ヒ ト末 梢 血 単球 の走性 に関 す る研 究 第1編
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(2) 490. 片. 遊 液 を除 き,フ. ィ ル タ ー を と り出 し,メ. ル ア ル コ ー ル に て 固 定 を行 な い, Harris toxylin液 1l中. CO329とMgSO4209を. 間 反 応 させ た.エ. 脱 水 し, HSR液(国 作 製 した.実. っ た.第. Hema. 染 色 を 行 な い,単. チ ルア ル コー ル に て. の 方 法 に て 判 定 を行 な. 一 は 顕 微 鏡 下(オ. 400倍 に て,フ. リ ン パ ス, BH‑RFC). あ る平 面 に ま で 遊 走 し て き た 全 視 野 中 の 細 胞 数 (写 真1)を 数 え て,そ. フ ィ ル ター の 直 径 に そ っ て5視 の 平 均 数 をMonocyte. response(MCR)と. 野. chemotactic. して 表 わ した.第2は. フ ィ. 球 の 百 分 率 を求 め て み る と. あ り,両 者 間 に 差 は 認 め ら れ な か. っ た(表2).本. 法 に て12ccの 健 常 人 静 脈 血 よ り. 平 均2.4×106個. の 単 球 を 得 る こ とが で き た.. ま ず 最 初 に,反. 応 時 間 は90分,用. は3×105個,フ. RPMI. 1640の み で は, MCRは0.35. た が,. 10%ZAS溶. 液 で18.3±4.8,. ±6.1,. 50%で41.0±4.4で. 6.4と,. 20%を. こ え る とMCRは. に 顕 微 鏡 下 に 算 定 し, MCRと. 液 の‑30℃. 遠 く ま で 遊 走 し た2個. の細 胞 までの フ ィル ター. れ た. May‑Giemsa染. 0.5%で,好. お よぼ す. 製 の の ち,た あ る. 4週 間 で は32.6±1.9と. 2週 間 で な り, 2. 週 後 以 降 に 軽 度 の 低 下 が 認 め ら れ る も,有. 意の. の 単核 球 が 得 ら. 色 に よ りこ の 単 核 球 層 を. 分 類 す る と,単 球 は18.9±7.5%(平 偏 差)で,リ. ZAS作. 1週 間 保 存 で は36.7±5.7,. は33.5±3.1,. りFicoll‑Hypaque. 比 重 遠 沈 法 に て 平 均1.3×107個. 凍 結 保 存 に よ る, MCRに. 影 響 を 検 討 し た(表3).. の に 対 し,. 果. 健 常 者24名 の 静 脈 血12mlよ. 平 担化 した.次 液 を 用 い てZAS溶. だ ち に 使 用 し た 場 合, MCRは34.2±4.2で. 表 面 か ら の 距 離 を求 め る方 法14)で あ る.. 結. 20%で36.8. あ り, 100%で44.7±. に 同 一 条 件 に て20%ZAS溶. 最 も. 度 の 影 響 を検 討 し. ±0.2と 単 球 の 遊 走 は ほ と ん ど 認 め ら れ な か っ. ル タ ー の 裏 面 に ま で 遊 走 して き た 細 胞 数 を 同 様 し た.第3は. で遊. す る条 件 の もと. 球 走 性 に 対 す るZAS濃. た(図1).. い る単球 数. ィ ル ター 表 面 か ら30μmま. 走 し た 細 胞 数 を も っ てMCRと で,単. ィ ル タ ー の 上 面 よ り一 定 距 離 に. に 同 一 標 本 をPeroxidase‑Giemsa. 19.8±6.2%で. て 包埋 し標 本 を. 験 はす べ てtniplicateに て 行 な っ た.. 単 球 走 性 の 判 定:3つ. 男. た(表1).更. 含 む)の. 際 試 薬)に. 幹. チルア. に て15分 間 染 色 し,青 化 試 薬(蒸 留 水. にNa2. 中 で2分. 岡. 均値 ±標 準. ン パ 球79.0±7.0%,好 酸 球,好. 中 球0.2±. 塩 基 球 は 認め ら れ な か っ. 表1 Differential by Ficoll-Hypaque. counts. of mononuclear method. cells. obtained. Monocytee incubated ƒÊm depth. May-Giemsa. staining. (3•~105) were put for 90 minuite. below the top of. room at. and the. were 30. N=24. 図1. 表2 Percent monocytes by various method. in the upper MCR was counted the filter.. of in. normal individuals mononuclear cells. 表3. detected Influence Periods. n=24. of of. periods storage. stored. in. -30•Ž. on. Lymosan. activated. serum.
