QIAGEN Product News 1May 2014 Pick Up n QIAxpert n REPLI-g Single Cell DNA/RNA Sample & Assay Technologies

1

May 2014

QIAGEN

Product News

Pick Up ！注目製品

n

QIAxpert

n

REPLI-g Single Cell シリーズ

サンプルテクノロジー

アッセイテクノロジー

エピジェネティクス

微生物検出および同定

食品試験ポートフォリオ

動物感染症の病原体検出

個人識別および法医学サンプル

DNA/RNA セレクションガイド

Pick Up！注目製品

Get True Insight

into Your Sample

Quality

QIAxpert が提供する革新： ■■ ■ 独自のスペクトラルプロトコールで DNA、RNA や他の混入物質を特異的 定量 ■■ ■ わずか2 µl の核酸溶液で 16 サンプルを 2 分以内に定量測定する迅速性 ■■ ■ フルカラータッチスクリーンによる直感的な操作性 ■■ ■ お手持ちのPC に解析レポートを持ち出せるポータビリティ

最少のサンプル量で最大の情報量

QIAxpert は、貴重なサンプルをダウンストリーム解析に最大限度提供す ることができます。QIAxpert のスライドへのインプット量は解析あたり わずか2 µl、そしてそれらのサンプル量を解析するまで、最大で 2 時間 も蒸発から守るキャピラリーチャンネルが装置には備わっています。サン プルをロードしてからQIAxpert にセットするまで急ぐ必要はありません。 QIAxpert は実験計画にゆとりも提供します。

次世代サンプルプロファイラー

QIAxpert

QIAxpert は、DNA、RNA、タンパク質の定量やクオリティコントロールを飛躍的に加速させる高速マイクロフリュー

ディックタイプの紫外・可視分光光度計です。卓上タイプのためサンプル中の

DNA、RNA とタンパク質分画や

純度を簡単に測定することができます。

QIAxpert の測定は高速かつ簡便です。そのパフォーマンスは 2 分以内に

最大

16 サンプルを測定します。操作は QIAxpert のスライドにサンプルをアプライし、装置にセットしてタッチ

スクリーンで測定メニューを選択するだけです。

QIAxpert は、サンプル定量に高い精度を求める生命科学の研究室

にとって理想的なツールとなります。サンプル溶液に本当に含まれているものが見えてきます。

Pick Up！注目製品

独自のアルゴリズムによるサンプルプロファイ

リング

独自のスペクトラルプロトコールは、いくつもの紫外・可視 光に吸収をもつ化合物を含む複雑なサンプルも定量用色素不 要で高精度に定量することが可能です。特異的なスペクトラ ルプロファイリングアプリケーションは、溶液中の成分を分 離することが難しいサンプルの解析を目的に開発されました。 独自に開発したソフトウェアアルゴリズムによりDNA、RNA と紫外・可視スペクトルで検出される不純物などの特定の化 合物の寄与率を見分けて検出できるようになりました。現在 お使いのQIAGEN 精製キット * からの精製物ならそのまま成 分分析ができます。 * 対応するキットに関してはお問い合せください。

タッチスクリーンによる直感的な操作性

QIAxpert は、装置本体にインストールされているソフトウェ アとフルカラータッチスクリーンにより、簡便かつ直感的な 操作を実現しました。画面に表示されるアイコンは、測定の セットアップやデータのエクスポート、測定結果といった作 業を視覚的にサポートするため、操作を学ぶ手間なく即使用 可能です。

多彩なエクスポート／レポートオプション

QIAxpert の Export タブより簡単にデータを USB ドライブや ネットワークフォルダにエクスポートすることができます。 さらにQR コード®_{を読み込むことでスマートフォンにも} データを保存することができます。データは、2 種類のデー タフォーマットでエクスポートできますので、その後の解析 にも柔軟に対応できます。HTML レポートはウェブブラウザ で、CSV ファイルは Microsoft® _Excel®_{で開くことが可能です。} レポートは従来の吸光度データ（A260、A260/A280およびA260/ A230）が表形式で含まれ、HTML レポートはサンプルごとの スペクトラルプロファイルデータが含まれています。 製品名 内容 Cat. no. 価格（￥） QIAxpert Instrument 装置本体（1 年保証）、アクセサリー（電源ケーブル、 キャリブレーションスライド2 枚）* 9002340 1,450,000 QIAxpert 専用スライド QIAxpert Slide-40 (25) 25 スライド（25 × 16 サンプル用；1 スライドあたり 最大16 サンプル） 990700 13,000

* 装置のアクセサリーには、サンプル測定用の QIAxpert Slide-40 (25)（Cat. no. 990700）は付属しておりませんので、装置と併せてご注文頂くようお願い致します。

QIAxpert のより詳細な情報は www.qiagen.com/p/QIAxpert をご覧ください。

4 3 2 1 0 230 250 275 300 325 350 375 400 425 450 Wavelength (nm) –0.54 5.4 B Absorbance (10 mm) A 6.01 5 4 3 2 1 0 230250 275 300 325 350 375 400 425 450 Wavelength (nm) Absorbance (10 mm) –0.601 RNA のスペクトラルプロファイリング解析 A：（B）のRNA サンプルに人為的に gDNA を添加して分子特異的に解 析を行なった。RNA（青）、DNA（赤）として混入量を定量的に見分けた。 B：高純度RNA のスペクトラルでは、有意な混入物はない。 A B

Pick Up！注目製品

“

Compare to our current

method.... the high quality

results obtained... ”

Luting Song, BGI, China

REPLI-g

®

_{Single Cell Kit}

シングルセルあるいは限られたサンプル量からの全ゲノム増幅

（

WGA）

■■ ■ シングルセルから最大のゲノムカバレッジでの全ゲノム増幅 ■■ ■ MDA テクノロジーによりゲノム遺伝子座の偏りのない増幅 ■■ ■ 次世代シークエンシングなどの新テクノロジーでの使用に最適 ■■ ■ 最大40 µg までの一定した収量（増幅産物長さの平均は >10 kb） ■■ ■ がん研究やメタゲノミクスなど、多くのアプリケーションに最適なツール

シングルセルに関する情報は

www.qiagen.com/JP/Prod-SingleCell をご覧ください。

革新的テクノロジーを用いてDNA 配列解析やジェノタイピングを行なう 場合など、微量生体サンプルを用いた解析には大変困難な場合が数多くあ ります。UV 処理によりコンタミの可能性がある DNA を検出限界まで除去 した試薬を用いているREPLI-g Single Cell Kit は、シングルセル（1,000 個

未満の細胞から最低1 個の細菌または腫瘍細胞まで）あるいは精製ゲノム

DNA から配列の偏りがほとんどなく、最大のゲノムカバレッジで均一に

ゲノムDNA を増幅することが可能となります。

製品名 Cat. no. 価格（￥）

REPLI-g Single Cell Kit (24) 150343 81,500

REPLI-g Single Cell Kit (96) 150345 277,000

精製ゲノムDNA あるいは REPLI-g Single Cell で増幅した

DNA を用いた NGS は同等の結果を実現

枯 草 菌 ゲ ノ ム の 全 ゲ ノ ム シ ー ク エ ン シ ン グ をIllumina®

MiSeq®_{で行なった。解析では、ゲノムDNA およびシング}

ルセル（3 回のシングルセル実験を実施）または 103_個の

細胞からREPLI-g Single Cell Kit を使用して増幅した 2 µg の

DNA を 300 bp のフラグメントにせん断し、各 1 µg をライ

ブラリー作成に使用した。A 同等のシークエンスカバレッ

ジがgDNA および REPLI-g Single Cell で増幅した DNA で観

察された*。B 増幅していない DNA と REPLI-g で増幅した

DNA の比較では、エラー率が非常に低く類似していた†_。

* Burrows-Wheeler Alignment プログラムを用いたアライメ ント（cut-off：10x coverage）：bio-bwa.sourceforge.net

† _{非増幅および REPLI-g Single Cell で増幅した DNA の比較}

はまた、配列が高い割合でゲノムにマッピングされたこ とを明らかにした（データ未提示）。 25 50 0 REPLI-g Single Cell Kit

（1 cell）

REPLI-g Single Cell Kit （1000 cells） gDNA 75 94.76％ 97.39％ 99.96％ 100 ゲ ノ ム カ バ ー 率 （ % ） REPLI-g Single Cell Kit

（1 cell）

REPLI-g Single Cell Kit

（1000 cells） gDNA

エラー率 0.43％ 0.22％ 0.35％

キメラ 0.08％ 0.06％ 0.11％

インデル率 0.05％ 0.02％ 0.01％

“

I have tried the kit and successfully performed single cell whole genome amplification. The DNA obtained allowed me to reliably detect allele-specific point mutations in a colorectal adenocarcinoma cell line. The excellent yield and sequence representation of the amplified DNA really helped me to advance my work in single-cell genomics.

