大森, 俊郎

(1)

Kyushu University Institutional Repository

大麦焼酎製造工程におけるグリセリンの生成機作とその役割に関する研究

大森, 俊郎

https://doi.org/10.11501/3099962

出版情報：Kyushu University, 1994, 博士（農学）, 論文博士バージョン：

権利関係：

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しながら，もろみ中のグリセリン濃度向上を目的にクエン酸濃度を高めることは酵母の増殖阻害をもたらす危険がありさらに不飽和脂肪酸は酵母のグリセリン生成を促進するが，一方ではエステル生成を阻害する8 ^{3 .}8 ⁴ ) 。以上のことから，クエン酸および不飽和脂肪酸によるグリセリン生成の向上が必ずしも焼酎の品質向上につながらない可能性がある。

一方，前章までの知見から，製造条件を変更することでもろみ中のグリセリン濃度を高めることが可能である。例えば，第2章で述べたように，従来の大麦焼酎もろみではリパーゼ活性が低いために大麦中のグリセリドからのグリセリン生成はほとんどないが，もろみのリバーゼ活性を高めることで大麦中のグリセリドからのグリセリン生成が促進され，もろみ中のグリセリン濃度は増加すると考えられる。また，第4章で述べたように，大麦焼酎もろみは初期グルコース濃度が低いためグルコース濃度がグリセリン生成に影響することはほとんどない。しかし糖化酵素を使用することによりもろみの初期グルコース濃度を高まり，これにより酵母のグリセリン生成は向上すると考えられる。さらに，前章で取得した18%塩化ナトリウム耐性株TK-2を用いた焼酎はもろみ中

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のグリセリン濃度の向上による香気成分の増加でエステル香が高く，まろやかな焼酎が得られたことはすでに述べた。

本章ではまず酵素剤を使用してグリセリン濃度向上に最適な製造条件を検討し，この条件でTK-2を用い実用レベルでの試験仕込みを行い，焼酎製造を試みた。

8-2 実験方法

原料大麦

第l章1 -2に示した。

大麦麹

第2章2-2に示した。

酵母

大麦焼酎醸造用酵母BAW-6を使用し，試験仕込みでは18%塩化ナトリウム耐性株TK-2も使用した。

供試酵素剤

ダビアーゼK27 (ナガセ生化学工業， αーアミラーゼ系) ，グルターゼs (上回化学工業，グルコアミラーゼ系) ，オリエンターゼ20A (上回化学工業，プロテアーゼ系) ，スミチームAC (新日本化学，セルラーゼ系) ，リリバーゼA5

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ウムから370Cで1分間に1μmolのグルコースに相当する還元糖を生成する活性を 1unitと定義した。詳細はTable 8-1に示す。

酵素剤添加仕込み試験

酵素剤を添加した仕込み試験は，精麦率650/0の大麦を用い第 2章Table2-1 に示す麹歩合33%仕込み配合で，温度250C一定で行ったO 酵素剤の影響を調べた実験は，酵素斉1J1.5g (総原料の0.50/0 (wjw) )を主もろみに添加した。グルター

ゼS濃度の影響を調べた実験は，グルターゼSを(0.6， l.5， 2.1 および、3g，それぞれ総原料の0.2， 0.5， 0.7， 1.00/0相当)主もろみに添加した。また，グルターゼS存在下でのリバーゼ活性の影響を調べた実験は，グルターゼS(1.5g，総原料の0.50/0 (wjw) )とリリバーゼA5 (0.2， 0.45， 0.9およびl.8g，それぞれ総原料の0.07， 0.15， 0.3， 0.60/0相当)を主もろみに添加した。コントロールは酵素剤無添加の麹歩合33%仕込みとしたO

大麦焼酎試験仕込み

精麦率65%の大麦を用い，総原料100kgの大麦焼酎試験仕込みを行った。酒母は麹30kg，水45/，主もろみは大麦 70kg，水105/で行い，主もろみにアマノ2

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Table 8-1. P rofile of commercial enzyme used.