(3) ヒ ト末梢 血 単 球 の 走性 に 関す る研 究. 491. 反 応 時 間 の 単 球 走 性 へ の 影 響 を20%ZAS溶 3×105個. の 単 球 数,反 応 時 間90分,フ. 表 面 か ら30μmの も っ てMCRと 3),反. 液,. ィル タ ー. 距 離 に 遊 走 して き た 細 胞 数 で す る 条 件 の も とで 検 討 した(図. 応 時 間30分 間 で はMCRは4.0±2.4,. 分 間 で34.9±8.6,. 90. 180分 間 で47.6±14.2と. 時 間 の 延 長 と と も にMCRも. 反応. 大 き く な る が, 90. 分 以 後 で は そ の 増 加 も平 担 化 し て き た. 20%ZAS溶. 液, 3×105個. の 単 球 数,反 応 時 間. 90分 に て 反 応 させ た 同 一 標 本 に つ い て 算 定 方 法 Twenty percent NCR was counted. ZAS at. was the. used end incubation 30ƒÊm depth below. time was the top of. 90 the. minutes. filter.. に よ るMCRの 表4).顕. 図2. 変 動 に つ い て 検 討 し た(図4,. 微 鏡 下400倍 に て フ ィル タ ー の 表 面 下. 15μmに ま で 遊 走 して き た 細 胞 数 は, 84.9±17.7 個,. 30μmで. は41.9±4.1個,. 個,. 90μmで. は1.2±0.8個. 60μmで は6.5±4.0 で あ り, 60μmに な る. と急 激 な 減 少 が み られ た.次. にフ ィル ター の 表. 面 よ り最 も遠 く ま で 遊 走 し て き た2個. の細胞 ま. で の 距 離 を 求 め て み る と91.9±9.6μmで 厚 さ が 約130〜150μmあ い る と,裏. Twenty put depth. percent in. the below. ZAS upper the. was. used. room. top of. MCR the. and was filter. 3•~105 counted. monocytes at. the. るMillipore. あ り, filterを 用. 面 に ま で 遊 走 した 細 胞 は ほ と ん ど 認. were 30ƒÊrm. .. 図3 差 は 認 め ら れ な か っ た の で,以 作 製 後4週. 後 の 実 験 はZAS. 間 以 内 の も の を 使 用 し た.. 20%ZAS溶. 液 を用 い,反 応 時 間 は90分,フ. ィ. ル タ ー 表 面 か ら30μmま で遊 走 し た細 胞 数 で も っ てMCRと. す る 条 件 に て, chamberの. 入 れ る単 球 数 に よ るMCRの (図2).単. で4.6±3.0,. ×104個. 7.5. で15.8±2.6, で36.3±2.6,. 6×105個 と な り,単. で73.3±4.9 球 数 を増 加. さ せ る とMCRの. put. percent in. the. ZAS upper. was. room. used and. and were. 3•~105 incubated. monocytes for. were 90. minuits.. 図4. 変 動 を検 討 し た Comparison mothod. で7.8±3.8,. 1.5×105個 3×105個. Twenty. 表4. 球 数3×103. 個 で は, MCRは0,3× 104個. 上室 内に. 値 は. 正 比 例 し て 増 加 し た.. hetween. leading front two cells method and count the cells in a single plane.
