ヒト膵臓におけるsuperoxide dismutase （SODs） の免疫組織化学的局在と糖尿病におけるその変動

原 著

〔書略薔、5第難、劉卸

ヒト膵臓におけるsuperoxide dismutase（SODs）の

免疫組織化学的局在と糖尿病におけるその変動

東京女子医科大学 第一病理学教室（主任：小林 愼雄教授） フ       キヨウ

付      強

（受付 平成3年12月12日） Imm皿ohistocllemical Localization of Superoxide Dismlltase in Human       Pancreatic Islets and Diabetes Melhtus        Qian FU Department of Pathology（Dir㏄tor：Prof． Makio KOBAYASHI）          Tokyo Women’s Medlcal College    The distribution of CuZn superoxide dismutase（SOD）and Mn superoxide dismutase in islets of the pancreas of non・diabetic and diabetic sublect was examined by immunoenzyme methods． It was found that the alpha， beta and delta cells of islet are immunoreactivity for CuZn SOD， whereas exhibited very low or no immunoreactivity for Mn SOD． By double immunoelectron micrGscopy of protein A・gold technique， the CuZn SOD was distributed uniformly throughout the nuclei and cytoplasmic matrix of beta ce11， but not in lysosomes． Only weak immunoactivity of Mn SOD were detected in cytoplasmic matrix， but not in mit㏄hondria． It was characterized by enhanced immunostaining of CuZn SOD in secretory granules of alpha and delta cells．    SODs in pancreatic islets is consistently expressed during human development and increased s童gnificantly during gestation and after birth， but no chronological difference in growth after 601d years． It was demonstrated that positive immunostaining for CuZn SOD decreased on diabetic i合lets and particularly significant in islets with hyaline degeneration． But there were no obvious difference in duration of the disease． These facts suggested that the superoxide radicals might be p董ay a role to cell injury of pancreatic islets．        緒  言  Superoxide dismutase（SOD）は， oxygen radicalsの一つであるsuperoxide radical（02） を消去することにより，02の引き起こす細胞障害 から生体を防御する酵素で，臓器虚血，組織損傷， 発癌，老化，糖尿病等において重要な役割を果た していることが確認され1）∼5），また生化学的なら びに免疫組織学的検索によって，多くの組織細胞 に分布することが明らかになった6）7）．高等動物に

おいては，細胞内の局在からcytosolのCuZn

SODとmitochondriaのMn SOD，および

extracellular SODの3種類に分類されてい

る8）．  最近，糖尿病の発症に関連して，oxygen radi− calsによるβ細胞障害とこの障害に対するSOD の保護作用が注目されている．Crouchらのラッ トの分離した膵島に対するstreptozotocin， allox− anまたはVacorの投与実験では，膵島のβ細胞 が選択的に破壊され，同時に膵島内のSODの含 有量が40％減少していた9）．桜井らもoxygen rad− icalsのβ細胞への障害によりinsulin分泌は著 減し，またSODとcatalaseの前投与によってβ

細胞の障害が抑制されたと報告している1D）．  臨床的に，II型糖尿病患者において赤血球での SOD含量を測定した結果では，対照群に比較して 有意に減少していたという11）．これらの事実から， 糖尿病における膵島β細胞の障害はfree radi− calsの増加，或いはこれを消去するscavengerで あるSODの減少によって生じる可能性を指摘す る報告が多い12）．  一方，ヒト膵島内のCuZn SODの免疫局在につ いては既にSamuelらが，主としてβ細胞に分布 していることを明らかにしている13）．しかし，膵島 内の各細胞，特にβ細胞におけるSODsの分布と

糖尿病患者の膵島のSODsの免疫局在の変動は

これまでに報告がみられない，本研究の目的は， ヒト膵島におけるβ細胞内のSODs（CuZn SOD とMn SOD）分布をプロテインA一コロイド金法 を用いて検索し，また非糖尿病群（胎児，新生児， 幼児，成人）および糖尿病群での膵臓における SODsの局在を免疫組織学的に観察して，酵素局 在の変動と糖尿病の発症との関連性を検討するこ とにある．         材料と方法  1．対象  免疫組織学的検索を目的とするヒト膵組織は全 て東京女子医科大学病理学教室の剖検材料で，そ の内訳は胎児（胎齢22∼36週）4例，新生児（28

