Title
日本における牛白血病ウイルスの浸潤状況と伝播に関する
疫学的研究( 本文(Fulltext) )
Author(s)
小林, 創太
Report No.(Doctoral
Degree)
博士(獣医学) 乙第139号
Issue Date
2015-09-24
Type
博士論文
Version
ETD
URL
http://hdl.handle.net/20.500.12099/53637
※この資料の著作権は、各資料の著者・学協会・出版社等に帰属します。日 本 に お け る 牛 白 血 病 ウ イ ル ス の
浸 潤 状 況 と 伝 播 に 関 す る 疫 学 的 研 究
2015 年
岐 阜 大 学 大 学 院 連 合 獣 医 学 研 究 科
小 林 創 太
日 本 にお け る牛白血病 ウイル ス の
浸潤状 況 と 伝播 に関する疫 学 的研究
目
次
緒 言 ... 1 第 一 章 日 本 に お け る 牛 白 血 病 ウ イ ル ス の 浸 潤 状 況 を 把 握 す る た め の 全 国 抗 体 調 査 ... 8 序 論 ... 9 材 料 お よ び 方 法 ... 10 １ ． 調 査 手 順 ... 10 ２ ． 採 材 お よ び 実 験 室 内 検 査 ... 11 ３ ． 統 計 学 的 解 析 ... 12 結 果 ... 13 １ ． 牛 白 血 病 ウ イ ル ス の 浸 潤 状 況 ... 13 ２ ． 地 域 別 抗 体 陽 性 率 ... 13 ３ ． 年 齢 別 抗 体 陽 性 率 ... 14 考 察 ... 14 小 括 ... 19 図 表 ... 20 第 二 章 混 合 ロ ジ ス テ ィ ッ ク 回 帰 モ デ ル を 用 い た 牛 白 血 病 ウ イ ル ス の 酪 農 場 内 伝 播 に 関 す る リ ス ク 要 因 の 解 析 ... 32 序 論 ... 33 材 料 お よ び 方 法 ... 34１ ． 分 析 に 供 し た デ ー タ ... 34 ２ ． 抗 体 検 査 ... 35 ３ ． 調 査 票 を 用 い た 聞 き 取 り 調 査 ... 35 ４ ． 解 析 対 象 農 場 の 選 定 ... 36 ５ ． 統 計 学 的 解 析 ... 36 結 果 ... 40 １ ． 記 述 的 解 析 ... 40 ２ ． 単 変 量 解 析 ... 41 ３ ． 多 変 量 解 析 ... 42 考 察 ... 43 小 括 ... 47 図 表 ... 49 第 三 章 ゼ ロ 強 調 負 の 二 項 分 布 モ デ ル を 用 い た 牛 白 血 病 ウ イ ル ス の 農 場 内 お よ び 農 場 間 伝 播 に 関 す る リ ス ク 要 因 の 解 析 ... 53 序 論 ... 54 材 料 お よ び 方 法 ... 55 １ ． 調 査 票 を 用 い た 聞 き 取 り 調 査 ... 55 ２ ． 解 析 対 象 農 場 の 選 定 ... 55 ３ ． 農 場 内 有 病 率 の 分 布 ... 56 ４ ． 統 計 学 的 解 析 ... 56 結 果 ... 60 １ ． 記 述 的 解 析 ... 60 ２ ． 単 変 量 解 析 ... 61
３ ． 多 変 量 解 析 ... 62 考 察 ... 63 小 括 ... 68 図 表 ... 70 総 括 ... 84 謝 辞 ... 87 引 用 文 献 ... 88
略 語 一 覧
A IC ： A ka ik e ’s in fo rma tio n c rite rio n ， 赤 池 の 情 報 基 準 B LV ： b o vin e leu k e mi a viru s ， 牛 白 血 病 ウ イ ル ス EB L： e n z o o tic b o vin e le uc o sis ， 地 方 病 性 牛 白 血 病
O IE：O ffic e In te rn a tio na l d e s E p iz oo tie s（ 英 名：Wo rld O rg a n iz a tio n fo r A n ima l He a lth ）， 国 際 獣 疫 事 務 局
P L： p e risiste n t l ymp h oc yto sis ， 持 続 性 リ ン パ 球 増 多 症 SB L： sp o ra d ic b o vin e le uk o sis ， 散 発 性 牛 白 血 病
ZIN B モ デ ル ： z e ro -in fla te d n e g a tive b in o mi a l モ デ ル ， ゼ ロ 強 調 負 の 二 項 分 布 モ デ ル
1
緒
言
牛 白 血 病 は ， 体 表 お よ び 体 腔 リ ン パ 節 の 腫 大 な ど を 主 徴 と す る 疾 病 で ， 牛 白 血 病 ウ イ ル ス （b o vin e le u k e mia viru s: B LV ） を 原 因 と す る 地 方 病 性 牛 白 血 病 （e n z o o tic b o vin e le u k o sis ： EB L ） と ， 原 因 不 明 の 散 発 性 牛 白 血 病 （sp o rad ic b o vin e le u ko sis ： S B L） の 総 称 で あ る 。 日 本 に お い て 本 病 は 届 出 伝 染 病 に 指 定 さ れ て お り ， と 畜 場 に 出 荷 さ れ た 牛 が 牛 白 血 病 と 診 断 さ れ た 場 合 ， と 畜 場 法 お よ び 食 品 衛 生 法 に 基 づ き ， と 体 は 全 廃 棄 と な る 。 農 林 水 産 省 の 家 畜 衛 生 統 計( 72 )に よ れ ば ，牛 白 血 病 の 摘 発 頭 数 は 1 9 98 年 に は 全 国 で 99 頭 で あ っ た が ， 毎 年 こ の 数 は 増 え 続 け ， 2 0 0 8 年 に は 1 , 00 0 頭 ， 2 0 12 年 に は 2 , 0 00 頭 を 超 え る 数 を 記 録 し ， 法 定 伝 染 病 と 届 出 伝 染 病 を 合 わ せ た 牛 の 監 視 伝 染 病 の 中 で は ， 近 年 最 多 の 発 生 頭 数 と な っ て い る 。 さ ら に ， 近 年 の 調 査 で は ，我 が 国 で 発 生 の み ら れ る 牛 白 血 病 の ほ と ん ど は EB L で あ る こ と が 示 唆 さ れ て い る(9 1 )。 EB L は 国 際 獣 疫 事 務 局（ O IE ）に よ っ て リ ス ト 疾 病 に 指 定 さ れ て い る (7 6 )。 日 本 の よ う に 発 生 数 の 把 握 は な さ れ て い な い も の の ， 米 国 の 乳 用 牛 で は 地 域 に よ っ て も 異 な る が 4 4 ～ 68 %(1 2, 9 6 )が ， 肉 用 牛 で は 全 国 的 に は 約 1 0 ％ (12 , 97 )が ， カ ナ ダ ア ル バ ー タ 州 (8 9 )で は 27 % の 乳 用 牛 が B LV に 感 染 し て い る と 推 定 さ れ て い る 。 一 方 ， 欧 州 で は デ ン マ ー ク ， フ ィ ン ラ ン ド ， オ ラ ン ダ ，英 国 ，リ ト ア ニ ア 等 ，E B L を 清 浄 化 し た 国 も あ る (2 , 14 , 7 4 , 7 5 , 7 6 )。 ま た ， ニ ュ ー ジ ー ラ ン ド に お い て は ，1 9 97 年 か ら 酪 農 生 産 者 団 体 主 導 で EB L 対 策 が 行 わ れ て お り ， 2 0 0 6 年 か ら 2 01 1 年 に は 毎 年 国 内 牛 群 の 約 半 数 が 抗 体 検 査 を 受 け て き た 。 そ の 結 果 ，2 0 0 8 年 以 降 は 1 群 も B LV 感 染 群 が 見 つ か っ て い な い(6 5 )。 豪 州 で は ， 1 9 9 0 年 代 中 ご ろ か ら 民 間 の 自 発 的 な プ ロ グ ラ ム と し て 始 ま っ た E B L 対 策 は ， 2 00 8 年 に 官 民 共 同 で 進 め る 国 家 プ
2 ロ グ ラ ム と な り ， 集 中 的 な サ ー ベ イ ラ ン ス の 結 果 ， 清 浄 化 を 達 成 し つ つ あ る(2 3 )。 EB L の 原 因 と な る B LV は ， レ ト ロ ウ イ ル ス 科 デ ル タ レ ト ロ ウ イ ル ス 属 に 属 し ， ウ イ ル ス 粒 子 は 8 0 ～ 1 0 0n m の 球 形 で ， 中 心 に 4 0 ～ 9 0 n m の コ ア を 持 ち ，エ ン ベ ロ ー プ を 有 し て い る 。B LV の ゲ ノ ム は 一 本 鎖 R NA で あ る が ， 本 ウ イ ル ス は こ の ゲ ノ ム を DNA に 変 換 す る 逆 転 写 酵 素 を 持 ち ， 感 染 細 胞 の 染 色 体 に 二 本 鎖 D NA（ プ ロ ウ イ ル ス ） と し て 組 み 込 ま れ ， 感 染 細 胞 の 分 裂 と 共 に 増 殖 す る(4 6 )。本 ウ イ ル ス は Mil l e r ら (6 4 )に よ り ，白 血 病 を 発 症 し た 牛 ， お よ び 後 述 す る 持 続 性 リ ン パ 球 増 多 症 を 呈 し た 牛 の 末 梢 血 リ ン パ 球 か ら ，1 9 6 9 年 に 初 め て 分 離 さ れ た 。 現 在 ， レ ト ロ ウ イ ル ス は デ ル タ レ ト ロ ウ イ ル ス 属 を 含 め て 5 属 に 分 け ら れ て お り ， デ ル タ レ ト ロ ウ イ ル ス 属 に は ヒ ト T 細 胞 白 血 病 ウ イ ル ス な ど が 含 ま れ る ( 4 9 )。 牛 へ の B LV 感 染 は 終 生 持 続 す る が (1 1 , 4 9 )， い く つ か の 転 帰 を と る こ と が 知 ら れ て い る 。 感 染 牛 の 約 7 0 % は ， 体 内 で リ ン パ 球 数 が 増 え る こ と も ， 臨 床 的 に 発 症 す る こ と も な く そ の 生 涯 を 終 え る(1 1 , 4 9 )。た だ し ，発 症 し な い 場 合 で あ っ て も B LV の キ ャ リ ア ，す な わ ち 感 染 源 と し て の リ ス ク を 持 ち 続 け る 。 一 方 ， 感 染 牛 の 3 0 %程 度 に は ポ リ ク ロ ー ナ ル な B リ ン パ 球 数 の 増
