緑膿菌算出用液体培地の性能の比較

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(1)Title. 緑膿菌算出用液体培地の性能の比較. Author(s). 青井, 陽; 横田, 正義. Citation. 北海道教育大学紀要. 第二部. C, 家庭・養護・体育編, 42(1): 89-100. Issue Date. 1991-07. URL. http://s-ir.sap.hokkyodai.ac.jp/dspace/handle/123456789/6691. Rights. Hokkaido University of Education.

(2) . 平成３年７月. ２巻第１号北海道教育大学紀要（第２部Ｃ）第４. ｌ４２ｉｏｎｌＩＣ）Ｖｏｉｏｎ（ＳｅｃｔｉｉｖｅｒｉｄｏＵｎｔｙｏｆＥｄｕｃａｔｌｏｆＨｏｋｋａ．Ｉｓ．Ｊｏｕｍａ，Ｎｏ. ｌｙＪｕ，１９９１. 緑膿菌算出用液体培地の性能の比較. 青. 井. 陽・横. 田. 正. 義. 北海道教育大学旭川分校保健学教室. Ａ. ｉｆｆｅｒｅｎｔｆＲｅｃｏｖｅｒｙｏｆｐｓｅｕｄｏーｔ．ｇｉｎｏｓａｆｉｏｒｄＣｏｍｐａｒば．ｏｎａｓａｅｒｓｏｎｏｉｏｎｏｆｐ・ａｅｒｕｇｉｎｏｓａＣｕｌｔｕｒｅハ江ｅｄｉａｆｏｒＥｎｕｍｅｒａｔ. ＹｏｈＡＯｌａｎｄＭ［ａｓａｙｏｓｈｉＹＯＫＯＴＡｄｏｌｌｉｋａｗａＣｏｉｅｇｅ，ＨｏｋｋａｉＤｅｐａｒｔｈＳｃｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｅｎｃｅ，Ａｓａｈｉｋａｗａ０７０ｉ２ＵｈｉＵｎｉｖｅｒｔｙｏｆＥｄｕｃａｔｏｎ，Ａｓｓ. Ａｂｓｔｒａｃｔ. ＴｈｅｒｅｃｏｖｅｒｙｏｆＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｍｏｓａｆｒｏｍｎａｔｕｒａｌｒｉｖｅｒｗａｔｅｒｗａｓｃｏｍｐａｒｅｄｆｏｒｉｏｎｏｆＰｉｏｎａｎｄｅｎｕ … 尊ｎｏｓａｕｍｅｒａｔｆｆｅｒｅｎｔｃｕｌｓｏｌａｔｄｉｔｕｒｅｍｅｄｉａｄｅｖｅｌｏｐｅｄｆｏｒｉ ‐ Ｔｈｅ ‐ａｒｅｕｓｍｏｒｅａｃｃ皿「ａｔｅｃｈｉｉｔｐｒｏｂａｂ１ｅＮｍｍｂｅｒｐｒｏｃｅｄｕｒｅｔｈｔｈｅＭ［ｏｓｓｏｎｗａｃｏｍｐａｒｓｍａｄｅＷｉ，ｗｈｉｉｄｃｅ１ｉｄｉｘｉｃａｃｔｄｍｉｄｅｂｒｏｔｈ（ＮＡＣＢ）ｉａＷｅｒｅＮａｔｈａｎｐｒｅｖｉｏｕｓｐｒｏｓｅｄｗｒｅｓ．Ｔｈｅｍｅｄ，７ｉｅｓｆｆｅｒｅｎｃｉｉｕｍ‐ＴｈｅｒｅｗｅｒｅｎｏｄｓＮｏｌｏｍｅｄＡｓｐａｒａｇｉｎｅｂｒｏｔｈ，Ａｃｅｔａｍｉｄｅｂｒｏｔｈ，ａｎｄＤｒａｋｅｌｔｐｉｄ「ａ１ｔｕｒｅｄ ‐ａｅ１１１ｇｎｏｓａｗａｓｕＳｅ．ｎｎａｔ刀ｆｅｒｅｎｔｍｅｄｉａ，ｗｈｅｎｆｉｆｉｎｒｅｃｏｖｅｒｙｆｏｒｔｈｅｄｒｅｓｈ１ｙｃｕ１ｉｖｅｒｒ. ｗａｔｅｒｓ，. ｆｆｅｎｅｄａｍｏｎｇｍｅ重ａ．ＴｈｅｈｏｗｅｖｅｒｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｙｏｆＰ‐ａｅｎｌｇｉｎｏｓａｄｉ，. ｉ，ｈｈｄｉｉｂｉｏｔｌｉｃｓｔｙｉｎＮＡＣＢ，ｗｈｉｎｓａｎｔｃｈｃｏｎｔａｉｒｅｃｏｖｅｒａｂｉ，ｗａｓｍｕｃｈｌｏｗｅｒｔａｎｏｔｅｒｍｅａＴｈｉｂｉｒｉｄｔｒｅｃｏｖｅｄｆｅｏｆｉｂｔｎｓｏｍｒｃｅｓｌｉｉｔｎｒｏｅｙｇｗｈｏｓｅｓｅｅｃｔｖｔｙｓａｓｅｏｎｒｅｓｒｃｏｎｓｏｃａｒｏｎａｎ ‐ ｏＰ・ａｅｒｕ … 軍ｎｏｓａｆｒｏｍｒｉｖｅｒｗａｔｅｒｓａｔ２５Ｃｗｅｒｅｉ叩Ｅｅｒｉｏｒｔｏｒｅｃｏｖｅｒｙａｔｈｉｇｈｅｒｔｅｍｐｅｒａｔｗ「ｅｓ‐. 緒言９）本菌が日和見 ’ 医学領域において，緑膿菌は，日和見感染の原因菌としてよく知られている３．. 感染を起こす原因については，抗生物質に対する強い耐性，菌体外産生毒素，蛋白質分解酵素等，１６４｝また本菌が各種汚水，湿潤環境，水系環境等の自然環境中 ’ ・色々の要因が挙げられている４，．９８（）.