日以内）3例，幼児（5ヵ月∼6歳）2例，糖尿

病例（19∼82歳）45例（IDDM：1例， NIDDM： 44例），糖尿病の対照群として，非糖尿病成人群 （31∼81歳）19例であり，胎内死亡の例を除いて， 死後時間は3時間以内である．免疫電顕による観 察を目的とするヒト正常膵組織は本学消化器病セ ンターにおける胃癌症例で胃切除術の行われた患 者（3例，28∼64歳）について，術中必要に応じ て採取された膵尾部組織の一部を用いた．  2．組織学的検索  剖検材料は採取後直ちに10∼50％ホルマリンで 固定後，アルコール系列で脱水，パラフィン包埋 とした3μmの組織切片を，hematoxylin eosin（H． E．）およびMasson trichrome染色で膵島の病理 所見を観察した．  3．免疫組織学的検索  酵素抗体法（PAP法）14）を用いて連続切片によ りinsulin， glucagon， somatostatinおよびSODs の免疫染色を行い，膵島内の各細胞におけるホル モン免疫活性とSODsの局在を観察した．3μmの パラフィン切片は脱パラフィン後，3％H202に10 分間浸した後，normal swine serumに1時間反 応させた．SODsの1次抗体は山梨医科大学小児 科朝山博士より恵与されたヒト赤血球，肝から精

製されたSODに由来する抗human CuZn SOD

（5，000：1）および一一human Mn SOD（5，000： 1）ポリクローナル抗体を用いてそれぞれ4℃に て12時間反応させた．一次抗体の特異性について は，朝山らがradio immunoassay法を用いて確認 している15）．対照には，正常家兎血清（DAKO社 製）を用いた．insulin， glucagon， somatostatin 染色の一次抗体は市販抗血清（DAKO社と藤沢製 薬）を用いた．

 二次抗体は抗家兎swine血清（DAKO社製，

1：100）を用いて37℃にて1時間反応させた．反 応後，PAP複合液（DAKO社叢，1：100）に37℃ にて30分間反応させた．また各反応ごとに切片は 0．1M PBSにて15分間洗浄した．抗体反応後の呈 色はdiaminobenzidine（DAB）を用いMayer’s hematoxylin液で核染色を行った．  膵臓組織内SODの免疫組織学的判定はその陽 性所見の程度に応じて，陰性（一），微弱陽性（±）， 弱陽性（＋），強陽性（升）に分けてジ検討した．  4．免疫電子顕微鏡学的検索  膵臓生検の組織片（1mm3）は1％のグルタール アルデヒド液に4℃，2時間固定後，型のごとく アルコール系列にて脱水，・epon包埋後，80nmの 超薄切片を作製した．Bendayonらの方法16）に従 い，プロテインA一コロイド金法を用い，Cu SOD およびMn SODのそれぞれとinsulin， glucagon， somatostatinとの二重免疫染色を行った．ニヅケ ルグリッド上の切片の両面をそれぞれ0．5％H202 で10分，一次抗体で12時間，希釈プロテインA金 溶液で45分間の順序で，室温で反応させた．二次 抗体とするPAGは， BIOCELL三二の抗家兎im− munoglobulinヒツジ血清一gold colloidal parti一

cles（10および20nm径）を用いた．2％酢酸ウラ ン溶液中で5分間，4％クエン酸鉛溶液中で1分 間電子染色を施し，日立HU12A型電子顕微鏡（加 速電圧75KV）により観察した．          結  果  1．正常膵組織におけるSODsの免疫組織学的 観察  CuZn SODは膵の外分泌腺においては，腺房中 心細胞，介在導管，導管，神経束また血管内皮細 胞と平滑筋細胞に爾漫性に認められた．膵島内に おいては連続切片で観察すると，α，β，δ細胞に 陽性であった．Mn SODは外分泌腺においては主 に腺房細胞と導管に散在性に染色された．また， CuZn SODに比較するとMn SODの染色性は弱 く，膵島においては，一部の例に微弱陽性である ことを除いて，大部分の例（糖尿病と非糖尿病を