Product name αAase a GAasea APase a CLasea LPase a of enzymes unitJg unitJg unitJg unitJg unitJg

Dabiaze K27 62.500 30 340 。。

Gurutaze S 。 190，000 23，000 。 250

Orientaze 20A 。。 200.000 。。

Sumichimu AC 。。 11，000 1，500 。

Riripaze A5 。。 1，300 。 9，800

Amano 2 41.'000 180.000 40，000 1，200 150

a αAase， αー出nylase; GAase， glucoamylase; APase， acid-protease; CLase，

cellulase; LPase， lipase.

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もろみ中のグリセリン，グルコースの定量は第l章1 - 2，エタノールの定量は第3章3-2に示した方法で行った。

8-3 実験結果

8-3-1 もろみ中のグリセリン濃度に及ぼす酵素剤添加の影響 a. 酵素剤種類の影響

Fig.8-1 に主もろみでの発酵経過およびFig.8-2に発酵終了後のもろみ中のグリセリン濃度を示す。リリバーゼA5以外はコントロール(酵素剤無添加)より

も発酵が促進され，グルコアミラーゼ系酵素剤であるグルターゼS ， αーアミラーゼ系酵素剤であるダピアーゼK27の添加区では特に発酵が促進された。もろみ中のグリセリン濃度はダピアーゼ、K27添加区で 6.9g/l，グルターゼ、S添加区で 6. 6g/ 1，リリバーゼA5添加区で6.4g/1で，これらはコントロールよりも多かったO 一方，スミチームAC，オリエンターゼ20Aの添加区ではコントロールとの違いはほとんどなかった。ダピアーゼ、K27，グルターゼSをj恭力日することでもろみ中のグルコース初期濃度が高くなり，そのため酵母のグリセリン生成が向上した

(7)

100

40 20 80 60

(O)吉会コON00

10 12 8

4 6 2

。

Fermentation day

Fig. 8-1.

Shochu

fermentation of

koji

ratio 33% with commercial enzymes.

Materials used were shown in Table 2-1 in chapter 2.

Symbols : 0 ， Dabiaze K27; ⁰，Gurutaze S;

口， Sumichiumu AC; ^ð.， Orientaze 20A;

V ， Riripaze A5; ・， Control (without enzyme).

(8)

rででマでママ・7

8

4

(一\O)工mwcεc二O」ωO〉一。

Fig. 8-2. Effects of enzyme on glycerol concentration in mash.

A， control (without commecial enzyme); 8， Dabiaze K27; C， Gurutaze S;

0， Sumichiumu AC; E， Orientaze 20A; F， Riripaze A5.

Profile of commercial enzyme indicate in Table 8-1 in chapter 8.

F E

D B C

A

。

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と考えられた。また，リリバーゼA5は大麦のグリセリドに由来するグリセリンが増加したために，もろみ中のグリセリン濃度が増加したためと考えられたO

b. グルターゼ濃度の影響

麹歩合33%仕込みの主もろみにグルターゼSを添加しもろみ中のグリセリン濃度に及ぼすグルターゼSの影響を検討した。その結果をFig.8-3に示す。発酵はグルターゼS添加によって促進され，コントロール(酵素剤無添加)に比べると2日はやく終了した。しかしグルターゼSを0.50/0以上添加しでも発酵経過にはほとんど影響しなかった。

もろみ中のグリセリン濃度をFig.8-4に示す。もろみ中のグリセリン濃度はグルターゼS添加量が多いほど増加したが， 1.5g (0.50/0 )以上の添加区ではグリセリン濃度に違いは見られなかった。穀類にはデンプンに保持された脂質が存在し，原料の溶解に伴って遊離されると報告されている1 2 7 ) 。従って，グル