(3) . ９０. 青. 井. 陽・横. 田. 正. 義. ２１７）さらに人家畜野性動物等のに，普遍的に生存している点も，公衆衛生学的に重要である１ ’ ．，，糞便中にも存在していることから，水中の緑膿菌の存在は大腸菌と同様糞便による汚染を直接，，的に示すとも考えられている．このような点から緑膿菌は環境汚染指標菌としてもとらえられている，．水中に存在する緑膿菌数の算出法には，大別して２種類の方法が用いられているメンブレンフ．８｝それぞれに特徴のある手技であるィルター法（ＭＦ法）および最確数法（ＭＰＮ法）である７ ’ ．が，汚染の程度の大きな試料や，浮遊懸濁粒子を大量に含むような試料中の緑膿菌を算出する場合，ＭＦ法はフィルターがめずまりを起こす欠点があって不向きである７）ＭＰＮ法は精度の点で．ＭＦ法に比べてはるかに劣るのであるが，このような濁度の大きい試料の場合にはＭＰＮ法は，，生菌数を算出するための実行可能の，恐らく，唯一の方法であるただＭＰＮ法を用いて目的，．，とする細菌を算出する際には，使用する培地に対して適切な選択増殖能力が要求されまた混在す，る雑菌などによる干渉効果を克服しなければならない等の問題がある．水中の緑膿菌を算出するためのＭＰＮ用培地，および緑膿菌用液体選択培地については多くの，８｝けれどこれらの培地について厳密種類と，それらを用いた分離方法とが考案されている７ ’ ， ‐ ，にその性能を比較検討した作業は，行なわれていないようである今回私達はＭＦ法では測定，．，の難しい，浮遊粒子の多い河川水中の緑膿菌を算出する際には，従来用いられてきたＭＰＮ法用培地の中でどのような培地が良いのかを調べようとした特に従来用いられている１０倍段階希釈３，．１５｝よりも精度の高いＭＰＮ法で各培地の緑膿菌算出性能を比較本，５本又は１０本法のＭＰＮ法１ ’ ，しようとしたので報告する．. 材料および方法１．培地ＮＡＣブイヨン培地（栄研化学株式会社；ＮＡＣＢ）ＮＡＣ寒天培地（栄研化学株式会社；Ｎ，）アセトアミドブイヨン（ＡＣＴＢ）１ＡＣＡ），アスパラギンブイヨン（ＡＳＰＢ）１）Ｄｒａｋｅの，，. ｝トリプチケースソイブイヨン（ＢＢＬ；ＴＳＢ）Ｎｏ１０培地（ＤＲＫＢ）７．，．. ２．最確数（ＭＰＮ）法を用いた緑膿菌の算出２倍濃度に作成した，各培地に等量の河川水試料を接種した試料は１，０倍又は２倍段階希釈し．ｏＣを設定て接種した．使用試験管数は，１０～５０本であった．培養温度は，２５２２，３，３７，および４０Ｃを用いた４日迄観察した細菌の発育を示した試験管からＮＡし，特に記載のない場合には３７．．Ｃ寒天平板に継代して，菌の発育の有無を調べた発育したコロニーについて各種の生物学的検．，査をおこない，オキシファームチューブ（日本ロシュ株式会社）によって最終的に緑膿菌その他，ｏと同定した．緑膿菌を同定する際に行なった検査項目は，以下の通りである；グラム染色４，２Ｃ発育，ブドウ糖ＯＦ試験，チトクロームオキシダーゼ，アルギニン水解アシルアミダーゼ試験グ，，ルコン酸酸化，運動性，ゼラチン液化，リシン脱炭酸，乳糖，白糖，キシロースマルトースマ，，ンニット，マニトール，フェニルアラニン，クエン酸分解，インドール尿素および色素産生性，．６）の方法に従いＮＥＣ－９８最確数（ＭＰＮ）の算出は西原ら１０１コンピューターで行なった．また，以前河川水から分離してすでに緑膿菌と同定している緑膿菌を，トリプチケースソイブイヨン（Ｔ０Ｃ１８時間培養して対照に用いた実験室内での緑膿菌の培養及び河川水中の一般ＳＢ）培地で３７．，細菌の培養は，ＴＳＢまたはトリプチケースソイ寒天培地を用いて行なったまた菌液の希釈に．，９０（）.

(4) . 緑膿菌算出用液体培地の性能の比較. ９１. はフオスフェイトバッファー（ＰＢ，ＰＨ７‐２）を用いた．. ３．サンプル採取場所. 河川水試料の採取場所は，旭川市日の出橋付近における牛朱別川，および旭橋付近における石狩川である．いずれの採水地点も旭川市市街中心部に位置していた．採取季節は冬期，および夏期．ｏ水温は冬期においては２～５℃，夏期においては１８～２４Ｃであった．４．検. 定. ｝によって行なった検定はＣｏｃｈｒａｎの方法５．. 結. 果. １．ＮＡＣブイヨンおよびその他の培地との緑膿菌算出能についての比較実験室培養緑膿菌株に対する算出能の差について，ＮＡＣブイヨン（ＮＡＣＢ）および，細菌用増殖培地として一般的に用いられているトリプチケースソイブイヨン（ＴＳＢ）との間で，最確数（ＭＰＮ）法を用いて比較を行なった．グラム陰性細菌用選択培地であるＢＧＬＢも比較のために０を洗浄する用いた．試験菌株は，緑膿菌ＩＦ０３０８０株を用い，ＴＳＢで３７Ｃ１８時間培養したもの，ｏＣで行なは３７した培養種２）を用いて，１０倍段階希釈してゆき各培地に接ことなくＰＢ（ＰＨ７‐ ．い，２４～４８時間後に緑膿菌を分離した．その結果を表１および２に示した．ここに示したように，ＴＳＢ培養した緑膿菌に対しては，ＮＡＣＢは他の培地に比較して算出能が劣ることはなく，ＴＳＢと同程度の回収成績を示した．成績に差異はあるが，各実験群で最高最低値の間に有意差は認められなかった．表１. 実験室培養緑膿菌株に対するＮＡＣＢ，ＴＳＢおよびＢＧＬＢの算出能の比較接雌液容量（ｍｌ）種菌寵. 培地. ７１０‐. １０ー. ９１０‐. ＭＰＮ［馨剛直；稲興値］／ｍＩ. 〉７／１０４／１０１７３８［０９１９；３２８７］ｘｌｏａＮＡＣＢＩＯ／１０８ ‐ ‐ ‐. 三；三１二言基ｇｒｓ書三島器質Ｘ言え８１鴛圭１苦言琴電１榛雌稀締法［３‐ ３０±０‐ ４８］×１０６顧. 表２実験室培養緑膿菌株に対するＮＡＣＢ，ＴＳＢおよびＢＧＬＢの算出能の比較接種菌液容量（ｍｌ）培地. １０一. １０→. １Ｏ１０－. ＭＰＮ［」団興値；下限値］／ｍＩ. ）４／１００／１０４９３２［０２１７；１１２１］ ×１０８ＮＡＣＢＩＯ／ｌｏａ ‐ －－０３５４；１‐ ７７３］ｘｌｏａｌ６／１００／１０７－９２４［ＢＧＬＢＩＯ／ｉ０十十十 ◆－］ ×１０８ＮＳＴＳＢＩＯ／１０５／１００／１０６－２１７－［０－２７２；１‐ ４２２－ｂ）ＮＢ９／１０５／１０１／１０３－７３１［０－１９５；０－７１５］ ×１０８一釦準希蹄標準糟法［５‐ ６０±０‐ ６３］ ×１０８. ＴＳＢ実験室培養緑膿菌株に対する，ＮＡＣＢおよびアスパラギンブイヨン（ＡＳＰＢ）の算出０８時間行成績の比較を表３に示した．試験菌株は緑膿菌ＩＦ０３０８０株を用い，培養はＴＳＢで３７Ｃ１２）を用いて希釈を行なった．算出成績は，ＡＳＰなった．菌液を洗浄することなく，ＰＢ（ＰＨ７‐ ９１（）.