ぶ

鈴． べ・、 起 乎記 ナ．

、  疑1菊．

   離離遍窺  二

触！む継ぐ、べ贈∵ぞ㌦ 麟滅ベズ照点爵“『，

農冨撫勲冷   沸

欝欝帯諜ゴ    擁静一 ・   覧魯」         攣 “翼

1e 一

難＼1∫ぜ諸撚

       図1a∼f ヒト膵臓内のCuZn SODとMn SODの免疫局在 a）lnsulln， b）CuZn SOD， c）glucagon， d）Mn SOD， e）somatostatm， f）対照． CuZn SOD（b）は膵の外分泌腺における陽性構造は爾漫性てあるが，膵島においてはβ，α，δ細胞 に陽性構造か認められた．Mn SOD（d）は膵島において，陰性てあるが，外分泌腺には散在性（→） に染色された．対照染色（f）の膵島（＊）は陰性．パラフィン3μm連続切片における免疫染色．（100 倍）

表1 ヒト正常膵臓におけるCuZu SODとMn SOD  の免疫組織化学的局在 細胞型 CuZu SOD Mn SOD 外分泌腺 腺房細胞   十 腺房中心細胞 十 _一 介在導管 十 ± 導管 十 十 膵島 α細胞 十 ± β細胞 十 ± δ細胞 十 ± 血管壁 内皮細胞 十 十 平滑筋細胞 十 ± 末梢神経 十 十 ±：染色されない場合もある 含めて）で陰性であった．全てのCuZn SOD， Mn

SODの対照染色は陰性であった（表1，図1a

∼f）．  2．ヒト膵島におけるSODsの免疫電子顕微鏡 学的観察  β細胞内のCuZn SODの染色において穎粒状 の金コロイド粒子は主に細胞核，特に染色質に分 布し，細胞質内基質と細胞内小器官ではミトコン ドリア，分泌穎粒に少数の陽性構造が観察され， 小胞体，ゴルジ装置またライソゾームには殆ど認 められなかった（図2，3）．α，び細胞における 分布はβ細胞と類似するが分泌顯粒における陽 性構造は強かった（図1，4）．Mn SODの染色は， α，β，δ細胞においては，細胞質の基質に少数の 金コロイド粒子がみられるが，ミトコンドリアに は有意の陽性構造は認められなかった（図5）．  3．胎児，新生児における膵臓内のCuZn SOI） 免疫局在の観察  表2に示すように，胎齢20週の膵外分泌腺の CuZn SODの染色では腺房細胞と導管において 弱い陽性構造を認めた．この時期の膵島内におい 図2 ヒト膵島細胞α細胞（G1），β細胞（ln）のCuZn SODとinsulin二重染色免疫電顕， PAG  法 β細胞内のCuZn SOD（直径20nmの金コロイド穎粒，失声：→）は主に細胞核（Nu），細胞質の基 質【Cyt），に分布するが，α細胞では主に分泌穎粒に金コ・イド粒子が認められた． insulinの局在 （直径10nmの金コロイド穎粒，矢印：→）はβ細胞の分泌穎粒に認めた．（→←）はα，β細胞間の lunctionである．（45，000倍， Bar：1μm）