(4) 492. 片. 岡. 写真1. 写真2. 幹. 男.
(5) ヒ ト末 梢 血 単球 の走 性 に関 す る研 究 表5 Comparison filter on. between monocyte. 493. す る 白 血 球 の 種 類 に よ り適 当 な 穴 の 径 を選 択 し. Millipore chemotactic. filter and response. Nuclepore. な け れ ば な ら な い. Keller 球 でMillipore 0.65μmで. H. U.16)等 は 多核 白血. filterを 使 用 した 場 合,穴. の径 が. は 細 胞 は わ ず か に フ ィル タ ー に 入 り込. む の み で, 1.2μmで. は じめ て フ ィ ル タ ー の 反 対. 側 ま で 遊 走 が 見 ら れ,単. 球 の 場 合 は5μm以. の 径 が 必 要 で あ る と述 べ て い る.そ. 上. の 他 の 報. 告17).18)にお い て も,単 球 を対 象 と し た 場 合, μmフ. μmの フ ィル ター を 用 い た 結 果,十 得 ら れ た.又 め ら れ な か っ た.又,ー 細 胞 数 と,最. 定 の 距 離 ま で遊 走 し た. も遠 く ま で 遊 走 し て き た2細. で の 距 離 と を 比 較 し た が,両 係 は 認 め ら れ な か っ た.同 てpore. 胞 ま. 者 の間 に は相 関 関 一 実験 条 件下 にお い. sizeの 同 じ も の を用 い てMillipore filter. とNuclepore. filterと を比 較 し た.. filterは 厚 さ が13μmとMillipore 常 に 薄 く,フ. Nuclepore. filterに 比 し非. ィ ル タ ー 中 に は 細 胞 は 認 め られ ず. (写 真2),細. 胞 は フ ィル ター の 上 面 に あ る か,. 5. ィル タ ー が 主 に用 い るの で,本 実 験 で も5 分 な遊 走 が. 用 い る フ ィ ル タ ー の 基 材 に よ り,. フ ィル ター の 性 質 が 異 な っ て く る.種. 々 あ るフ. ィル タ ー の 中 で, cellulose nitrate filter(Milli pore)とpolycarbonate. filter (Nuc1epore)の. 2種 が 最 も広 く使 用 さ れ て い る が, Mi1lipore fil terは 厚 さが130〜150μmあ. り,穴 は 入 り くん で. い る の に 対 し, Nuclepore. filterは 厚 さ が13μm. で,穴. は 円 形 で 膜 を 直 線 的 に 貫 通 し て い る.こ. れ ら 両 フ ィ ル タ ー を 比 較 す る た め に,全 条 件 で 実 験 を 行 な っ た と こ ろ, Millipore. く同 一 filter. あ るい は遊 走 して裏 面 に付 着 して い るか の いず. の場 合 は大 多数 の細 胞 は フ ィル ター 内部 に とど. れ か で あ っ た.そ こ で 顕 微 鏡 下400倍. ま っ て い る が,. Millipore. fi1terの 深 さ30μmに. た りの 細 胞 数 とNuclepore. に お い て,. お け る一視 野 あ. filterの 裏 面 に 附 着. Nuclepore. filterの. 