加 に よ る 持 続 性 リ ン パ 球 増 多 症（p e rsiste n t l ymp h o c yto sis： P L）が 認 め ら れ る(1 1 , 2 4 , 2 5 )。 P L 牛 で は B リ ン パ 球 と T リ ン パ 球 の 比 （ B /T 比 ） が 逆 転 す る も の の ， 臨 床 症 状 は 示 さ な い 。 B LV 感 染 牛 の 最 終 転 帰 は 致 死 性 の リ ン パ 腫 ，あ る い は リ ン パ 肉 腫 の 発 症 で あ る 。こ の 段 階 に い た る の は 主 と し て 4 ～ 5 歳 以 上 の 感 染 牛 で ，感 染 牛 全 体 の 5 %以 下 と 考 え ら れ て い る (1 1 , 26 )。 発 症 牛 の お よ そ 2 /3 は 末 梢 血 リ ン パ 球 が 増 加 す る 白 血 性 の リ ン パ 腫 を 呈 す る( 1 0 , 1 1 )。 発 症 時 の B リ ン パ 球 の 増 殖 は モ ノ ク ロ ー ナ ル な い し オ リ ゴ ク ロ ー ナ ル で あ り ， 各 種 臓 器 ・ 組 織
3 に リ ン パ 腫 が 形 成 さ れ ， そ の 結 果 ， 病 変 が 形 成 さ れ た 臓 器 は 機 能 不 全 を 起 こ し ， 感 染 牛 を 死 に 至 ら し め る(1 0 , 1 1 , 3 9 , 46 -4 8 )。 こ の 段 階 で の 臨 床 所 見 は ， 食 欲 不 振 あ る い は 廃 絶 に よ る 削 痩 や 元 気 消 失 と い っ た 一 般 的 な 臨 床 症 状 の 他 ，E B L に 特 徴 的 な も の と し て は ， 体 表 リ ン パ 節 の 腫 脹 ， 直 腸 検 査 時 に 触 診 可 能 な 子 宮 を は じ め と す る 臓 器 の 腫 大 ・ 硬 結 ， 眼 球 の 突 出 な ど が あ る(1 1 , 2 5 )。な お ，E B L を 発 症 し た 個 体 を 含 め ，B LV 感 染 牛 に 対 す る 治 療 の 試 み は ，免 疫 学 的 な 抵 抗 性(3 )や ，エ ピ ジ ェ ネ テ ィ ク ス の 応 用 可 能 性 (4 )を 示 唆 し た 報 告 な ど が あ る も の の ， 未 だ 確 立 さ れ た も は な い 。 同 様 に ， 感 染 あ る い は 発 症 を 防 御 す る ワ ク チ ン 等 の 開 発 も 試 み ら れ て い る(7 , 1 3 , 2 8, 4 5 , 76 )が ， 実 用 化 に は い た っ て い な い 。 EB L 発 症 以 前 の B LV 感 染 牛 に よ る 生 産 性 へ の 影 響 に つ い て は ， 諸 外 国 で こ れ ま で 多 く の 研 究 が な さ れ て き た 。E ma n u e lsson ら (2 0 )や Ott ら (7 9 )は ， B LV 抗 体 陰 性 牛 に 比 べ て 抗 体 陽 性 牛 の 産 乳 量 は 2 ～ 3 % 低 い こ と を 報 告 し た 。ま た ，E rsk ine ら ( 22 )は ，農 場 内 の B LV 有 病 率 が 高 い 群 ほ ど 産 乳 量 は 低 い と 報 告 し て い る 。 さ ら に ，Va n Le e u we n ら (10 0 )は ， 抗 体 陽 性 牛 は 抗 体 陰 性 牛 よ り も 受 胎 率 が 7 %低 い と 報 告 し ，B ren n e r ら (8 )は ，抗 体 陽 性 牛 は 抗 体 陰 性 牛 よ り も 淘 汰 率 が 高 く ， 乳 房 炎 や 下 痢 症 に か か り や す い と 報 告 し て い る 。 一 方 ，B LV に 感 染 し て い る だ け で は ， 生 産 性 に は 影 響 し な い と し た 報 告 も あ る 。S o rge ら (9 0 )や T iwa ri ら (9 4 )の 調 査 に よ れ ば ，B LV 感 染 牛 と 非 感 染 牛 の 間 に 産 乳 量 お よ び 乳 質 の 差 は 認 め ら れ な か っ た 。H ub e r ら (3 6 ) も B LV 感 染 の 有 無 と 生 産 性 や 繁 殖 成 績 、 さ ら に 臨 床 型 乳 房 炎 の 発 生 リ ス ク と の 間 に は 関 連 が な い と 報 告 を し て い る 。 こ の よ う に ，B LV 非 感 染 牛 と 感 染 未 発 症 牛 の 生 産 性 の 差 や ， 感 染 未 発 症 牛 の 他 の 疾 病 へ の 感 受 性 に つ い て は 議 論 が 分 か れ て い る も の の ，EB L 発 症 牛 の 治 療 法 が な い こ と ， ま た ， 発 症 牛 の と 畜 場 に お け る 全 廃 棄 は 農 場 経 営
4 に 大 き な 経 済 的 損 失 を 与 え る こ と か ら ， 少 な く と も 日 本 に お い て は 適 切 な EB L 対 策 が 必 要 と 考 え ら れ る 。 前 記 の と お り 国 内 の 牛 白 血 病 の 発 症 ・ 摘 発 頭 数 が 継 続 的 に 増 加 し て い る こ と ，B LV 感 染 牛 の う ち E B L を 発 症 す る の は ご く 一 部 で あ る と い っ た 現 状 に 鑑 み る と ， 現 在 日 本 国 内 に は 相 当 数 の B LV 感 染 牛 が 存 在 す る こ と が 推 察 で き る 。し た が っ て ，B LV 感 染 牛 を 減 ら す 対 策 を 確 立 す る こ と が ，EB L 対 策 の 根 幹 に な る と 考 え ら れ る 。 そ の た め に は ，現 在 国 内 に お い て B LV が ど の 程 度 浸 潤 し て い る の か を 把 握 す る こ と が 必 須 で あ る 。 し か し な が ら ，1 9 8 0 年 代 初 頭 に 全 国 調 査 (3 7 )が な さ れ て 以 来 ， 現 在 ま で B LV の 国 内 浸 潤 状 況 は 明 ら か に さ れ て い な い 。 家 畜 衛 生 に お け る 感 染 症 対 策 の 基 本 は ， 発 生 の 早 期 摘 発 と 感 染 個 体 の 淘 汰 ， お よ び 非 感 染 個 体 へ の 更 新 で あ る 。 こ れ に 加 え て ，B LV は 日 本 国 内 に 常 在 化 し て い る こ と か ら ， 浸 潤 を こ れ 以 上 進 行 さ せ な い た め の 対 策 ， す な わ ちB LV 伝 播 を 阻 止 す る た め の 対 策 も 重 要 と な る 。 こ こ で ， 疾 病 等 の 健 康 上 の 問 題 に 対 し て そ の 発 生 確 率 を 高 め る 要 因 ， す な わ ち リ ス ク 要 因(6 3 ) を 特 定 し ， そ れ を 排 除 す る こ と に よ っ て 疾 病 等 の 発 生 を 予 防 し ， 健 康 増 進 に 寄 与 す る こ と は ，疫 学 の 目 標 そ の も の で あ り(8 0 )，B LV 対 策 に お い て も こ の 考 え 方 は 適 用 で き る 。 B LV の 伝 播 は ， 感 染 牛 に 保 有 さ れ る 感 染 リ ン パ 球 が 非 感 染 牛 に 伝 達 さ れ る こ と に よ っ て 成 立 す る 。 例 え ば ， 注 射 針 や 直 腸 検 査 手 袋 な ど の 複 数 回 使 用 は ，B LV の 医 原 性 の 伝 播 経 路 と し て 知 ら れ て い る (3 3 -3 5 )。 ま た ， 吸 血 昆 虫 ， 特 に ア ブ は ，B LV の 機 械 的 ベ ク タ ー と し て 知 ら れ て い る ( 5 , 5 8 , 7 7 )。 こ の よ う な 水 平 感 染 に 加 え ，B LV は 垂 直 感 染 す る こ と も 知 ら れ て お り ， 子 宮 内 感 染 お よ び 分 娩 中 の 産 道 感 染 が 報 告 さ れ て い る(9 9 )。ま た ，B LV 感 染 牛 の 初 乳 や 常 乳 に はB LV が 含 ま れ て お り ， そ れ ら を 介 し て 伝 播 す る こ と も 知 ら れ て い る(2 7 , 3 5 ) 。 し か し な が ら ， B LV 伝 播 経 路 を す べ て リ ス ク 要 因 と と ら
5 え ， こ れ ら す べ て に 対 し て 同 等 に 注 力 し な が ら 対 策 を 実 施 す る こ と は 容 易 で は な い 。 む し ろB LV の 浸 潤 状 況 を 把 握 し た 上 で ， 多 く の B LV の 伝 播 経 路 の 中 か ら ， 現 在 の 日 本 に お い て よ り 伝 播 に 寄 与 す る も の を 特 定 し ， そ れ ら に つ い て 優 先 的 に 対 策 を 検 討 し て い く 方 が ， 対 策 全 体 の 効 果 の 面 か ら も ， さ ら に ， 対 策 に 投 じ る こ と が で き る 資 源 の 有 限 性 に 鑑 み て も 重 要 と 考 え ら れ る 。 一 方 ， 野 外 で の 疾 病 対 策 を 検 証 す る 際 ， 一 般 的 に 評 価 対 象 と す る 要 因 以 外 の 条 件 が す べ て の 農 場 で 揃 う こ と は 稀 で あ り ， こ れ ら を 考 慮 す る 必 要 が あ る 。 す な わ ち ， 疾 病 の 発 生 と は 直 接 関 係 な い 要 因 が ， 分 析 対 象 で あ る 興 味 の あ る 要 因 ， お よ び 疾 病 発 生 の 有 無 と 強 い 統 計 学 的 関 連 を 持 つ 場 合 ， 興 味 の あ る 要 因 の 効 果 が 正 し く 推 定 で き な い こ と が あ る 。 こ の よ う に ， 健 康 上 望 ま し く な い ア ウ ト カ ム ， 例 え ば あ る 要 因 の B LV 伝 播 確 率 へ の 影 響 が ， そ れ 以 外 の 要 因 に よ っ て 歪 め ら れ る こ と を 交 絡 と 呼 ぶ(8 3 ) 。 ま た ， 疾 病 発 生 に 関 し て 興 味 の あ る 要 因 が 複 数 あ る 場 合 ， 個 々 の 要 因 が 疾 病 発 生 に 与 え る 効 果 は ，要 因 間 で 調 整 し た 値 を 用 い て 解 釈 す る 必 要 も あ る 。し た が っ て ， 異 な る 農 場 を 対 象 に リ ス ク 要 因 の 検 証 を 行 う に は ， 興 味 の 有 無 に 関 わ ら ず 複 数 の 要 因 と 疾 病 発 生 と の 関 連 を 調 整 で き る よ う な 分 析 方 法 を 採 用 す る 必 要 が あ る 。 こ の ， 統 計 解 析 上 変 量 や 変 数 と 呼 ば れ る 要 因 を 複 数 考 慮 し て 分 析 す る こ と は ， 多 変 量 解 析 と 総 称 さ れ る( 84 )。 多 変 量 解 析 を 用 い た リ ス ク 要 因 の 解 析 は ， 家 畜 衛 生 に お け る 疫 学 研 究 で し ば し ば 用 い ら て れ き た 手 法 で あ る 。Ko b a ya sh i ら (5 1 )は 日 本 国 内 に お け る ヨ ー ネ 病 発 生 農 場 の 疫 学 情 報 を 分 析 し ， 発 生 農 場 に 対 し て 実 施 さ れ る モ ニ タ リ ン グ 中 に 継 続 的 に 摘 発 が 起 こ る 農 場 の 特 徴 は ， 初 摘 発 個 体 が 臨 床 症 状 を 示 し て い る ， 初 摘 発 時 に 2 頭 以 上 摘 発 さ れ る ， お よ び 牛 舎 形 態 が つ な ぎ 飼 い で な い こ と を 明 ら か に し た 。 ま た ，Nish ig uc h i ら (7 1 )は 2 00 5 年 茨 城 県