ターゼSのような糖化酵素とリバーゼ、を組み合わせることで，もろみ中のグリセリン濃度はさらに高まることが予想された。

c. グルターゼ、存在下におけるリバーゼ、の影響

そこで，グルターゼSが 0.5%存在下でのリリパーゼA5を添加し，もろみ中のグリセリン濃度を比較した。その結果， Table8-2に示すようにリバーゼを添加しない場合でも，グルターゼSの効果でグリセリンはコントロール(酵素剤無添加)よりも0.7g/1多くなり，さらにリリバーゼA5を添加することでグリセ

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80 60 40 20

(O)吉会コON00

。

14 12

Fermentation day 8 10

6 4 2

Fig. 8-3. Effect of Gurutaze S concentration on barley shochu fermentation.

Symbols: � ，0.2 %;口，0.5-1.0 %;・，control.

(11)

，.._、

、0、、3

、-

工こU c u 3

ε

.-c

O ^L- o t

〉J

、

。

7.0 6.5

6.0

5.5

5.0 0 2 3

Gurutaze S (g/300g-barley) ⁱⁿmash

Fig. 8-4. Effect of Gurutaze S concentration on glycerol concentration in barley shochu mash.

(12)

Table 8�2. Effect of Riripaze A5 on glycerol concentration in barley shochu mash.

Addition of Riripaze A5

(%)

。 0.2 0.5 0.7 1.0

Glycerol concentration in mash (g/l)

Addition of Gurutaze S (%)

。 0.5

6.0 6.7

6.9 7.0 7. 1 7.3

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リン濃度はO.9�1.3g/1増加した。この結果は，第2章2-2でも述べたように，

大麦焼酎もろみではリバーゼが不足していることを示すものと考えられた。

8-3-2 試験仕込みの分析と官能評価

以上のように酵素剤使用によってもろみ中のグリセリン濃度は増加したことから， αーアミラーゼ，グルコアミラーゼを含む焼酎醸造用複合酵素剤アマノ 2とリリバーゼA5を使用して実用規模での仕込み試験を行った。酵母は前章で取得したグリセリン高生成株TK-2を使用した。また，従来法として酵素剤無添加でTK-2の親株であるBAW-6を使用した仕込みを行った。発酵終了後のグリセリンおよびエタノールの濃度をTable8-3に示す。 TK-2を使用し，酵素剤を添加したもろみ中のグリセリン濃度は8.9g/1で， BAW-6を使用した従来法より約44%

増加したO もろみを減圧蒸留し，得られた焼酎製品を250/0に希釈後，専門パネラーによる官能検査を実施した。その結果， Table8-4に示すように15名中11名

のパネラーがエステル香が強い，まろやかな味の焼酎と高く評価したO

8-4 考察

以上のように，グリセリン高生成の製造条件を検討した結果，もろみ中の

αーアミラーゼ活性，グルコアミラーゼ活性およびリバーゼ活性を高めることで

もろみ中のグリセリン濃度を高めることができた(Fig.8-2)。 αーアミラーゼお

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Table 8-3. Properties of barley shochu mash using strain TK-2.

Strain Enzyme (kg) Glycerol a Ethanol Amαno 2 Riripαze A5 (g/l) (%)

TK-2 0.5 8.9 18.5

BAW-6 。。 6.2 18.4

a Glycerol concentration of barley koji used was 0.62g/l 00g-koji.

(0凶 Note

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Table 8-4. Sensory test result of barley shochu using strain TK目2.

Odor a Taste a

1.7 1.5

Comment

estery， well-blanced， fruity， slightly-heavy

a Scoring method (1 ^{・・} very good， 2 ^{・・} fairly good， 3 ^{・・} good， 4 ^{・・}no good， 5 ^{・・} bad)

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膜に存在するalcohol acety 1 transferaseはグルコース濃度が高いほどエステル生成が高いこと1 2 8 )が知られている。そのため，酵素剤添加によってもろみ中のグルコース初期濃度を高くすることは，酵母のエステル生成を促進させ，さらにグリセリン生成も促進することから焼酎製品の品質向上に効果的な方法と考えられた。