Dr. Masafumi Muratani

Research Associate, Cancer Therapeutics & Stratified Oncology, Genome Institute of Singapore (GIS)

Pick Up！注目製品

REPLI-g WTA Single Cell Kit

シングルセル由来のトータル

RNA や mRNA の全トランスクリプ

トーム増幅

■■ ■ シングルセルからでも全トランスクリプトームをカバー ■■ ■ MDA テクノロジーにより配列の偏りのほとんどない均一な WTA ■■ ■ NGS のような新テクノロジーでの使用に最適化 ■■

■ トータルRNA あるいは mRNA– 濃縮（poly A+_{）RNA の増幅}

■■

■ がん、および幹細胞研究のための革新的なツール

REPLI-g Cell WGA & WTA Kit

微量サンプルから、全ゲノムおよび全トランスクリプトームを

同時増幅

■■

■ ゲノムDNA および RNA（トータルあるいは mRNA 濃縮）の同時増幅

■■ ■ ゲノム状態と転写パターンの関連付けを容易に実現 ■■ ■ MDA テクノロジーにより配列の偏りは最少限 ■■ ■ 細胞あるいは組織からgDNA および RNA を直接増幅 ■■ ■ NGS を含む全てのダウンストリームアプリケーションに使用可能

REPLI-g WTA Single Cell Kit は、シングルセルのトランスクリプトームレベ ルでの転写制御への影響に関する信頼できる研究を可能にし、シングル セル（1 ∼ 1,000 細胞）からの全転写物の均一な増幅を実現します。 REPLI-g 法においては、混入核酸の増幅をブロックするため、専用のバッ ファーおよび試薬を用いて独自のプロセスで処理することにより、混入核 酸が除去されます。革新的な溶解バッファーで細胞RNA を効果的に安定化 することにより、増幅されたRNA は in vivo での遺伝子発現プロファイル を正確に反映します。

REPLI-g Cell WGA & WTA Kit は均一な全ゲノム増幅（WGA）および全ト

ランスクリプトーム増幅（WTA）を同時に実現し、微量サンプル（25 ∼

1000 個の細胞）を用いてゲノムとトランスクリプトームを直接関連づけ ることができます。専用のバッファーおよび試薬は、混入核酸の制御され

た除去を行ない、REPLI-g 法による混入核酸の増幅をブロックします。ゲノ

ムDNA およびトータル RNA あるいは mRNA（poly A+_{）の増幅はREPLI-g}

SensiPhi DNA Polymerase により PCR ベースの増幅テクノロジーとは対照

的にフィデリティー率は1,000 倍にまで増大します。

* 使用するプライマーにより、トータル RNA または濃縮 miRNA（poly A+_{）が増幅される。}

製品名 Cat. no. 価格（￥）

REPLI-g Cell WGA & WTA Kit (12) 150052 138,000

製品名 Cat. no. 価格（￥）

REPLI-g WTA Single Cell Kit (24) 150063 200,000

100000 10000 1000 100 10 1 100000 10000 1000 100 10 1 0.1 RPKM (3 cells) RPKM (average, 10–50 cells) 1 0.1 0.01 0.001 0.0001 10 1 0.1 0.01 0.001 0.0001 Cell 1 Cell 2 R2 _{= 0.97253} 高い再現性をもつ実験 rRNA 増幅を抑えるため、mRNA（poly A+_{）濃縮プロトコー} ルを用いて3 ∼ 1000 個の様々な細胞数で REPLI-g WTA

Single Cell 反応を行なった。増幅 cDNA をフラグメント化 し（Covaris S220）、GeneRead Library Prep I Kit で NGS 用 ライブラリーを調製し、MiSeq Instrument（Illumina）で配 列解析した。RNA バイオタイプは Bowtie2 を用いてシング

ルの転写RNA にマッピングし、RPKM（reads per kilobase

and million mapped reads）を計算した。これらの結果は、 3 個の細胞と WTA サンプル（10 ∼ 50 細胞）に由来する転

写産物の平均RPKM 値が同等であることを証明している。

REPLI-g Cell WGA & WTA Procedure Cell sample (25–1000 cells)

Cell lysis Add Lysis Buffer

10 min at 42°C

Amplified gDNA Amplified cDNA

5 min at room temperature 3 min at 95°C WTA (amplify RNA) WGA (amplify DNA) Add gDNA Wipeout Buffer Add WGA Ready Mix

Add ligation mix

Add REPLI-g SensiPhi amplification mix Add ligation mix Add REPLI-g SensiPhi amplification mix Add Quantiscript RT mix and primers* gDNA removal Reverse Transcription Whole transcriptome amplification Repair Ligation Whole genome amplification Ligation 30 min at 24°C 5 min at 95°C 2 h at 30°C 5 min at 65°C 60 min at 42°C 3 min at 95°C

サンプルテクノロジー

Sample Technologies

Sample Technologies

Sample collection Purification _{cDNA synthesis}Amplification Analysis

QIAcube

™

_{HT System}

96 ウェルフォーマットでのミドルからハイスループットの核酸自動精製装置

■■ ■ あらゆる種類のサンプルからDNA、RNA、miRNA を高い信頼性で抽出 ■■ ■ ミドルからハイスループットの核酸自動精製と専用精製キットで経費と時間を節約 ■■ ■ ユーザーフレンドリーなソフトウェアでデータ管理とドキュメンテーションを簡便化 ■■ ■ 安全性に配慮した設計によりクロスコンタミのリスクを最小限に抑制 ■■ ■ 操作が簡便で柔軟性が高く使いやすいコンパクトな装置 QIAcube HT は、ミドルからハイスループットのシリカメンブレン法を用 いた核酸自動精製を96 ウェルフォーマットで実現します。動物サンプル 中のバクテリアやウイルスからだけではなく、細胞、組織、食品などあ らゆるサンプル種からDNA、RNA、miRNA を迅速かつ容易に精製するこ とができます。自動化用プロトコールと専用のQIAcube HT 精製キットや プラスチック製品は信頼性と利便性を高め、貴重な時間を節約できます。 本システムは、信頼性の高い他のQIAGEN 精製技術と同様に、高品質な 結果を提供します。

原理

QIAcube HT での自動精製は、高速かつ経済的で、1 ランあたり 24 ∼ 96 サンプルから高品質の核酸が得られます。専用のQIAcube HT Kits は、細胞、 組織、バクテリア、ウイルス、食品サンプルを含む様々なスタートサンプ ルからの核酸精製を実現します。QIAcube HT は非常に使いやすく、直感 的なソフトウェアによりマウスを数回クリックするだけでランを開始する ことができます。 製品名 Cat. no. 価格（￥）

QIAcube HT system, Priority*† _{9001899 4,900,000 ∼}

* 保証期間が 3 年の QIAcube HT system, PrioPLUS（Cat. no. 9001900）もございます。お問い 合せください。

†

サンプルテクノロジー

Sample Technologies

ゲノムDNA のアガロースゲル解析

QIAamp 96 DNA QIAcube HT Kit および QIAcube HT を用 いて、50、100、150 および 200 µl のヒト全血からゲノム DNA を精製した。200 µl で溶出した精製 DNA から 7 µl を それぞれ用いて0.8％の 1x TBE アガロースゲルで解析した。 M：ラムダHindIII マーカー。 50 µl M 100 µl 150 µl 200 µl 組織ライセートからトータルRNA の直線性のある回収 RNAlater®_{で安定化したラット肺組織からのライセートを、サ} ンプルが2.5 ∼ 25 mg の組織に相当する量を含むように連続