6 下 に お け る 低 病 原 性 （ 当 時 の 定 義 で は 高 病 原 性 の 弱 毒 タ イ プ ） 鳥 イ ン フ ル エ ン ザ の 発 生 に 際 し ，H5N 2 ウ イ ル ス の 農 場 侵 入 に 関 す る リ ス ク 要 因 を ，廃 鶏 の 導 入 ，農 場 機 材 の 他 農 場 と の 共 用 ，農 場 来 訪 者 に 対 す る 消 毒 の 不 徹 底 ， お よ び 最 も 近 い 養 鶏 場 ま で の 距 離 の 短 さ で あ っ た と 特 定 し た 。 こ れ ら の 先 行 研 究 で は ， 多 変 量 解 析 の 一 つ で あ る 二 値 ロ ジ ス テ ィ ッ ク 回 帰 分 析 が 用 い ら れ た 。さ ら に ，2 0 1 0 年 の 宮 崎 県 下 で 発 生 し た 口 蹄 疫 の 際 に は ，H a ya ma ら (31 ) が 口 蹄 疫 ウ イ ル ス の 近 隣 伝 播 を 起 こ し や す か っ た 農 場 の 特 徴 を ， 混 合 二 値 ロ ジ ス テ ィ ッ ク 回 帰 モ デ ル を 用 い て 分 析 し ， 豚 の 感 染 農 場 は 牛 の 感 染 農 場 よ り も 近 隣 伝 播 を 起 こ し や す く ， さ ら に 牛 農 場 で は 飼 養 規 模 が 大 き い ほ ど 近 隣 伝 播 を さ せ や す か っ た こ と を 明 ら か に し た 。 ま た ，Mu ro g a ら (68 ) は 口 蹄 疫 の 農 場 間 伝 播 に 関 す る リ ス ク 要 因 を 二 値 ロ ジ ス テ ィ ッ ク 回 帰 分 析 に よ っ て 評 価 し ，移 動 制 限 下 の 牛 農 場 で は ，農 場 機 材 の 他 農 場 と の 共 用 が ， 搬 出 制 限 下 に お い て は 飼 料 運 搬 車 や 家 畜 関 連 会 社 の 関 係 者 の 訪 問 が リ ス ク 要 因 で あ っ た と し て い る 。 こ の よ う に 多 変 量 解 析 は 活 用 例 の 多 い 手 法 で は あ る も の の ，B LV に 関 す る 対 策 の 検 討 と い う 観 点 か ら の 本 手 法 を 用 い た リ ス ク 要 因 の 評 価 事 例 は ， 国 際 的 に み て も 非 常 に 少 な い(2 1 )。 そ こ で 本 研 究 で は ，近 年 の 日 本 国 内 に お け る B LV 浸 潤 状 況 を 把 握 し ，そ の 伝 播 に 関 わ る 要 因 を 明 ら か に し ，効 率 的 な B LV 対 策 を 提 言 す る た め ，以 下 の 研 究 を 行 っ た 。 第 一 章 で は ， 乳 用 牛 と 肉 用 牛 に つ い て ， 全 国 血 清 疫 学 調 査 を 実 施 し ，抗 体 陽 性 率 を 指 標 と し て 国 内 の B LV 浸 潤 状 況 を 推 定 し ，そ の 疫 学 的 特 徴 を 明 ら か に し た 。 第 二 章 で は ， 農 場 レ ベ ル の 対 策 検 討 に 資 す る た め ，国 内 7 県 由 来 の B LV 感 染 酪 農 場 の 疫 学 調 査 デ ー タ を 用 い て ，農 場 内 伝 播 に 関 連 す る リ ス ク 要 因 を 明 ら か に し た 。 第 三 章 で は リ ス ク 要 因 の 評 価 対 象 地 域 を 全 国 に ， さ ら に 対 象 農 場 を 酪 農 場 お よ び 肉 用 繁 殖 農 場 に 拡 張 し ， 農 場 内 伝 播 に 関 連 す る リ ス ク 要 因 に 加 え ， 農 場 間 伝 播 に 関 連 す る リ ス
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ク 要 因 を 明 ら か に し た 。 ま た ， 第 二 章 お よ び 第 三 章 で は ， デ ー タ の 特 徴 を 踏 ま え て 異 な る 統 計 解 析 手 法 を 適 用 し ， そ れ ら の 意 義 な ら び に 有 用 性 も 評 価 し た 。
8
第 一 章
日 本 に お け る 牛 白 血 病 ウ イ ル ス の 浸 潤 状 況 を
把 握 す る た め の 全 国 抗 体 調 査
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序 論
感 染 症 に お い て は ， そ の 疫 学 的 特 徴 を 考 慮 し て 対 策 を 実 施 す る こ と が 重 要 で あ る 。口 蹄 疫 や 高 病 原 性 鳥 イ ン フ ル エ ン ザ 等 ，通 常 は 国 内 に 存 在 せ ず ， 伝 播 力 が 強 い 疾 病 の 場 合 ， 発 生 を 早 期 摘 発 し ， で き る だ け 早 く 終 息 さ せ る こ と が 優 先 さ れ る 。 し た が っ て ， こ の よ う な 感 染 症 の 発 生 に 際 し ， 原 因 病 原 体 の 浸 潤 状 況 を 把 握 す る こ と の 妥 当 性 は 低 い 。 仮 に 浸 潤 状 況 を 推 定 す る に し て も ， 有 病 期 間 や 発 生 期 間 が 短 い 疾 病 の 場 合 は ， 調 査 時 期 に よ っ て 疾 病 の 発 生 を 見 逃 す 可 能 性 が 高 い こ と か ら ， 意 味 の あ る 浸 潤 状 況 の 推 定 は 困 難 で あ る(4 2 )。 一 方 ， 日 本 に お け る B LV の よ う に ， 常 在 化 し て お り ， か つ 感 染 が 終 生 持 続 す る よ う な 病 原 体 に つ い て は ， 浸 潤 状 況 を で き る だ け 正 確 に 把 握 し ， 対 策 の 検 討 に 役 立 て る こ と が 重 要 で あ る 。 こ の こ と に よ り ， 国 レ ベ ル で 対 策 を 実 施 す べ き か 否 か ， 仮 に そ う す る 場 合 は ， 対 策 の 方 向 性 や そ れ に 必 要 な 期 間 や 費 用 等 に つ い て 検 討 す る こ と な ど が 可 能 と な る 。ま た ， 現 在 の 浸 潤 状 況 の 情 報 は ， 対 策 実 施 後 の 効 果 を 評 価 す る 際 に も ， 基 準 と な る た め 把 握 し て お く こ と が 必 須 で あ る 。 こ こ で ， 病 原 体 の 浸 潤 状 況 把 握 の た め ， 一 時 点 に お け る 罹 患 個 体 の 観 察 対 象 集 団 内 に 占 め る 割 合 を 指 標 と し て ， 疾 病 の 頻 度 を 調 査 す る 手 法 を 横 断 研 究 と 呼 ぶ(8 2 ) 。 本 手 法 は ， 一 時 点 で の 疾 病 浸 潤 状 況 を 把 握 す る た め の 唯 一 の 手 法 で あ る 。 そ の 他 の 疫 学 的 研 究 手 法 ， 例 え ば ， 症 例 対 照 研 究 は 実 施 者 自 ら が 症 例 群 と 対 照 群 の 数 を 恣 意 的 に 設 定 す る た め ， あ る い は コ ホ ー ト 研 究 で は ，興 味 の あ る 要 因 を 持 っ て い る 群（ 曝 露 群 ）と 持 っ て い な い 群（ 非 曝 露 群 ） を 一 定 期 間 観 察 す る こ と に よ り イ ベ ン ト の 発 生 の 頻 度 を 比 較 す る た め ， 集 団 に お け る 一 時 点 の 有 病 割 合 は 算 出 で き な い(4 2 )。 過 去 ， 日 本 に お け る B LV の 浸 潤 状 況 を 把 握 す る た め の 横 断 研 究 と し て ，10 19 8 0 年 と 1 98 2 年 に 乳 用 牛 と 肉 用 牛 の 全 国 抗 体 調 査 が 実 施 さ れ て い る 。 そ の 結 果 ，乳 用 牛 の 抗 体 陽 性 率 は 4 ～ 6 %程 度 ，同 じ く 肉 用 牛 で は 6 ～ 1 0 %程 度 と 推 定 さ れ た(3 7 ) 。 た だ し ， 家 畜 伝 染 病 予 防 法 の 改 正 に よ り 牛 白 血 病 の 報 告 義 務 が 生 じ た 1 9 9 8 年 の 9 9 頭 か ら ， 2 0 0 8 年 の 1 , 0 4 5 頭 ， さ ら に 2 0 1 2 年 に は 2 , 09 0 頭 へ と 摘 発 頭 数 が 急 増 し て い る こ と に 鑑 み る と ， 現 在 の 日 本 の B LV 浸 潤 状 況 が 1 9 8 0 年 代 当 時 の ま ま 推 移 し て い る と は 考 え に く い 。 そ こ で Mu ra k a mi ら (6 7 )は ， 2 00 7 年 に 国 内 7 県 を 対 象 と し た B LV の 抗 体 調 査 を 実 施 し た 。 そ の 結 果 ， 搾 乳 牛 （n = 3, 9 66 ）， 肉 用 牛 繁 殖 牛 （ n = 1 , 45 4 ） お よ び 肥 育 牛（n = 65 7 ）の 抗 体 陽 性 率 は そ れ ぞ れ 35 ，1 2 お よ び 8 %と 推 定 さ れ ，上 記 の 調 査 結 果(3 7 )と 比 較 す る と ，日 本 国 内 の B LV 浸 潤 が 進 行 し て い る こ と が 伺 わ れ た 。し か し な が ら ，こ の Mu ra k a mi ら の 報 告 (6 7 )で は ，日 本 国 内 の 広 い 地 域 を 対 象 と し た と 言 及 し て い る も の の ， ７ 県 の み が 対 象 で あ り ， 全 国 的 な 状 況 を 反 映 し て い な い 可 能 性 が あ る 。全 国 レ ベ ル の B LV 対 策 の 検 討 を 行 う た め に は ，全 国 を 対 象 に し た 浸 潤 状 況 の 評 価 を 実 施 す る 必 要 が あ る 。 そ こ で 本 章 で は ，近 年 の 全 国 レ ベ ル で の B LV の 浸 潤 状 況 を 把 握 す る こ と を 目 的 と し て ， 抗 体 検 査 を 用 い た 横 断 研 究 を 実 施 し ， 乳 用 牛 お よ び 肉 用 牛 の 抗 体 陽 性 率 を 推 定 す る と と も に ， そ の 疫 学 的 特 徴 を 分 析 し た 。