前章で取得したグリセリン高生成株TK-2と酵素剤を使用した焼酎醸造を行った結果(Table8-3)，もろみ中のエタノール濃度はBAW-6を用いた従来法と同

じで，もろみ中のグリセリン濃度は増加し，得られた焼酎はパネラーから高い評価を受けた(Table8-4)。これまでの知見からもろみ中のグリセリン濃度が増加したことで焼酎の品質が向上したためと考えられた。また， Table8-4�こ示すようにエタノール濃度には違いがないことは実用化する上で重要なことであ

り， allyl alcohol耐性株， pyrazole耐性株あるいはアミノ酸アナログ耐性株などのADH活性が低下したこれまでのグリセリン高生成株と異なり， 18%塩化ナ

トリウム耐性株TK引ま工業生産に適した実用酵母であると言える。

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8-5 小括

α-アミラーゼ\グルコアミラーゼ\フロテアーゼ，セルラーゼ、およびリバーゼの各種酵素剤を使用し，もろみ中のグリセリン濃度に対する影響を調べた。

その結果， αーアミラーゼ系，グルコアミラーゼ系，リバーゼ系のどれか1種類の酵素剤を添加することでもろみのグリセリン濃度は向上した。 αーアミラーゼ系およびグルコアミラーゼ系の酵素剤を添加した場合，大麦の溶解・糖化が促進され，その結果もろみ中のグルコース初期濃度が向上し，酵母のグリセリン生成が向上したものと考えられた。

前章で取得したTK-2を用い，麹歩合330/0仕込みで焼酎醸造用酵素剤アマノ2 とリリバーゼA5を添加し大麦焼酎を試験醸造した結果，もろみ中のグリセリン濃度は8.9g/lとなり，従来法であるBAW-6を使用した麹歩合33%もろみの場合と比べ，グリセリン生成は約440/0増加した。もろみを減圧蒸留し得られた焼酎

製品はエステル香が強い，まろやかな味の焼酎であった。

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グリセリンは醸造酒の甘味を構成する成分として知られていたが，蒸留工程では留出しないことから，蒸留酒についてはこれまで研究された例はなかった。

第1章では焼酎醸造におけるグリセリンの役割を明らかにすることを試みた。

エタノール水溶液および焼酎もろみにグリセリンを添加し，減圧蒸留におけるグリセリンの留出を検討した結果，添加したグリセリン量とほぼ同量のグリセリンが蒸留残液から回収された。このことから，グリセリンは蒸留工程では留出せず，焼酎香味に直接は影響しないことが確認された。しかし，一方で焼酎

原酒中の他の香気成分濃度に影響し，焼酎原酒中の香気成分はグリセリン濃度の増加にともなう挙動で ( 1)いったん増加した後減少した成分， (2)徐々に減少した成分， (3)影響されなかった成分に分類することができた。酢酸 ß-フェネチルは(1)に， ß-フェネチルアルコールおよび脂肪酸エチルは(2) に，高級アルコールおよび低沸点のエステル類は(3)にそれぞれ分類された。

一般的な麹歩合33%もろみを用いて行った実験ではグリセリン濃度が8--- 18g/1のとき，焼酎原酒は， Hエステル香が高いに Hブルーティーに "まろやかな味"など好ましい評価を受け， 2IJg/ lを超える濃度では味が重たくなる傾向にあった。酢酸ß-フェネチル， ß-フェネチルアルコールおよび脂肪酸エチルの気液

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平衡に与えるグリセリンの影響を水-エタノール系で検討した結果，グリセリン濃度増加にともないß-フェネチルアルコール，パルミチン酸エチルおよびリノール酸エチルの気液平衡比は低下し，酢酸ß-フェネチルの気液平衡比は上昇した。

以上のことから，もろみ中のグリセリン濃度によってもろみ中の香気成分の気液平衡が影響を受け，グリセリン濃度が焼酎の官能評価に間接的に影響していることが明らかになった。