希釈した。これらのサンプルから、RNeasy QIAcube HT Kit

とRNeasy 96 QIAcube HT total RNA Tissue V1.QSP Protocol

を用いてQIAcube HT でトータル RNA を精製した。精製 RNA は 100 µl の RNase フリー水で溶出した。吸光度測定値は、 RNA回収およびスタートサンプル量の間に直線関係を示した。 2.5 5 10 15 Starting material (mg) 20 25 RNA yield (µg) 40 35 30 25 20 15 10 5 0

QIAamp

®

_{96 DNA QIAcube HT Kit}

血液、細胞および組織からのハイスループットの

トータル

DNA 自動分離

RNeasy

®

_{96 QIAcube HT Kit}

動物およびヒトの細胞／組織からのハイスループット

RNA 自動

分離

■■ ■ 簡便で信頼できる自動化精製により費用と時間の節約が可能 ■■ ■ 様々なサンプルタイプに対応する標準化された手法 ■■ ■ 特殊なサンプルからも高収量で精製 ■■ ■ ダウンストリーム解析で良好な結果を実現する高品質DNA ■■ ■ 様々なスタートサンプルに至適化済みのプロトコール

QIAamp 96 DNA QIAcube HT Kit は血液、細胞および組織からトータル DNA（例；ゲノム、ミトコンドリアおよび病原体）の自動化精製を実現し ます。便利な96 ウェルフォーマットでの、実績のある QIAamp のシリカ メンブレンテクノロジーを用いることで、夾雑物および阻害物が除去され たダウンストリーム解析に即使用可能な高品質の核酸が得られます。 ■■ ■ 簡便で信頼できる自動化精製により費用と時間の節約が可能 ■■

■ トータルRNA または miRNA を含むトータル RNA 分離のためのフレキ

シブルな操作 ■■ ■ 各種スタートサンプルおよび目的のサイズ分布用プロトコール ■■ ■ ダウンストリームアプリケーションに即使用可能な高品質RNA ■■ ■ 少量のスタートサンプルで一定したRNA 収量

RNeasy 96 QIAcube HT Kit は QIAcube HT システムを用いた動物および

ヒトの細胞／組織サンプルからのトータルRNA または miRNA を含むトー タルRNA の簡便な自動化精製を実現します。便利な 96 ウェルフォーマッ トで、実績のあるRNeasy のシリカメンブレンテクノロジーを用いること により、夾雑物および阻害物が除去されたダウンストリーム解析に即使用 可能な高品質の病原体核酸が得られます。 製品名 Cat. no. 価格（￥）

QIAamp 96 DNA QIAcube HT Kit (5) 51331 90,000

製品名 Cat. no. 価格（￥）

RNeasy 96 QIAcube HT Kit (5) 74171 153,000

対応

QIAcube HT

対応

サンプルテクノロジー

Sample Technologies

AllPrep DNA/RNA/miRNA Universal Kit

細胞あるいは溶解困難な組織からゲノム

DNA および miRNA を

含むトータル

RNA を同時に精製

■■ ■ 同一サンプルから高収量のDNA、RNA、miRNA 精製 ■■ ■ 溶解困難なサンプル用に開発（繊維性あるいは脂肪性組織） ■■ ■ ダウンストリームですぐに使用可能な高品質核酸 ■■ ■ 様々なサンプルタイプ用に最適化されたプロトコール ■■ ■ フェノール不要の簡便操作

AllPrep® _{DNA/RNA/miRNA Universal Kit は、細胞および繊維性、脂肪性}

組織を含む様々な組織から、ゲノムDNA および miRNA を含むトータル RNA の同時精製を実現します。本キットを用いた分離精製法ではサンプル を分割する必要がないため、DNA および RNA/miRNA を最大収量で精製 できます。精製したDNA および RNA/miRNA は別々に溶出でき、様々な ダウンストリームアプリケーションにも即使用可能です。本キットには、 組織や分離した血液細胞など様々なサンプルに至適化されたプロトコール があります。 Cells or tissue Lyse and homogenize

Bind genomic DNA

Wash

Wash

Elute

Eluted DNA

The AllPrep procedure

Genomic DNA

On-column Proteinase K

digestion For fatty tissue:

chloroform extraction of flow-through Total RNA Bind total RNA Add ethanol Wash Wash Elute Eluted RNA, including miRNA Proteinase K digestion in the presence of ethanol On-column DNase digestion, including miRNA rebinding 製品名 Cat. no. 価格（￥）

AllPrep DNA/RNA/miRNA Universal Kit (50) 80224 68,000

Deparaffinization solution

FFPE サンプルの脱パラフィン

Deparaffinization Solution はホルマリン固定パラフィン包埋組織切片か らのDNA あるいは RNA を精製する前に脱パラフィンを行なうために至

適化されています。Deparaffinization Solution は FFPE サンプルに添加し

た後もサンプル上に留まり、Proteinase K による分解が同時に行なわれ

ます。Deparaffinization Solution の添加後、FFPE サンプルをペレット化 する必要はなく、パラフィンを含む上清を除去する必要もありません。 Deparaffinization Solution は無臭で、青色のトラッキング色素により容易 にトラッキングできます。本製品はEpiTect Plus Bisulfite Kit の一部であり、 またQIAamp DNA FFPE Tissue Kit、RNeasy FFPE Kit、miRNeasy FFPE Kit、 QIAsymphony RNA Kit、QIAsymphony DNA Mini Kit、また QIAsymphony DSP DNA Mini Kit とも併用できます。

製品名 Cat. no. 価格（￥）

Deparaffinization Solution (16 ml) 19093 23,500 Deparaffinization Solution (50 ml) 939018 36,000

対応

サンプルテクノロジー

Sample Technologies

QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit

糞便サンプルからの

gDNA 精製

■■ ■ 新規のInhibitEX® _{Buffer により溶解ステップが大幅に改善} ■■ ■ 有害な有機化合物は不要 ■■ ■ QIAcube でワークフローを自動化可能 ■■ ■ PCR 阻害物質を効率的に除去 ■■ ■ ダウンストリームアッセイで高い感度

QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit は、新鮮あるいは凍結した糞便サンプルか

ら高品質なゲノムDNA（ヒトおよび細菌）を迅速に精製します。取り扱い にくい阻害物質除去錠剤に代わってキットに付属の液状のInhibitEX Buffer は、糞便サンプルに通常存在するPCR 阻害物質を効率的に除去し、手作業 時間を大幅に短縮します。

阻害物質の効率的な除去

糞便サンプルには、多糖類複合体、胆汁酸塩、脂質、および尿酸などの PCR 阻害物質が多く含まれています。最もうまくいった場合でも、これ らの阻害物質によりターゲットを増幅することが難しくなります。最悪の 場合は、これらの阻害物質の存在がPCR 反応を完全に抑制されます。従っ て、このような阻害物質を完全に除去する方法は、どのような糞便サンプ ルの解析にも非常に重要です。QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit に入ってい る新規のInhibitEX Buffer は PCR 阻害物質を効率的に除去し、信頼性の高い DNA 検出を実現します（下図）。

製品名 Cat. no. 価格（￥）

キャンペーン 価格（￥） QIAamp Fast DNA Stool

Mini Kit (50)

51604 33,000 23,100

注：上記のキャンペーン価格は2014 年 7 月 31 日受注分までとなります。

QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit

Fully automatable on the QIAcube

Sample Suspend in InhibitEx Buffer Digest proteins Bind Wash 2x Elute

DNA ready for downstream applications PCR 阻害物質の効率的な除去

QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit あるいは他のスタンダードなカラム法により、糞便 6 サンプル

からDNA を分離した。CT値は阻害物質に対して感受性の高いPCR システムで測定した。スタ

ンダードな精製法を用いたほとんどのサンプルでは、PCR 阻害物質のためターゲットが増幅され なかった。QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit は DNA から阻害物質を効率的に分離し、高感度な 増幅が可能であった。 50 0 10 20 30 40 CT value 1 2 3 4 5 6 Sample

Standard column purification QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit

対応予定

アッセイテクノロジー

Assay Technologies

Assay Technologies

QuantiNova Probe PCR Kit

プローブを用いた、感度と特異性の高い超高速リアルタイム

PCR

製品名 Cat. no. 価格（￥）

QuantiNova Probe PCR Kit (100) 208252 13,000

QuantiNova Probe PCR Kit (500) 208254 55,500

QuantiNova Probe PCR Kit (2500) 208256 222,000

Copy number 0 1– 4 40 60 50 30 20 10 70 0 Detection frequency (%) Copy number 0.1 1 10 _{100 1000} 10000 100000 35 40 45 30 25 CT Calculated Experimental 30 ng DNA 3 ng DNA 0.3 ng DNA 0.03 ng DNA 3 pg DNA Copy number 0 1– 4 40 60 50 30 20 10 70 0 Detection frequency (%) Copy number 0.1 1 10 _{100 1000} 10000 100000 35 40 45 30 25 CT Calculated Experimental 30 ng DNA 3 ng DNA 0.3 ng DNA 0.03 ng DNA 3 pg DNA 1 コピーのターゲットを高感度かつ確実に検出

A QuantiNova Probe PCR Kit を使用して白血球ゲノム DNA

中に存在するシングルコピー遺伝子CFTR を 104_{コピーから} 10 コピーに相当する 30、3、0.3、0.03 ng の gDNA で検出 し、検量線を作成した。コピー数に対するCT値のプロットは 高い直線性を示した。60 回の反応に充分なマスターミックス をセットアップし、理論的にウェルあたり1 コピーに相当す る3 pg のテンプレート gDNA を各反応液に添加した。60 反 応でのコピー数を決定するために検量線を使用した。検量線 を用いて測定したコピー数を計算されたポアソン分布に対し てマッピングした。B 検量線を用いたシングルコピー定量の 結果は、理論的に計算されたポアソン分布との一致を示して おり、高い感度と確実性を証明している。

Sample collection Purification cDNA synthesis _{Amplification} Analysis

■■ ■ わずか1 コピーのターゲットも正確に検出 ■■ ■ 1 反応で複数の結果が得られる duplex 能力 ■■ ■ 30℃で最長 100 時間まで安定しており様々なワークフローに最適 ■■ ■ バッファーの色の変化でサンプルの入れ忘れを回避 ■■ ■ 高い特異性でより良い結果を実現 ■■ ■ 超高速サイクリングによりスループット数を増大

QuantiNova Probe PCR Kit は、低温度でのミスプライミングによる弊害を

回避できるリアルタイムPCR 試薬です。抗体による革新的なホットスター

トメカニズムをベースにした本キットは、プローブベースのリアルタイ

ムPCR の特異性と効率を向上し、様々な PCR サイクラーで cDNA または

gDNA の正確な singleplex および duplex 解析を実現します。また、室温で

最大100 時間という卓越した安定性により、冷却の必要がなく、ハイスルー

プットおよび自動化ワークフローに最適です。さらに、本キットは正確なピ ペッティングを視覚化できるシステムにより安心して実験を実施でき、低 コピーのターゲットも検出可能な高い感度で信頼できる結果を提供します。

シングルコピー

DNA の正確で確実な検出

QuantiNova Probe PCR Kit の高い感度により、わずか 1 コピーのターゲット でも正確かつ確実に検出できます（左図）。

あらゆるリアルタイムサイクラーで一定した結果

QuantiNova Probe PCR Kit は、ほとんどのリアルタイムサイクラーで使用 可能です。passive reference 色素として ROX ™ 色素が必要なサイクラー

を使用する場合には、別チューブで提供されるROX 色素を添加できます。

サイクラーによって高速サイクリング能力に差があるため、サイクリング・ プロトコールが異なりますが、QuantiNova Probe PCR Kit は異なるサイク ラーを用いた際にも一定した感度、再現性、効率を実現します。

アッセイテクノロジー

Assay Technologies

QuantiNova SYBR

®

_{Green PCR Kit}

SYBR Green ベースの qPCR を用いて卓越した結果

製品名 Cat. no. 価格（￥）

QuantiNova SYBR Green PCR Kit (100) 208052 10,500 QuantiNova SYBR Green PCR Kit (500) 208054 50,000 QuantiNova SYBR Green PCR Kit (2500) 208056 200,000

1 コピーターゲットを高感度かつ確実に検出

A QuantiNova SYBR Green PCR Kit を用いて 30、3、0.3、 0.03 ng の白血球ゲノム DNA からシングルコピー遺伝子 IL1R2 を検出し、ターゲットのコピー数に対し CT値をプロッ トし検量線を作製した。用いた容量は10 ∼ 10,000 個のコピー 数に相当し、CTとの相関関係において高い直線性があった。 理論的に1 コピーになるように、60 回の反応で実際のターゲッ トのコピー数を決めるために、検量線を使用した。反応液はマ スターミックスから分注したが、統計的変動により、1 コピー 以上を含むウェル、何も含まないウェルもいくつか存在した。 B 各反応で予想される理論的なコピー数をポアソン分布を用 いて計算し、検量線から算出した実際のコピー数と比較した。 低コピー数での計算および実験の検出頻度が非常に良く一致 していたことは、QuantiNova ケミストリーの高い感度と確実 性を証明している。 40 30 35 15 25 20 CT value 1 0.1 10 100 1000 10000 Copy number 30 ng 3 ng 0.3 ng 0.03 ng 3 pg 80 40 60 0 20 Detection frequency (%) 0 1–4 Copy number Calculated Experimental 40 30 35 15 25 20 CT value 1 0.1 10 100 1000 10000 Copy number 30 ng 3 ng 0.3 ng 0.03 ng 3 pg 80 40 60 0 20 Detection frequency (%) 0 1–4 Copy number Calculated Experimental ■■ ■ 革新的なホットスタートメカニズムにより比類のない特異性 ■■ ■ バッファーの色の変化でサンプルの入れ忘れを回避 ■■ ■ わずか1 コピーのターゲットも正確かつ確実に検出 ■■ ■ 超高速サイクリングによりスループット数とスピードを増大 ■■

■ QuantiTect® Primer Assay と組み合わせて良好な結果

特異性、感度、速度、およびプロセスの安全性が向上されたQuantiNova

SYBR Green PCR Kit は、SYBR Green をベースにした qPCR において新し い基準を示しています。革新的なホットスタートメカニズムは、リアルタ イムPCR の特異性を顕著に向上し、また至適化済みの試薬はほとんどのリ アルタイムPCR サイクラーでわずか 1 コピーのターゲットでも cDNA や gDNA の正確な定量結果を実現します。さらに、正確なピペッティングを 視覚化できるシステムが組み込まれています。

1 コピーターゲットを高感度で検出

QuantiNova SYBR Green PCR Kit 試薬の特殊な組成により、わずか 1 コピー のターゲットでも正確かつ確実に検出できます（右図）。この究極の感度 は超高速サイクリング条件下でさえも達成され、最高の感度を必要とする

稀少なDNA サンプルを用いるような難しい実験において QuantiNova

SYBR Green PCR Kit は最高の選択肢となります。

SYBR Green によるリアルタイム PCR で新基準を設定

QuantiNova SYBR Green PCR Kit は、実績のある QIAGEN のバッファー

テクノロジーと革新的なQuantiNova ホットスタートを組み合わせ、様々

なサイクリング条件下で、比類のない特異性と感度を実現します。その 結果として、QuantiNova ケミストリーはお客様がご利用の装置を用いた 既存のワークフローに容易に組み込むことができます。簡単な反応セット アップと超高速サイクリング条件下でさえも確実なパフォーマンスを実現 する特長に加え、QuantiNova SYBR Green PCR Kit は最初の試みからリア

アッセイテクノロジー

Assay Technologies

Type-it

™

_{CNV Probe PCR +qC Kit および}

Type-it CNV SYBR Green PCR Kit

ゲノムコピー数変異解析キット

近年の急速なゲノムの網羅的解析の発達により、CNV（Copy Number Variation）は患者だけではなく一般健常者集団にも広く存在することが明 らかになってきました。臨床的にも、臨床症状に関与するCNV と一般健 常者集団で観察されたものとを識別することが重要です。また、CNV は 民族集団によって出現の頻度が異なることが報告されているため、ゲノム 解析により検出されたCNV が病態と関わるかどうかを判断することが必 要とされています。QIAGEN ではジェノタイピングの研究に特化した解析 用試薬、Type-it シリーズをご提供しています。その Type-it シリーズから CNV 解析用に Type-it CNV PCR +qC Kits（SYBR Green および Probe）を ご用意しました。