(5) . ９２. 青井. 陽・横田正義. ＢおよびＮＡＣＢにおいて，それぞれ９２１４×１０８／ｍｌおよび１０９４×１０９／ｍｌでありＮＡＣＢを用．．，. いた成績がＡＳＰＢでの成績よりも高かったただし有意差は認められなかった．．自然界に存在する緑膿菌に対する回収能力について．，ＮＡＣＢおよびＡＳＰＢの性能の比較を，石狩川から採取した河川水を試料に用いて，ＭＰＮ法によって行なった培養は３７ｏＣで行なった．．その結果を表４および５に示した．ＮＡＣＢによる緑膿菌算出成績はＡＳＰＢによるものにくら，べてかなり低く，おおよそ１／２０～１／２８であった．両方の実験例で，ＡＳＰＢとＮＡＣＢの成績の間には０‐１％未満の危険率で有意差が認められた．表３実験室培養緑膿菌株に対するＮＡＣＢおよびＡＳＰＢの算出能の比較接種繭液容量（ｍｌ）１０屯. 培地. １０一. １０１０‐. ＭＰＮ［上限値；粁！酬直］／ｍＩ. ｉ三雲ｉＥ名義ｒｓ隆三；緊｛ｇ－ ”三＆耳. 〉３５／５０６／５０ＡＳＰＢ４９／５０ａ. ９‐ ２１４［６‐ ７３３；１２‐ ６１０］ ×１０８ＴＮＳＮＡＣＢ５０／５０３４／５０４／５０１０９３６７８・ ‐ ‐. 蜘＝。尾。叫. 標準希釈陀法［１‐ ４０±０．１１］×１０９. 同様に，自然界に存在する緑膿菌に対する回収能力について牛朱別川から採取した河川水を試，料に用いて，ＭＰＮ法によって各種培地間の比較を行なったその結果をＮＡＣＢおよびＡＳＰ．．，Ｂの比較について表６に，また，ＮＡＣＢおよびアセトアミドブイヨン（ＡＣＴＢ）の比較について表７に示した．表６に示したように，牛朱別川河川水においては石狩川採取試料と異なりＮ，，ＡＣＢによる成績はＡＳＰＢによる成績の約１／２であった．しかし表７に示したようにＡＣＴＢと比較すると，ＡＣＴＢの４４‐８５０／ｌｏｏｍｌに対しＮＡＣＢは８．４２９／ｌｏｏｍ１と，約１／５であり相違は大きくなった．ＡＳＰＢとＮＡＣＢの間では５％の危険率でまたＡＣＴＢとＮＡＣＢとの間では，０ ‐１％の危険率でそれぞれ有意差が認められた．表４. 河川水中（石狩川；１９８９，１０‐１８）緑膿菌に対するＮＡＣＢおよびＡＳＰＢの算出能の比較ｑ雌畿料Ｕ容量（ｍｌ）接樟訊１０１. 培地. 表５. ＡＳＰＢ. ）４５／５ｏａ. ＮＡＣＢ. ４／５０. ＭＰＮ［上憂興値；下至屡値］／ｌｏｏｍＩ. ２麗筆ｒ３ ※ ※ ｇｇｉｌ１宣言訂※ １：. 河川水中（石狩川；１９８９，１１‐１０）緑膿菌に対するＮＡＣＢおよびＡＳＰＢの算出能の比較ｑ雌泡接種試料容量（ｍｌ）培地. ｌ１ｏｌｏ１. ｏ１０ｌｏ０. １Ｉ１０ｌｏ－. ＭＰＮＬ日剛直；下限値］／ｌｏｏｍＩ. ）４／５０ＡＳＰＢ２６２６／５ｏ５ｏａ４５０ ○／５０ＮＡＣＢ. ２／５００／５０ ○／５０２ｏＣ一瀬細細菌数２ｏＣ［１‐ ８３±ｏ－３４］ ×１０４／ｍ１３７Ｃ. 表６. ［４‐ ００±０－５８］×１０３／ｍｌ. 河川水中（牛朱別川；１９８９，１２‐２０）緑膿菌に対するＮＡＣＢおよびＡＳＰＢの算出能の比較. 鮎は族闘試料接容量（ｍｌ）種. Ｉ培地ｌｏｌｌｏｏｌｏ－ＭＰＮ［上限値；下限値］／ｌｏｏｍＩ，）２２／５０６／５０６６８９５［４６７６８９５６８５］ ※ ＡＳＰＢ５０／５ｏａ； ‐ ‐ ‐ ＮＡＣＢ５０／５０１４／５００／５０３８‐ ３４６［２６８７８；５４１ ‐ ‐ ７０６］」２ｏＣ「搬細獅薯数２ｏＣ［１‐ ９８±ｏ‐ ４５］×１０５／ｍ１３７Ｃ. ９２）（. ［４‐ ２１±ｏ‐ ｏｌ］×１０５／ｍｌ.

(6) . ９３. 緑膿菌算出用液体培地の性能の比較表７. ）緑膿菌に対するＮＡＣＢおよびＡＣＴＢの算出能の比較河川水中（牛朱別川；１９９１，１‐１８仏接雌試粋容量（ｍｌ）獅馴培地. ｌｏｌ. ｌｏｏ. Ｉｌｏ－. ＭＰＮ［上限値；下限鯖値］／ｌｏｏｍｌ. ＡＣＴＢ４９／５０１９／５０３／５０４４‐ ８５０［３１‐ ８９４；６３‐ ０６９］Ｔ ※※※ ８‐ ４２９［５‐ ９７７；１１‐ ８８７］Ｊ７／５０１／５０ＮＡＣＢ２６／５０殴鞠細菌数３７Ｃ［１‐ ３２±ｏ‐ １４］ ×１０２／ｍ１. ｏＣにおけるＡＳＰＢＡＣＴＢおよびＤ１０培地間の緑膿菌算出能の比較ｅのＮｏ２．３７ｒａｋ．，，. 河川水，プール水，等の試料中に存在する緑膿菌のための分離算出用培地には，炭素および窒素源を制限することによって緑膿菌に対する選択能を与える方式のものがある．そのようなものの中の代表的なＭＰＮ法用培地である，ＡＳＰＢ，ＡＣＴＢ，およびＤｒａｋｅのＮｏ‐１０培地（ＤＲＫＢ）の緑膿菌算出能を調べた．実験室培養緑膿菌株についての算出能を表８に示した．使用菌は河川水０Ｃ１８時間培養し，洗浄することなしにＰＢで希釈して接から分離した緑膿菌株であり，ＴＳＢで３７８種した．その結果，最大の算出能を示したのはＤＲＫＢにおいてであり１．９７０×１０／ｍｌだった．ま. ８た，ＡＳＰＢおよびＡＣＴＢの成績の間には差はなく，それぞれ１‐４９６×１０８／ｍｌおよび１‐５３６×１０. ／ｍｌであった．ただし，これらの成績の間には有意差は認められなかった．表８. 実験室培養緑膿菌株に対するＡＳＰＢ，ＡＣＴＢおよびＤＲＫＢの算出能の比較搬容量（ｍｌ）接種菌液. 培地. ７１０－. ａ１０‐. ｌ０４. ＭＰＮ［上限値；下限値］／ｍｌ. ＡＣＴＢ５０／５０３６／５０１３／５０１‐ ５３６［１‐ １３８；２－ｏ７４］ ×１０８９／５０１‐ ９７０［Ｌ４４７；２‐ ６８２］×１０８ＤＲＫＢ５０／５０４３／５０一瀬細菌数３７Ｃ［２‐ ３０±０‐ ２２］×ｉ０８／ｍｌ. 表９. ＮＳ. ）緑膿菌に対するＡＳＰＢ，ＡＣＴＢおよびＤＲＫＢの算出能の比較河川水中（石狩川；１９９０，１‐２４容量（ｍｌ）接縄重書籍“ 培地. １０Ｉ. ＭＰＮ［上ｊ酬直；下限値］／ｌｏｏｍｌ. ＤＲＫＢ. ＩＯ／５０. 細菌数２ｏＣ－ ‐留織３７Ｃ. ［４‐ ５３±１‐ ０８］×１０３／ｍ１［１‐ ４８±ｏ‐ １４］×１０３／ｍｌ. ）緑膿菌に対するＡＳＰＢ，ＡＣＴＢおよびＤＲＫＢの算出能の比較１９９０，２‐１５表１０河川水中（牛朱別川；体胸容量（接瀞髭ｍｌ）諏培地. ｌｏｌ. ｌｏｏ. Ｉｌｏ－. ＭＰＮ［上限値；粁１剛直］／ｌｏｏｍＩ. ）２６／５０４／５０７５－１６６［５２－６６２；ｉ０７‐ ２８５］ＡＳＰＢ５０／５０ａ. ＮＳ. ＡＣＴＢ５０／５０３２／５０４／５０９９‐ ５５５［７１‐ ０３３；１３９‐ ５２７］ＰＲＫＢ４７／５０１５／５０２／５０３１‐ ０００［２２‐ ６６７；４２‐ ３９６］一般蜘鞠菌数２ｏＣ［１‐ ８６±ｏ－４４］ ×１０４／ｍ１３７Ｃ［１‐ ５９±ｏ‐ ２３］×１０４／ｍｌ. ９３（）. ※※※.