第2章では，大麦焼酎もろみのグリセリンの生成源について検討したO 市販酵素剤リバーゼを用い大麦および大麦麹に由来するグリセリンを定量した結果，

リバーゼ活性の増大に伴って大麦あるいは大麦麹からのグリセリン生成が増加した。しかし，もろみ中のリバーゼ、はlunit/ml以下であり，このことから発酵中に大麦や大麦麹のグリセリドに由来するグリセリン生成はほとんどないと考えられた。もろみ中のグリセリン濃度は麹歩合が高いほど高かった。これは麹に由来するグリセリンが増加したことに加え，酵母の代謝に伴って生成したグリセリンが増加したためであったO 全麹もろみの酵母が生成したグリセリンは麹歩合33%の酵母より重量比で約25%増加し，酵母のグリセリン生成は仕込み

条件に影響されていた。

全麹もろみで酵母のグリセリン生成が向上した要因を明らかにするためには，

全麹もろみの特徴を把握する必要がある。しかし，大麦焼酎もろみの仕込み配合は麹歩合33%が一般的で，全麹仕込みは行われていないため，これまで詳細には検討されていない。そこで，第3章では，大麦麹および全麹もろみの特徴

(20)

グリセリンとリパーゼの基質となるグリセリドの製麹中の経時変化を調べた。

その結果，グリセリドは製麹 30時間までほとんど変化なかったが、 36時間以降減少し始め、 42時間麹では大麦の約55%まで減少した。一方、大麦から遊離グリセリンは検出されなかったが、大麦麹中の遊離グリセリンは時間経過に従つて徐々に増加し、特に36時間以降顕著に増加した。また，麹中のリバーゼ活性も36時間以降顕著に増加した。

もろみ中のグルコース濃度は最高で、10/0で24時間以降は0.250/0以下で推移し，

麹歩合の影響は小さかった。もろみ中のクエン酸は麹に由来することから麹歩合が高い方が多かった。もろみのpHは，麹歩合が高いほど低く，クエン酸濃度

の低下に従って上昇し， pHはクエン酸濃度の影響を強く受けていた。大麦麹中の高級脂肪酸(C14-C18:3)含有量は大麦のおよそ8.4倍で，不飽和脂肪酸の割合が増加していた。もろみ中の脂肪酸濃度は主原料にも麹を使用する全麹で高かった。また発酵終了後のもろみから酵母を回収して菌体内脂肪酸を比較した結果，全麹から分離した酵母は麹歩合33%から分離した酵母に比べ菌体内脂肪酸(CI4-C18:3)が菌体100mg当り3.6mg多く，特にリノール酸は2.5mgと顕著に多かった。

(21)

第4章では，前章で調べたもろみの特徴に基づいて，大麦全麹もろみで酵母

がグリセリンを高生成した要因を検討した。大麦焼酎もろみの初期グルコース濃度を調整して発酵させた結果，初期濃度で30/0以上になるともろみ中のグリセリン増加が見られた。しかしながら，実際には大麦焼酎もろみ中でのグルコース濃度は10/0以下で推移することから，大麦焼酎もろみでの酵母のグリセリン生成に及ぼすグルコース濃度の影響は無視できるものと考えられた。一方，大麦焼酎もろみで初期クエン酸濃度を調整して発酵させた結果，全麹もろみに相当する初期濃度10/0でもろみ中のグリセリン増加が見られ，これは麹歩合の違いによるグリセリン生成の差のおよそ6割に達したO また，グルコース濃度10%でのクエン酸濃度の影響を調べたところ，クエン酸濃度の増加に伴ってグリセリン濃度は増加し，高濃度グルコースであってもクエン酸はグリセリン濃度に影響したO

麹歩合330/0もろみに全麹もろみに相当する量の高級脂肪酸を添加した結果，

もろみ中のグリセリン濃度は向上し，これは麹歩合によるグリセリン生成の差のおよそ3割であった。全麹もろみと同じ濃度になるようにクエン酸と脂肪酸を添加したところ，酵母のグリセリン生成は全麹もろみの酵母とほぼ一致した。