場合 は フ ィ. ル タ ー 内 部 に と ど ま っ て い る 細 胞 は な く,フ. ィ. ル タ ー の 裏 面 に 多数 の 細 胞 が 遊 走 し て い た.こ. し て い る 細 胞 の 視 野 あ た りの 数 の 比 較 を行 な っ. の よ うな フ ィ ル ター の 反 対 側 に ま で 遊 走 し て き. た が(表5),有. た 細 胞 胞 数 を 算 定 す る 場 合,反. 意 の 相 関 は 認 め ら れ な か っ た.. 考. た 細 胞 が,フ. 案. 白 血 球 遊 走 能 の 測 定 法 に はchamberとfilter. ィ ル ター よ りは な れ て 下 室 へ 脱 落. し,遊. 走 細 胞 数 が 少 な く算 定 さ れ る 可 能 性 が あ. る.本. 実 験 に お い て もMillipore. を使 う 方 法12)と 寒 天 平 板 を 用 い る 方 法15)が あ る.. が 高 値 を 示 し た 例 でNuclepore. 後 者 は, random. 示 す 例 が あ り,こ. migrationを. る とい う利 点 が あ る が,し い る場 合 は2〜3時. 同時 に 観 察 で き. か し多核 白血球 を用. 間 の孵 置 で 十分 な遊 走 距離. を得 る こ とが で き る の に 対 し,単. 球 の場合 は遊. 走 能 力 が 好 中 球 に 比 し て きわ め て 低 く,反 長 時 間 を 要 し,か. 応に. つ 遊 走 距 離 が 短 い の で,測. 定. の 可 能 性 の 存 在 が 示 唆 さ れ た.. で 遊 走 し た 細 胞 の35〜95%が 落 す る と報 告 し て い る.又,フ. μmとNuclepore. のchamberを. 成 し 用 い た.こ. ス テ ン レス ス チ ー ル に て 作. のchamberは. 操 作 が 簡 単 で あ り,. ィル ター の厚 さ い. る フ ィ ル ター に よ り孵 置 時 間 も考 慮 し な け れ ば な ら な い. Millipore. well型. フ ィ ル タ ー よ り脱. は 細 胞 の 遊 走 距 離 と密 接 に 間 連 し て お り,用. こ で 著 者 はBoydenの. blind. filterでMCR filterで 低 値 を. さ ら に, Frei, P.C.19)等 は フ ィル タ ー の 反 対 側 ま. 誤 差 が 大 き く単 球 の 遊 走 測 定 に は 適 さ な い.そ 原 理 に 基 づ い て,. 対 側 まで遊 走 し. あ り,90分. filterは. 厚 さ が130〜150. filterに 比 し約10倍 の 厚 さ が. 間 の 孵 置 で は フ ィ ル ター の 反 対 側 ま. で 遊 走 し た 細 胞 は ほ と ん ど認 め ら れ ず,. 90分 間. 頻 回 の 使 用 に も耐 え ら れ る の で 日常 一 般 検 査 法. の 孵 置 で は 単 球 が フ ィ ル タ ー を通 りす ぎ て 下 室. と し て 使 用 す る の に 適 し て い る. Boyden. へ 脱 落 す る こ と は 考 え ら れ な い こ と な ど よ り,. berを 用 い る場 合,使. cham. 用 す る フ ィル タ ー は 対 象 と. Millipore. filterが 適 当 と考 え た..
