IRUCAA@TDC : 末梢神経部分損傷における損傷高位より末梢での健常部分から損傷部分への側副発芽

Author(s)

田, 修二

Journal

日本手の外科学会雑誌, 25(4): 430-435

URL

http://hdl.handle.net/10130/2082

Right

【 は じ め に 】 神 経 の 端 側 吻 合 は 、 健 常 神 経 に 中 枢 と 連 続 性 の な い 末 梢 神 経 片 を 端 側 で 接 合 す る こ と で 、 末 梢 神 経 に 再 生 神 経 が 進 入 す る 1 ) 4 ) 5 ) 6 ) 8 ) 9 ) _。 一 方 、 ひ と つ の 神 経 幹 に 健 常 部 分 と 損 傷 部 分 が 存 在 す る 病 態 が 、 神 経 叢 損 傷 や 末 梢 神 経 不 全 損 傷 、 さ ら に は 脊 髄 の 神 経 根 障 害 な ど 臨 床 上 多 く 存 在 す る と 考 え ら れ る 。 こ の と き 、 健 常 部 分 と 損 傷 部 分 が 接 す る 部 分 は 、 神 経 端 側 吻 合 の 接 合 部 に 類 似 し た 状 況 で あ る と 考 え ら れ 、 健 常 部 分 か ら 損 傷 部 分 に 軸 索 が 進 入 す る 可 能 性 が あ る 。 わ れ わ れ は 、 神 経 叢 損 傷 の 場 合 に つ き 、 腰 神 経 の 一 つ を 切 断 し た モ デ ル （ 腰 神 経 切 断 モ デ ル ） を 作 製 し 、 腰 神 経 叢 に お い て 健 常 部 分 か ら 損 傷 部 分 へ 再 生 神 経 が 進 入 す る こ と を 報 告 し た 2 ) _{。 今 回 、 末 梢 神 経 の 部 分} 損 傷 に お い て 健 常 部 分 か ら 損 傷 部 分 に 再 生 軸 索 が 進 入 す る か を 検 証 す る こ と を 目 的 と し 、 ラ ッ ト を 用 い て 検 討 し た 。 【 材 料 お よ び 方 法 】

８ 週 齢 Ｓ Ｄ ラ ッ ト の 坐 骨 神 経 を 大 腿 部 で 展 開 し 、 径 の 約 半 分 を 6 - 0 ナ イ ロ ン 糸 で 結 紮 し た も の （ 半 結 紮 モ デ ル ）（ 図 1 a ）（ n = 4 ） と 、 2 7 G 注 射 針 に て 神 経 上 膜 お よ び 周 膜 を 約 1 5 m m 縦 切 開 し 、 鏡 視 下 に 2 7 G 注 射 針 と マ イ ク ロ 用 摂 子 で な る べ く 軸 索 を 切 断 し な い よ う に 縦 方 向 に 分 割 後 、 一 方 の 中 枢 部 を 6 - 0 ナ イ ロ ン 糸 で 結 紮 、 そ の 末 梢 部 を 切 断 し た の ち 末 梢 端 を s i l i c o n e t u b e で 覆 っ た も の （ 半 裁 モ デ ル ）（ 図 1 b ）（ n = 8 ） を 作 製 し た 。 半 結 紮 モ デ ル お よ び 半 裁 モ デ ル 作 製 4 週 間 後 に 坐 骨 神 経 を 採 取 し 、 凍 結 縦 断 薄 切 切 片 を 作 製 後 、抗 n e u r o f i l a m e n t 抗 体 ( D A K O 、D e n m a r k ) を 1 次 抗 体 と し 、 b i o t i n - a v i d i n s y s t e m ® ( V e c t o r 、 U S A ) を 用 い た 免 疫 染 色 を 行 い 、 評 価 を 行 っ た 。 ま た 、 半 結 紮 モ デ ル は 作 製 後 1 、 2 、 3 週 の 標 本 （ 各 n = 3 ） も 作 製 し 、 経 時 的 変 化 を 観 察 し た 。 さ ら に 半 裁 モ デ ル で は 、 モ デ ル 作 製 ４ 週 間 後 、 s i l i c o n e t u b e 内 の 組 織 （ 半 裁 組 織 ） に 蛍 光 標 識 の t r u e b l u e