材 料 お よ び 方 法
１ ． 調 査 手 順 本 調 査 は ， 農 林 水 産 省 が 実 施 主 体 で あ る レ ギ ュ ラ ト リ ー サ イ エ ン ス 新 技 術 開 発 事 業 「 緊 急 対 応 が 必 要 な ウ イ ル ス 性 疾 病 の 診 断 ・ 防 除 技 術 の 高 度 化 お よ び 監 視 体 制 の 確 立 」の 一 部 と し て ，平 成 21 年 11 月 26 日 発 出 の 農 林 水11 産 省 消 費 ・ 安 全 局 動 物 衛 生 課 か ら 4 7 都 道 府 県 の 畜 産 部 局 （ 家 畜 保 健 衛 生 所 ） へ の 事 務 連 絡 に よ る 協 力 依 頼 に 基 づ き 実 施 さ れ た 。 対 象 集 団 は 全 国 の 搾 乳 に 供 さ れ て い る 乳 用 牛 ， お よ び 繁 殖 に 供 さ れ て い る 肉 用 牛 ， ま た ， そ れ ら の 候 補 牛 （ た だ し 6 ヶ 月 齢 以 上 ） と し た 。 以 下 ， こ れ ら は そ れ ぞ れ 搾 乳 牛 お よ び 肉 用 繁 殖 牛 と 呼 ぶ 。な お ，搾 乳 牛 の 調 査 は 2 0 0 9 年 度 ，肉 用 繁 殖 牛 の 調 査 は 2 0 10 年 度 に そ れ ぞ れ 実 施 し た 。 対 象 個 体 の 抽 出 に 先 立 ち ， ま ず 各 都 道 府 県 の 家 畜 保 健 衛 生 所 に お い て ， 協 力 可 能 な 酪 農 場 と 肉 用 繁 殖 農 場 を 4 戸 ず つ 選 定 し た 。 た だ し ， 都 道 府 県 内 で 牛 の 分 布 に 偏 り が あ る 場 合 は ， 都 道 府 県 の 裁 量 に よ っ て 家 畜 保 健 衛 生 所 間 で 戸 数 を 増 減 さ せ て も よ い と し た 。こ れ ら の 協 力 が 得 ら れ た 農 場 か ら ， 牛 20 頭 を そ れ ぞ れ 無 作 為 抽 出 し て 検 査 対 象 と し た 。 た だ し ， 飼 養 頭 数 が 20 頭 未 満 の 農 場 に つ い て は 全 頭 抽 出 し た 。 抽 出 さ れ た 牛 に つ い て は ， 各 家 畜 保 健 衛 生 所 の 担 当 者 が 採 材 年 月 日 ・ 耳 標 番 号 ・ 品 種 ・ 生 年 月 日 ・ 月 齢 ・ 産 歴 等 に つ い て の 疫 学 情 報 を 収 集 す る と と も に ，後 述 の B LV の 抗 体 検 査 キ ッ ト を 用 い て ，各 県 内 で 検 査 を 実 施 し た 。 そ の 結 果 ， す べ て の 都 道 府 県 か ら 協 力 が 得 ら れ ， 搾 乳 牛 に つ い て は 1 4 9 家 畜 保 健 衛 生 所 か ら 58 7 農 場 由 来 の 11 ,11 3 頭 が 対 象 と な っ た 。 こ の う ち ， 97 . 8 % に あ た る 1 0 , 8 6 5 頭 が ホ ル ス タ イ ン 種 で あ っ た 。 肉 用 繁 殖 農 場 に つ い て は 1 4 7 家 畜 保 健 衛 生 所 か ら 5 5 8 農 場 由 来 の 9 , 7 2 2 頭 が 対 象 と な っ た 。 こ の う ち 9 7 . 9 %に あ た る 9 ,5 19 頭 が 黒 毛 和 種 で あ っ た 。 国 内 地 域 別 の 協 力 戸 数 と 検 査 頭 数 の 内 訳 を 表 1 -1 に 示 し た 。 ２ ． 採 材 お よ び 実 験 室 内 検 査 常 法 に し た が い 頚 静 脈 あ る い は 尾 静 脈 か ら 採 血 し ， 血 清 を 分 離 し た 後 ， 抗 体 検 査 実 施 ま で －2 0 ℃ で 冷 凍 保 存 し た 。抗 体 検 査 は B LV の エ ン ベ ロ ー プ
12 糖 蛋 白 g p 5 1 に 対 す る 抗 体 を 検 出 す る 間 接 E LISA 法（「 牛 白 血 病 エ ラ イ ザ キ ッ ト 」，JNC 社 ，東 京 ，日 本 ）を 用 い た 。本 キ ッ ト の 使 用 指 示 書 に し た が い ， 指 示 陽 性 血 清 の 吸 光 度 に 対 す る 被 検 血 清 の 吸 光 度 の 比（𝑆 𝑃⁄ 値 ）が 0.3 以 上 を 抗 体 陽 性 ，0 . 3 未 満 を 抗 体 陰 性 と 判 定 し た 。な お ，本 キ ッ ト の 検 査 対 象 は 6 ヶ 月 齢 以 上 の 牛 と さ れ て い る 。 以 上 の デ ー タ は ， 前 述 の 協 力 依 頼 に よ り 得 ら れ た 検 査 結 果 を 収 集 し て 解 析 さ れ て い る た め ， 動 物 衛 生 研 究 所 動 物 実 験 委 員 会 の 承 認 は 必 要 な い と 判 断 さ れ た 。 ３ ． 統 計 学 的 解 析 各 都 道 府 県 か ら 送 付 さ れ た ， 前 記 の 個 体 ご と の 疫 学 情 報 と 検 査 結 果 は ， 表 計 算 ソ フ ト ウ ェ ア （Mic ro so ft E x c e l 20 0 3 ） に よ っ て デ ー タ ベ ー ス 化 し ， 以 下 の 分 析 に 供 し た 。 ま ず ， 抗 体 陽 性 率 を 以 下 の よ う に 定 義 し た 。 抗 体 陽 性 率(%) = 100 ×抗 体 検 査 陽 性 頭 数 抗 体 検 査 実 施 頭 数 検 査 対 象 個 体 全 体 の 抗 体 陽 性 率 を 算 出 す る と と も に ， 各 個 体 の 疫 学 情 報 か ら ，用 途 別（ 搾 乳 牛 と 肉 用 繁 殖 牛 ），地 域 別 ，な ら び に 年 齢 ご と に 抗 体 陽 性 率 を 算 出 し た 。 ま た ， 抗 体 陽 性 牛 が 1 頭 以 上 摘 発 さ れ た 農 場 を 感 染 農 場 と 定 義 し た 上 で ， 農 場 レ ベ ル の 有 病 率 （ 農 場 有 病 率 ） を 以 下 の よ う に 定 義 し ， 全 体 お よ び 用 途 別 に 算 出 し た 。 農 場 有 病 率(%) = 100 × 感 染 農 場 戸 数 抗 体 調 査 参 加 農 場 戸 数 用 途 別 抗 体 陽 性 率 お よ び 農 場 有 病 率 ，ま た ，年 齢 別 抗 体 陽 性 率 に つ い て ， 統 計 学 的 に 評 価 す る た め ， カ イ 二 乗 検 定 を 実 施 し た 。 地 域 別 の 抗 体 陽 性 率
13 は 算 出 さ れ た 結 果 を 定 性 的 に 評 価 し た 。統 計 学 的 解 析 に は ソ フ ト ウ ェ ア「R 」 の バ ー ジ ョ ン 2 . 6 . 1 (8 6 )を 用 い た 。
結 果
１ ． 牛 白 血 病 ウ イ ル ス の 浸 潤 状 況 抗 体 検 査 を 実 施 し た 計 2 0 , 83 5 頭 の う ち ， 7 ,3 3 9 頭 が 陽 性 反 応 を 示 し ， 抗 体 陽 性 率 と そ の 9 5 % 信 頼 区 間 は 3 5 . 2%（ 3 4 .9 ，3 5 . 6 ）で あ っ た 。牛 の 用 途 別 の 抗 体 陽 性 頭 数 は 搾 乳 牛 で 4 , 5 46 頭 ， 肉 用 繁 殖 牛 で 2 , 7 93 頭 で あ り ， 抗 体 陽 性 率 と そ の 9 5 %信 頼 区 間 は そ れ ぞ れ 4 0 . 9% （ 4 0 . 0 ， 41 . 8 ） お よ び 2 8 .7 % （2 7 .8 ，2 9 . 6 ）で あ っ た 。カ イ 二 乗 検 定 の 結 果 ，搾 乳 牛 は 肉 用 繁 殖 牛 に 比 較 し て 抗 体 陽 性 率 が 有 意 （P <0 . 0 1 ） に 高 か っ た （ 表 1 -2 ）。 調 査 対 象 と な っ た 全 農 場 1 , 1 4 5 戸 の う ち ，82 4 戸 が 感 染 農 場 と 判 定 さ れ ， 農 場 有 病 率 と そ の 9 5 % 信 頼 区 間 は 7 2 .0 %（ 69 . 4 ，7 4 . 6 ）で あ っ た 。酪 農 場 お よ び 肉 用 繁 殖 農 場 の 感 染 農 場 は そ れ ぞ れ 45 2 戸 お よ び 3 7 2 戸 で あ り ， 農 場 有 病 率 と そ の 9 5 %信 頼 区 間 は そ れ ぞ れ 7 7 . 0%（ 7 3 . 6 ， 80 . 4 ） お よ び 6 6 .7 % （6 2 .8 ，7 0 . 6 ）で あ っ た 。カ イ 二 乗 検 定 の 結 果 ，酪 農 場 は 肉 用 繁 殖 農 場 に 比 較 し て 農 場 有 病 率 が 有 意 （P < 0 .0 1 ） に 高 か っ た （ 表 1 -3 ）。 ２ ． 地 域 別 抗 体 陽 性 率 地 域 別 の 抗 体 陽 性 結 果 を ， 搾 乳 牛 に つ い て は 表 1 -4 に ， 肉 用 繁 殖 牛 に つ い て は 表 1 -5 に 示 し た 。 ま た ， こ れ ら を 図 1 -1 に 取 り ま と め た 。 全 国 的 に み る と ， 北 日 本 か ら 南 日 本 へ 南 下 す る ほ ど 抗 体 陽 性 率 は 高 い 傾 向 を 示 し ， 特 に 牛 の 用 途 に 関 わ ら ず 九 州 ／ 沖 縄 が 最 も 高 か っ た （ 搾 乳 牛 お よ び 肉 用 繁14 殖 牛 で そ れ ぞ れ 6 4 .6 %お よ び 4 2 . 4 %）。 た だ し ， 搾 乳 牛 で は 関 東 ， 肉 用 繁 殖 牛 で は 東 北 も 高 く （ そ れ ぞ れ 4 1 . 9%， 3 9 . 9 % ）， 四 国 に つ い て は ， 搾 乳 牛 ， 肉 用 繁 殖 牛 と も に 低 か っ た （ そ れ ぞ れ 2 2 . 0% ， 1 0 . 8% ）。 ３ ． 年 齢 別 抗 体 陽 性 率 年 齢 別 の 抗 体 検 査 結 果 を ， 搾 乳 牛 に つ い て は 表 1 -6 ， 肉 用 繁 殖 牛 に つ い て は 表 1 -7 に 示 し た 。 搾 乳 牛 は 2 1 . 2% お よ び 肉 用 繁 殖 牛 は 1 3 . 7% が 0 歳 時 点 で 感 染 し て い た 。そ の 後 ，搾 乳 牛 は 4 歳 ま で 加 齢 に と も な っ て 高 く な り ， 4 歳 以 降 は 4 5 %程 度 で 一 定 で あ っ た 。 肉 用 繁 殖 牛 は 3 歳 ま で 加 齢 に と も な っ て 高 く な り ，3 歳 以 降 は 3 0 %程 度 で 一 定 で あ っ た （ 図 1 -2 ）。 ま た ， 各 個 体 の 年 齢 を 育 成 ・ 初 妊 ま で を 想 定 し た 若 齢 牛 の 2 歳 未 満 と ， 成 牛 を 想 定 し た 2 歳 以 上 で 区 分 し た と こ ろ ， 搾 乳 牛 の 2 歳 未 満 の 抗 体 陽 性 率 は 2 4 .1 %， 2 歳 以 上 で 4 2 . 2 %で あ っ た（ 表 1 -8 ）。同 様 に 肉 用 繁 殖 牛 で は そ れ ぞ れ 1 5 . 2 %， お よ び 3 0 . 6 %で あ っ た （ 表 1 -9 ）。 カ イ 二 乗 検 定 の 結 果 ， と も に 2 歳 以 上 の 牛 の 抗 体 陽 性 率 が 有 意 （ と も に P < 0 . 01 ） に 高 か っ た 。 こ れ ら を 図 1 -3 に ま と め た 。