図3 β細胞のCuZn SODとinsulinの二重染色免疫  電顕，PAG法  CuZn SOD（直径20nmの金コロイド三二，矢印：  →）穎粒は細胞基質（Cyt）に認められ，ライソゾー  ム（ly）には陽性構造は認められなかった． insulin  （直径10nmの金コロイド穎粒，矢印：→）はβ細胞  の分泌離離に認めた．（36，000倍，Bar：1μm，右上  角はこの一部の拡大像，60，000倍） 図4 δ細胞のCuZn SODとinsulinの二重染色免疫  電顕，PAG法  分泌穎粒におけるCuZn SOD（直径20nmの金コロ  イド穎粒，矢印：→）の陽性構造は顕著であった．  Somatostatinの染色（直径10nmの金コロイド穎  粒，矢印：→）は分泌穎粒に認めた．（45，000倍，  Bar：1μm） ては，insulin， glucagon， somatostatinは既に明 瞭に染色されたが，CuZn SOD染色は一部分の膵 島がごく僅かに染色されるにすぎなかった（図6 a，b）． SODsの染色は胎齢の増加と共に明瞭とな り，出生してから，膵内，外分泌腺の陽性構造は 増強する傾向にあり，今回の研究では6歳時の例 図5 β細胞のMn SODとinsu］inの二重染色免疫  電顕，PAG法  ミトコンドリア（Mi）にはMn SOD（直径20nmの  金コロイド穎粒，矢印：→）の有意の陽性構造は認  められなかった．insuhn（直径10nmの金コロイド頼  粒，矢印：→）はβ細胞の分泌穎粒に認めた．  （45，000倍，Bar：1μm） 表2 胎児，新生児，幼児，成人における膵臓のCuZn  SODの免疫組．織学局在 番 号 年 齢 性 腺房細胞 導管 腺房中心 @細胞 膵島 11806 胎内22週 女 十 ± _一 ± 9388 _30週 女 一 十 十 ± 10655 32週 女 _一 卦 十ト ± 10763 _36週 男 _一 十 十 ± 11516 _{出生12時間} 女 一 十 十 十 11409 _3日 女 _一 十 什 十 11643 28日 女   十 升 十 11783 2ヵ月 女 一 什 十 十 11823 5ヵ月 女 _一 什 升 十 11421 _6歳 男 _{一 升 升} 十 11672 31歳 女 一 什 升 十 ：陰性，±：微弱陽性，＋：弱陽性，升：強陽性 において，強い染色性が観察された（図7）．その 後は年齢の増加によっても，染色性に変化は認め られなかった（表2）．  4．糖尿病群と非糖尿病群の膵島内の病理所見 とCuZn SODの免疫局在観察  45例の糖尿病剖検例の膵島と対照とした19例の 非糖尿病剖検例の膵臓における病理所見を観察し

’ _{D1∵隔瀞甲 f影，．㌧・議遇}  図6a，b胎児（胎齢        ：22週）における膵臓内のCuZn SODの免疫局在 CuZn SODの染色（a）では外分泌腺の腺房細胞と導管において，弱く染色していた． 膵島内の細胞はCuZn SODでごく僅かに染色されたが，連続切片によるinsulin染色 では（b）明瞭に染色された．（100倍） 図7 6歳の非糖尿病の剖検例におけるCuZn SOD  の免疫局在  内，外分泌腺におけるCuZn SODは明瞭に染色され  た．（100倍） た結果，非糖尿病症例膵島の硝子変性はわずか2 例（10％）に認められるに過ぎず，年齢は全て 60∼70歳代であった．これに対して，44例の非イ ンシュリン依存型糖尿病症例で24例（56％）の膵 島に硝子変性がみられた．1例のインシュリン依 存型糖尿病症例の膵島には，硝子変性は認められ なかった．  膵島のCuZn SODの免疫染色においては，イン シュリン依存型糖尿病（IDDM）の1例は弱陽性に 属し，非インシュリン依存型（NIDDM）の44例で は，34例は微弱陽性あるいは弱陽性で，10例は強 陽性であった．これに対して，非糖尿病成人群の 19例では，弱陽性が1例のみで，残り18例では， 強陽性であった（図8a， b）．そして，糖尿病例の 外分泌腺のCuZn SOD染色の強さも減弱する傾 向がみられた．糖尿病（非インシュリン依存型 NIDDM）と非糖尿病の膵島におけるCuZn SOD 局在変動の比率は，図9に示した．一方，糖尿病 例の中で，硝子変性等の病変がみられる膵島の染 色性はより低下していたが（図8c），糖尿病の罹病 期間（カルテの記録に依存する）とは明らかな相 関は認められなかった．          考  察  Superoxide anions（02）は，活性酸素の一種で， 細胞内のDNA，タンパク質，脂質など多くの分子