（ S i g m a - A l d r i c h 、 U S ）、 分 岐 点 よ り 約 2 0 m m 末 梢 の 坐 骨 神 経 に 別 の 蛍 光 標 識 d i a m i d i n o y e l l o w（ S i g m a - A l d r i c h 、 U S ） を 添 付 し た （ n = 4 ）。 各 蛍 光 標 識 の 量 は 、 針 先 を 湿 ら せ た ２ ７ Ｇ 注 射 針 の 先 に 付 着 す る 程 度 で 、 ２ ７ Ｇ 注 射 針 で 作 成 し た 約 2 m m の 縦 切 開 の 切 開 面 に 付 着 さ せ 、 切 開 部 を 1 0 - 0 ナ イ ロ ン 糸 で 縫 合 し た 。 坐 骨 神 経 は 、 蛍 光 標 識 添 付 部 よ り 末 梢 は 切 断 し た 。 ７ 日 後 、 後 根 神 経 節 お よ び 脊 髄 の 凍 結 、 薄 切 切 片 を 作 製 し 、 蛍 光 顕 微 鏡 に て 観 察 し た 4 ) 8 ) _。 【 結 果 】 N e u r o f i l a m e n t 染 色 半 結 紮 モ デ ル ４ 週 で は 、 結 紮 高 位 よ り 末 梢 の 損 傷 部 分 内 で 、 健 常 部 分 に 隣 接 し た 部 位 に 、 陽 性 線 維 を 認 め た 。 ま た 、 末 梢 に 向 か う ほ ど 分 散 し 数 も 増 加 す る 傾 向 が み ら れ た （ 図 2 ）。 経 時 的 に は 、 結 紮 高 位 よ り 末 梢 の 損 傷 部 分 内 で 、 健 常 部 分 に 隣 接 し た 部 位 に 、 ２ 週 以 降 再 生 線 維 と 思 わ れ る 細 い 陽 性 線 維 を 認 め た （ 図 3 ）。

半 裁 モ デ ル ４ 週 で は 、 s i l i c o n e t u b e 内 の 半 裁 神 経 内 に 陽 性 線 維 を 認 め た 。 ま た 、 分 岐 部 よ り 末 梢 の 損 傷 部 分 内 に も 陽 性 線 維 を 認 め た 。 分 岐 部 の 中 枢 寄 り が 特 に 密 度 が 高 い と い う こ と は な く 、 中 枢 か ら 多 く の 線 維 が 進 入 し て い る 所 見 は な か っ た （ 図 4 ）。 M a c r o p a g e E D 1 染 色 半 結 紮 モ デ ル で は 、 損 傷 部 分 に 多 く の 陽 性 細 胞 を 認 め る と と も に 、 健 常 部 分 で も 陽 性 細 胞 の 増 加 が み ら れ た （ 図 5 a 1 、 2 ）。 半 裁 モ デ ル で は 、 半 裁 面 お よ び 半 裁 部 の 分 岐 点 か ら 末 梢 に か け て 陽 性 細 胞 の 濃 度 の 高 い 部 位 を 認 め た （ 図 5 b 1 、 矢 頭 ）。 蛍 光 標 識 （ 半 裁 モ デ ル ４ 週 ） 左 L 4 ・ L 5 の 後 根 神 経 節 は 、 す べ て の 例 で d i a m i d i n o y e l l o w に よ り 、 薄 切 標 本 中 の 後 根 神 経 節 細 胞 の 1 / 2 か ら 4 / 5 が 標 識 さ れ た 。 右 の 後 根 神 経 節 は 標 識 さ れ な か っ た 。 一 方 、 t r u e b l u e で は す べ て の 例 で 、 そ れ ぞ れ １ か ら ５ カ 所 、 数 個 か ら 十 数 個 の 細 胞 が 集 落 状 に 標 識 さ