(7) . ９４. 青井. 陽・横田正義. 次にＡＳＰＢ，ＡＣＴＢ，およびＤＲＫＢの河川水中緑膿菌に対する回収能を調べた石狩川，．についての成績を表９に，牛朱別川についての成績を表１０Ｃで行０に示した．試料の培養はすべて３７なった．石狩川における回収成績は，表９に示したようにＤＲＫＢＡＣＴＢおよびＡＳＰＢに，，ついてそれぞれ２‐２３１／ｌｏｏｍｌおよび１５０８／ｌｏｏｌであり大きな差異は認められｍ，１．７４４／ｌｏｏｍｌ， ‐ ，. なかった．一方，牛朱別川採取試料における成績は表１０に示したように，３種の培地の差異は，，石狩川における成績とは若干異なっていたＡＣＴＢにおける算出成績は９９５５５／ｌｏｏｍ１と三種． ‐ ，の培地中で最大値を示し，ＡＳＰＢにおいては７５‐１６６／ｌｏｏｍ１とＡＣＴＢにおける成績よりも劣り，さらにＤＲＫＢにおいては３１‐０００／ｌｏｏｍ１とＡＣＴＢの１／３であった．ＡＳＰＢとＡＣＴＢの回収成績の間には有意差は認められなかったしかしＤＲＫＢの成績にたいしてはＡＳＰＢＡＣＴＢ．，，ともに０‐１％未満の危険率で有意差が認められた．. ３．試料の培養温度と河川水中緑膿菌の算出について試料を培養する温度が緑膿菌算出に影響を与える可能性を考慮して培養温度を２５３２３７およ，，，ｏＣに設定した各培養温度における牛朱別川河川水中び４２の緑膿菌に対する算出能の相違をＭＰ．，Ｎ法を用いて調べた．ＭＰＮ法は，２倍段階１０本法で行なった．比較に用いた培地はＡＣＴＢ，，ＡＳＰＢ，ＤＲＫＢ，およびＮＡＣＢであるその結果について緑膿菌の少なかった例での成績．，を表１１に，緑膿菌の比較的多かった例での成績を表１２に示した．表１１に，緑膿菌数が少なかった試料におけるそれぞれの培地および培養温度における河川水，，中の緑膿菌算出成績を示す．最も良好な算出成績を示した培地はＡＣＴＢでありＡＳＰＢおよび，ＤＲＫＢがこれについだ．ＮＡＣＢにおいては緑膿菌は全く回収できなかった．表１１各種培地の河川水中（牛朱別川；１９９０５１１）緑膿菌に対する培養温度の違いによる算出能の比較 ‐ ，培養培地. 温度繊. 出弾舷試料出容量（ｍｌ）接１Ｉ２０２－. ２１. ｇ一驚奉呈誓書言蟹Ｆ. ）２ｃ. ０. ３２Ｃ. ３. ２. ２. ３７Ｃ. ４. ３. ０. ＡＣＴＢ２５Ｃ. ４２Ｃ. ＭＰＮ〔上限値；下限値］. ０. し／ｌｏｏｌｏｏｍｌ）６‐ ０６８［１．５１６；２４．２８４］ ※※ ２３．１６３【１１．００５；４８‐７５４］２４‐０３８［１１．４０４；５０‐ ６６７］ＮＳ．. ＡＳＰＢ２５Ｃ３２Ｃ３７Ｃ４２Ｃ. ※ ※ 畳呈露語義量三愛琴電コ※ ，. ＤＲＫＢ２５Ｃ３２Ｃ３７Ｃ４２ＣＮＡＣ８２５Ｃ３２Ｃ３７Ｃ４２Ｃ. 一瞬岡菌数２０Ｃ［１‐ １４±０‐ １１］ｘｌ０４／ｍｌ細ｗ３ケｃ［７‐４０±０‐ １５］×１０３／ｍｌ. ９４（）.

(8) . 緑膿菌算出用液体培地の性能の比較. ９５. ）緑膿菌に対する培養温度の違いによる算出能の比較２２９９０６２各種培地の河川水中（牛朱別川；１表１ ‐ ，触湿度培地ＴＩＢＴ２－５－Ｃ１３２Ｃつサ ′ハｏし４２Ｃ. 試曲容量（ｍｌ）接概譲醇 ‐ ‐ ４ＭＰＮ［上限値：粁隈値］｛／ｌｏｏｍｌ１２）１２０２２７９ｒ丁）９４２５ｃ１３６０［３１１２５３：２２８．－ ‐ 十ｒ４－：・ ”－＾ｒｌ ▲．▲ ｆ７扉‐Ｚ＾ｂ＾ｂ１１一＞丁じ＾じコＮ（Ｄ５ＬＪ ” ０ ▲ ８６３＾８・６－５ ▲ ‐ ｌＲ４．▲ １ー，ｙｑ’・Ｑｒ △Ｒ．ＹケＵＱＶ＾１７０って４Ｊ０十ーｇｙ÷ ‐ｔｌＩｎＶ’ ０十リ．ムＦＶ ÷ 十９７３０８９‐９９９［５５‐４８０：１４５．９９５］. ９５. ３３ハ０リ０４５７月１５. １９４６‐７５４［２６．８６４；８１／ ‐３６９１ ÷ １ウ１ウ十ワＪに．たＴ４・つ聾＾ “ ‐ ▲Ｊムつム” 魚」．争．Ａ争ワ十ｏＯｒｔ女Ｕ・心ム ○ ０ＡＬ ’１２９０．８６５［５６ ‐８９４：１４５－１１９］Ｊ１６６．４４１［４１‐３１８；１０６‐８４１１. ８. ５. ２. ＡＳＰＢ２５Ｃ３２Ｃ３７Ｃ４２Ｃ. ６. ＤＲＫＢ２５Ｃ３２Ｃ. ４. ８１ ‐２７６］ ‐７２５［５０－８７７；１３１. . ＮＡＣＢ２５Ｃ３２Ｃ３７Ｃ４２Ｃ. ４２３２２２１２６‐４４７［３－５３７；１１５３３２３／ ‐７５０１ ÷ 丁５６５０１０‐６１７［６‐２５７；１８－０１５］ＮＳ４／５４５月３５１１４／ ‐５１６【７‐１２４；１８．６１５］５６２１１０‐２１８［５．８９１；１７．７２２］５／級滋団園数２０Ｃ［５．４０±０‐３２］×１０４／ｍ１３７Ｃ［２－７９±０‐２７］×１０４／ｍｌ. 脳納酬数／試せ艶数；ｂ）ＮＢ：瞥通ブイヨン枠斜駆験道珊［注］ａ）紬囲階錨闘馳評．駅般檎瀞管艶ゐ悶数は分母“変示したもの以外１Ｏ敵；試料潔鱒餌淑群削ｃ）毅醐附』，皿層滋 “ ※ ※：Ｐ〈０．０１ ‐ ：Ｐく０．０５；－ＮＳ：Ｎｏｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ； ※ ・ ※：Ｐ〈０．００１ ※※. また，試料の培養温度によって各々の培地における緑膿菌算出数に相違が見られた．ＡＣＴＢに. ０Ｃの算出数の間に差はなく各々２４０３８／ｌｏｏｍｌ及び２３‐１６３／ｌｏｏｍｌであっｏＣおよび３２おいては３７ ‐ ，ｏＣにおいてはこれよりもやや少なく１６‐８２４／ｌｏｏｍだった．２庁Ｃでの回収は，６‐０６８／た．４２，. ｌｏｏｍ１とはるかに低くすべての温度にたいして回収成績に有意差が認められた．ＡＳＰＢにおいてｏｏ６８／０Ｃにおける成績は１９１りもかなり低く６‐ は，３７ ‐４９／ｌｏｏｍ，また３２Ｃにおいてはこれよ０ｏｌｏｏｍｌだった．この２つの成績の間には有意差が認められた．４２Ｃおよび２５Ｃでは緑膿菌は回収で. ０Ｃにおける回収の相違はあまりなくそれぞ０Ｃおよび４２０Ｃ３７，きなかった」ＤＲＫＢにおいては３２，は認は有意差らだたこれ３者についてｌｏｏび９０３／ｌよ１おｍっ．