製品名 Cat. no. 価格（￥）

Type-it CNV Probe PCR +qC Kit (100) 206662 25,500 Type-it CNV Probe PCR +qC Kit (400) 206664 90,000 Type-it CNV SYBR Green PCR +qC Kit (100) 206672 22,500 Type-it CNV SYBR Green PCR +qC Kit (400) 206674 79,500 Type-it CNV SYBR Green PCR Core Kit (400) 206624 70,500

5 4 3 2 1 0

Calculated GOI copy number

No change +1 copy –1 copy

Copy number of CNV quantification reference False loss False gain 18-copy element (Type-it CNV Reference) Single-copy gene; not changed Single-copy gene; copy number +/–1 A B CNV reference Copy number, per diploid human genome CT change (reference

assay) number (real)GOI copy

GOI copy number

(calculated) CNV calling for GOI Type-it CNV Reference Assay 36 0 2 2.00 NC: Correct 36+1 –0.04 2 1.94 NC: Correct 36–1 +0.04 2 2.06 NC: Correct Single-copy

gene ₂₊₁2 _–0.580 2₂ 2.00_1.33 NC: Correct_{Loss: False}

2–1 +1 2 4.00 Gain: False 多コピー因子をリファレンスとして使用した確実なCNV 定量 qPCR を用いた 18 コピーあるいは単一コピー因子をリファレ ンスとする仮定上のCNV 定量実験で、多コピー因子をリファ レンスとして使用する優位性を図式化した。 A グラフおよび B 表では、CNV リファレンス遺伝子のコピー数変動（1 コピー 喪失または獲得）がもたらす、CT値および対象遺伝子（GOI） のコピー数測定への影響が示されている。GOI のコピー数測 定の際に生じる偽喪失と偽獲得は、単一コピーのリファレン ス遺伝子が1 コピー変動することによって引き起こされる。 これに対し、多コピー遺伝子をリファレンスとして用いた場 合には、リファレンス遺伝子の1 コピー変動による GOI の コピー数測定への影響はなく、高い精度でコピー数の測定が 可能である。（計算の前提：GOI はすべてのテストサンプルに おいてコピー数が変動しない単一コピー遺伝子である。CNV 定量のリファレンスには18 コピーの因子または一倍体ヒトゲ ノム上で単一コピーの因子（二倍体ヒトゲノム上で36 または 2 コピー）。

~200 DNA samples from different populations 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 200 180 160 140 120 100 80 60 40 20 0 信頼性の高い多コピー定量コントロールアッセイ

Type-it CNV Reference Assay は、異なるヒト集団間でコピー 数が一貫した多コピー因子を基準としており、汎用性のある 定量コントロールアッセイとして最適である。Type-it CNV Reference Assay の多コピー因子は、192 人の健常者のヒト ゲノムを用いて定量および検証されており、それらは性別およ びその他の集団間でも一貫した結果を示した。

アッセイテクノロジー

Assay Technologies

Type-it HRM PCR Kit および

Rotor-Gene

™

_{Type-it HRM Discovery Kit}

HRM（High Resolution Melt）解析による遺伝子変異および SNP の

迅速かつ正確な検出

製品名 Cat. no. 価格（￥）

Type-it HRM PCR Kit (100) 206542 19,000

Type-it HRM PCR Kit (400) 206544 68,000

Type-it HRM PCR Kit (2000) 206546 307,000

Rotor-Gene Type-it HRM Discovery Kit 206541 39,500

Rotor-Gene Q

比類ない高い感度・再現性を実現したリアルタイムPCR システム リアルタイムPCR 装置 Rotor-Gene Q は、画期的な“遠心エアコントロール方式” を採用しているため、サンプル間の温度のばらつきをブロック型装置の約1/20 の± 0.02℃まで抑えることに成功しました。さらに加熱冷却装置（ペルチェ素子 など）の劣化による実験結果のばらつきもなく、高い精度と再現性を実現するこ とが可能です。Rotor-Gene Q は、極めて高い温度分解能を必要とする HRM 解析 や変異解析などの実験に適しています。 ■■ ■ わずかな配列の違いも正確に検出 ■■ ■ 特異性の高いPCR により増幅困難な遺伝子座を増幅 ■■ ■ 新しいEvaGreen 蛍光色素により明確な融解曲線 ■■ ■ 新規のHRM ジェノタイピング解析実験系の設定を簡便化 ■■ ■ 簡便なマスターミックスフォーマットと至適化済みのプロトコール Type-it HRM PCR Kit は HRM 解析による迅速で正確なジェノタイピングのた めの信頼できる製品です。本キットは増幅困難なゲノム遺伝子座でさえも 良好に解析できるように至適化されています。本キットは、変異のスキャ ン用に最適であり、未知の変異のスクリーニングに使用できます。効率 的に新しいHRM ジェノタイピングアッセイを確立します。時間のかかる PCR 実験条件の至適化なしに、非特異的な増幅を抑え、特異的な増幅産物 および信頼できる結果が一定して得られます。本キットはRotor-Gene Q、

Rotor-Gene 6000、LightCycler® _{480、Applied Biosystems}® _{7500 Fast System}

のようなHRM 解析用に適したリアルタイム PCR 装置において使用でき

ます。

Rotor-Gene Type-it HRM Discovery Kit は Rotor-Gene Q で正確かつ再現性の

あるHRM 解析ができるよう最適化されています。 QIAGEN PCR キット 他社のキット 時間 時間 時間 キット･プロトコールに準拠 実験系の構築 煩雑な至適化後のみ PCR 解析が可能 至適化なしで PCR 解析成功 PCR 条件の至適化 至適化実験なしで良好なPCR 実験 QIAGEN PCR キットは、簡単な操作で信頼性の高い結果を迅 速に実現する。現在汎用されている方法と異なり、QIAGEN PCR キットは PCR パラメーターの至適化が不要で、アッセイ の確立を迅速かつ容易に行なえる。 A/T Class IV SNP の正確なジェノタイピング

Type-it HRM PCR Kit を 用 い た ヒ ト GYS1 遺 伝 子 の SNP （rs2270938）タイピングの結果、Type-it HRM PCR Kit を用い

て得られたNormalized melting curve は Class IV SNP の 3 種類

のジェノタイプ（野生型、ヘテロ接合体、変異体）を明確に識 別できたことを示す。 Normalized fluorescence 78.0 100 80 60 40 20 84.0 79.0 80.0 81.0 82.0 83.0 A Normalized minus wt 78.0 2. 0 0 -2.0 -4.0 -6.0 84.0 79.0 80.0 81.0 82.0 83.0 B Normalized fluorescence 100 80 60 40 20 81.5 80.5 77.5 78.5 79.5 82.5 0 -5.0

エピジェネティクス

Epigenetics

Epigenetics

■■ ■ 至適化済みの操作で99％以上の高いシトシン変換率 ■■ ■ わずか30 分で効率的な Bisulfite 変換 ■■ ■ gDNA、全血、細胞、組織、FFPE 切片用に特化されたソリューション ■■ ■ 迅速で能率的な操作でDNA の効率的な変換と精製 ■■

■ DNA 分解を回避する画期的な DNA Protect テクノロジー

EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kit は、様々なスタートサンプルに対応する

高い柔軟性を提供する一方、わずか30 分で非メチル化シトシンをウラシ

ルに高い効率で変換する統合的なシステムです。

効率の高い

Bisulfite 変換

反応効率がダウンストリーム解析の信頼性に非常に大きな影響を与えるこ とから、DNA の Bisulfite 処理および非メチル化シトシンのウラシルへの変 換は、メチル化解析において最も重要なステップです。EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits に 入 っ て い る 革 新 的 な Bisulfite Solution に よ り、2 本 の X 染色体の 1 本が高度にメチル化された女性サンプルに由来する X 染色体 のゲノムDNA のような非常に分析困難なサンプルでも超高速で効率良く Bisulfite 変換が行なえます。

DNA 断片化を低減

完全なBisulfite 変換に必要な過酷な条件は、高度な DNA 断片化やサンプ ル消失を引き起こすため、DNA 収量の低下、DNA の激しい断片化、再 現性のない変換効率につながります。QIAGEN のユニークな DNA Protect Buffer は DNA 分解を抑えるため、他社のキットで変換した DNA よりも