れ た 。 脊 髄 で は 、 左 前 角 細 胞 が d i a m i d i n o y e l l o w に よ り 標 識 さ れ た 。 T r u e b l u e で は 、 4 例 中 3 例 に 、 数 個 か ら 十 数 個 集 落 と し て 標 識 さ れ た 細 胞 を 認 め た 。 い ず れ も 、 二 重 蛍 光 標 識 さ れ た 細 胞 を 認 め た （ 図 6 ）。 【 考 察 】 １ 、 実 験 モ デ ル に つ い て 末 梢 神 経 の 部 分 損 傷 モ デ ル と し て は 、 末 梢 神 経 幹 を 部 分 的 に 横 切 し た も の が 考 え ら れ る が 、 中 枢 か ら 進 入 し た 再 生 軸 索 と 側 方 か ら 進 入 し た 軸 索 の 区 別 が 困 難 で あ る 。 本 実 験 で は 、 側 方 進 入 を 検 証 す る た め 、 中 枢 部 か ら の 再 生 軸 索 の 進 入 を 阻 止 し た 半 結 紮 モ デ ル を 作 製 し た 。 実 際 に 、 中 枢 か ら 末 梢 へ の 軸 索 の 進 入 は わ ず か で あ り 、 結 紮 に よ り 側 方 か ら 進 入 し た 再 生 軸 索 の 評 価 が 可 能 に な っ た と 考 え ら れ る 。 一 方 、 神 経 標 識 の 添 付 や 、 機 能 再 生 へ の 応 用 に は 、 r e c i p i e n t と な る 軸 索 の 誘 導 部 位 が

d o n o r と な る 本 幹 と 分 離 し て い る 必 要 が あ る こ と か ら 半 裁 モ デ ル を 作 製 し た 。 し か し な が ら 、 半 裁 モ デ ル 作 製 時 に は 、 半 裁 す る 際 に 切 断 す る 軸 索 が 少 な か ら ず 存 在 す る と 考 え ら れ 、 分 岐 部 近 く で 切 断 さ れ た 神 経 か ら の 再 生 神 経 が 半 裁 部 に 進 入 す る 可 能 性 が 高 く 、 側 方 進 入 神 経 の 評 価 に は 神 経 標 識 の 結 果 や 半 結 紮 モ デ ル の 結 果 が 必 要 で あ っ た 。 ２ 、 神 経 蛍 光 標 識 に つ い て 今 回 、 後 根 神 経 節 お よ び 脊 髄 に お い て 二 重 標 識 さ れ た 細 胞 を 認 め た こ と か ら 、 半 裁 部 位 の 末 梢 で 健 常 部 分 か ら 損 傷 部 分 に 再 生 軸 索 が 側 副 発 芽 し 進 入 し た こ と が 強 く 示 唆 さ れ た 。 し か し な が ら 、 末 梢 部 で は 、 d o n o r 部 と r e c i p i e n t 部 が 分 離 し て い な い こ と か ら 、 側 副 発 芽 し た 再 生 軸 索 が 中 枢 お よ び 末 梢 に 分 岐 し た 場 合 や 、 中 枢 か ら 進 入 し た 再 生 神 経 が 中 枢 お よ び 末 梢 に 分 岐 し た 場 合 も 二 重 標 識 さ れ る 可 能 性 が あ る 。 こ れ に 対 し 、 末 梢 に 分 岐 し た 再 生 神 経 を な る べ く 標 識 し な い よ う 、 半 裁 分