以上のことから，全麹もろみでの酵母のグリセリン高生成はクエン酸と脂肪酸の濃度の違いによるものと考えられた。

第5章では，酵母のグリセリン生成に及ぼすグルコース，クエン酸および脂

肪酸の影響を合成培地においてさらに詳しく検討した。並行複発酵モデル培地

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上させていると推察された。また， pHも酵母の GPase活性に影響したが，実際のもろみの pHはクエン酸濃度と関連しており，クエン酸の影響に包括されるものと考えられた。オレイン酸は，供試した10種類の醸造用酵母のグリセリン生成を増加させ特に焼酎酵母(BAW-6 ， MK， Ko， SH-4) ，ビール酵母 (IFOl167)およびウイスキー酵母(IF02373)に対して顕著に増加させた。リノール酸は焼酎酵母，ビール酵母およびウイスキー酵母のグリセリン生成を促進したが，清酒酵母(K-7， K-9)およびワイン酵母(W-3)のグリセリン生成は阻害した。焼酎酵母BAW-6の菌体当たりのグリセリン生成能はオレイン酸，

パルミチン酸の添加区では脂肪酸無添加区と変わらなかったのに対し，リノール酸添加区では向上していた。また，グリセリン生成は窒素源の影響を受け，

酵母はアミノ態窒素よりも無機態窒素でグリセリンを高生成した。

第6章では，窒素源が酵母のalcohol dehydrogenase (ADH)活性に影響していることを明らかにし，この結果を基にアミノ酸代謝系を変異したアミノ酸アナ

ログ耐性株からグリセリン高生成株を取得した。すなわち， ADH活性はアミノ態窒素添加区より無機態窒素添加区で低く，グリセリン生成は無機態窒素添加区で、高かった。この結果から，アミノ酸生合成が活発になるとADH活性およ

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ぴエタノール生成が低下し，そのためにグリセリン生成が向上するのではないかと推論しアミノ酸代謝系が変異したアミノ酸アナログ耐性株のグリセリン生成を調べた。その結果， 5ム5-trifluoroleucine (TFL)およびp-fluoroDL-

phenylalanine (FPA)の耐性株から高い確率で親株よりもグリセリンを高生成する株が得られた。 T礼およびFPAの耐性株とも最優秀株は親株のおよそ1.8倍のグリセリンを生成した。また対象として行ったcanavanine (CAN)および cerulenin (CER)の耐性株は親株よりもグリセリン生成が低下した株が多かった。 TFLおよびFPAの耐性株ではグリセリン生成が多い株ほどエタノール生成量は低下する傾向にあり，両耐性株の菌体内ADH活性は親株よりも低く推移した。また，アミノ酸代謝系変異株のグリセリン生成量はフィードバック阻害が解除されたアミノ酸に由来するイソアミルアルコールやß-フェネチルアルコールの生成量とそれぞれ正の相関が認められた。アミノ酸代謝系変異株は，

フィードバック阻害が解除されたいくつかのアミノ酸を継続的に生合成したために親株よりADH活性が低下し，そのためにグリセリンを高生成したと推定された。

以上のように，アミノ酸アナログ耐性株はグリセリンを高生成したが， ADH 活性が低下したためにアルコール生産性が低下する可能性があり，焼酎醸造にとっては好ましくない。そのため， ADH活性は低下することなく，グリセリン生成だけが増加する変異株の取得が望まれた。

第7章では， Zygosaccharomyces rouxii， Debariomyces hanseniiは耐塩性を有

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ニングを行い，塩化ナトリウム耐性株20株を取得した。このうち， 18株が親株よりグリセリンを高生成し，高い確率でグリセリン高生成株が取得できたO しかし，グリセリン生成の増加率が親株の1割程度であったため， 180/0塩化ナトリ