大きいサイズのフラグメントで完全に変換されたDNA が得られます。

EpiTect

®

_{Fast Bisulfite Conversion Kits}

ゲノム

DNA、FFPE、血液、細胞または組織サンプルからわずか 30 分で効率的な Bisulfite 変換

DNA

EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit

EpiTect Fast LyseAll Bisulfite Kit

Bisulfite converted DNA Cultured cells

or tissues Whole

blood tissuesFFPE

EpiTect Fast DNA

Bisulfite Kit

EpiTect Fast Bisulfite Kit の相互関係

サンプルタイプに応じてDNA の Bisulfite 変換は特化された

キットとプロトコールが必要。キットにはDNA 抽出に至適化

済みのバッファーとDNA の Bisulfite 変換に必要な全試薬が含

まれている。

Bisulfite 変換後の DNA フラグメントサイズの分析

EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit を用いた Bisulfite 変換後、1 µg の

ゲノムDNA の断片化レベルは最も低く、フラグメントサイズ

の分布は数百bp から 6 kb を超える範囲であったが、他社の

キットでは500 bp と 1 kb にそれぞれピークがあった。サン

プルはAgilent® _{RNA 6000 Nano Chip で解析した。}

5 0 15 25 20 10 35 30 200 500 1000 2000 4000 25 [FU] [nt] EpiTect Fast Supplier Z Supplier E

エピジェネティクス

Epigenetics

EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit

QIAcube 対応

および

EpiTect Fast 96 Bisulfite Kit

EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit には特別に調製されたバッファーと試薬が入っており、ゲノム DNA の Bisulfite 変換とそれに続くクリーンアップを効率的に行ないます。斬新な Bisulfite Solution がわずか 30 分で高効率にBisulfite 変換を可能にする一方、DNA Protect テクノロジーと QIAGEN スピンカラムは、 分解を最小限に抑えてDNA の完全変換を実現します。EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit を用いて、20 µl までの容量で1 ng ∼ 2 µg の DNA、あるいは最大容量 40 µl で 1 ∼ 500 ng の DNA が変換可能です。

EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit および EpiTect Fast 96 FFPE Bisulfite Kit

ホルマリン固定パラフィン包埋（formalin-fixed、paraffin-embedded；FFPE）組織は EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit で処理されます。本キットは、FFPE 組織切片の脱パラフィンと溶解を効率的に行なうため の特殊なバッファーが入ったEpiTect Fast FFPE Lysis Kit と、抽出した DNA の迅速で効率的な Bisulfite 変換のためのEpiTect Fast DNA Bisulfite Kit で構成されています。本プロトコールは Bisulfite 変換後の

クリーンアップツールを含み、シングルのFFPE 組織切片（厚さ 10 µm）に使用できます。QIAGEN

の信頼できるDNA Protect テクノロジーは変換反応中の断片化を最小限に抑えるため、Bisulfite 変換さ

れたDNA を高収量で得られます。

EpiTect Fast LyseAll Bisulfite Kit および EpiTect Fast 96 LyseAll Bisulfite Kit

全血、培養細胞、組織サンプルはEpiTect Fast LyseAll Bisulfite Kit で処理します。本キットは、特殊な 溶解バッファーが入ったEpiTect Fast LyseAll Lysis Kit と、DNA を Bisulfite 変換するための EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit で構成されています。本プロトコールには、サンプルから DNA を能率的に遊離す

るための独自の配合成分を持つ溶解バッファーを用いてDNA の結合を促進するために至適化された

ステップが含まれています。本キットで0.5 ∼ 20 µl の血液あるいは 10 ∼ 105_{個の細胞を処理でき}

ます（最少60 pg の DNA）。

製品名 Cat. no. 価格（￥）

精製DNA からの Bisulfite 処理変換およびクリーンアップ用

EpiTect Fast Bisulfite Kit (10) 59802 12,500

EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit (50) 59824 34,500

EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit (200) 59826 117,000

EpiTect Fast 96 Bisulfite Kit 59720 129,000

FFPE 組織切片からのサンプル溶解と Bisulfite 処理変換および

クリーンアップ用

EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit (50) 59844 61,500

EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit (200) 59846 208,000

EpiTect Fast 96 FFPE Bisulfite Kit 59740 229,000

全血、培養細胞あるいは組織からのサンプル溶解とBisulfite 処理変換

およびクリーンアップ用

EpiTect Fast LyseAll Bisulfite Kit (50) 59864 39,000

EpiTect Fast LyseAll Bisulfite Kit (200) 59866 134,000

EpiTect Fast 96 LyseAll Bisulfite Kit 59760 146,000

*

エピジェネティクス

Epigenetics

PyroMark

™

_{CpG Assays}

パイロシークエンス解析による遺伝子特異的な

DNA メチル化

定量

PyroMark Q24 Advanced Reagents

パイロシークエンス法によるロングリード解析を強力にサポート

する新しいテクノロジー

■■ ■ 高度なデザインアルゴリズムによりアッセイの特異性を最大化 ■■ ■ ヒト、マウスおよびラットゲノムのCpG 部位を広範に解析可能 ■■ ■ 解析設定のアッセイファイルを簡単にダウンロード ■■ ■ デザイン済みのアッセイがGeneGlobe®_{ウェブサイトで入手可能} ■■ ■ 費用対効果の高い製品で最高のパフォーマンスを実現 PyroMark CpG Assay は、パイロシークエンス解析用のゲノムワイドな デザイン済みのメチル化アッセイで、特異性の高いアッセイと高精度な CpG メチル化解析結果を実現するデザインアルゴリズムを使用していま す。弊社のアップグレードされたPyroMark CpG Assay データベースは、 現在ヒト、マウスおよびラットゲノムに対応する84,000 以上の個別アッ セイを提供しています。 ■■ ■ ソフトウェアとケミストリーから構成されるAdvanced テクノロジー ■■ ■ CpG ターゲットだけは無く CpN ターゲットの解析にも対応可能 ■■ ■ DNA メチル化定量解析および変異ターゲットの定量解析の精度の向上

PyroMark Q24 Advanced Reagents は、従来に比較してロングリードが 可能であり、解読配列の後半の解析精度の向上が期待できる新しいテク

ノロジーです。特にDNA メチル化定量解析や複雑な変異解析や微生物

の同定解析のようなシークエンス解析に最適です。なお、PyroMark Q24 Advanced Reagents は、PyroMark Q24 Advanced Systems に特化して最適

化された試薬です。また、ロングリード解析に際してdNTP が多く必要な

場合は、PyroMark Q24 Advanced CpG Reagents をご使用ください。

製品名 Cat. no. 価格（￥）

PyroMark CpG Assay (200) Varies 18,000

PyroMark CpG Assay 96 well (50) Varies 11,500 PyroMark CpG Assay 96 well (200) Varies 18,000

製品名 Cat. no. 価格（￥）

PyroMark Q24 Advanced Reagents (4 x 24) 970902 27,500 PyroMark Q24 Advanced CpG Reagents (4 x 24) 970922 30,000 A

B

ESR1 解析

A GeneGlobe の PyroMark CpG Assay ツールは CpG アイラ

ンドにある複数のターゲット情報を提供し、ユーザーは解析 するべきCpG アイランドの特定領域を選択できる。B パイロ シークエンスのデータはESR1 遺伝子に関連する CpG アイラ ンドにおける2 つの部位の解析結果を示している。

PyroMark Q24 Advanced

パイロシークエンス法によるDNA メチル化 および遺伝子変異定量解析装置 PyroMarkQ24 は、パイロシークエンス法 による24 ウェルフォーマットのリアルタ イムシークエンス解析システムで、正確な 塩基配列と各配列位置での塩基の比率定量 によりDNA メチル化および遺伝子変異解 析を実現します。

微生物検出および同定

Microbiome

Microbiome

Sample collection Sample disruption Purification qPCR and _qRT-PCR Analysis

Microbial DNA qPCR Arrays

リアルタイム

PCR ベースでアプリケーションに特化した微生物

の同定またはプロファイリング

■■ ■ アプリケーションに着目した微生物ターゲットで関連性の高い解析結果 ■■ ■ ラボ検証済みのアッセイを用いて確実な検出および定量を実現 ■■ ■ コントロールアッセイを含むことにより信頼できる結果を提供 ■■ ■ 無料のデータ解析ツールで解析を簡易化