(6) 494. 片. 単 球 走 性 を評 価 す る場 合,そ 々 考 え られ る. Millipore. 岡. の測 定 方 法 は種. filterを 用 い た場 合 の. 算 定 方 法 を 検 討 し た とこ ろ,フ. ィル ター の表 面. よ り一 定 の 距 離 に あ る 平 面 に ま で 遊 走 し て き た 細 胞 数 を算 定 す る方 法 で は,そ. 細 胞 数 が 多 す ぎ る た め,測. は遊 走. 定 誤差 が 大 きか っ た. り,測 定 不 能 症 例 もあ る こ とか ら,フ の 表 面 下30μmが. ィル ター. 最 も適 当 と考 え られ た.又. か ら 先 行 す る2個. 表面. の 細 胞 ま での 距離 を計 測す る. 方 法 も報 告14)さ れ て い る が,こ. の 判 定 法 で は,. フ ィ ル ター の 裏 面 ま で 遊 走 し た 細 胞 が2個 あ れ ば 遊 走 距 離 は フ ィ ル タ‑の り,フ. 男. 度 に な る と 平 担 化 す る こ と よ り,至. 適 濃 度 は20. %と 考 え た.. そ の他 の 実験 条件 を検討 した結 果,上 室 へ 入 れ る単 球 濃 度 とMCRは. 正 比例 を示 し,細 胞数. が 多す ぎる と検 鏡 時 に 遊 走細 胞 数 の 算安 が不 正. の 距 離 が60μm. 以 上 で は 細 胞 数 が 少 な す ぎ,又15μmで. 幹. 以上. 確 とな り,少 なす ぎて も誤差 が 大 き くな るため, 著 者 は採 血 量 を少 しで も少 な くす る こ とを も考 慮 に 入 れて, 3×105/mlの. 濃度 を使 用 した.反. 応 時 間 の影 響 は30分 では ほ とん ど遊 走が み られ ず, 90分 でか な り急 速 にMCRの. 増加 が み られ,. 以 後 は平 担 化 が み られ た の で,一 応90分 が至 適 反 応 時 間 と考 え た.. 厚 さに 等 し くな. 続 い て 問 題 と な る の は 末 梢 血 よ り単 球 を純 粋. ィ ル タ ー の 厚 さ 以 上 の 遊 走 能 力 を もつ 場. に か つ 障 害 を与 え る こ と な く分 離 す る方 法 で あ. 合 は 測 定 不 可 能 と な る.さ 等 はp‑nitrophenyl. ら にSwanson,. M. J.20). る.. Boyum,. A28)はFicoll‑Hypaque液. を, Bennet,. W. E.29)は ア ル ブ ミン を 用 い て 比 重 遠 沈 法 に て そ. 4‑chlorobuthyl‑phosphateに. よ る 多核 白 血 球 の 遊 走 の 抑 制 を観 察 し た 場 合,. れ ぞ れ21%,. 表 面 よ り一 定 距 離 ま で 遊 走 し た 細 胞 数 を算 定 し. て い る.著. た 場 合 に は た し か に 遊 走 の 抑 制 が 認 め ら れ る が,. 法 及 び 二 段 階 比 重 遠 沈 法 に よ り単 球 の 純 粋 分 離. 表 面 よ り先 行 す る2細. を 試 み た が,単. 合,遊. 胞 ま で の 距 離 を求 め た 場. 走 の 抑 制 は 認 め られ ず,反. 50〜80%の. 純 度 の 単 球 を分 離 し. 者 等30)も ア ル ブ ミ ン 重 層 液 比 重 遠 沈. 球 の 純 粋 度 は54.0%及. び76.0%. 対 に 充 進 して. で あ り,リ. ン パ 球 の 混 入 が み られ た.以. い る 結 果 を得 た と述 べ て お り,表 面 よ り一 定 の. 績 か ら,比. 重 遠 沈 法 の み に て 単 球 を リン パ 球 と. 距離 に まで遊 走 した細 胞数 を算定 す る方法 が よ. 完 全 に 分 離 す る こ と は 困 難 で あ る こ とが うか が. り良 い と報 告 し て い る.. わ れ た.そ. 白 血 球 に 対 す る遊 走 因 子 は 特 定 の 白 血 球 の み. 上 の成. こ で 単 球 の 純 度 を よ り高 め る た め に. 比 重 遠 沈 法 に て 集 め られ た 単 核 球 層 を さ らに ガ. を遊 走 させ る 因 子 もあ り,何 種 類 か の 白血 球 を. ラ ス 板 に 附 着31)さ せ た り,鉄 粒 子 を 貧 喰 させ て. 遊 走 させ る 因子 も あ る.こ. 分 離 す る方 法 が 試 み られ て い る.し. れ らの遊 走 因子 の 中. か しこれ ら. で 単 球 に 対 す る遊 走 因 子 に は 補 体 成 分 や リン パ. の方 法 は 回収 率 の低 下 や 単 球 の細 胞 機能 に損傷. 球 由 来 遊 走 因 子18),21)等が あ る.