れ９‐２５１／ｌｏｏｍｌ， ‐ ，，５．９３０／ｌｏｏｍｌ. ４ｏ，められなかった．２庁Ｃでは緑膿菌は回収できなかった．一般細菌数は，２０Ｃ培養で１‐１４×１０／ｍｌｏＣで７４０×１０３／ｍｌであった３７． ‐. 表１２に，緑膿菌数がやや多かった試料における，それぞれの培地および培養温度での，緑膿菌算ｏＡＳＰＢ出成績を示した．各培地で最も良好な算出成績を示した培養温度は，ＡＣＴＢでは４２Ｃ，０ＰＢ，ＡＣｏ次はＡＳはＤＲＫＢこれらのうち最大値た２Ｃ培養であ３では３７Ｃ，ＤＲＫＢではっ．，は有意差らＴＢでそれぞれ１０９‐４２８，８９‐９９９であった．しかし，これ３者の成績の間に，，９０‐８６５は認められなかった．また，ＮＡＣＢの回収成績は，これら３者よりもはるかに劣っていた．ＮＡ０Ｃで最大回収を示したがこの成績は他の培地での最低の回収成績の約１／４であり，両７ＣＢは，３，者の間にはｏ‐１％以下の危険率で有意差が認められた．この例でも培養温度によって緑膿菌算出数に相違が見られたが，緑膿菌数が少なかった例とおおｏ９／むね同じ傾向が見られた．ＡＣＴＢにおいて最大算出を示した培養温度は４２Ｃであり，８９．９９０Ｃにおける算出成績は若干劣り各々８６‐３ｏＣおよび３７８５／ｌｏｏｍおよび７９‐２４９／ｌｏｏｍｌだった．３２，９５）（.

(9) . ９６. 青. 井. 陽・横. 田. 正. 義. ｏＣにおける成績はこれらに比べ劣ていｌｏｏｍｌだった．２５て，５３‐３６０／ｌｏｏｍｌであったが最大値っ，，. ０Ｃでの成績の間には有意差は認められなかたＤＲＫＢであった４２において最大算出を示した培っ．ｏｏ養温度は，３２℃であり１２０９４８／ｌｏｏｌだた２庁Ｃ３７Ｃおよび４２Ｃにおけｍっ．る算出成績はこれより ‐ ，も低く各々８１‐７２５／ｌｏｏｍ，６６‐０５２／ｌｏｏｍおよび６５‐２０４／ｌｏｏｍｌだった．ただし，これらの成績に０Ｃにおいて９０８６５／は有意差は認められなかった．ＡＳＰＢにおける算出成績の最大値は３７ ‐ ｏｏｌｏｏｍだった．３２Ｃおよび４２Ｃにおける成績は，これより若干劣り各々８４．４７８／ｌｏｏｍおよび６６‐４４１／ｌｏｏｍであった．また，２庁Ｃにおける算出成績は４６５４／ｌｏｏｍ１とこれらの成績よりも劣ってい ‐７０Ｃにおける成績との間に有意差が認められたて，３７．. 考察医学領域における緑膿菌の重要性はよく知られている緑膿菌は新生児乳幼児火傷患者．，，，，癌末期患者，高濃度抗生物質投与患者などにおいて重篤な感染症を引き起こす３９）緑膿菌に対す，．る有効な抗生物質が開発されていなかった当時は緑膿菌感染症は大変に恐れられた病気であっ，た．したがって，さまざまの分野から集中して研究が行なわれその結果その生物学的特性と病原，性のメカニズムが総合的に，詳細に理解されるようになったたとえば緑膿菌の病原性の本体とし．ては，抗生物質に対する強い耐性，種々様々の菌体外産生毒性物質などが知られている４１４｝，．また，緑膿菌の危険性について，公衆衛生学的見地から議論される重要な生態学的性質の一つに，この細菌が自然環境中に極めて普遍的に存在していることが挙げられる緑膿菌は．Ｐｓｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓｅｕｄｏｍｏｎａｉｄａとともに一群を形成しｓ属の細菌で近縁種のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｆ，Ｐ．ｐｕｔている．この群のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓは，土壌および水中等に広く存在して，自由生活を営んでいることが特徴で，緑膿菌もまた，他の近縁の２菌種同様水中や湿潤環境中に広く存在しているすな，．わち，緑膿菌は病原細菌でありながら，腐生細菌としての性質を濃厚に持っておりこの性質は，，緑膿菌感染の機会を増大させ，同時に緑膿菌感染を防御する上で障害となる重要な因子となっている．また緑膿菌は人および動物の糞便中にも存在することから大腸菌同様に糞便汚染の指標とし，てもとらえられている．. 従って，水系環境中に存在する緑膿菌を検出することは衛生公衆衛生学的に重要な意義があ，る．その際に問題になることは，試料中の緑膿菌の濃度および緑膿菌以外の細菌の存在である濃．厚菌液，あるいは他の雑菌がほとんど存在していないような試料（例：緑膿菌症患者の血液尿，等）からであれば，緑膿菌を分離することは容易であるしかし自然界の水系環境中には大変に．，多種，かつ多数の細菌が生存している．そして緑膿菌は，特殊な条件の環境を除けば彼らに比べ，て，相対的に，極めて小数しか存在していないこのような試料から緑膿菌を検出し定量するた．，めには，緑膿菌を何らかの方法によって選択し，濃縮することが必要となるそのために利用され．ている細菌の算出法がメンブレンフィルター（ＭＦ）法および最確数（ＭＰＮ）法である１７８），，．多くの特′性を総合的に比較すると，ＭＦ法は，ＭＰＮ法よりもはるかに優れているしかしＭ．，Ｆ法はフィルターの上に細菌を捕捉するために浮遊粒子が多い試料の場合にはフィルターにめず，まりを起こす．このような場合には，大量の試料の漉過はできなくなりまたすでにフィルター，，上に捕捉された細菌も，栄養補給が阻止されて発育できなくなる等の欠点をもつ従って浮遊粒子．が多い試料に対してはＭＦ法の利用は大きく制限されるこのような試料中に極めて微量に存在．，する細菌を，分離し定量するためには，どうしてもＭＰＮ法を用いなければならない．しかし，ＭＰＮ法は，精度が低いという欠点を持つこの欠点はＭＰＮが推計学の理論に従って．０｝我々はＭＰＮを用いて直接にではなく間接数学的に導き出された確率であることに起因する１．，９６）（.