     図8a， b， c 非糖尿病と糖尿病例における膵島のCuZn SODの免疫局在 非糖尿病剖検例，膵島のCuZn SODの免疫染色は強陽性（a）．糖尿病剖検例，膵島のCuZn SOD の免疫染色は弱陽性（b）．糖尿病剖検例，膵島に顕著な硝子化変性を伴うCuZn SODの染色は弱陽 性（c）．（100倍） ％ 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 NIDDM _non DM 囮土∼＋ ■＋＋ 図9 NIDDM， non DMの膵島におけるCuZn SOD  の免疫組織化学的局在の変動 と容易に反応して，細胞死，突然変異の誘発，発 癌などの障害においては，重要な役割を果してい る．それに対して，生体にはこの活性酸素を消去 する酵素，superoxide dismutaseが備わってお り，生理的状態では，活性酸素の生成と消去のバ ランスが保たれていると考えられる17）．これまで

の研究によると細胞内CuZn SODの分布は

superoxide anions（02）を生じる場所とほぼ一致 することが認められている18）．  Changらは定量化金コロイド免疫染色法を応 用し，ラット肝細胞内のCuZn SODの分布を観察 しているが，CuZn SODは細胞核と細胞基質に強 く認められ，また，ライソゾーム，ミトコンドリ ア，peroxisomesには陽性構造は認められるが， 小胞体，ゴルジ装置には陰性であった19）．Slotら の研究ではMn SODの強い陽性構造が肝細胞の ミトコンドリアに認められた20）．  本研究ではCuZn SODは細胞核と細胞質に陽 性に認められ，これはChangらの観察結果と一致 しているが，ミトコンドリアでは染色性が低く， ライソゾームには殆ど認められなかった．さらに， Mn SODもミトコンドリアにおいて，有意の染色 性は認められなかった．  好気性細胞内のミトコンドリアは非酵素的な電 子伝達系の酸化によって，多量の02を発生し，細 胞内の02の重要な発生源であると考えられる2）． β細胞のミトコンドリアにおけるこの酵素の欠損 あるいは量の減少はoxygen radicalsによる損傷 を，他の臓器，細胞より，受けやすいことに関連 していると思われる．ライソゾームには細胞内の 消化分解の役割を果たす多数の加水分解酵素が含 まれている21）．GellerらによるとCuZn SODも含

まれており，またラヅトの断食の期間にライソ ゾームの作用が活発化とすると共にCuZn SOD の量：が増加していることから，SODはライソゾー

ムの貧食機能と密接な関連があると推定され

る22）．我々の観察では，ライソゾームにはCuZn SODの有意の陽性構造はな：く，膵島細胞特にβ 細胞の防御機能に影響を与えていることが想定さ れる．  生体の各臓器の発生，特に胎児，新生児におけ る発育とSODの含量の変動に関し， Paynterら がヒツジについて各臓器のSODの含量を調べた 結果によると，肝，肺，腎，また骨格筋ではSODs が生後の仔羊の日齢，月齢の増加と共に増加・して いくことが明らかとなった23）．本研究においては， 22週齢の胎児の僅か数個の膵島にCuZn SODの みが陽性であった．胎児の二四，また新生児の月 齢を経るにしたがい，SODs含量が増加していく 傾向があり，特に出生後の新生児においては染色 性が明らかに増加していた．この結果は，膵臓に おけるSODsの生成または：増加は，膵臓そのもの の発生と関連しており，また胎児の環境変化，特 に出生後，free radicalの増加に対する一種の生 体反応を反映しているものと理解される．  糖尿病膵臓の病理変化に関しては，膵島の硝子 変性がもっとも典型的な病理変化の一つであると 指摘されてきた24）．しかしながら，この変化は糖尿 病患者では59％に認められ，同時に非糖尿病患者 の12％にも観察されている25｝．このことから硝子 変性は，必ずしも糖尿病に特異的な所見ではない と考えられる．  糖尿病の病因に関しては，遺伝，ウイルス感染 或いは他の糖尿病誘発素因と関連があるとされて いるが26），未だ明らかでない．朝山らは，膵島のβ 細胞の破壊とoxygen radicalsとの関連性を指摘 しており12），また，β細胞は選択的にfree radicals の障害を受けやすいという報告もある27）．SODs はfree radicalsのscavengerの一つで，糖尿病を 自然発症したBB rat，またstreptozotocinで誘