岐 部 よ り な る べ く 末 梢 （ 実 際 に は 2 0 m m ） で 坐 骨 神 経 の 蛍 光 標 識 を 行 っ た 。 実 際 の 結 果 か ら 、 こ れ ら は 無 視 で き る レ ベ ル で あ っ た と 考 え て い る 。 ３ 、 健 常 部 位 か ら 損 傷 部 位 へ 再 生 神 経 側 副 進 入 の 可 能 性 半 結 紮 モ デ ル で 、 健 常 部 分 に 隣 接 し た 部 位 に n e u r o f i l a m e n t 陽 性 線 維 を 認 め た こ と 、 末 梢 に 向 か う ほ ど 数 が 増 加 し た こ と の ２ 点 か ら 、 損 傷 高 位 よ り 末 梢 で 、 健 常 部 分 が d o n o r と な り 損 傷 部 分 に 再 生 神 経 が 進 入 し た こ と が 示 唆 さ れ た 。 末 梢 で 増 加 し た 理 由 と し て 、 神 経 束 の 交 差 に よ り 健 常 部 分 と 損 傷 部 分 の 接 触 面 積 が 増 加 し た こ と な ど が 考 え ら れ た 。 ま た 、 半 裁 モ デ ル で の 二 重 標 識 で 、 後 根 神 経 節 お よ び 脊 髄 前 角 細 胞 に 二 重 標 識 さ れ た 細 胞 を 認 め た こ と か ら 、 再 生 軸 索 は 末 梢 で 健 常 神 経 か ら 側 副 発 芽 し た こ と が 示 唆 さ れ た 4 ) 8 ) _。 ４ 、 マ ク ロ フ ァ ー ジ の 意 義 マ ク ロ フ ァ ー ジ が 神 経 再 生 に 関 与 す る こ と

は 知 ら れ て い る 3 ) 7 ) _{が 、 わ れ わ れ は マ ク ロ フ ァ} ー ジ が 神 経 側 副 発 芽 に 関 与 し て い る と 考 え 、 評 価 を 行 っ て き て い る 。 神 経 端 側 吻 合 、 腰 神 経 損 傷 モ デ ル の 際 も 、 r e c i p i e n t 側 の み な ら ず 、 d o n o r 側 に も 出 現 し た の が 観 察 さ れ た が 、 今 回 も 、 同 様 で あ っ た 。 ま た 、 半 裁 モ デ ル で 半 裁 面 お よ び 半 裁 部 の 分 岐 点 か ら 末 梢 に か け て 陽 性 細 胞 の 濃 度 の 高 い 部 位 を 認 め た こ と か ら 、 同 部 で の 側 副 発 芽 を 示 唆 す る 所 見 の 可 能 性 が あ る と 考 え ら れ た 。 【 結 論 】 半 結 紮 モ デ ル お よ び 半 裁 モ デ ル の 損 傷 高 位 よ り 末 梢 で 、 健 常 部 分 か ら 損 傷 部 分 に 再 生 神 経 が 進 入 し た こ と が 示 唆 さ れ た 。 ま た 、 二 重 標 識 の 結 果 か ら 、 再 生 軸 索 は 末 梢 で 健 常 神 経 か ら 側 副 発 芽 し た こ と が 示 唆 さ れ た 。 神 経 叢 損 傷 の み な ら ず 、 末 梢 神 経 部 分 損 傷 や 不 全 損 傷 、 脊 髄 の 神 経 根 障 害 な ど も 、 健 常 部 分 か ら 損 傷 部 分 に 軸 索 が 進 入 す る 可 能 性 が 示 唆 さ れ た 。