(10) . 立地の性能の比較緑腰菌算出用液体ゴ考. ９７. 的に細菌数を測定している．正確にＭＰＮを表現するならば，『あるＭＰＮ，Ｄは９５％の確率で上限値ＤＵから下限値ＤＬの間に存在する』，という言い方をしなければならない．だが精度が低いとはいう欠点，試料の希釈倍数を小さくし，供試管数を多くすることによってある程度改善できる．たとえば，１０倍段階希釈１段５０本の場合ならば，１段５本に比べて９５％信頼限界の幅は約２８％に減少する．２倍段階希釈１０本法ならば，約３６％に減少する．従来行なわれているＭＰＮ法は，１０倍段１５｝又は１）これはＭＰＮの決定をＭＰＮ表に依存し ’ ０本である１階希釈で供試管数は３本，５本７，，．ていた時代のやむを得ざる手段であった．ＭＰＮの計算，なかんずく信頼限界の厳密な算出には膨大な量の計算を必要とする．だが現在はコンピューターの利用と大変正確に作った近似計算プログラムの開発によって，我々は，実験条件の許すかぎり，自由な希釈倍数と供試管数の組み合わせでＭＰＮ法を実行できるようになった．もう一つの重要な，ＭＰＮ法の利用の可能性として，液体選択培地の性能の比較評価が挙げられ２８）コロニー発現の有無によって容易に比較検定をおこなうことができる固形培地と異なり ’ る１，．液体培地における細菌の分離能および増殖能の評価は難しい．ここで，均一に懸濁されている試料を，比較しようとする培地に接種して，もしも算出したＭＰＮに相違が現れるとしたならば，その相違は用いた培地の選択能や，増殖能などの性質の相違を表現していると考えらる．また，この場合には，ただ１個の細胞を増殖させるか否かまでを考察することが可能で，ＭＰＮ法の利用によって定量的に簡便により正確に液体培地の性能を比較できよう．自然界に存在する細菌細胞，また，場合によっては実験室内で増殖させた細胞についても，性質が完全に同一のものはない．さらに，種々のストレスを受けていて，選択培地には発育できない細胞が存在することを考えると，このことは新しい利用法の道を開くものであると考えられる．緑膿菌用の液体分離選択増殖培地は，多くのものが考案されてきた．今回，河川水中の緑膿菌の回収ＭＰＮ用培地として比較を行なったのは，ＮＡＣブイヨン（ＮＡＣＢ），アセトアミドブイヨン（ＡＣＴＢ），アスパラギンブイヨン（ＡＳＰＢ），ＤｒａｋｅのＮｏ１０培地（ＤＲＫＢ）の４種類で．. ７）これらの培地を選んだのは文献上の引用頻度調製の簡便および使用後の処理の・あった１，，，．容易によってである．ＮＡＣＢは栄研化学株式会社で製造販売されていた，緑膿菌用の液体分離選択増殖培地で，セトリミド，ナリジキ酸を選択剤として加えている．ＡＣＴＢおよびＡＳＰＢは｝にＭＰＮ用培地としてｉｏｎｏｆＷａｔｅｒａｎｄＷａｓｔｅｗａｔｅｒｌＳｔａｎｄａｒｄＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒｔｈｅＥｘａｍｉｎａｔ『ｉｔ』に採用されているもので，炭素および窒素源としてアスパラギン又はアセトアミドをｔｔａｅｎｖｅ利用している．ＤＲＫＢは１９６０～７０年代にかけて，緑膿菌用ＭＰＮ用培地としてよく用いられていたもので，炭素および窒素源としてアスパラギン，プロリン，エタノールを利用している．これらの３種類の培地は，ＮＡＣＢとは異なり炭素および窒素源を，緑膿菌のみが利用できるものに制限することによって選択増殖能を与えようとしている．今回，ＮＡＣＢによる河川水中の緑膿菌の算出は，ＡＳＰＢおよびＡＣＴＢに比べて大きく劣っているという成績が得られた．これは以前の実験で得られた成績とも一致する．また，ここには示していないけれど，ＮＡＣ寒天培地から寒天成分を除去して作成したブイヨンでも，やはり同様の成績を得た．これらの成績から，ＮＡＣＢは，少なくとも河川水中の緑膿菌を分離定量するためにｏＣの温度範囲で調べた成績も結果は同様でＡＣＴは不向きである，と結論づけられる．２５～４２，Ｂ，ＡＳＰＢ，ＤＲＫＢのほうが性能は優れていた．. ここで興味深いことは，ＴＳＢで１８時間培養した緑膿菌に対しては，河川水で見られた，培地間の緑膿菌回収率の差異が，全く見られないことである．これはＮＡＣＢ対ＴＳＢ，ＢＧＬＢでもそうであったし，ＡＣＴＢ，ＡＳＰＢ，ＤＲＫＢの間でもやはり大きな差はなかった．このような，. ９７（）.

