038%と. はWelchの. あ り, 方 法 で,. 可 能 で4生. 分 子 か ら2molの. 電子 の放 出が. 体 系 で 綱 定 さ れ た代 謝 産 物 と して は. 37℃ の p<0.05. で 有 意 で あ っ た.. 表4. 肝 ホ モ ジ ネ イ ト超 遠 沈 上 清 分 画 の カ タ ラー ゼ 比 活 性 度 と水 銀 イ オ ン還 元率. 図9. 肝 ホ モ ジネ イ ト超 遠 沈上 清 分 画 の カ タ ラーゼ 比 活 性 慶 と水 銀 イ オン還 元 率m+SD.
(7) 試験 管 内水銀 イ オ ン還 元実 験 トコ フ ェ ロ ー ル キ ノ ン体 が 広 く知 られ て い る29). 一 方ESRで の 研 究 で は1モ ル の 分 子 か ら必 ず し も2モ. ルの 電 子が放 出 され るとは 限 らない と し. で い る30).. 609. 生 体 内 で 働 くL‑ア ス コ ル ビ ン酸, DL‑α‑ト コ フ ェ ロ ー ル,ス. ー パ ー オ キ サ イ ドア ニ オ ン の 還 元. 力 は,ビ ア ス コル ビ ン酸>DL‑α. ートコフ ェ ロー ル>. スー パ ー オ キ サ イ ドア ニ オ ン の 順 で あ っ た.. 今 回 の 実 験 条 件 で は,先 のLア. ス コ ル ビ ン酸 が. 水 溶 液 中 で あ る の に 対 し, 75%メ. タノー ル溶液. とい う 違 い が あ り, L‑ア ス コル ビ ン酸 に よ る 還 元. 肝 細 胞 の 超 遠 沈 上 清 分 画 に よ る水 銀 イ オ ン の 還 元 に つ い て; 細 胞 中 の ペ ル オ キ シ ソー ム か ら の カ タ ラ ー ゼ. と同 じ条 件 下 の 直 接 の 比 較 は 困 難 で あ るが,(表. の 遊 離 の 少 な い 上 清 分 画(8.5%sac.. 3)に 示 す よ うに, 0.709mMの. 条 件 下)の カ タ ラ ー ゼ 比 活 性 度 は, 97.7PU/gで,. のHg++の50%還. 濃 度 で,約1μM. 元 が 行 わ れ, 50%還. 元 の モ ル数. 遊 離 させ る 条 件 は, 1,213PU/gで,前. の 逆 数 で示 す 還 元 力 は ビ ア ス コル ビ ン 酸 の 約1/. よ り12.4倍 低 か っ た.一. 300で あ っ た.. は 前 者 は 後 者 よ り6.4倍 高 か っ た. こ れ は,還. スー パ ー オキサ イ ドア ニ オン(O2‑)はpotassium superoxide(KO2)と. し てGay. Lussac(1811年). 方,水. は キ サ ン チ ンーキサ ン チ ン オ キ シ ダー ゼ 系 や 他 の. に よ る と考 え られ た.. と もに生. 又, とは,こ. オ キ サ イ ドア ニ オ ン(O2‑)は,ス. 推 定 され た.. ー パ ー オ キサ. に な32),過. の 還 元 反 応 に 関 す る酵 素 反 応 の 関 与 が. 不 均 化 反 応 で,. 結. 酸 素(O2). 酸 化 水 素 は 細 胞 中 の ペ ル オ キ シ ソー. 用 の相違. 0℃ に て 殆 ど還 元 が 認 め ら れ な か っ た こ. じ得 る と さ れ て い る10).細 胞 中 で 生 じた ス ー パ ー. イ ドデ ィ ス ム ター ゼ(SOD)の. 銀 イ オ ン還 元 率. る 肝 カ タ ラ‑ゼ の ペ ル オ キ シ ダー ゼ 作 用 に よ る 金 属 水 銀 の 再 酸 化(Hg0→Hg++)作. 既 述 の 式 の ご と く過 酸 化 水 素(H2O2)と. 