発された糖尿病動物を観察した結果，膵島内

CuZn SOD含有量が対照群より著明に減少して いた事実は糖尿病の発症にoxygen radicalsが少 なくとも重要な誘引の一つであると考える根拠と なるであろう28）．  本研究における糖尿病患者の膵組織の免疫組織 学的検索で，糖尿病の膵組織，特に膵島内のCuZn SODの免疫組織化学的活性が著明に減少してい ることが明らかにされた．SODの低下が糖尿病の 発症に直接関連するか否かは断定できないが，膵 島に病変を有する糖尿病症例で，SODの染色が著 明に減弱する事実は，SODの低下により，oxygen radicalsを介した膵島内の病理変化が生じやすい ものと想定される．          結  語  ヒト膵島（糖尿病および非糖尿病例）において， 免疫組織学的方法を用い，光学顕微鏡的，電子顕

微鏡的にCuZn SODとMn SODの局在を検索し

た．  1）膵島においてはCuZn SODが陽性であった が，Mn SODは大部分の例では陰性であった．  2）超微形態学的にCuZn SODの陽性構造はβ 細胞では細胞核，基質に強く認められ，分泌穎粒， ミトコンドリアに軽度で，ライソゾームには認め られなかった．α，δ細胞のCuZn SODの染色性 はβ細胞と類似しているが，分泌穎粒における陽 性構造が顕著であった．Mn SODでは，α，β，δ 細胞内のミトコンドリアにおける免疫局在は認め られなかった．

 3）CuZn SODは胎齢22週で既に膵島に発現

し，生後，徐々に増強する傾向があり，6歳以後 は恒常的に強く染色され，年齢による変動は認め られなかった．

 4）糖尿病（IDDMとNIDDM）例における膵島

のCuZn SODは，非糖尿病例に比較して，明らか に染色性が減弱傾向にあった．膵島の硝子化を伴 う糖尿病症例の染色性ぽより低下していたが，罹 病期間による差は認められなかった．  以上の所見から，糖尿病では膵島のCuZn SOD が減少傾向にあり，oxygen radicalsを介して細 胞障害が生じやすい状態におかれている可能性が 示唆された． 稿を終えるに臨み，終始御懇篤なる御指導，御校閲