謝 辞 ： 本 研 究 は 、 社 団 法 人 損 害 保 険 協 会 の 助 成 を 受 け た 。 【 文 献 】 1 ) a l - Q a t t a n M M , a l - T h u n y a n A : V a r i a b l e s a f f e c t i n g a x o n a l r e g e n e r a t i o n f o l l o w i n g e n d - t o - s i d e n e u r o r r h a p h y . B r J P l a s t S u r g , 5 1 : 2 3 8 - 2 4 2 , 1 9 9 8 . 2 ) 新 井 健 , 仲 尾 保 志 , 斉 藤 治 和 ほ か ： ラ ッ ト 腰 神 経 叢 切 断 モ デ ル を 用 い た 健 常 部 分 か ら 隣 接 す る 損 傷 部 分 へ の 神 経 発 芽 の 検 討 。 日 手 会 誌 , 1 9 : 4 0 2 - 4 0 5 , 2 0 0 2 . 3 ) D a h l i n L B : P r e v e n t i o n o f m a c r o p h a g e i n v a s i o n i m p a i r s r e g e n e r a t i o n i n n e r v e g r a f t s . B r a i n R e s , 6 7 9 : 2 7 4 - 2 8 0 , 1 9 9 5 . 4 ) K a n j e M , A r a i T , L u n d b o r g G : C o l l a t e r a l s p r o u t i n g f r o m s e n s o r y a n d m o t o r a x o n s i n t o a n e n d t o s i d e a t t a c h e d n e r v e s e g m e n t . N e u r o R e p o r t , 1 1 : 2 4 5 5 - 2 4 5 9 , 2 0 0 0 .

5 ) L u n d b o r g G , Z h a o Q , K a n j e M , e t a l . : C a n s e n s o r y a n d m o t o r c o l l a t e r a l s p r o u t i n g b e i n d u c e d f r o m i n t a c t p e r i p h e r a l n e r v e b y e n d - t o - s i d e a n a s t o m o s i s ? J H a n d S u r g [ B r ] , 1 9 : 2 7 7 - 2 8 2 , 1 9 9 4 . 6 ) T a r a s i d i s G , W a t a n a b e O , M a c k i n n o n S , e t a l . : E n d - t o - s i d e n e u r o r r h a p h y r e s u l t i n g i n l i m i t e d s e n s o r y a x o n a l r e g e n e r a t i o n i n a r a t m o d e l . A n n O t o l R h i n o l L a r y n g o l , 1 0 6 : 5 0 6 - 5 1 2 , 1 9 9 7 . 7 ) P e r r y V H , B r o w n M C : R o l e o f m a c r o p h a g e s i n p e r i p h e r a l n e r v e d e g e n e r a t i o n a n d r e p a i r . B i o e s s a y s , 1 4 : 4 0 1 - 4 0 6 , 1 9 9 2 . 8 ) Z h a n g Z , S o u c a c o s P N , B o J , B e r i s A E . : E v a l u a t i o n o f c o l l a t e r a l s p r o u t i n g a f t e r e n d - t o - s i d e n e r v e c o a p t a t i o n u s i n g a f l u o r e s c e n t d o u b l e - l a b e l i n g t e c h n i q u e . M i c r o s u r g e r y , 1 9 : 2 8 1 - 2 8 6 , 1 9 9 9 . 9 ) V i t e r b o F , T r i n d a d e J C , H o s h i n o K , e t a l . : A . L a t e r o - t e r m i n a l n e u r o r r h a p h y

w i t h o u t r e m o v a l o f t h e e p i n e u r a l s h e a t h . E x p e r i m e n t a l s t u d y i n r a t s . R e v P a u l M e d , 1 1 0 : 2 6 7 - 2 7 5 , 1 9 9 2 .

In a partially damaged peripheral nerve, impaired portion is in contact with intact

portion, and this condition is similar to that of end-to-side neurorrhaphy. So, we

postulated regenerated axons grow into the damaged portion from the intact portion in

this condition. In the present study, we studied on axonal sprouting in partially

damaged peripheral nerve. Adult female SD rats were used. We established two

models as follows: Half ligation model (n=13) in which half part of SD rat’s sciatic

nerve was ligated at the thigh level; Half split model (n-8) in which sciatic nerve was

splited into two strings, and one of them was cut proximally. In the half ligation model,

at 1, 2, 3, 4 weeks after operation, neurofilaments and macrophages were examined

immunocytochemically. In the half split model, at 4 weeks after operation, the same

examination and

labeled by true blue and donor nerve was labeled by diamidino yellow.