(11) . ９８. 青. 井. 陽・横. 田. 正. 義. 人工培地で培養した細菌と，自然界で自由生活を行なっている細菌の間での，算出能の差異はどうして生じてくるのだろうか．この場合考えられるのは，河川水中の緑膿菌細胞のあり様である．河川水中の環境は利用可能の栄養に乏しいことをはじめとして，高い酸素濃度，紫外線被爆，捕食者の存在等，様々の，試験管内にはない，細菌の生残に不都合な因子に満ちている．これらの因子は，細菌にたいしてストレスとなって作用する，そしてストレスを受けた細菌細胞は健康細胞とは異なった生理化学的性質を示し，抗生物質はじめ種々の抗菌性化学物質にたいして，感受性が非常に高まることがよく知られている．人工的にストレスを与えた細胞は，健康な細胞ならば良好に発育する選択培地にも発育しなくなるという現象はその１例である．ＮＡＣＢにはセトリミドおよびナリジキ酸が選択剤として加えられているのだが，河川水中には何らかの原因によって，これらの抗菌薬剤に対して強い感受性を示す緑膿菌が多くなっているということは，十分に考えられる．一方，他の三種の培地は炭素および窒素源を，緑膿菌やその近縁種にしか利用できない特殊な有機物にすることによって選択能力を与えようとしている．またアスパラギンなどのアミノ酸はストレス下にある細胞の回復を促進す１１３１９｝河川水等の環境に生息する細菌を分離する際には他の細菌の発育を・ ’ るという報告があり１，，抑制するような物質は用いない培地のほうが都合が良いのではないかと思われる‐ ＭＰＮ法を実行する際に克服すべき問題の一つに，培養中の細菌同士の桔抗が挙げられる．ＡＣＴＢ，ＡＳＰＢ，およびＤＲＫＢには必ずしも，緑膿菌のみが単独で発育するわけではなく，他の菌種が発育しその結果桔抗現象が起こる．桔抗の影響を，できるかぎり小さくするために，一度培養してからＮＡＣ寒天培地（ＮＡＣＡ）に継代して緑膿菌を分離しているのだが，それでも緑膿菌ｌ以外の細菌が回収されてくる．それら雑菌の主体は緑膿菌に近縁種のＰ‐ｆｕｏｒｅｓｃｅｎｓである．ＮＡＣＡは非常に優秀な緑膿菌用選択寒天培地であるが，私達が今回行なったような実験操作では残念ながらＰ紅ｕｏｒｅｓｃｅｎｓを完全に除去することはできなかった今回調べた河川水中には多数のＰ．ｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ ‐ｆ. が存在していたようで，ここで用いた３種のＭＰＮ用培地にも比較的容易に発育す. ｌる．河川水中に同時に存在するＰ‐ｆｕｏｒｅｓｃｅｎｓの数量によって，緑膿菌の回収が様々に阻害されるのではないかと考えている．. 緑膿菌と. ｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓＰ‐ｆ. の大きな相違の一つに発育可能温度の違いがあり，緑膿菌はＰ‐. ｏＣで発育することができるｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓとは異なり４２ ‐. 一方. Ｐ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓはむしろ低温で良好に. ０発育する．このような理由から，培養温度を２５，３２，３７，４２Ｃの四段階に設定して，河川水試料の培養を行なった．その結果，各培地共通して２庁Ｃでの緑膿菌回収成績は低かった．これは，低温でｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓが緑膿菌に桔抗した結果であろうと思われるしかし，培養温度３発育するＰ‐ｆ２，３７，．ｏ２Ｃについての成績は各培地についてまちまちであって，今回の研究では至適な培養温度を特定す４ることはできなかった‐. 以上述べてきたように，緑膿菌算出用培地としては最も適切なものを判断するためには，更に検討を行なわなければならないが，今回の実験による限りＡＳＰＢまたはＡＣＴＢを用いた，３７又はｏＣでの培養が良いのではないかと考えているＤＲＫＢはＰｆ４２，．ｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ．. の増殖に非常に都合. が良い培地であり，緑膿菌の分離が妨害されてしまうようだ．ただ，使用する培地と，培養条件の評価についてはより厳密な比較検討が必要である．またＮＡＣＢは分離用培地としては大変に優れているが，緑膿菌算出用培地としては明らかに不適である．これらの培地の緑膿菌選択能の違いｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓによる桔抗，ストレスなどの問題等については現在検討を行なっているところや，Ｐ‐ｆである．. ９８（）.

(12) . 緑膿菌算出用液体培地の性能の比較. 要. ９９. 約. 従来用いられてきたものよりも，精度を高めた最確数法を用いることによって，緑膿菌用選択培地の，河川水中に存在する緑膿菌に対する回収能力の比較を行なった．比較を行なった培地は，ＮＡＣブイヨン（ＮＡＣＢ），アセトアミドブイヨン（ＡＣＴＢ），アスパラギンブイヨン（ＡＳＰＢ），およびＤｒａｋｅのＮｏ１０培地（ＤＲＫＢ）であった．トリプチケースソイブイヨン培地を用い．. ０Ｃ１て，３７８時間培養した緑膿菌に対しては，比較を行なったそれぞれの培地について回収成績の違いは見られなかった．一方，河川水中に存在する緑膿菌に対しては，培地間の回収成績に相違が見られた．抗生物質を用いることによって選択能を与えている，ＮＡＣＢによる緑膿菌の回収成績は，有機物栄養源をアスパラギンおよびアセトアミドに制限している，ＡＳＰＢおよびＡＣＴＢよりも大きく劣っていた．低温培養による回収成績は中高温培養よりも劣っていた‐. 引用文献１）ＡｍｅｒｉｉｌｉｉｔｈＡｓ）ｆ賜防げ αれｄ溺餌云ｃａｎＰｕｂｌｃＨｅａｓｏｃａｔｏｎ．