者 は後者. 元 反 応 で 生 じた 金 属 水 銀1こた い す. に よ り初 め て 合 成 され た 物 質 で あり31),酵 素 系 で. 様 々 な 酸 化 還 元 の 酸 素 系 か ら, H2O2と. 11%PVP. In vitroで3種. 論. 類 の 還 元 物 質 即 ち, L‑ア ス コ ル. ム 中 に 豊 富 に 存 在 す る カ タ ラー ゼ で 水(H2O). ビ ン酸, DL‑aー トコ フ ェ ロー ル,ス ー パ ー オ キサ. と酸 素(O2)に. イ ドア ニ オ ン に 放 射 性 標 識 塩 化 第 二 水 銀. 分 解 処 理 さ れ る10).. スー パ ー オ キサ イ ドア ニ オ ン は,過 と問 様 に 反 応 の 権 手 の 被 酸 化 性,被. 酸化 水素. 環 元性 によ. (203HgCl2)を. 加 え て, 37℃ の イ ン キ ュベ ー ター. に セ ッ ト し た 小 壁 バ ブ ラー で5分. 間 バ ブ リン グ. り,酸 化 剤 と して も働 き,又 還 元 剤 と し て も働. して 還 元 され 生 じた 金 属 水 銀 を 測 定 す る 方 法 で,. く とい う報 告 が あ る33).. 還 元 率 を 算 出 し た。. 緒 方,剣 持 ら は キ サ ン チ ンーキサ ン チ ン オ キ シ ダー ゼ 系 か ら ス ー パ ー オ キ サ イ ドア ニ オ ン を生 成 させ て 水 銀 イ オ ン を 還 元 させ,両. 者 間 に 直線. 元率 と濃度 の 間に. 又,今. 回 純 粋 な ス ー パ ー オ キ サ イ ドア ニ オ ン ー パ ー オ キ サ イ ドア ニ オ ン に よ っ. 接 触 す る とす み や か に分 解 して. Oと の 接 触 に よ る 分 解 を 防 ぐ工 夫 を し た が,. 3. 物 質 の 中 で は最 も低 い 還 元 力 で あ り,約1μMの. 274.6mMで. あ っ た.. 元 す る モ ル 濃 度 は,外. 装で. ー. パ ー オ キ サ イ ドア ニ オ ン で は 直 線 関 係 が 得 ら れ た. 水 銀 イ オ ン を50%遠. 元 す る3物 質 の 各 々 の. 添 加 モ ル 濃 度 は ビ ア ス コ ル ビ ン酸 で2.48μM, ‑a‑ト. O2ガ ス を 生 じ う るの で,バ ブ リ ン グ直 前 ま でH2. 水 銀 イ オ ン を50%還. 間 に はL‑ア ス コ ル ビ ン酸 とDL‑α‑ト コフ ェ ロー ル. 2). て 水 銀 イ オ ン を還 元 す る こ と を確 認 し た, O2‑はH2Oに. 下 に 承 す と お りで あ る.. 3種 の 還 元 物 質 の 添 加 モ ル 濃 度 と選 元 率 の. で は シ グ モ イ ド曲 線 を示 す 関 係 が 得 ら れ,ス. は 岡 様 な 直 線 関 係 を観 察 し た.. を用 い て,ス. ウ ス 肝 臓 ホ モ ジ ネ イ ト超 遠 沈 上 清 分 画. 得 られ た結 果 は,以 1). 関 係 の 存 在 す る こ と を 報 告 した18). 今 回 の 筆 者 の 実 験 も又,還. 又,マ. に つ い て も 同 様 の 還 元 実 験 を行 っ た.. コ フ ェ ロ ー ル で は0 .71mM,ス. サ イ ドア ニ オ ン で は274.6mM(外 還 元 力 はL‑AsA>DL‑α. DL. ーパー オキ 挿)で. ーtoco.>O2‑の. あ り,. 順 を承 し. た. 3). マ ウ ス 肝 ホ モ ジ ネ イ ト超 遠 沈 上 清 分 画 に よ.