考 察
本 章 で は ， 約 2 5 年 ぶ り に B LV の 全 国 浸 潤 状 況 を 調 査 し た 。 抗 体 検 査 の 結 果 ，搾 乳 牛 の 約 4 0 % ，肉 用 繁 殖 牛 の 約 3 0 % が B LV に 感 染 し て い る と 推 定 さ れ た 。 Ito ら (3 7 )に よ る 調 査 で は ，4 7 都 道 府 県 か ら 約 3 , 60 0 戸（ 1 98 0 年 ）お よ び 約 2 , 90 0 戸 （ 1 9 8 2 年 ） の 酪 農 場 か ら ， 1 2 ヶ 月 齢 以 上 の 個 体 が 約 1 4 ,0 0 0 頭15 （1 98 0 年 ） お よ び 約 1 0 , 00 0 頭 （ 1 9 8 2 年 ） が 検 査 に 供 さ れ た 。 同 様 に ， 肉 用 牛 農 場 で は 約 1 , 9 0 0 戸 （ 1 9 80 年 ） お よ び 約 1 , 5 0 0 戸 （ 1 98 2 年 ） か ら 約 5 ,0 0 0 頭 （ 1 9 8 0 年 ） お よ び 約 3 , 6 0 0 頭 （ 1 98 2 年 ） が 検 査 さ れ た 。 し た が っ て ，1 戸 あ た り の 検 査 頭 数 は ， 本 調 査 に 比 べ て 明 ら か に 少 な い 。 検 査 法 に つ い て は ， 寒 天 ゲ ル 内 沈 降 反 応 が 用 い ら れ て い る 。 そ の 結 果 ， 抗 体 陽 性 率 は 乳 用 牛 で 5 . 8 %（ 1 9 80 年 ）お よ び 4 . 2 %（ 1 98 2 年 ），肉 用 牛 で は 11 . 3%（ 1 9 8 0 年 ）お よ び 6 . 0 %（ 1 9 82 年 ）と 推 定 さ れ た 。検 査 戸 数 や 1 戸 あ た り の 検 査 頭 数 ， ま た ， 検 査 法 が 異 な っ て い る た め ， 本 章 で 得 ら れ た 結 果 と 詳 細 に 比 較 す る こ と は で き な い が ，少 な く と も B LV は こ の 四 半 世 紀 の 間 に 国 内 で 広 く ま ん 延 し た と 考 え ら れ た 。 さ ら に ， 農 場 有 病 率 は 酪 農 場 で 8 0 %弱 ， 肉 用 繁 殖 農 場 で 7 0 %弱 と 推 定 さ れ た こ と か ら ，現 在 の 日 本 に お い て B LV が 多 く の 農 場 に 侵 入 し て い る こ と が 示 さ れ た 。 個 体 レ ベ ル の 抗 体 陽 性 率 で は ， 肉 用 繁 殖 牛 よ り も 搾 乳 牛 が ， ま た ， 農 場 有 病 率 で は 肉 用 繁 殖 農 場 よ り も 酪 農 場 の 方 が 高 か っ た と い う 結 果 は ，B LV が 高 度 に 浸 潤 し て い る 米 国 の 調 査 結 果(1 2 , 9 6 -9 7 ) と も 一 致 し た 。 こ れ ら の 報 告 に よ れ ば ，搾 乳 牛 お よ び 肉 用 牛（ 繁 殖・肥 育 の 別 は 明 記 さ れ て い な い ） の 有 病 率 は 4 3 . 5 %お よ び 1 0 . 3 %， ま た ， 酪 農 場 お よ び 肉 牛 農 場 の 農 場 有 病 率 は 8 9 %お よ び 3 8 . 7 % と 推 定 さ れ て い る 。 こ の 日 米 両 国 に 共 通 し て 認 め ら れ た 差 に つ い て は ， 搾 乳 と い う 毎 日 の 集 合 作 業 が あ る 酪 農 場 と ， そ れ が な い 肉 牛 の 農 場 と い う 牛 同 士 の 接 触 あ る い は 接 近 頻 度 が 違 う こ と ， そ れ に と も な う 基 本 的 な 飼 養 管 理 方 法 が 異 な っ て い る こ と が 影 響 し て い る と 考 え ら れ ，B LV 伝 播 に 関 す る リ ス ク 要 因 の 分 析 に つ い て は ， 牛 の 用 途 別 に 検 討 す る 必 要 が あ る こ と が 示 唆 さ れ た 。 地 域 別 に み る と ， 全 国 的 に は 北 海 道 で 抗 体 陽 性 率 が 低 く ， 南 日 本 へ 南 下 し て い く に し た が っ て 高 い と い う 傾 向 が 認 め ら れ ， 特 に 九 州 ／ 沖 縄 の 抗 体
16 陽 性 率 が 高 く ， 搾 乳 牛 で は 6 0 %以 上 ， 肉 用 繁 殖 牛 で は 4 0 %以 上 と な っ て い た 。 こ の 理 由 の 一 つ と し て ，B LV の 機 械 的 ベ ク タ ー で あ る 吸 血 昆 虫 ， 特 に ア ブ(5 , 5 8, 7 7 )の 影 響 が 考 え ら れ た 。一 般 的 に ア ブ の 成 虫 の 活 性 や 幼 虫 の 成 長 は 気 温 の 影 響 が 大 き く ， 気 温 が 高 い ほ ど 活 発 に 活 動 し ， 早 く 成 長 す る 。 そ の た め ， 気 温 が 高 い 地 域 で は ア ブ は よ り 早 く 出 現 し ， そ の 活 動 期 間 も 長 く な る(5 0 ) 。 こ の こ と は ， 日 本 国 内 で 比 較 的 温 暖 な 地 域 で あ る 九 州 ／ 沖 縄 で の 抗 体 陽 性 率 が 高 か っ た 理 由 の 一 つ と 推 察 さ れ た 。 た だ し ， 南 日 本 に 近 づ く ほ ど 抗 体 陽 性 率 が 高 い と い う 傾 向 に は ， 関 東 の 搾 乳 牛 ， 東 北 の 肉 用 繁 殖 牛 が 高 い ， あ る い は 四 国 に お い て は 搾 乳 牛 ， 肉 用 繁 殖 牛 と も に 低 い と い う 例 外 も 認 め ら れ た 。 こ の 理 由 に つ い て は ， 現 在 の 地 域 別 の 牛 の 飼 養 規 模 ， 近 年 の 全 国 レ ベ ル で の 1 戸 あ た り の 飼 養 頭 数 の 増 大 傾 向 ， そ し て 牛 の 移 動 が 関 連 し て い る 可 能 性 が 考 え ら れ た 。 農 林 水 産 省 に よ る 畜 産 統 計(7 3 )に よ れ ば ， 2 00 9 年 の 関 東 に お い て は 搾 乳 牛 が 約 4 , 2 00 戸 に 1 9 5 ,0 00 頭 飼 養 さ れ て お り ， こ れ は 国 内 農 業 地 域 別 に み る と 北 海 道 の 約 7 , 90 0 戸 ， 約 8 23 , 00 0 頭 に 次 ぐ 第 2 位 で あ る 。 一 般 的 に ， 1 戸 あ た り の 搾 乳 牛 頭 数 を 増 や し て 生 産 量 を 高 め た い が ， 牛 舎 の 拡 張 が 経 営 的 に 容 易 で は な い 農 場 に お い て は ， 育 成 牛 を 預 託 に 出 し ， よ り 多 く の 搾 乳 牛 の た め の ス ペ ー ス を 確 保 す る こ と が 必 要 に な る 。 預 託 牛 は 不 特 定 農 場 由 来 の 牛 と 一 定 期 間 同 居 す る こ と か ら ，B LV に 曝 露 さ れ や す い と 推 察 さ れ ， 預 託 終 了 後 ， 感 染 個 体 は 農 場 内 の 感 染 源 と な っ て し ま う 。 自 家 育 成 が で き な い 農 場 は 本 州 の 他 の 地 域 で も 多 く 存 在 す る は ず で あ る が ， 関 東 で は 飼 養 規 模 が 相 対 的 に 大 き い こ と と ， そ の 結 果 と し て 預 託 頭 数 も 多 く な る こ と が 推 察 さ れ る 。 そ の 結 果 と し て ， 関 東 に お け る 搾 乳 牛 の 抗 体 陽 性 率 の 例 外 的 な 高 さ に つ な が っ て い る と 考 え ら れ た 。 同 様 に ， 本 調 査 の 肉 用 繁 殖 牛 に 該 当 す る 子 取 り 用 め す 牛 の 2 0 10 年 の 東
17 北 で の 飼 養 規 模 は ， 九 州 ／ 沖 縄 の 約 3 5 ,0 00 戸 ， 約 3 8 0 , 0 00 頭 に 次 ぐ 第 2 位 の 約 2 1 , 00 0 戸 ， 約 118 , 0 00 頭 で あ り ， 酪 農 場 同 様 ， 1 戸 あ た り の 飼 養 頭 数 は 全 国 的 に 増 加 し て い る(7 3 ) 。 南 九 州 各 県 は 伝 統 的 に 国 内 各 地 域 へ の 繁 殖 候 補 牛 の 供 給 元 と な っ て い る 地 域 で あ り ， 牛 肉 生 産 が 盛 ん な 東 北 へ も 相 当 数 の 牛 が 移 動 し て い る と 考 え ら れ る 。今 回 の 調 査 で 明 ら か に な っ た よ う に ， 南 九 州 を 含 む 九 州 ／ 沖 縄 は 最 も 抗 体 陽 性 率 が 高 い 地 域 で あ る こ と と 合 わ せ て 考 え る と ， こ れ ら に よ っ て 東 北 で の 例 外 的 な 抗 体 陽 性 率 の 高 さ に つ な が っ た と 推 察 さ れ た 。 一 方 ， 四 国 は 最 も 牛 の 飼 養 規 模 が 小 さ い 地 域 で あ り ， 搾 乳 牛 は 約 6 3 0 戸 に 約 2 6 ,0 0 0 頭 が ， 肉 用 繁 殖 牛 に つ い て は 1 ,1 00 戸 に 6 , 5 00 頭 が 飼 養 さ れ て い る 。 し た が っ て ， 他 地 域 に 比 べ る と ， 地 域 外 か ら の 感 染 牛 を 含 む 牛 の 移 入 が 相 対 的 に 少 な い 可 能 性 が あ り ， 結 果 と し て 抗 体 陽 性 率 の 低 さ に つ な が っ て い る と 推 察 さ れ た 。 な お ， こ れ ら の 仮 説 は ， 独 立 行 政 法 人 家 畜 改 良 セ ン タ ー が 運 営 し て い る 「 牛 の 個 体 識 別 情 報 検 索 サ ー ビ ス 」(4 4 ) に 含 ま れ る 牛 の 移 動 デ ー タ を 分 析 し て 国 内 の 牛 の 移 動 の 実 態 を 把 握 し ， 本 調 査 の 結 果 と 比 較 す る こ と に よ っ て よ り 正 確 に 検 証 で き る と 思 わ れ た 。 い ず れ に し て も ， 抗 体 陽 性 率 に 地 域 間 で 違 い が 認 め ら れ て い る こ と か ら ， 日 本 全 体 の リ ス ク 要 因 の 解 析 に あ た っ て は ， こ れ を 考 慮 し た 分 析 を 検 討 す る 必 要 が あ る 。 年 齢 別 に み る と ，0 歳 齢 で の 抗 体 陽 性 率 は ， 搾 乳 牛 で は 2 0 %以 上 ， 肉 用 繁 殖 牛 で は 1 5 %弱 で あ っ た 。T h u rmo n d ら (93 )は ，B LV 感 染 母 牛 の 子 宮 内 ま た は 産 道 を 介 し て の 子 牛 へ の 感 染 は 6 % 程 度 と 報 告 し て い る が ， こ れ を 今 回 の 調 査 結 果 に 外 挿 し て 差 し 引 い た と し て も ，若 齢 期 に 多 く の B LV 伝 播 が 起 き て い る こ と が 推 察 さ れ ，こ の 時 期 の 水 平 感 染 対 策 が 重 要 と 考 え ら れ た 。 そ の 後 ， 搾 乳 牛 で は 4 歳 ま で ， 肉 用 繁 殖 牛 で は 3 歳 ま で は 高 齢 牛 ほ ど 抗 体