Microbial DNA qPCR Array は、微生物種、毒性遺伝子、または抗生物質耐 性遺伝子の同定とプロファイリングに特化したアッセイを搭載したアレイ

です。生物種同定用アッセイはバクテリアの16s rRNA 遺伝子とバクテリ

アDNA をターゲットし、各アレイにはホスト DNA、バクテリア DNA の

含有、PCR 反応を確認するためのコントロールが含まれています。また、 アレイキットにはMicrobial qPCR Mastermix も含まれています。本アレイ の簡便なフォーマットと操作手順は、リアルタイムPCR 装置を使用する いかなる実験室においても、ルーチンでの信頼できる微生物遺伝子の同定 またはプロファイリングを可能にします。 製品名 Cat. no. 価格（￥）

Microbial DNA qPCR Arrays Varies Varies

Custom Microbial DNA qPCR Arrays

リアルタイム

PCR ベースでアプリケーションに特化した微生物の

同定またはプロファイリング

■■

■ 微生物遺伝子または種のプロファイリングを可能にするカスタムパネル

■■

■ 高感度で特異的なMicrobial DNA qPCR Assay で構成 ■■

■ お客様のニーズに対応する様々なプレートレイアウト

Custom Microbial DNA qPCR Array は微生物種または微生物遺伝子を検出 するためのユーザーが設定できるアッセイです。

製品名 Cat. no. 価格（￥）

Custom Microbial DNA qPCR Array 330161 Inquire

Sample Microbial DNA qPCR Array プレート

このアレイプレートフォーマットは、1 サンプルで 90 種類 の微生物アッセイが行なえる。各ウェルには独自のテストが 1 種類含まれている。また宿主 DNA、pan-bacterial DNA、 pan-fungal DNA およびポジティブ PCR コントロールが含まれ ている。 90 89 88 87 86 85 84 83 82 81 80 79 78 77 76 75 74 73 72 71 70 69 68 67 66 65 64 63 62 61 60 59 58 57 56 55 54 53 52 51 50 49 48 47 46 45 44 43 42 41 40 39 38 37 36 35 34 33 32 31 30 29 28 27 26 25 24 23 22 21 20 19 18 17 16 15 14 13 12 11 10 09 08 07 06 05 04 03 02 01 A B C D E F G H 12 11 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Sample 1

Host1 Host2 PanA/C PanB1 PanB2 PPC

* それぞれのアレイに含まれるアッセイの種類は弊社ウェブ サ イ トwww.qiagen.com/JP/Prod-microbial-dna-qpcr-arrays をご確認ください。 Antibiotic Resistance Genes (1901) Food Testing: Poultry (1101) Sepsis (1903) Bacterial

Vaginosis (1401) Food Testing: Seafood (1102) Urinary Tract Infections (1205)

Biodefense

(1201) Food Testing: Vegetable (1103) Vaginal Flora (1902)

Food Testing:

Dairy (1402) Intestinal Infections (1403) Water Analysis (1505)

Food Testing:

Meat (1202) Respiratory Infections (1404) Custom ̶ user-selected assay

panels

微生物検出および同定

Microbiome

Microbial DNA qPCR Assays および

Microbial DNA qPCR Assay Kits

リアルタイム

PCR ベースの微生物検出

■■ ■ 高感度および特異的な実験的に検証済みのアッセイ ■■ ■ 微生物種、毒性遺伝子、または抗生物質耐性遺伝子の検出 ■■ ■ シンプルなqPCR ワークフロー

Microbial DNA qPCR Assay は、定量リアルタイム PCR を実現する 2 種類

のPCR プライマー（各 10 µM）および 5'- 加水分解プローブ（5 µM）の

ミックスです。Microbial DNA qPCR Assay は特許取得済みで、実験的に

検証済みのアルゴリズムを用いてデザインされ、効果的なPCR と増幅条件

を提供します。高い効率を実現するため、ご使用の際にはMicrobial qPCR

Mastermixes および Microbial DNA-Free Water と併用してください。 Microbial DNA qPCR Assay Kits は、Microbial DNA Positive Control、Positive PCR Control、Microbial DNA-Free Water および Microbial qPCR Mastermix が含まれています。初めてのご使用される方にお勧めします。

製品名 Cat. no. 価格（￥）

Microbial DNA qPCR Assays 330025 69,500

Microbial DNA qPCR Assay Kit 330033 28,000

Microbial DNA qPCR Multi-Assay Kits

リアルタイム

PCR ベースの微生物検出または同定および

プロファイリング

■■

■ qPCR ベースの微生物検出用アッセイ、コントロールおよび試薬キット

■■

■ 実験的に検証済みのMicrobial DNA qPCR Assay を含む ■■

■ 5' 加水分解プローブを用いた感度および特異性の高い検出

Microbial DNA qPCR Multi-Assay Kits は、リアルタイム PCR ベースの微生 物検出のための完結したソリューションです。それぞれのキットには、定

量リアルタイムPCR を実現する 2 種類の PCR プライマー（各 10 µM）の

ミックスおよび1 種類の 5' 加水分解プローブ（5 µM）の Microbial DNA qPCR Assay が含まれています。さらに qPCR を成功させるために必要な Microbial DNA Positive Control、Positive PCR Control、Microbial DNA-Free Water および Microbial qPCR Mastermix も含まれています。

製品名 Cat. no. 価格（￥）

Microbial DNA qPCR Multi-Assay Kits Varies Varies

検出限界 vs 定量下限 グラフは検出限界（LOD）と定量下限（LLOQ）の違いを示し ている。LOD は陽性サンプルの 95％を測定できる下限濃度で あり、一方LLOQ は、標準曲線の直線上にのる下限濃度であ る。LOD はアッセイの精度に依存し、陽性サンプル量の決定 には少なくとも40 回の再現性が求められる。Microbial DNA qPCR Assays においては、アッセイの感度の決定には LLOQ で十分である。 複雑なメタゲノム試料中の定量にも有用な高感度Micorbial DNA qPCR Assays 数千におよぶ微生物種が混在する複雑なメタゲノム試料の定 量を、Microbial DNA qPCR Assays が各試料に応じて問題なく 行なえることを確認するため、糞便、歯垢、唾液を用いて測定 した。各々の試料には合成したテンプレートターゲットをス パイクし、テンプレートターゲットのみの場合とCT値を比較 した。PCR には次の各サンプルを使用：プールされたテンプ レートターゲットのみ、糞便、糞便にプールされたテンプレー トターゲット、歯垢、歯垢にプールされたテンプレートター ゲット、唾液、唾液にプールされたテンプレートターゲット。 糞便、歯垢、あるいは唾液のみの場合でCT値が35 以下のと きに ∆CTを算出した（例；糞便のみの場合のCT値– プールさ れたテンプレートターゲットのCT値）。この計算は全てのアッ セイに対して行なわれた。各アッセイにおいて ∆CTが3 より

小さいということは、Microbial DNA qPCR Assays の結果が、 複雑なメタゲノムのバックグラウンドの影響を受けていない ことを示唆している。 0 CT 40 38 36 34 32 30 28 26 24 22 20 LOD LLOQ y = –3.2647x + 39.73 R² = 0.9956 2 3 4 5 6

Log target copy number 1 Assay ΔCT ([metagenomic sample + synthetic template] – synthetic template) 6.0 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 0.0 -1.0 -2.0 -3.0 -4.0 -5.0 -6.0

微生物検出および同定

Microbiome

Microbial DNA Positive Control

Microbial DNA qPCR Assays でのポジティブコントロール

Microbial DNA-Free Water

Microbial DNA qPCR 製品と使用

Microbial DNA Positive Control は、各 Microbial DNA qPCR Assay のターゲットになることで、各 Microbial DNA qPCR Assay の機能性を検証する合成 DNA のプールです。Microbial DNA Positive Control は、10 倍濃縮で提供されるため、Microbial DNA-Free Water で希釈する必要があります。

Microbial DNA-Free Water は分子生物学グレードのヌクレアーゼフリー水で、ゲノム DNA のコンタ

ミを除去するためにフィルター滅菌とUV 処理がされています。品質はバクテリアおよび菌類 DNA

に反応するMicrobial DNA qPCR Assay のパネルで PCR により検証済みです。Microbial DNA-Free Water をテンプレートとして使用した PCR アッセイにおいてポジティブ反応が無い場合にロットが