(8) 610. 倉. る塩 化 第 二 水 銀 の 還 元 は,ペ ら カ タ ラ‑ゼ. ル オ キ シソー ムか. 康 工 郎. さ れ た.. を余 り遊 離 させ な い 上 清 分 画(即. ち8.5%saccharose, rolidone,. 橋. 11%polyvinylpyr. 4). 37℃ と0℃. で の 還 元 は0.127%と0.020%で. 上 記 の 還 元 反 応 は 酵 素 反 応 と推 定 さ れ た.. pH 4.0を 用 い て ホ モ ジ ネ イ トを作 成). の カ タ ラ ー ゼ 活 性 は,カ. タ ラー ゼ を 遊 離 させ る. 上 清 分 画 の そ れ よ り12.4倍 低 か っ た.又,前. 者. に よ る還 元 率 は 後 者 よ り6.4浩 高 か っ た.こ の 結 果 は,上. 清 分 画 で 還 元 され 生 じた 金 属 水 銀 に 対. す る,肝. カ タラーゼ の ペ ル オキ シダー ゼ作 用に. 稿 を終 え る にあ た り,絶 え ず御 指 導,御 校 閲 いた だい た岡 山 大 学 医学 部 公衆 衛 生 学 教 室 緒方 正 名 教 授 に深 謝 い た します. なお 本論 の要 旨は 第58回 日本衛 生 学 会 総 会 にて 発 表 した.. よ る 金 属 水 銀 の 再 酸 化 作 用 の 相 違 に よ る と推 定. 文 1). 献. 喜 多 村 正 次,近 藤 雅 臣,瀧 澤 行 雄,藤 井 正 美,藤 木 素 士 共 著:水. 銀,講 談 社 サ イ エ ン テ ィ フ ィ ッ ク,東 京(玉976). pp. 261‑395. 2). 日本 化 学 会 編:水. 銀,丸. 善 排 式 会 社,東. 京(1977)PP.. 99‑100,. 3) Rothstein A and Hayes AD: The metabolism of mercury in the rat studied by isotope techniques. Pharmacol 4). Hayes AD and Rothstein A: The metabolism of inhaled mercury vapor in the rat studied by isotope techniques.. 5). J. Exp Ther (1960) 130, 166-176. J Pharmacol. 只 友 淳 雄:. Hg203(NO3)2を. Exp Ther (1962) 138, 1-10. 用 い た 水 銀 中 毒 に 関 す る実 験 的 研 究.第3編,. 動 並 び に 水 銀 の 排 泄 状 況 に 関 す る研 究.岡. 山 医 誌(1962)74,. BAL投. 与 時 の蛋 白結合 水 銀 の 変. 713‑727.. 6) Clarkson T and Rothstein A: The excretion of volatile mercury by rats injected with mercuric salts. Health Phys (1964) 10, 1115-1121. 7) Nielsen-kudsk. F: Uptake of mercury vapor in blood in vivo and in vitro from Hg-containing. Acta Pharmacol 8) Nielsen-kudsk. Toxicol. (1969) 27, 149-160.. F: Factors influencing the in vitro uptake of mercury vapor in blood.. macol Toxicol. air.. Acta Phar. (1969) 27, 161-172.. 9) Magos L, Sugata Y and Clarkson TW: Effects of 3-amino-1, 2, 4-triazole on mercury uptake by in vitro human blood samples and by whole rats. 10). ス ミ ス,ヒ. ル,レ. ー マ ン,レ. フ コ ビ ッツ,ハ. Toxicol. ン ドラ ー,ホ. Appl Phamacol. ワ イ ト:生. (1974) 28, 367-373.. 化 学[I],廣. 川 書 店,東. 京(1986)PP. 273‑274.. 11) Magos L, Clarkson TW and Greenwood MR: The depression of pulmonary vapor by ethanol:. identification. of the site of action. Toxicol Appl Pharmacol. 12) Dunn D, Clarkson TW and Magos L: Ethanol-increased. exhalation. retention of mercury (1973) 26, 180-183.. of mercury in mice.. Br J Ind. Med (1978) 35, 241-244. 13). 倉 橋 豪 二 郎:水. 銀 蒸 気 暴 露 後 の 生 体 内 分 布 と エ タ ノー ル の 影 響.岡. 14) Ogata M and Ikeda M: Mercury uptake by acatalasemia homogenates. 15) Sugata. 山 医 誌(1989)101,. mice and their erythrocytes,. of inhaled mercury vapor in. mice. Environ Sci Health (1979) 13, 97-106.. 16) Eide I and Syversen TLM: guinea-pig,. lung and liver. Int Arch Occup Environ Health (1978) 41, 87-93.. Y, Halbach S, Allen J and Clarkson TW: Tissue distribution. acatalasemic. 629‑646.. Uptake of elemental mercury and activity of catalase. normal and acatalasemic. mice. Acta Pharmacol et Toxicol. in rat, hamster,. (1982) 51, 371-376..