を賜わりました小林愼雄教授に深甚なる謝意を捧げ ます．また本研究に御指導，御助言を．ｸきFました教室 の豊田智里助教授をはじあ，諸先生，諸氏，諸嬢に感 謝します．   なお本論文の要旨の一部は第80回日本病理学会総 会（大阪）において発表した．       文  献   1）貴．家 基，凌 光烈，吉田洋二ほか：虚血・血流      再開による脳．superoxide dismutase（SOD）の      変化．Brain Hypoxia 3：51−58，1989   2）Freeman BA， Crapo JD： Biology of disease      free radicals and tissue injury． Lab Invest 47：      412−426， 1982   3）Strand WR， Sesterhenn I， Rusbton HG：      Role of superoxide dismutase in the path・      6genesis of pyelonephritis：Immunological      localization of superoxide dismutase in human      rena玉tissue． J Uro1（Part 2）142：616−618，1989   4）加藤邦彦：老化．蛋・核・酵33：3127−3135，1988   5）Bryszewska CW， Stefaniak B， Nowak S l      Peroxide metabolism enzymes in diabetic chi1・      dren：Re玉ationship to duration an（圭control of      diabetes． Cytobios 47：101−105， 1986   6）Dobashi K， Asayama K， Kato K et a置：Im・      munohistochemical．localization of copper−zinc      and manganese superoxide dismutases in rat      tissues． Acta Histochem Cytoch．em 22：      351−365， 1989   7）Munim A， Asayama K， Ucbida N et aL      Immunohistochemical localization of copper−      zinc and manganese superoxide dismutases in      human tissues． Yamanashi Med J 5：181−188，      1990   8）柳川 明，中川武正：ズーパーオキサイドジス．ム      ターゼ（SOD），日本臨床 47：2501−2504，1989   9）Crouch RK， Ga蹴dy SE， Kimsey G et al：The      inhibition of圭slet superoxide dismutase by     diabetogenic drugs． Diabetes 30．：235−241，1981  10）桜井光一，小川陽子，三浦俊明ほか：活性酸素に      よる生体障害に関する研究（第2報）．ヒポキサン      チンーキサンチンオキシタ一下の0至産生系にお      けるランゲルハン不眠島からのインスリン分泌の      阻害，薬学雑誌 108：150−155，1988 11）Collire A， Wiison R， Bradley H et al：Free     radical activity in type 2 diabetes． Diabetic     Med 7：27−30，1990  12）朝山光太郎：膵島とフリーラジカル．フリーラジ      カルの臨床 1：59−63，1987 13）Gandy SE， Galbraith kA， Cr・ucb RK et a1：     Superoxide dismutases in hu血an islets of lan−     gerhans． N Engl J Med 304：1547−1548，1981 14）川生 明：組織細胞化学（第9回組織細胞化学講    習会）．pp89−110，学際企画，東京（1984） 15）Asayama． K， Janco RL， Burr IM：Sdective    ihduction of manganous superoxide dismutase    in human monocytes． Am J physio1249：    393−397， 1985 16）Bendayan M：Double immunocytochemical    labeling applying the protein A−gold technique．    JHistochem Cytochem 30：81−85，1982 17）米井脩治，泉 忠秀：酸素ストレスによる適応応    答の誘導とその機構．蛋・核・酵 33：31．69」3177，    1988 18）Farber J瓢， Kyle ME， Co】eman JB： Biology    of disease． Mechanisnls of．cell injury by    activated oxygen species． Lab Invest 62：    670−679， 1990 1．9）Cbang LY， S藍①t JW， Geuze田et al：Molec・    ular immunocytochemistry of the CuZn super−    oxide dismutase in rat hepatocytes． J Cell Bi．ol    107：2169−2176， 1988 20）Slot JW， Geuze HJ， Freeman BA：Intrace1・    lular localizaton of the copper−zinc and manga−    nese Superoxide dismutases in rat liver paren・    chymal cells． Lab Invest 55：363−371，1986 21）伊藤 隆∵組織学．pp14−15，南山堂，東京（1979） 22）Geller肌， Winge DR：Rat liver Cu， Zn    superoxide dismutase． J Bi61 Chem 257：    8945−8952， 1982 23）Paynter DI， Caple IW：Age−related changes    i塾 activities of the superoxide dismutase    enzymes in tisSues of the sheep and the effect of    dietary．copper and manganese on these    changes， J Nutr 114：1909−1916，1984 24）平山 章：糖尿病．「現代病理学体系」（．飯島宗一，    遠城寺宗知，吉利 和ほか編），pp29−48，中山書    店，東京（1984） 25）Ma16y AI、，． Daniel BS， Lo皿gnecker S et a1：    The relat圭on of islet a卑yloid to the chnical    type of diabetes． Hum Patho112：917−922，1981 26）Cotran BS， Kumar V， Robbins SL； Diabetes    mellitus」伽Robbins Pathologic Basis of Dis・    ease（Cotran RS， ed）pp994−1002， WB Saunders    Co， Philadelphia（1987） 27）Wohaieb SA， Godin DV：Alteration in free    radical tissue・defense mechanisms in strept・    ozotocin induced diabetes in rat． Diabetes 36．：    1014−1018， 1987 28）Gandy SE， Buse MG， Cmuch RK et a1：    Protective role of superoxide dismutase    against diabetogenic drugs． J CIin Invest 70：    6．50−658， 1990