ウムに対して耐性を有する株の取得を試みたところ，増殖はできないが生存可能な2株が取得でき，これらはさらにグリセリン生成が向上していた。最終的に，親株の1.3倍のグリセリン生成を示す180/0塩化ナトリウム耐性株(TK-2)を取得したo TK-2のADH活性は親株とは大きな違いはなかったが， 2， 3日目での TK-2のGPase活性が親株のおよそ1.3倍に増加した。このことから， TK-2のグリセリン高生成メカニズムは ADH活性低下によりグリセリンを高生成したこれまでのグリセリン高生成株とは異なり， GPase活性が増加したためにグリセリンを高生成したものと推察された。イソアミルアルコール， ß-フェネチルアルコールの留出率はTK-2，親株ともほぼ同値であったのに対し，酢酸イソアミルお

よび酢酸ß-フェネチルはTK-2の方が15%以上高かったO

第8章では，もろみ中のグリセリン濃度に及ぼす各種酵素剤の影響を調べ，

さらに大麦焼酎の試醸を行った。その結果，十アミラーゼ系，グルコアミラーゼ系，リバーゼ系のどれか 1種類の酵素剤を添加することでもろみのグリセリ

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ン濃度は増加した。グルコアミラーゼ系，リバーゼ系の酵素剤を併用することで，さらにグリセリン濃度は増加した。

第7章で取得したTK-2を用い，麹歩合330/0仕込みで焼酎醸造用酵素剤アマノ 2とリリバーゼA5を添加し大麦焼酎を試験醸造した結果，もろみ中のグリセ

リン濃度は8.9g/lとなり，従来法であるBAW-6を使用した麹歩合330/0もろみの場合と比べ，グリセリン生成は約440/0増加した。もろみを減圧蒸留し，得られた焼酎製品はエステル香が強い，まろやかな味の焼酎であった。

以上のように，様々な生化学的アプローチでもろみ中のグリセリン濃度を調整することで，焼酎原酒の品質が好ましくなり，香味豊かな焼酎製品が製造可能であることを実験的に検証し，理論を体系化して，これに基づき高品質の焼酎を製造する工業的プロセスを完成した。

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本研究を行うにあたり，終始懇切なるご指導，ご鞭縫を賜りました九州大学教授石崎文彬博士に深甚なる謝意を表します。また，本論丸-を校|苅，添削されご懇切なるご指導いただいた九州大学教授筏島豊博士，九州大宇教授藤尾雄策時J:に深く感謝いたします。

本研究は，三和酒類株式会社三和研究所において行われたものであり，本研究中，終始懇切なるご指導，ご鞭援を賜りました前研究所長手1][1-1昇代表取締役会長，研究所長和田久継常務取締役，また，終始ご指導ならびに有援なるご助言を賜りました元アイム電機工業株式会社伊規須太郎顧問(故人) ，下回雅彦研究所副所長ならびに千葉大学助教授太田剛雄博士に深甚なる謝意を表します。

本研究の一部に共同研究者としてご協力頂いた三和酒類株式会社三和研究所高下秀春氏，

岩田太輔氏，小川清氏，竹嶋直樹氏，幸賢二氏，梅本泰史氏，辻本祥子氏，中野健治氏，梶原康博氏ならびに藤本千恵氏に深く感謝致します。

本研究遂行をご支援いただきました三和酒類株式会社赤松重明名誉会長，熊埜御堂英二名誉会長，西太一郎代表取締役社長，熊埜御堂宏賓代表取締役常務，赤松健一郎代表取締役常務， i可底伊八郎常務取締役ならびに熊谷敬造取締役に深く感謝いたします。

折りにふれ有意義なご教示を頂戴した鹿児島大学教授|幡手泰雄博士に深く感謝します。

最後に，本研究遂行にあたり共同研究者の一人として協力し，また終始あたたかく見守ってくれた妻の莱奈子に感謝いたします。

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