補 体 成 分 の 中 で. を与 え る た め に,以. 遊 走 因 子 と して 活 性 を もつ 部 分 はC5〜6複 合 体22),. 合 な 点 が 多 い.今. C523),24), C5の 断 裂 分 屑25),26)であ る等 報 告 され て. man18)等. き た が, Snyderman27)等. 遠 沈 法 を 用 い た.そ. は精 製 分 離 さ れ た モ ル. モ ッ トの 補 体 第5成. 分(C5)を. り断 裂 し て, C5aを. 産 生 し,こ. ト リプ シ ン に よ のC5aが. モルモ. 後の 実 験 に供 す るに は不都 回 著 者 はBoyum28),. Snyder. の 方 法 に 従 っ てFicoll‑Hypaque比 の 理 由 と して,一. 査 と し て 行 な う場 合,患 の あ る こ と か ら,で. 重. 般 臨床 検. 者 か らの 採 血 量 に 制 限. きる だけ 回収 率 の 良 い方 法. ッ トの 単 球 を 遊 走 さ せ る こ と を 認 め て い る. C5a. を選 ぶ 必 要 が あ り,そ. の 産 生 はZymosan5).22)やlypopolysaccharide23). 低 下 は や む を え な か っ た.本. が 補 体 のalternative. 活性 化 す る こ. れ た 細 胞 は 単 球 と リ ン パ 球 が ほ と ん ど で,好. 短 時 間 で 作製. 球 の 混 入 は ほ と ん ど認 め ら れ な か っ た. Ward,. と に よ り起 る.こ. pathwayを. の う ちZASは. 可 能 で あ り,又‑30℃. に て4週. 間,凍. 結保存 し. の ため に は単 球 の純 度 の 法 に よって 分離 さ. P.A.32)等 は モ ル モ ッ トの リ ン パ 節 細 胞 の 培 養 液. て も遊 走 活 性 の 低 下 は ほ と ん ど 認 め られ な い こ. を 遊 走 因 子 と して 用 い て,ラ. と な ど よ り 日常 検 査 に 適 し て い る. ZASの. 遊 走 が 認 め ら れ た と し て い る が,本. 濃度. が 単 球 の 走 性 に 及 ぼ す 影 響 を み る と, 20%稀 ま で は 走 性 は 急 峻 に 上 昇 す る が,20%以. 釈. 上の濃. 中. てNuclepore をMay‑Giemsa染. ッ トの リ ンパ 球 の 実 験 に おい. filterの 裏 面 に 遊 走 し て き た 細 胞 色 に て 観 察 し た が,遊 走 し た.
(7) 1. ヒ ト末 梢血 単球 の 走性 に 関す る研 究 細 胞 は す べ て 単球 で あ り,リ な か っ た.又 で お り,リ. ン パ 球 は 認 め られ. 細 胞 は フ ィル タ ー 上 に 一 層 に 並 ん ンパ 球 が 単 球 の 遊 走 に 物 理 的 障 害 を. お よぼ し て い な い こ とが 確 か め ら れ,リ の 混 入 は 問 題 な い と考 え ら れ た.し. ンパ球. か し好 中 球. の2者. 495. の 比 較 を行 な っ た. Nuclepore. 厚 さ が 薄 い た め,フ. filterは. ィル タ ー の 裏 面 に 遊 走 し た. 細 胞 の 脱 落 が 示 唆 さ れ た.し か しMillipore filter は 厚 さ が 十 分 あ り,遊. 走 細 胞が フ ィル ター 内 に. と ど ま っ て い た.. は 遊 走 能 を有 し て お り,フ. ィル タ ー 内 で は 単 球. 3). と の 鑑 別 が 困 難 な た め,好. 中球 の 混 入は 禁 忌 で. に あ る平 面 に 遊 走 した 細 胞 数 と 先 行 す る2細. あ る が,本. 法 に お い て は 好 中球 の 混 入 は ご く低. 率 で あ っ た.分. 離 した 単 核 球 層 中 の 単 球 の 同 定. 方 法 と して はPeroxidase‑Giemsa染. 色 が リン パ. Millipore. filterを 用 い た 場 合,一 定 の 深 さ. ま で の 距 離 を算 定 す る2種 る と,後. 胞. の算 定方 法 を比較 す. 者 の場 合 フ ィル ター の厚 さ以上 の遊 走. 能 力 を もつ 細 胞 の 算 定 は 不 可 能 と な る た め,前. 球 と の 鑑 別 が よ り容 易 で あ り, May‑Giemsa染. 者 の 方 法 に よ り,表. 色 よ り も有 用 で あ っ た.. した 細 胞 数 を算 定 す る の が 最 も適 当 で あ っ た.. 結. 4). 論. chamberの. も3×105個 日常 的,臨. 