(9) 試験 管 内水 銀 イ オ ン還 元実 験. 611. 17) Ogata M, Kenmotu K, Hirota N, Meguro T and Aicoh H: Mercury uptake in vivo by normal and acatalasemic. mice exposed to metallic mercury vapor (203Hg0)and injected with metallic mercury or. mercuric chloride (203HgCl2) Arch Environ Health 18) Ogata M,. Kenmotu. exhalation -30 .. K,. Hirota. N,. (1985) 40, 151-154.. Meguro M and Aicoh H: Reduction. of mercury in acatalasemic. of mercuric. ion and. mice and normal mice. Arch Environ Health (1987) 42, 26. 19) Dunn JD, Clarkson TW and Magos L: Ethanol reveals novel mercury detoxification. step in tissues.. Science (1981) 213, 1123-1125. 20) Valentine JS and Curtis AB: A convenient preparation reaction of superoxide 21). 中沢. 透:ラ. anion with a copper (II) complex.. ッ ト肝 の ミ ト コ ン ド リ ア:細. 胞 分 画 法,佐. 22) Greenfield RE and Price VE: Liver catalase. 23). 荒 川 信 彦:ア 人,東. 藤. anion and the. J Am Chem Soc (1975) 97, 224-226 .. 了 編,岩. 波 書 店,東. 京(1972)PP. . 149‑154.. J Biol Chem (1956) 220. 607-618.. ス コ ル ビ ン 酸 と そ の 関 運 化 合 物 の 化 学;tタ. 京(1980)pp.. of solutions of superoxide. ミ ン 学[II],日. 本 ビ タ ミ ン 学 会 編,東. 京化 学 同. 569‑578.. 24) Evans HM and Bishop KS: On the exsistence of a hitherto unrecognized dietary factor essential for reproduction.. Science (1922) 56, 650-651.. 25) Olcott HS and Emerson OH: Antioxidants. and the autoxidation. of fats.. IX. The antioxidant. properties of the tocopherol. J Am Chem Soc (1937) 59, 1008-1009. 26) Dam H: Influence of antioxidants and redox substances on signs of vitamin E defficiency. macol Rev (1957) 9,. 27) Tappel AL: Vitamin E as the biological lipid antioxidant. 28) Lucy JA: Functional. Phar. 1-16. and structural. Vitam Horm (1962) 20, 493-510.. aspects of biological membranes:. for vitamin E in the control of membrane permeability. and stability.. A suggested structuralrole. Ann N Y Acad Sci (1972) 203,. 4-11. 29). 中 村 哲 也:ビ. タ ミ ンEの. 吸 収 と代 謝;ビ. タ ミン 学[I],. 日本 ビ タ ミン学 会 編,東. 京 化 学 同 人,東. 京(1980). PP. 199‑208.. 30) Svanholm U, Bechgaard K and Parker. VD: Electrochemistry. Reversible oxidation products of the a-tocopherol dication. 31)中. 野 pp.. cation radical,. acidity. cation,. VIII. and. J Am Chem Sac (1974) 96, 2409.. 稔,松. 浦 輝 男,二. 木 鋭 雄:. O2の 歴 史:ス. ー パ ー オ キ シ ドO2‑,松. 浦 輝 雄 編,医. 歯 薬 出 版,東. 京(1986). 7‑10.. 32) McCord 33). in media of intermediate. model compounds,. JM and Fridovich. 菅 野 龍 也,櫻. 木 宏 親,吉. I: Superoxide. 田 政 幸:ス. dismutase.. J Biol Chem. ー パ ー オ キ シ ドの 化 学.有. (1969). 244, 6049-6055.. 機 合 化 協 会 誌(1979)37,. 335‑345..
(10) 612. 倉 Study. of. the. 橋. reduction. of. 康 二 郎. mercuric. ion. by. L-ascorbic. acid,. DL-ƒ¿-tocopherol, superoxide. anion. and. the. - Experiment. of. supernatant. the in. of. oxidation vitro. or. and. in. - part Kouzirou of. reduction. The. of 203Hg++ of. results. mouse obtained. 1. The. relationships. L-AsA. or. by. liver. 700,. L-ascorbic. as. between. Japan M.. acid, after. School,. Ogata). pL-a-tocopherol, the. superoxide. ultracentrifugation. anion. were. and. the. performed.. follows.. the. DL-a-tocopherol. mercury. Health,. Medical. Prof.. homogenate. were. of. vivo. Public. University. (Director: The. reduction. homogenate.. 1. Okayama. supernatant. liver. KURAHASHI. Department Okayama. mouse. were. reductive shown. ion. and. a sigmoidal. rate. curve;. that. of. in decreasing. order. with. L -AsA,. as. of. mercuric. the the. concentration. of. superoxide. anion. the was. a linear. 2. The. activity. superoxide 3.. The. of anion,. liver with. isomes.. Another. was. released. tion. was. and. . This reaction.. was. was. used. with. 37•Ž suggests. of. preparation from. peroxisomes. higher. catalase. of. performed. that. the. 44mM. the. the. to. ion. reduction of. prevent. rate. latter.. by. mercuric. of. It. 11%. release. pL -a-tocopherol,. and. of. by. of. mercuric. mercuric. this in liver. catalase. ion that. supernatant. ion. polyvinylpirrolidone. 6.8)solution. indicates. rate liver rate. and. buffer(pH. reductive. mercuric The. sucrose. phosphate. reductive. with. reduction. 8.5%. homogenate. The than. reduced. experiment was. the used. times the. 4. A reductive 0•Ž. Hg++. preparation. 6.4 by. of. respectively.. homogenate. solution. mercury. reduction. with. the. the. the. perox. liver. catalase. former. reoxidation. prepara of. metallic. and. PVP. ion. containing. sample. from. and. the. (PVP). at. homogenate. 0•Ž. sucrose is 1/5.48 is due. to. of. that. an. enzymatic. at. at 37•Ž.
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