虚Ｓ加７２〆αｍＭＢ乾留おえ γ 劫８Ｅ期“““のめ７２ｑｇｗ防げｉｉ１６ｉｉｏｎ），Ｅｄ‐ｂｙＡｍｅｒｉａｔ（ｔｈｅｄｔｉｉｎｇｔｏｎ，Ｄ‐Ｃ‐ （１９８５）ｐ－８８０‐８８２．ｔｈＡＳｃａｎＰｕｂｌｃＨｅａｌＳｏｃｏｎ‐ Ｗｒａｓｈｂｒｉｏ力の唯物の”ｏ夢幻婚ｉ２）ＢｅｕｃｈａｔＬ‐Ｒ・（１９７６）ＳｕｗａｙｏｆｍｅｄｉａｆｏｒｔｈｅｒｅＳｕｓｃｉｔａｔｔｒｅｓｓｅｄＶｉｏｎｏｆｈｅａｔ－Ｓ．Ｚ工Ａロメ． βααβ“ｏ－，４０，５３－６０‐ ｌｉｎｆｉｉ）Ｂｏｔｚｅ猷ｌａｒｔＫ．＆ＲｕｄｅｎＨ．Ｈｏｓｐｉｔａ３伽 ‘ ７ｅｃｔｏｎＳｃａｕｓｅｄｂｙＰｓｅ“ｄｏ粥ｏ”健雄’ ｓｃ尺偽のた α ２〆 “ｏ鍵．工ｎａα ｇＺＣＺＺｌｌ（）ｐ１９８７１‐１５．ｉｎｇＧ‐ｅｔ‐ａ “化αＺＡ功にＺｓｑｆｐｓ α，Ｅｄ‐ｂｙＤｏｒｇ”〆の瑠鯛硲 αの勧増加ｏｓ．．Ｋａｒｇｅｒ，ＢａｓｅＥ‐ Ｒｅｓ４）ＢリメｉｉｍｉｉａｌａｇｅｎｔｌｎａｔｕｒｅｏｆｔｈｅｐｒｏｂｌｉｔａｎｃｅｔｏａｎｔａｎＬ‐ ｃｒｏｂｓ：ｔｈｅｇｅｎｅｒａｓｅｍａｎｄｔｈｅｂａｓｓｏｆｉｔａｎｃｅ‐ ｌｎＦｓ）ｐ１９７９ｔＲ‐Ｇ‐Ａｃａｄｅｍｉｒｅｓｓｔｅ”〆の”ｏ７２僻 αの偽 ‘ ％ｏ秘，ＥｄｃＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ（ｇｉ ‐ｂｙＤｏｇｇｅ ‐ ２１９‐２７０． ’ＭｏｓｉｍａｔｉｏｎｏｆｂａｃｉａｌｄｅｎＳｉｉ）Ｃｏｃｈｒａｎい－Ｇ．（１９５０）Ｅｓｔｔｅｒ５ｔｔＰｒｏｂａｂｌＥ潟ｂｙｍｅａｎｓｏｆｔｈｅ ’ ｅＮｗｍｂｅｒ’ ． βわ粥メガｃｓ，６，１０５‐１１６‐ ）Ｄｏｒ６ｉｔｔｏｒａｌｒｅｎｃｅｆａｃｓｏｆｐｓればｏ“““凝 αの偽増加ｏｓα １ｎａα ｎｇＧ‐ｅ７ｆｓ化Ｒｅｓのた α ｚｄＣあれＺ”ＺＡ功におｑ ‐ ‐ Ｖｉｎ・ＰｓＫＥｂＤｉｌＢｌ（ｄＧ１９８７）１３６ ‐ １４８ｔｒｒｅ”の粥ｏ”熔解“増加ｏｓ α ｒｎａａｅａｓｅｏｅｐｇ，ｇ．． ‐ ‐ ．，．ｙ）ＤｒａｋｅＣ‐Ｈ‐（７）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｃｕｌｉｏｎａｎｄｅｎｕにｎｅｒａｔ１９６６ｉａｆｏｒｍｅｉｉｔｕｒｅｍｅｄｏｎｏｆＰｓｅ”〆の呪ｏ７２簾ｓｏｌａｔズ αの例ぎみ勿ｓ α．を〆劫乙αわ－ｓｃー，３，１０一１９・Ｚ８）ＤｕｔｋａＢＪ‐ ＰｓｉｉｉＺ筋Ｚｇ“〆の明のα葛 αの偽 ‘ “鮎α：ＡｃｏｎｔｒｏｖｅｒａｌｉｎｄＳｏ“，Ｅｄ‐ｂｙｃａｔｏｒｐａｔｈｏｇｅｎ‐ｌｎ肌８７明るフ咽閉ｅＦＩｇｉＤｕｔｋａＢ．Ｊ．ＭａｒｃｅＩＤｅｋｋｅｒ，ＮｅｗＹｏｒｋ／Ｂａｓｌ（１９８１）ｐ‐１１１２８ｅｌｉＧ‐Ｌ‐ Ｍｅｄｉｌｍｉ９）Ｇｉｌｏｇｙ‐ ｌｎＰｓｇ”αの“◇ ｂｙｓａｂａ億ＬＤ．ＨａｎｓＨｕｂｅｒａｒｄｃａｃｒｏｂｉｏ７２餌僻ｍｇｆ “◇鍵，Ｅｄ ‐ Ｐｕｂｌｉ１９８０）ｐ．２５－３０．ｓｈｅｒＳ，Ｂｅｍ（１０）Ｈａｌｌ（１９３３）ＡｐｐｌｉｉｏｎｏｆＳｉｃＳｔｏｐｒｏｂｌｉｔａｔｔｅｒｖｏｒｓｏｎＨ．○－＆ＺｉｅｇｅｒＮ．Ｒ．ｃａｔｅｍＳｉｎｂａｃｏｌｏｇｙ－１ ‐ Ａｍｅａｎｓｏｆｉｎｇｂａｃｄｅｌｐｏｐｕ β Ｚｉａｌｉｏｎｂｙｔｈｅｄｉｌｉｔｅｒｔｅｒだ“ ２５１０１一１２１ｔｈｏｄ‐ノｒｎａｔ α ◇ ｕｔｏｎｍｅ・．，， ‐ ｆｉ）ＨｅａｔｅｒＣ．Ｄ．＆ＶａｎＤｅｒＺａｎｔ帆．Ｃ．（１９５７）Ｅｆｉｌｏｆｈｅａｔ－１１ｔｏｆｔｈｅＰ１ｔｅｃａｔｎｇｍｅｄｕＬｒｎｏｎｔｈｅｓｕｌ【ｉｖａｒｅａｔｅｄｌｌｃｅｓｏｆＰｓｅ“〆の肌の・餌刀”鯛溶解欄‐／ ‐ Ｆｏｏｄ尺鱒．，２２，１６４‐１６９‐ １２）ＨｏａｄｌｆａｃｅｗａｔｅｙＡ．帆．Ｐｓｇ”〆◇“ ２０７２Ｑｓ α８れ増加ｏｓαｉｎｓｕｒｅｒ切ｏ７ｓ‐ｌｎＰ鞘劾 ‘ぬ７２餌 αの勧懲Ｚ “偲ぼ五のお客化〆僻め鑑ＺｓＺＺＺＢｋＮＹｋ（１９７７）ｐ－３１‐５７． α ７ｚｄｐ”ず靴ごのめ７Ｏ％，Ｅｄ．ｂｙＹｏｕｎｇＶ‐Ｍ．ＲａｖｅｎＰｒｅｓ２ｚα ｓｏｏｓ，ｅｗｏｒ１３）ＫｕｏＳ１９６９）Ｃａｐａｃｉｉｉｔｙｏｆａｓｐａｒｔｄｔｏｉｌｉｉｔｅｒｃａｃｎｃｒｅａｓｅ官ｅｂａｃａｌｃｏｕｎｔｏｎｓｕｓＰｅｎｓｏｎｓ ‐Ｃ‐＆ＭａｃＬｅｏｄＲ‐Ａ－（Ｚａｆｉｔｅｒｆ９８６５１－６５８ｏｆＥｒｅｅｚｎｇ‐ ェβααβ“ｏＺｓｃ膨れ効如のＺ．，， ‐ １４）ＬｉｕｐｂｙＤｏｇｇｅｔｔＲ．Ｇ．Ａｃａｄｅｍｉ７２鱒 αの勧嵯Ｚ “餌α ｅ“〆◇ ’ 吻ｏ７２姫鱒れば物ｏ班．Ｅｄｃ ‐Ｖ‐ ＴｏｘｉｎｓｏｆＰｓｅ“〆の呪ｏ ‐ ，ｌｎＰｓＰｒｅｓ１９７９）ｐ‐６３－８８－ｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ（. ９９（）.

(13) . １００. 青井. 陽・横田正義. １）日本薬学会衛生試験法注解日本薬学会金原出版，京都（５１９８６）ｐ．１１６‐ １１７２４８‐ １２５１．，１１６）西原力他（１９８６）マイクロコンピューターによる最確数の計算．衛生化学，３２２２８‐ ，２２６‐ ］ａｍｅＦ１７）ＲＩｉｄｅｍｉｏｇｙａｎｄｅｐｏｌｏｇｙｏｆ凡ｇ “ｄｏ粥ｏれ餌僻粥夢鋤肌．ｌｎ凡ｅ “〆ｏ粥伽硲僻粥夢”ｏ鍵．Ｅｄ．．Ｓ．ＴｈｅｅｃｏｌｂｙＳａｂａｔｈＬＤ－ＨａｎｓＨｕｂｅｒＰｕｂｌｉ１９７９）ｐ．３１‐５１．ｓｈｅｒｓ，Ｂｅｍ（１８）Ｒｉｄｇｅ. Ｅ（１９７０）ＥｆｆｉｌｔｉａｂｌｅｃｓｏｆｓｏｍｅｄｕｅｎｔｓｕｐｏｎｖｅｃｏｕｎｔｓｏｆＡ２房ｏ卿α“ 効のｏｃｏｃ伽雛． ‐Ｈ．朋たＡる力ん１６１８９ ‐ １９２／Ｇ２“ メロ飾 ‐ ．．，１９）Ｓｔｉ（１９６２）ＥｆｆｌｌｉｎｇｏｎＡ８〆ｔｏｆｃｈｒａｎｇｅＲ．Ｅ．＆ＤａｒｋＦｉｏｎｅｃひろαｄＢγ α雛噂靴ｇｓｉｎａｃｑｕｅｏｕｓｓｕｓＰｅｎｓ．Ａ．．ヱＧ８れ．朋た飾るわＺ ‐，２９，７１９－７３０．（本学助教授. １００（）. 旭川分校）.

(14)