床 的 検 査 と し て ヒ ト末 梢 血 単 球 の. 面 よ り30μmの. 上 室 に 入 れ る単 球 数 は 少 な く と. が 必 要 で あ り,孵 置 時 間 は90分 が 適. 当 で あ っ た.又. 遊 走 因 子 と し て 用 い たZymosan. 遊 走 能 の 測 定 法 を確 立 す る た め に 基 礎 的 実 験 条. 活 性 化 ヒ ト血 清 は20%以. 件 の 検 討 を 行 な っ た.. 十 分 な 遊 走 が 得 ら れ た.. 1)単. 球 の 分 類 はFicoll‑Hypaque比. に よ り行 な い,単. 核. 球 中 の 単 球 の 同 定 はPeroxidase‑Giemsa染 色 や,貧. 色 喰 細 胞率. を求 め る方 法 よ り確 実 で あ っ た. 2)遊 pore. 走 能 の 測 定 はBoyden filter及 びNuclepore. 上 の稀 釈 濃 度 が あれ ば. 重 遠 沈法. 核 球 層 と し て 採 取 し た.単. に よ る 方 法 がMay‑Giemsa染. 深 さに遊 走. 本論 文 を擱 筆 す る に あ た り,御 懇 篤 な る御 指 導 な らび に御 校 閲 を賜 わ っ た 恩 師 木 村 郁 郎 教 授 に 深 甚 の 謝 意 を表 します.ま. た,終 始 御 懇 篤 な る御 指 導 を賜. わ っ た大 熨泰 亮 講 師,中 田安 成 講 師 に 深 謝 します.. chamberとMilli. な お本 論 文 の要 旨 は 第40回 日本 血 液 学 会 総 会(昭. filterを 使 用 し,こ. 和53年 岡 山)に お い て 発 表 した.. 文. 献. . Oppenheim, J. J. and Seeger, R. C.: The role of macrophages. in the induction of cell mediated immuni. ty in vivo. In Immunobiology of the Macrophage, ed. D.S. Nelson, Blackwell, Oxford,. pp. 112-130 ,. 1976. 2.. Nelson, D.S.:. responses. In Macrophages and Immunity, ed . A. Publishing Company , Amsterdam, pp. 275-318, 1969. King, G.W., File, B. S. and LoBuglio, A. F.: Normal human monocytes inhibit tumor cell growth in vitro. Neuberger. 3.. Macrophages. J. Allergy Clin. Immunol. 4.. and immunological. and E.L. Taum, North-Holland. 62, 283-288,. 1978.. King, G.W., Para, M. F., LoBuglio, A.F. and Sangone Jr., A. L.: Human monocyte 17, 282-289 , 1975. Monocyte function,in man.. metabolism:. Male. vs. female. J. Reticuloendothel. Soc. 5. Territo, M. C. and Cline, M. J.: 6.. Cline, M. J. and Lehrer, R.I.:. 7.. Lehrer, R. I.:. Phagocytosis. The fungicidal mechanisms. and myeloperoxidase-independent 8.. by human monocytes. of human monocytes.. candidacidal mechanisms.. Steigbigel, R. T., Lambert, Jr., L. H. and Remington, J. S.: normal human monocytes.. 9.. Harris, H.:. J. Immunol.. J. Clin Invest.. 53, 131-142,. Mobilization of defensive cells in inflamatory. Blood. 118, 187-192,. 1977.. 32, 423-435,. 1968.. I. Evidence for myeloperoxidase-linked. J. Clin. Invest.. Phagocytic. 55, 338-346,. and bactericidal. 1975.. properties. 1974.. of. tissue.. Bactenol. Rev.. 24, 3-15,. 1960..