In the half

ligation model, many regenerating nerve fibers were seen at the area near the intact

indicated that collaterally sprouted axons were entered into damaged portion from the

図 1 a 半 結 紮 モ デ ル ８ 週 齢 Ｓ Ｄ ラ ッ ト の 坐 骨 神 経 を 展 開 し 、 径 の 約 半 分 を 6 - 0 ナ イ ロ ン 糸 で 結 紮 す る 。 図 1 b 半 裁 モ デ ル 注 射 針 と マ イ ク ロ 用 剪 刀 を 用 い て 約 1 5 m m 半 裁 し 、 中 枢 部 を 6 - 0 ナ イ ロ ン 糸 で 結 紮 。 そ の 末 梢 部 を 切 断 し た の ち 末 梢 端 を s i l i c o n e t u b e で 覆 う 。 図 ２ 半 結 紮 モ デ ル 作 製 後 ４ 週 n e u r o f i l a m e n t 染 色 、 2 a ； 全 体 像 （ × ４ ）、 2 b ； 結 紮 部 位 か ら 末 梢 2 m m 拡 大 図 （ × １ ０ ０ ）、 2 c ； 結 紮 部 位 か ら 末 梢 1 2 m m 拡 大 図 （ × １ ０ ０ ）。 損 傷 部 分 内 の 陽 性 線 維 は 、 健 常 部 分 に 接 す る 部 位 に 多 く 分 布 し 、 ま た 、 末 梢 に 向 か う ほ ど 分 散 し 数 も 増 加 す る 傾 向 が み ら れ る 。

n e u r o f i l a m e n t 染 色 像 。 3 a ； モ デ ル 作 製 後 １ 週 （ × １ ０ ０ ）、 3 b ； モ デ ル 作 製 後 ２ 週 （ × １ ０ ０ ）、 3 c ； モ デ ル 作 製 後 ３ 週 （ × １ ０ ０ ）、 3 d モ デ ル 作 製 後 ２ 週 拡 大 図 （ × ２ ０ ０ ）。 １ 週 で は 部 分 的 に n e u r o f i l a m e n t が 残 存 し て い る 。 ２ 週 以 降 は 、 結 紮 高 位 よ り 末 梢 の 損 傷 部 分 内 で 、 健 常 部 分 に 隣 接 し た 部 位 に 、 経 時 的 に 増 加 す る 再 生 繊 維 と 思 わ れ る 細 い n e u r o f i l a m e n t 陽 性 線 維 （ 矢 頭 ） を 認 め る 。 図 ４ 半 裁 モ デ ル 作 製 後 ４ 週 n e u r o f i l a m e n t 染 色 、 4 a ； 全 体 像 （ × ４ ）、 4 b ； 半 裁 部 位 拡 大 図 （ × １ ０ ０ ）、 4 c ； 半 裁 部 位 か ら 末 梢 5 m m 拡 大 図 （ × １ ０ ０ ）。 半 裁 神 経 内 に 再 生 軸 索 の 進 入 を 認 め る 。 分 岐 部 よ り 末 梢 の 損 傷 部 分 内 に も 陽 性 線 維 を 認 め る 。 図 ５ 半 結 紮 モ デ ル お よ び 半 裁 モ デ ル 作 製