検査を通過します。この厳密なプロセスはMicrobial DNA qPCR Assay または Array 実験の結果を

最も正しいものにさせることができます。

Supplemental Microbial qPCR Mastermix (Fluorescein) または

Supplemental Microbial qPCR Mastermix (ROX)

Microbial DNA qPCR Assays 用マスターミックス

Supplemental Microbial qPCR Mastermix は ROX または Fluorescein をリファレンス色素として用いる、 5' 加水分解プローブベースの検出のためのリアルタイム PCR アプリケーションに使用します。この supplemental mastermix は、Microbial DNA qPCR Array および Assay Kit で、自動分注システムを用 いる場合に必要な追加分のマスターミックスとしても使用できます。Microbial qPCR Mastermix は リアルタイムPCR バッファー、高性能なホットスタート DNA Taq ポリメラーゼ、ヌクレオチドが含 まれており、さらにご使用のサイクラーに合わせたFluorescein または ROX 色素が含まれているキッ トをお選びいただきます。化学修飾され厳密にコントロールされたホットスタート酵素は、プライ マーダイマーおよびその他の非特異的な産物の増幅を防ぐことで、比類のない正確な5' 加水分解プ ローブによる結果を提供します。

また、Microbial DNA qPCR Assays をご使用の際は、ご使用のサイクラーに合わせて Supplemental Microbial qPCR Mastermix をお選びください。

製品名 Cat. no. 価格（￥）

Supplemental Microbial qPCR Mastermix (Fluorescein) 330540 29,000

Supplemental Microbial qPCR Mastermix (ROX) 330530 29,000

Microbial DNA Positive Control 338134 6,800

食品試験ポートフォリオ

Food Safety Testing

Food Safety Testing

■■ ■ 改良CTAB 法により食品検体から DNA を迅速に精製 ■■ ■ 加工食品中の断片化したDNA でも効率的に精製 ■■ ■ グラム陰性菌および陽性菌を迅速かつ効率的に溶解 ■■ ■ 複合食品マトリックスからPCR 阻害物質を除去

mericon Sample Preparation Kits は、病原体の増菌培養液（mericon DNA Bacteria および Bacteria Plus

Kits）や生鮮／加工食品（DNeasy® _{mericon Food Kit）のような様々なサンプルから高品質な核酸を}

精製するようにデザインされています。複合食品マトリックスからのPCR 阻害物質の混入は最小限

に抑えられます。精製された高純度なDNA は、mericon PCR Assay Kits を用いてリアルタイム PCR

による原材料解析、病原体検出、GMO 中の DNA 検出や定量のようなアプリケーションに最適です。

mericon

™

_{Sample Preparation Kits}

増菌培養液および生鮮／加工食品からの高品質

DNA 精製

食品安全性試験ワークフローの2 つの流れ 病原体、遺伝子組み換え体、または動植物由来成分を使用するどのような試験であっても、mericon 食品安全性試験ポートフォリオは、 効率的なサンプル調製ワークフローと完全に標準化された検出プロトコールを備えたソリューションを提供。 微生物 増菌培養 mericon PCR Assays リアルタイムPCR による検出 テンプレートDNA

DNeasy mericon Food Kit

様々な食品タイプからの DNA 精製

mericon DNA Bacteria Kit

グラム陰性菌からのDNA 抽出

mericon DNA Bacteria Plus Kit

グラム陽性菌からのDNA 抽出 DNeasy mericon 96 QIAcube HT Kit 様々な食品サンプルからの ハイスループットDNA 自動精製 食品 サンプル mericon PCR アッセイ すべてのmericon リアルタイム PCR キットは同一 のサイクリング条件ですべてのターゲットに使用 できるよう標準化されています。 ■ 食品由来の病原体検出 ■ 原材料解析 ■ 遺伝子組み換え作物由来の DNA 検出 製品名 Cat. no. 価格（￥）

DNeasy mericon Food Kit (50) QIAcube 対応 69514 23,500

mericon DNA Bacteria Kit (100) 69525 17,000 mericon DNA Bacteria Plus Kit (50) 69534 17,000 DNeasy mericon 96 QIAcube HT Kit (5)

対応

QIAcube HT

69571 147,000

動物感染症の病原体検出

Animal & veterinary

Testing

Animal & veterinary Testing

■■ ■ ウイルスRNA/DNA、バクテリア DNA 精製を同じプロトコールで実現 ■■ ■ 全血、血清、組織など様々なサンプルに対応 ■■ ■ 未希釈の動物の全血中のウイルスRNA 精製にも最適 ■■ ■ 阻害物質や不純物を効率的に除去 ■■ ■ 分離した核酸はリアルタイムPCR/RT-PCR 解析に即使用可能

QIAamp cador Pathogen Mini Kit は、希釈されていない全血、血清、スワ

ブ、組織などの様々な動物サンプルからウイルスRNA/DNA やバクテリア DNA の精製を簡便化します。簡単で迅速なスピンカラム法により、コン タミや阻害物質を除去し、リアルタイムPCR や RT-PCR のようなアプリケー ションに即使用できる病原体由来の核酸を精製します。 ■■ ■ 簡便で信頼できる自動化精製により費用と時間の節約が可能 ■■ ■ 1 つの共通機器プロトコールでウイルス RNA および DNA、バクテリア DNA の抽出 ■■ ■ 全血、血清、組織など様々な動物サンプルに対応 ■■ ■ 阻害物質や不純物を効率的に除去 ■■ ■ 分離した核酸はリアルタイムPCR/RT-PCR 解析に即使用可能

cador Pathogen 96 QIAcube HT Kit は、QIAcube HT システムを用いた幅広

い動物サンプルからのウイルスRNA と DNA、バクテリア DNA の簡便な

自動精製を実現します。便利な96 ウェルフォーマットでの、実績のある

QIAamp のシリカメンブレンテクノロジーを用いることで、夾雑物および 阻害物が除去されたダウンストリーム解析に即使用可能な高品質の病原体 核酸が得られます。

QIAamp cador

™

_{Pathogen Mini Kit}

様々な動物サンプル種からウイルス

RNA/DNA およびバクテリア DNA を精製

cador Pathogen 96 QIAcube HT Kit

様々な動物サンプルからウイルス

RNA/DNA および

バクテリア

DNA のハイスループット自動化精製

動物感染症の病原体検出用アッセイ ■ ウイルス RNA 検出用アッセイ virotype シリーズ ■ バクテリア DNA 検出用アッセイ cador シリーズ bactotype Bovin e blood 1 _Bovine blood 2 Ovine bloo d Ovine serum Bovin e seru m Kidne y lysa te Liver lysate 40 38 36 34 32 30 28 26 24 22 20 18 16 BVDV CT

QIAamp cador Pathogen Mini Kit cador Pathogen 96 QIAcube HT Kit

Bovin e blood 1 Bovin e blood 2 Ovine bloo d Ovine serum Bovin e seru m Kidne y lysa te Liver lysate CT

QIAamp cador Pathogen Mini Kit cador Pathogen 96 QIAcube HT Kit 36 34 32 30 28 26 24 22 20 18 16 14 12 Salmonella ウイルスRNA とバクテリア DNA の同時分離 BVDV 粒子と Salmonella 細胞の一定量を、様々な動物サン プルに同時に添加した。サンプルは、QIAcube HT と cador Pathogen 96 QIAcube HT Kit で、あるいは QIAamp cador Pathogen Mini Kit を用いてマニュアルで並行して処理した。

同時に分離したウイルスRNA とバクテリア DNA は、自社アッ

セイを用いて同定した。A BVDV および B Salmonella での平

均CT値。エラーバー（3 replicates 抽出実験の± 1 SD）が小さ

いことは、両方の精製法が高精度であることを示す。

製品名 Cat. no. 価格（￥）

QIAamp cador Pathogen Mini Kit (50) 54104 25,000 QIAamp cador Pathogen Mini Kit (250) 54106 112,000 cador Pathogen 96 QIAcube HT Kit (5) 54161 122,000

pre-treatment Sample preparaiton Assay setup Detection

対応

QIAcube HT

対応