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(9) ヒ ト末 梢 血単 球 の 走性 に関 す る研 究 27. Snyderman, R., Shin, H. S. and Hausman, M. H.: Proc. Soc. Fxp. Biol. Med. 28. Boyum, A.:. 138, 387-390,. Isolation of mononuclear. nuclear cells by one centrifugation, at Ig.. Scand.. 123, 145-159, 30.. 中 田 安 成,高 離.臨. and of granulocytes 97, 77-89,. from human blood.. by combing centrifugation. Isolation. of mono. and sedimentation. 1968.. The isolation and selected properties. of blood monocytes.. 川 修 身,片. 730‑734,. J. Fxp. Med.. 岡 幹 男,大. 熨 泰 亮,木. 村 郁 郎:比. 重 遠 沈 法 に よ る ヒ ト末 梢 血 単 球 の 分. 1978.. 31. Koller, C.A., King, G.W., Hurtubise, P.E., Sagone, A. L. and LoBuglio, A.F.: adherent human mononuclear. cells.. J. Immunol.. 111, 1610-1612,. 32. Ward, P. A., Offen, D. and Montgomery, J. R.: Chemoattractants to lymphocytes.. leukocytes.. 1966.. 杉 健 太,金. 床 免 疫10,. factor for mononuclear. 1971.. cells and granulocytes. J. Clin. Lab. Med. (Suppl.). 29. Bennett, W. E. and Cohn, Z.A.:. A chemotactic. 497. Fed. Proc.. 30, 1721-1724,. 1971.. Characterization. of glass. 1973.. of leukocytes,. with special reference.
(10) 498. 片. Studies. on human. 岡. 幹. peripheral. Part. I.. Second Department. The. human studied. monocyte pared. monocyte in. vitro.. chemotaxis by. Peroxidase-Giemsa. sized. Millipore. the. Millipore. cells method. using. room. of. mosan. the. ƒÊm. man,. of Internal. depth.. was. from a. the. report, using. used, filter. a. in. member. of. describe. a. Boyden. and. migrated when. the more. duration. serum. diluted. Millipore. a. cells. of 20 filter,. the. host. purity was. Nuclepore. stayed. 90. migrated. was. suspension. the. suspension. was. using. a. while. it. used.. In. modified. had. used cells. to. as in. the. the filter. be. checked. appeared. added for. pre. pore When. filter,. adequate. for. 5ƒÊm. (thickness:13ƒÊm).. the. been. was. the. was. has. method. was. monocytes. minutes. percent. of. but. simple. performed filter. in filter. system,. and. Monocyte. The. 3•~105. defence. reproducible. assay. Nuclepore than. Japan.. chamber.. Chemotaxis. the. the. Medicine, Okayama. I. Kimura). sedimentation.. filter, and. human. I. 150ƒÊm). Millipore. chamber,. chemotaxis. important. gradient. filter(thickness:. activated. estimate. this. study. Medical School, Okayama,. staining.. filter. detached. an. in. Ficoll-Hypaque. with. is In. chemotaxis. KATAOKA. (Director:. little. monocyte. A technical. Mikio. University. 男. to. that Boyden. the. upper. incubation.. Zy. chemoattractant. were. counted. To at. 30.
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