再生医療実現拠点ネットワークプログラム
『
疾患・組織別実用化研究拠点』（拠点B）
』
課題名：
NKT 細胞再生によるがん免疫治療技術開発拠点
研究代表者 ：理化学研究所 古関 明彦
分担研究機関：千葉大学
慶應義塾大学
国立病院機構
資料３－８ 1NKT細胞標的治療
末梢血 aGalCer/DCs Vehicle/DCs aGalCer/DCs (3 x 106) 7d 14dNKT細胞標的治療の抗腫瘍効果
B16マウス メラノーマ細胞 共同研究 千葉大学医学部 中山俊憲 本橋新一郎（進行肺がん） 岡本美孝(上顎がん） 国立病院機構（術後肺がん） 名古屋医療センター 九州がんセンター 代表 伊藤澄信 樹状細胞 （DCs） GM-CSF + IL-2 １週間培養 a-GalCer NKT/ NK/CD8T アフェレーシス がん 進行肺がん 頭頸部粘膜黒色腫 咽頭がん 上顎癌 口腔がん 喉頭がん 食道がん 術後肺がん先進医療
Bに承認
対象疾患 20 5 10 15 20 25 30 35 BSC EGFR inhibitor EGFR antibody VGEF antibody Antifolate ＊NKT Therapy IFNg … ＊NKT Therapy (２３ ) (7) EGFR抗体 EGFR阻害剤 ベストサポーティブケア 葉酸拮抗剤 トポイソメラーゼ阻害剤 VGEF抗体 NKT細胞標的治療 全症例（17例） NKT細胞標的治療 低IFNg群（7例） NKT細胞標的治療高IFNg群（10例） 平均生存期間（月）
進行肺がん患者（IIIB、 IV期、再発）に対する第II相臨床試験
2010年改訂のステージ IV非小細胞肺がんの２次治療以降の診療ガイドラインにおいて推奨される 化学療法剤の平均生存期間：ドセタキセル（7.8ヶ月）、ペメトレキセド（8.3ヶ月），エルロチニブ（6.7ヶ月） NKT細胞標的療法はがん患者延命に効果的 進行性肺がん患者17人（>10個NKT/ml）に対して外来で実施 初回治療のみで、その後無治療でも、腫瘤増大・転移・再発なし IFN-g産生細胞が多い10人（60%）の患者：生存期間中央値29.6カ月 3 ヒトNKT細胞 NKT細胞由来 iPS細胞 Oct3/4, Sox2, c-Myc, Klf4 iPS細胞由来 NKT細胞 リプログラミング インビトロでの分化誘導・機能成熟技術開発
iPS細胞由来NKT細胞の 細胞品質管理基の設定 再生医療用iPS細胞由来 NKT細胞ストック製造 モデル動物による有効性と 安全性評価の非臨床試験 頭頸部腫瘍、進行肺がんなどを 対象とした臨床試験非臨床試験
開発プロセスの概要
臨床試験
4技術開発期間（H２５−２７年度）
１ ヒト
NKT細胞からの生物由来原料基準と所定の細胞品質管理
基準を満たした
iPS細胞誘導
２ ヒト
NKT由来iPS細胞からの生物由来原料基準と所定の細胞
品質管理基準を満たした
NKT細胞誘導
３ ヒト
iPS由来NKT細胞の有効性と安全性を検証する非臨床試験
の基盤となる技術と基準の確立
5 技術開発期間１ ヒトNKT細胞のiPS細胞誘導技術の樹立
100 101 102 103 104 FL4-H: CD3 100 101 102 103 104 F L2 -H : 6B 11 8.01e-3 99.7 0.24 0.042 CD3 V α 24 Jα 18 T C R α ( 6B 11 ) 99.7 NKT-iPSCs Activated NKT cells aGalCer, IL-2 PBMCs aGalCer+IL-2+IL-7+IL-15 10 ~ 14 days 2 ~ 3 days Purified NKT cells ・NKT細胞活性化を至適化し、生物由来原料基準を満たした iPS細胞誘導条件の最適化 検討項目 Step-1:活性化NKT細胞誘導培養 Step-2: NKT-iPSC誘導培養Va24-Ja18 rearrangement detection PCR
技術開発期間
２ ヒトNKT–iPS細胞からのNKT細胞誘導技術の樹立
•既に確立した誘導方法を基盤に生物由来原料基準を満たした誘導技術の確 立
•胚様体形成からのリンパ球系譜への無血清誘導培養の至適化
Day 0 Day 13 Day 40-41
OP9 OP9 OP9/DL
L1 OP9/DL L1 CD8 C D 4 Day 40 C D 3 Mart1 Day 9
Cell Reports 2, 1722–1735, December 27, 2012
Step-3: ヒトNKT−iPSからのNKT細胞誘導：（例）ヒトT-iPS細胞からのT細胞誘導
（ビスカルドら、Cell stem cell 2013)
検討項目 7 技術開発期間
３ iPS由来NKT細胞の有効性・安全性解析技術の確立
・iPS由来NKT細胞の機能解析技術の開発 – 試験管内での抗原刺激によるサイトカイン産生能 – 免疫系ヒト化マウスモデルを用いたアジュバント活性 （NKT細胞活性化後のNK/CD8TのIFNg 産生）測定 ヒトCD４５ マ ウ ス C D ４ ５ ヒトCD３ ヒ ト C D ５ ６ ヒト造血幹細胞 新生仔NSGマウス iPS-NKT (4x106) i.v. モデル抗原 ＋GalCeri.v. 2 wk NKT-KOマウス ヒト化マウス 1 wk モデル抗原 再チャレンジ % C D 8 +IF N -γ + WT iPS-NKT 抗原＋GalCer NKT-KO 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 p=0.0032p=0.00074 p=0.0056 p=0.034 ー ＋ ＋ ＋ ー ー ー ＋ ＋ ＋ ・CD8T細胞・NKT細胞 によるインターフェロン産生 ・モデル腫瘍の拒絶 造血・免疫系ヒト化マウス技術を用いた有効性検証 検討項目 8細胞形態 細胞数 生存率 細胞倍加速度 細胞周期 マーカー遺伝子発現 網羅的遺伝子発現 マーカーたんぱく質発現 細胞表面マーカー発現 染色体核型 HLA型解析 全エクソーム CGH解析 ゲノムメチル化解析 分化能 分化後の細胞機能 無菌試験 マイコプラズマ試験 エンドトキシン試験 ウイルス試験 造腫瘍能評価 一般特性 マーカー発現 ゲノム遺伝子解析 細胞機能 安全性評価 ・非臨床試験に用いるNKT細胞ストック検定のための細胞品質管理方法を開発し、下記 の５項目それぞれについての基準値設定を行う。