部 位 よ り 末 梢 、 健 常 部 分 と 損 傷 部 分 の 接 触 部 位 、5 b 1； 半 裁 モ デ ル 作 製 後 ４ 週 全 体 像（ × ４ ） 、 5 b 2 ； 半 裁 部 位 拡 大 図 （ × １ ０ ０ ）、 5 b 3 ； 半 裁 部 位 か ら 末 梢 5 m m 拡 大 図 （ × １ ０ ０ ）。 半 結 紮 モ デ ル で は 、 損 傷 部 分 に 陽 性 細 胞 を 認 め る と と も に 、 健 常 部 で も 陽 性 細 胞 の 増 加 が み ら れ る 。 半 裁 モ デ ル で は 、 半 裁 面 お よ び 半 裁 部 の 分 岐 点 か ら 末 梢 に か け て 陽 性 細 胞 の 濃 度 の 高 い 部 位 を 認 め る （ 図 5 b 1 、 矢 頭 ）。 図 ６ 半 裁 モ デ ル に お け る 二 重 蛍 光 標 識 。 モ デ ル 作 製 ４ 週 間 後 、 半 裁 部 分 を t r u e b l u e 、 分 岐 点 よ り 末 梢 の 坐 骨 神 経 を d i a m i d i n o y e l l o w で 標 識 。 6 a ； Ｌ ５ 後 根 神 経 節 、 t r u e b l u e 標 識 、 6 b ； Ｌ ５ 後 根 神 経 節 、 d i a m i d i n o y e l l o w 標 識 、 6 c ； 脊 髄 前 角 、 t r u e b l u e 標 識 、 6 d ； 脊 髄 前 角 、 d i a m i d i n o y e l l o w 標 識 。 二 重 標 識 さ れ た 細 胞 （ 矢 印 ） を 認 め る 。

図２ 半結紮モデル作製後４週neurofilament 染色、2a；全体像（×４）、2b；結紮部位から末梢 2 mm拡大図（×１００）、 2c；結紮部位から末梢 12 mm拡大図（×１００）。損傷部分内の陽性線維は、健常部分に接する部位に多く分布し、また、

結紮部位

2a

図３、半結紮モデルにおける損傷部分内の経時的変化。健常部分と損傷部分の接触部位のneurofilament 染色像。3a；モデル作 製後１週（×１００）、3b；モデル作製後２週（×１００）、3c；モデル作製後３週（×１００）、3dモデル作製後２週拡大図 （×２００）。１週では部分的にneurofilamentが残存している。 ２週以降は、結紮高位より末梢の損傷部分内で、健常部分に 隣接した部位に、経時的に増加する再生繊維と思われる細いneurofilament陽性線維（矢頭）を認める。

×200

3a

3b

_3c

3d

図４ 半裁モデル作製後４週neurofilament 染色、4a；全体像（×４）、4b；半裁部位拡大図（×１００）、4c；半裁部位 から末梢 5 mm拡大図（×１００）。半裁神経内に再生軸索の進入を認める。分岐部より末梢の損傷部分内にも陽性線維を 認める。

×100

proximal

distal

半裁部位

4a

4b

4c

図５ 半結紮モデルおよび半裁モデル作製後４週macrophage ED1染色。5a1；半結紮モデル作製後４週全体像（×４）、5a2； 結紮部位より末梢、健常部分と損傷部分の接触部位、5b1；半裁モデル作製後４週全体像（×４） 、5b2；半裁部位拡大図（× １００）、5b3；半裁部位から末梢 5 mm拡大図（×１００）。半結紮モデルでは、損傷部分に陽性細胞を認めるとともに、健常 部でも陽性細胞の増加がみられる。半裁モデルでは、半裁面および半裁部の分岐点から末梢にかけて陽性細胞の濃度の高い部位

半裁部位

×100

×100

半裁モデル４ｗ Macrophage ED1

5a1

5b1

5a2

5b2

5b3

図６ 半裁モデルにおける二重蛍光標識。モデル作製４週間後、半裁部分をtrue blue 、分岐点より末梢の坐骨 神経をdiamidino yellowで標識。 6a；Ｌ５後根神経節、 true blue標識、 6b；Ｌ５後根神経節、 diamidino yellow標識、 6c；脊髄前角、 true blue標識、 6d；脊髄前角、 diamidino yellow標識。二重標識された細胞

6a

6b

true blue

diamidino yellow

6c

6d