18 陽 性 率 が 高 く ， 成 牛 は 若 齢 牛 よ り も 有 意 に 抗 体 陽 性 率 が 高 か っ た 。 こ の よ う に ， B LV へ の 曝 露 期 間 が 相 対 的 に 長 い 高 齢 牛 の 抗 体 陽 性 率 が 高 か っ た こ と は ，B LV の 水 平 伝 播 は い ず れ の 年 齢 層 で も 起 こ り う る こ と を 示 し て お り ， 効 率 的 な 対 策 を 検 討 す る た め に ，B LV 伝 播 の リ ス ク 要 因 を 明 ら か に す る 必 要 性 が 示 さ れ た 。 一 方 ， 搾 乳 牛 の 5 歳 以 上 は 4 歳 と 比 べ て ， ま た ， 肉 用 繁 殖 牛 の 4 歳 以 上 は 3 歳 と 比 べ て ， 抗 体 陽 性 率 が 段 階 的 に 高 く な る と 想 定 さ れ た が ， 今 回 の 調 査 結 果 か ら は そ の よ う な 傾 向 は 認 め ら れ な か っ た 。 こ こ で ，B LV 感 染 乳 牛 は そ の 理 由 に 関 わ ら ず 非 感 染 牛 よ り も 早 く 淘 汰 さ れ る と い う 先 行 研 究 (8 )が あ る 。B LV 伝 播 が ど の 年 齢 に お い て も 起 こ る と す る と ，感 染 牛 頭 数 自 体 は 増 え て い く こ と か ら ，あ る 年 代 か ら 抗 体 陽 性 率 が 一 定 と な る た め に は ， 感 染 牛 は 非 感 染 牛 よ り も よ り 高 い 確 率 で 淘 汰 さ れ な け れ ば な ら な い 。 し た が っ て ， 今 回 得 ら れ た 観 察 結 果 は ， 上 記 の 先 行 研 究 結 果 を 支 持 す る も の と 思 わ れ た 。 実 際 ， 日 本 の 搾 乳 牛 の 平 均 除 籍 産 次 は 3 . 5 産 程 度 ， 除 籍 年 齢 は 5 . 8 歳 と 推 定 さ れ て い る こ と か ら (1 ) ， 6 歳 前 後 で の 淘 汰 圧 が 最 も 大 き い と 考 え ら れ る 。 こ の こ と は ， こ の 年 代 か ら 抗 体 陽 性 率 が 一 定 に な る こ と に 関 連 し て い る 可 能 性 が あ る 。一 方 ，肉 用 繁 殖 牛 の 生 存 性 と B LV 感 染 の 関 連 性 に つ い て の 先 行 研 究 は 見 当 た ら な い 。た だ し ，日 本 の 黒 毛 和 種 に つ い て は ， 5 産 ま で に 5 2 %が ， 8 産 ま で に 8 3 . 0 %が 淘 汰 さ れ ， 平 均 最 終 産 年 齢 が 8 . 2 歳 と 推 定 さ れ て い る(7 8 )。し た が っ て ，肉 用 繁 殖 牛 に つ い て は ，搾 乳 牛 と 全 く 同 等 の 解 釈 は で き な い が ， 今 後 飼 養 管 理 方 法 等 の そ の 他 の 要 因 も 検 討 し て い く こ と に よ っ て ，B LV の ま ん 延 の 理 由 が さ ら に 明 ら か に な る と 期 待 さ れ た 。
19
小 括
B LV の 全 国 血 清 抗 体 調 査 の 結 果 ，搾 乳 牛 お よ び 肉 用 繁 殖 牛 の 抗 体 陽 性 率 は ， そ れ ぞ れ 4 0 . 9 %（ 4 ,5 4 6 /11 ,11 3 ） お よ び 2 8. 7 %（ 2 ,7 9 3 /9 ,7 2 2 ）， ま た ， 農 場 有 病 率 は ，酪 農 場 で 7 7. 0 %（ 4 5 2 /58 7 ），肉 用 繁 殖 農 場 で 6 6 .6 %（ 3 7 2 /5 5 8 ） と な り ，1 9 80 年 代 と 比 較 す る と ，B LV は 広 く 国 内 に ま ん 延 し た と 考 え ら れ た 。 抗 体 陽 性 率 に は 地 域 差 が 認 め ら れ ， 牛 の 用 途 に 関 わ ら ず ， 九 州 ／ 沖 縄 が 最 も 高 く ， 北 日 本 ほ ど 低 い 傾 向 が 認 め ら れ た 。 そ の た め ， 全 国 レ ベ ル で の リ ス ク 要 因 の 検 討 の 際 に は ， 地 域 差 を 考 慮 す る 必 要 が あ る と 考 え ら れ た 。 年 齢 別 の 抗 体 陽 性 率 は ， 高 齢 牛 ほ ど 高 か っ た 。 し た が っ て ，B LV へ の 曝 露 は 農 場 で の 飼 養 期 間 が 長 い ほ ど 頻 繁 に 起 き る こ と が 示 唆 さ れ ， 農 場 レ ベ ル の 水 平 感 染 対 策 に 資 す る リ ス ク 要 因 を 明 ら か に す る 必 要 性 が 示 さ れ た 。20
図 表
表 1 -1 B LV 全 国 抗 体 調 査 に お け る 分 析 対 象 集 団 の 地 域 別 内 訳 地 域 酪 農 場 肉 用 繁 殖 農 場 合 計 検 査 農 場 （ 戸 ） 検 査 個 体 （ 頭 ） 検 査 農 場 （ 戸 ） 検 査 個 体 （ 頭 ） 検 査 農 場 検 査 個 体 北 海 道 3 0 5 9 2 （5 9 2 ） 3 6 6 7 6 （6 7 6 ） 6 6 1 , 2 6 8 東 北 7 2 1 , 2 8 4 （1 ,1 9 2 ） 7 8 1 , 3 2 9 （1 ,3 0 6 ） 1 5 0 2 , 6 1 3 関 東 8 8 1 , 6 5 8 （1 ,6 4 1 ） 8 2 1 , 3 7 6 （1 ,3 7 6 ） 1 7 0 3 , 0 3 4 北 陸 ／ 中 部 1 2 2 2 , 3 3 3 （2 ,3 2 2 ） 1 2 0 2 , 0 2 3 （1 ,9 7 3 ） 2 4 2 4 , 3 5 6 近 畿 5 2 9 8 0 （9 5 5 ） 3 0 4 9 9 （4 9 9 ） 8 2 1 , 4 7 9 中 国 7 2 1 , 3 8 3 （1 ,3 8 3 ） 6 3 1 , 0 7 3 （1 ,0 7 3 ） 1 3 5 2 , 4 5 6 四 国 3 6 6 5 4 （5 9 5 ） 3 6 6 2 3 （5 4 6 ） 7 2 1 , 2 7 7 九 州 ／ 沖 縄 11 5 2 , 2 2 9 （2 ,1 8 5 ） 11 3 2 , 1 2 3 （2 ,0 7 0 ） 2 2 8 4 , 3 5 2 合 計 5 8 7 11 ,11 3 （1 0 , 8 6 5 ） 5 5 8 9 , 7 2 2 （9 ,5 1 9 ） 1 , 1 4 5 2 0 , 8 3 5 検 査 個 体 の カ ッ コ 内 は ， 搾 乳 牛 で は ホ ル ス タ イ ン 種 ， 肉 用 繁 殖 牛 で は 黒 毛 和 種 の 内 数 を 示 す21 表 1 -2 搾 乳 牛 お よ び 肉 用 繁 殖 牛 に お け る B LV 抗 体 検 査 結 果 と 抗 体 陽 性 率 E L I S A 陽 性 （ 頭 ） E L I S A 陰 性 （ 頭 ） 合 計 （ 頭 ） 抗 体 陽 性 率 （% ） （ そ の 9 5 % 信 頼 区 間 ） 搾 乳 牛 4 , 5 4 6 6 , 5 6 7 11 ,11 3 4 0 . 9 （ 4 0 . 0 ， 4 1 . 8 ） 肉 用 繁 殖 牛 2 , 7 9 3 6 , 9 2 9 9 , 7 2 2 2 8 . 7 （ 2 7 .8 ， 2 9 . 6 ） 合 計 7 , 3 3 9 1 3 , 4 9 6 2 0 , 8 3 5 3 5 . 2 （ 3 4 . 6 ， 3 5 . 9 ） カ イ 二 乗 値 ＝ 3 3 6 . 5 ， 自 由 度 ＝ 1 ， P < 2 . 2 e － 1 6
22 表1-3 酪農場および肉用繁殖農場における BLV 感染判定結果と農場有病率 感染農場 （戸） 非感染農場 （戸） 合計 （戸） 農場有病率（%） （その95%信頼区間） 酪農場 452 135 587 77.0（73.6，80.4） 肉用繁殖農場 372 186 558 66.7（62.8，70.6） 合計 824 321 1,145 72.0（69.4，74.6） カイ二乗値＝ 14.8，自由度＝1，P＝0.0001
23 表1-4 国内地域別の BLV 抗体検査結果と抗体陽性率（搾乳牛） ELISA 陽性 （頭） ELISA 陰性 （頭） 合計 （頭） 抗体陽性率（%） （その95%信頼区間） 北海道 68 524 592 11.5（8.9，14.1） 東北 306 978 1,284 23.8（21.5，26.1） 関東 695 963 1,658 41.9（39.5，44.3） 北陸／中部 745 1,588 2,333 31.9（30.0，33.8） 近畿 365 615 980 37.2（34.2，40.3） 中国 782 601 1,383 56.5（53.9，59.2） 四国 144 510 654 22.0（19.8，24.3） 九州／沖縄 1,441 788 2,229 64.6（62.7，66.6） 合計 4,546 6,567 11,113 40.9（40.0，41.8）
24 表1-5 国内地域別の BLV 抗体検査結果と抗体陽性率（肉用繁殖牛） ELISA 陽性 （頭） ELISA 陰性 （頭） 合計 （頭） 抗体陽性率（%） （その95%信頼区間） 北海道 114 562 676 16.8（14.0，19.7） 東北 530 799 1,329 39.9（37.5，42.5） 関東 326 1,050 1,376 23.7（21.5，25.9） 北陸／中部 454 1,569 2,023 22.4（20.6，24.3） 近畿 103 396 499 20.6（18.8，22.5） 中国 298 775 1,073 27.7（25.1，30.5） 四国 67 556 623 10.8（8.9，12.7） 九州／沖縄 901 1,222 2,123 42.4（40.3，44.5） 合計 2,793 6,929 9,722 28.7（27.8，29.6）
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26 表1-6 年齢別の BLV 抗体検査結果と抗体陽性率（搾乳牛） ELISA 陽性 （頭） ELISA 陰性 （頭） 合計 （頭） 抗体陽性率（%） （その95%信頼区間） 0 歳 28 104 132 21.2（14.2，28.2） 1 歳 165 504 669 24.7（21.4，27.9） 2 歳 685 1,419 2,104 32.6（30.6，34.6） 3 歳 994 1,397 2,391 41.6（40.0，43.5） 4 歳 853 1,021 1,874 45.5（43.3，47.8） 5 歳 661 782 1,443 45.8（43.2，48.4） 6 歳以上 1,160 1,340 2,500 46.4（44.4，48.4） 合計 4,546 6,567 11,113 40.9（39.9，41.8）
27 表1-7 年齢別の BLV 抗体検査結果と抗体陽性率（肉用繁殖牛） ELISA 陽性 （頭） ELISA 陰性 （頭） 合計 （頭） 抗体陽性率（%） （その95%信頼区間） 0 歳 31 195 226 13.7（9.2，18.2） 1 歳 149 808 957 15.6（13.3，17.9） 2 歳 291 935 1,226 23.7（21.4，26.1） 3 歳 392 844 1,236 31.7（29.1，34.3） 4 歳 342 710 1,052 32.5（29.7，35.3） 5 歳 302 656 958 31.5（28.6，345） 6 歳以上 1,286 2,781 4,067 31.6（30.2，33.0） 合計 2,793 6,929 9,722 28.7（27.8， 29.6）
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29 表1-8 年齢別の BLV 抗体検査結果と抗体陽性率： 2 歳未満と 2 歳以上の比較（搾乳牛） ELISA 陽性 （頭） ELISA 陰性 （頭） 合計 （頭） 抗体陽性率（%） （その95%信頼区間） 2 歳未満 193 608 801 24.1（21.1，27.1） 2 歳以上 4,353 5,959 10,312 42.2（41.3，43.2） 合計 4,546 6,567 11,113 40.9（40.0，41.8） カイ二乗値＝100.2，自由度＝1，P<2.2e－16
30 表1-9 年齢別の BLV 抗体検査結果と抗体陽性率： 2 歳未満と 2 歳以上の比較（肉用繁殖牛） ELISA 陽性 （頭） ELISA 陰性 （頭） 合計 （頭） 抗体陽性率（%） （その95%信頼区間） 2 歳未満 180 1,003 1,183 15.2（13.2，17.3） 2 歳以上 2,613 5,926 8,539 30.6（29.6，31.6） 合計 2,793 6,929 9,722 28.7（27.8，29.6） カイ二乗値＝119.4，自由度＝1，P<2.2e－16
31
図1-3 育成・初妊までを想定した若齢牛の 2 歳未満と，成牛を想定した 2 歳以上で区分
した際のBLV 抗体陽性率（エラーバーは 95%信頼区間を示す）
32
第 二 章
混 合 ロ ジ ス テ ィ ッ ク 回 帰 モ デ ル を 用 い た
牛 白 血 病 ウ イ ル ス の
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序 論
第 一 章 で は ，現 在 の 日 本 に お け る B LV の 浸 潤 状 況 を 明 ら か に し た 。緒 言 で 述 べ た と お り ，B LV 感 染 は 終 生 持 続 し ，抗 体 を 産 生 し 続 け る こ と か ら (11 ， 49 )，第 一 章 で 明 ら か に な っ た 乳 用 牛 の 約 40 % ，肉 用 繁 殖 牛 の 約 3 0% と い う 高 い 抗 体 陽 性 率 の 現 状 は ， こ れ ら の 感 染 牛 が 感 染 を 更 に 広 げ る 可 能 性 を 示 唆 し て お り ，ま た ，近 年 の E B L 摘 発 数 の 増 加 の 理 由 の 一 つ と 強 く 推 察 さ れ る 。 し た が っ て ，B LV の 国 内 浸 潤 を 低 減 さ せ る た め に 適 切 な 対 策 を 検 討 す る 必 要 が あ る 。 日 本 に お け る B LV 清 浄 化 対 策 は ，感 染 牛 の 摘 発 ・ 淘 汰 が 基 本 に な る 。し か し な が ら ，多 く の B LV 感 染 農 場 の 畜 主 は そ の よ う な 対 策 に は 積 極 的 に 取 り 組 め て い な い 。 そ の 理 由 と し て ，B LV 感 染 牛 が 家 畜 伝 染 病 予 防 法 上 の 補 償 対 象 外 で あ る こ と ，さ ら に 農 場 に お い て は EB L が 発 症 す る ま で は 臨 床 上 非 感 染 牛 と 変 わ り が な く ， 同 等 の 生 産 性 を 維 持 し て い る こ と な ど が 考 え ら れ る 。さ ら に ，そ も そ も 飼 養 牛 の B LV 検 査 自 体 が 実 施 さ れ て い な い 農 場 も 多 い 。 こ の 状 況 を 放 置 す る こ と に よ り ，B LV 感 染 農 場 で は 感 染 牛 か ら 非 感 染 牛 に B LV が 伝 播 し ，B LV が 農 場 内 で さ ら に 拡 大 す る こ と が 危 惧 さ れ る と と も に ，こ れ ら の 感 染 農 場 が 非 感 染 農 場 に 対 す る B LV の 供 給 源 と な っ て し ま う 可 能 性 も 考 え ら れ る 。 B LV の ま ん 延 防 止 の た め に は ， そ の 伝 播 経 路 を 効 率 的 に 遮 断 す る こ と が 重 要 で あ る 。そ の た め に は ，緒 言 で 述 べ た よ う な ，多 く の B LV の 伝 播 経 路 の う ち ， 重 要 な 役 割 を 担 っ て い る も の に 対 し て 重 点 的 に 対 策 を 実 施 し て い く こ と が 必 要 で あ る 。 す な わ ち ， 実 際 の 牛 飼 養 農 場 に お い て ， 客 観 的 に リ ス ク 要 因 を 評 価 し た 上 で ，そ れ ら を 排 除 あ る い は 制 御 す る こ と が で き れ ば ， よ り 効 率 的 な 浸 潤 状 況 の 低 減 が 期 待 で き る 。34 リ ス ク 要 因 の 推 定 に あ た っ て は ， 実 際 の 農 場 環 境 に お い て 複 数 の 要 因 が 影 響 し あ っ て B LV 伝 播 が 起 き て い る こ と ，そ の 他 の 条 件 が 交 絡 と な る 可 能 性 が あ る こ と を 考 慮 す る 必 要 が あ る 。 そ の 手 法 の 一 つ と し て ， 多 変 量 解 析 が 挙 げ ら れ る 。 そ こ で 本 章 で は ，B LV の 農 場 内 伝 播 リ ス ク 要 因 を 明 ら か に す る こ と を 目 的 と し て ，2 0 07 年 に 国 内 7 県 の B LV 感 染 酪 農 場 か ら 得 ら れ た B LV の 抗 体 検 査 成 績 と 疫 学 情 報 に つ い て ， 多 変 量 解 析 を 用 い て 分 析 し た 。
材 料 お よ び 方 法
１ ． 分 析 に 供 し た デ ー タ B LV の 農 場 内 浸 潤 が よ り 進 行 し て い る 農 場 は ， そ う で な い 農 場 よ り も B LV 伝 播 に 関 す る 有 意 な リ ス ク 要 因 が あ り ，よ り 多 く の B LV 伝 播 が 起 き て い る と 仮 定 し た 。こ の 仮 定 に 基 づ き ，本 章 で は 想 定 さ れ る B LV の 各 伝 播 経 路 （ 要 因 ） の 有 無 と ， 農 場 内 抗 体 陽 性 率 （ 以 降 ， 農 場 内 有 病 率 と す る ） と の 関 連 を 分 析 し た 。 分 析 対 象 と し た 農 場 を 選 定 す る た め の 調 査 の 方 法 は 以 下 の と お り で あ っ た 。 20 0 7 年 度 に ， 東 北 （ 1 県 ）， 関 東 （ 1 県 ）， 北 陸 ／ 中 部 （ 2 県 ）， 中 国 ／ 四 国 （2 県 ）， お よ び 九 州 ／ 沖 縄 （ 1 県 ） の 地 域 か ら 計 7 県 の 協 力 を 得 て 実 施 し た 。各 県 に お い て 協 力 可 能 な 酪 農 場 を 最 大 2 0 戸 ，県 の 裁 量 の も と 選 定 し た 。 そ の 結 果 ， 合 計 13 9 戸 の 酪 農 場 か ら 協 力 が 得 ら れ た 。 次 い で ， 各 農 場 か ら 搾 乳 牛 と そ の 候 補 牛（ た だ し 6 ヶ 月 齢 以 上 ）3 0 頭 を 無 作 為 抽 出 し て 農 場 内 有 病 率 推 定 の た め の 検 査 対 象 と し た 。た だ し ，飼 養 頭 数 が 30 頭 未 満 の 農 場 に つ い て は 全 頭 抽 出 し た 。 抽 出 個 体 か ら 各 県 担 当 者 が 常 法 に し た が い35 採 血 を 実 施 し ， 血 清 を 分 離 し て 動 物 衛 生 研 究 所 に 送 付 し た 。 送 付 さ れ た 検 体 の 合 計 数 は 3 , 9 6 6 頭 と な り ，後 述 の B LV の 抗 体 検 査 キ ッ ト を 用 い て 検 査 し た 。 な お ， 上 記 の 血 清 は 農 林 水 産 省 の 研 究 事 業 「 人 畜 共 通 感 染 症 等 危 機 管 理 体 制 整 備 調 査 等 委 託 事 業 」 の 一 部 と し て 収 集 さ れ た も の で あ り ， 抗 体 検 査 結 果 は Mu ra k a mi ら ( 6 7 )に よ り 報 告 さ れ て い る も の を 活 用 し た 。 ２ ． 抗 体 検 査 抗 体 検 査 は B LV の エ ン ベ ロ ー プ 糖 蛋 白 g p 5 1 に 対 す る 抗 体 を 検 出 す る 間
接 E LIS A 法 （「 B o vin e Le u k o sis S e ru m S c r e en in g E LIS A 」， P o u rqu ie r 社 ， モ ン ペ リ エ ， フ ラ ン ス ） を 用 い た 。 本 キ ッ ト の 使 用 説 明 書 に し た が い ， 指 示 陽 性 血 清 の 吸 光 度 に 対 す る 被 検 血 清 の 吸 光 度 の 比（𝑆 𝑃⁄ 値 ）が 85 %以 下 で あ れ ば 陽 性 ，8 5 ～ 115 % は 疑 陽 性 ，115 % 以 上 で 陰 性 と 判 定 し た 。疑 陽 性 の 検 体 に つ い て は ，Ko n o ら ( 52 )の 手 法 に 準 拠 し た B LV の エ ン ベ ロ ー プ 糖 蛋 白 g p 5 1 を 抗 原 と す る 寒 天 ゲ ル 内 沈 降 反 応 を 用 い て 再 検 査 に 供 し 、 確 定 し た 。 ３ ． 調 査 票 を 用 い た 聞 き 取 り 調 査 農 場 の 基 礎 情 報 に 加 え ，既 報 の B LV の 農 場 内 伝 播 経 路 に 関 す る 調 査 票 を 作 成 し ， 各 農 場 で の 採 材 時 に 聞 き 取 り 調 査 を 実 施 し た 。 各 農 場 で 得 ら れ た 疫 学 情 報 は ， 抗 体 検 査 結 果 （ 検 査 頭 数 お よ び 抗 体 陽 性 頭 数 ） と と も に 表 計 算 ソ フ ト ウ ェ ア （Mi c ro so ft E x ce l 2 0 03 ） を 用 い て デ ー タ ベ ー ス 化 し ， リ ス ク 要 因 の 解 析 に 先 立 ち 記 述 的 分 析 を 行 っ た 。 本 調 査 に 用 い た 調 査 票 を 図 2 -1 に 付 し た 。
36 ４ ． 解 析 対 象 農 場 の 選 定 本 章 で は ， 農 場 内 B LV 伝 播 に 関 連 す る 要 因 を 検 討 す る こ と を 目 的 と し た 。 そ の た め ， 解 析 対 象 は 感 染 農 場 の デ ー タ と な る 。 そ こ で ，1 頭 以 上 の 抗 体 陽 性 牛 が 摘 発 さ れ た 農 場 を 感 染 農 場 と 定 義 し ， 分 析 対 象 と す る こ と に し た 。 今 回 の 疫 学 調 査 の 結 果 ，1 3 9 戸 中 110 戸 （ 7 9 . 1 %） の 農 場 で １ 頭 以 上 の 抗 体 陽 性 個 体 が 摘 発 さ れ ， 全 検 査 個 体 が 陰 性 で あ っ た 2 9 農 場 は 分 析 対 象 か ら 除 外 し た 。 さ ら に ，11 0 戸 の う ち 聞 き 取 り 調 査 で 全 回 答 が 得 ら れ な か っ た 項 目 が あ る 2 0 戸 に つ い て も 分 析 対 象 か ら 除 外 し た 。 以 上 か ら ， 9 0 農 場 を 分 析 の 対 象 と し た 。 ５ ． 統 計 学 的 解 析 農 場 内 有 病 率 の 整 理 と 単 変 量 解 析 農 場 内 有 病 率 は 以 下 の よ う に 定 義 し た 。 農 場 内 有 病 率(%) = 100 ×抗 体 検 査 陽 性 頭 数 抗 体 検 査 実 施 頭 数 続 い て ， 農 場 内 有 病 率 の ヒ ス ト グ ラ ム を 作 成 す る と と も に （ 図 2 -2 ）， 中 央 値 と 四 分 位 範 囲 （2 5 パ ー セ ン タ イ ル 値 お よ び 7 5 パ ー セ ン タ イ ル 値 ） を 算 出 し て 分 布 を 視 覚 的 お よ び 数 値 的 に 確 認 し た 。 農 場 内 有 病 率 の 中 央 値 （ 四 分 位 範 囲 ）は 4 8 . 1%（ 17 . 1 ，68 . 5 ）で あ っ た が ，1 0 %以 下 ，1 0% よ り 高 く 2 0 % 以 下 ， お よ び 4 0 %よ り 高 く 5 0 %以 下 の 農 場 数 が そ れ ぞ れ 1 3 戸 と ， 相 対 的 に 多 か っ た 。 続 い て ， 農 場 内 有 病 率 （ 統 計 解 析 上 ， 応 答 変 数 と 呼 ぶ ） と 各 説 明 変 数 の 関 連 に つ い て ， 単 変 量 解 析 を 実 施 し た 。 す な わ ち ， 説 明 変 数 が 2 水 準 を 持 つ 場 合 は Ma n n -W h itn e y の U 検 定 を ，3 水 準 以 上 を も つ 場 合 は Kr u sk a l -Wa ll is 検 定 を 用 い て ， 農 場 内 有 病 率 を 比 較 し た 。 こ れ ら の 結 果 ，P <0 . 15 と な っ た
37 説 明 変 数 を 多 変 量 解 析 に 供 し た 。 多 変 量 解 析 分 析 対 象 の 9 0 戸 の う ち ，検 査 頭 数 が 3 0 頭 に 満 た な い 農 場 が 2 6 戸 あ り ， 最 小 検 査 頭 数 は 8 頭 で あ っ た 。 つ ま り ， 本 解 析 に お け る 応 答 変 数 で あ る 農 場 内 有 病 率 に は 分 母 が 異 な る も の を 含 ん で い る 。 そ こ で 多 変 量 解 析 で は ， こ の 分 母 の 違 い を 考 慮 し て 分 析 す る こ と と し た 。 す な わ ち ， 今 回 の 応 答 変 数 は 試 行 回 数 （ 検 査 頭 数 ） に 占 め る 成 功 回 数 （ 抗 体 陽 性 頭 数 ） と し て ， 二 項 分 布 に し た が う と み な す こ と が で き る 。 二 項 分 布 は ， 𝑝(𝑦 | 𝑁, 𝑞) = (𝑁 𝑦) 𝑞𝑦 (1 − 𝑞)𝑁−𝑦 と 定 義 さ れ る 確 率 分 布 の 一 つ で あ る 。 今 回 の 場 合 ，𝑝(𝑦 | 𝑁, 𝑞)は 𝑁頭 中 の 𝑦頭 で 抗 体 陽 性 と な る 確 率 を 示 し て い る 。 ま た ，𝑞は 𝑁頭 の そ れ ぞ れ の 個 体 が 検 査 陽 性 と な る 確 率 ，つ ま り 農 場 内 有 病 率 で あ り ，0 ≤ 𝑞 ≤ 1で あ る 。(𝑁𝑦)は 𝑁頭 の 牛 の 中 か ら𝑦頭 の 抗 体 陽 性 牛 を 選 び 出 す 場 合 の 数 で あ る 。こ の 二 項 分 布 を 仮 定 し た デ ー タ の 解 析 手 法 に ， ロ ジ ス テ ィ ッ ク 回 帰 モ デ ル に よ る 分 析 が あ る 。 ロ ジ ス テ ィ ッ ク 回 帰 モ デ ル は ， 上 記 の 𝑞に 対 し て log 𝑞 1 − 𝑞 で 表 さ れ る ロ ジ ッ ト 関 数（logit(𝑞)）を 設 定 す る 。ロ ジ ス テ ィ ッ ク 回 帰 モ デ ル はlogit(𝑞)に 対 し て ， logit(𝑞) = 𝛼 + 𝛽1𝑥1+ ･･･ + 𝛽𝑛𝑥𝑛 + 𝑒 (= 𝛼 + ∑ 𝛽𝑖 𝑛 𝑖=1 𝑥𝑖+ 𝑒) と 定 式 化 さ れ る 。た だ し ，αは モ デ ル の 切 片（ 定 数 項 ），𝑥𝑖は 固 定 効 果 と 呼 ば れ ， 各 説 明 変 数 を 指 し ，𝛽𝑖は そ の 係 数 ， そ し て𝑒は 誤 差 項 で あ る 。 さ ら に 今 回 は ， 固 定 効 果 以 外 に 農 場 内 有 病 率 の ば ら つ き に 影 響 を 与 え る も う 一 つ の 変 数 に つ い て 考 慮 し た 。 そ れ は ， 調 査 計 画 を ど れ だ け 綿 密 に 立
38 て て も ， 農 場 の 立 地 条 件 や 周 囲 の 環 境 の 違 い な ど は 完 全 に 特 定 ・ 定 量 す る こ と は で き な い と い う ， 現 実 的 に 観 察 不 可 能 な 違 い に 基 づ く 変 数 で ， こ れ を ブ ロ ッ ク 差 と 呼 ぶ( 54 ) 。 ブ ロ ッ ク 差 を 考 慮 し な い と ， モ デ ル が 示 す 予 測 値 と ， デ ー タ そ の も の が 示 す 実 測 値 と の あ て は ま り （ フ ィ ッ テ ィ ン グ ） が 悪 く な る こ と が あ る 。 こ れ を デ ー タ の 過 度 な ば ら つ き ， す な わ ち 過 分 散 に よ る モ デ ル の あ て は ま り の 悪 さ と 呼 ぶ 。 今 回 は 「1 ブ ロ ッ ク に 1 農 場 」 と い う デ ー タ 構 造 を し て い る た め ， ブ ロ ッ ク 差 と 農 場 差 を 区 別 す る こ と が で き な か っ た 。 そ こ で こ れ ら を ま と め て 「 農 場 差 」 と し た 。 こ の 農 場 差 は 平 均 0 で 標 準 偏 差𝑠の 正 規 分 布 に し た が う と 仮 定 し ， ラ ン ダ ム 効 果 γと し て ロ ジ ス テ ィ ッ ク 回 帰 分 析 の モ デ ル 式 に 加 え る 。 す な わ ち ， 上 記 の ロ ジ ス テ ッ ィ ク 回 帰 モ デ ル は ， logit(𝑞) = 𝛼 + ∑ 𝛽𝑖 𝑛 𝑖=1 𝑥𝑖+ γ + 𝑒 と な る 。 平 均 0 の ラ ン ダ ム 効 果γを 加 え る こ と に よ り ， logit(𝑞)の 値 そ の も の に 影 響 を 与 え な い が ， モ デ ル 全 体 の ば ら つ き を 調 整 す る こ と が で き る 。 こ の よ う に ， 説 明 変 数 で あ る 固 定 効 果 と ， 農 場 差 で あ る ラ ン ダ ム 効 果 を と も に 含 む モ デ ル を ， 混 合 モ デ ル と 総 称 す る 。 今 回 の 場 合 は 複 数 の 固 定 効 果 を モ デ ル に 含 め る た め ， 最 終 的 に は 混 合 ロ ジ ス テ ィ ッ ク 回 帰 モ デ ル に よ る 多 変 量 解 析 ， と い う こ と が で き る 。 今 回 の 解 析 の 目 標 は ， こ の モ デ ル を 用 い て ， 対 象 と し た 7 県 の 酪 農 場 に 共 通 し た 農 場 内 有 病 率 を 高 め る リ ス ク 要 因 を 推 定 す る こ と で あ る 。こ こ で ， 単 変 量 解 析 の 結 果 ， 多 変 量 解 析 へ 投 入 す る こ と と な っ た す べ て の 説 明 変 数 を 含 む モ デ ル （ フ ル モ デ ル ） は ， 今 回 得 ら れ た 応 答 変 数 に 限 っ て は あ て は ま り が 良 い 。し か し な が ら ，そ の よ う な モ デ ル は ，飽 く ま で 今 回 の 9 0 戸 か ら 得 ら れ た デ ー タ セ ッ ト に 対 し て は 有 効 で あ る が ， 将 来 得 ら れ る 異 な る デ
