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RT-PCR法によるヒトT細胞抗原レセプターVβの解析

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Academic year: 2021

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141 量した,また半割したもう一方の検体は,迅速に凍結 後,avidin・biotin affinity法による免疫組織染色を行 い,サイトカインの局在をみた.結果:培養上清中の IL−1, IL・6, GM, CSFは乾癬皮疹部に比べ無疹部で増 加,TGF一αは逆に無疹部に比べ皮疹部で増加してい た.以上より,IL1, IL・6, GM・CSFは乾癬の病巣形 成の初期に作用し,速やかにdown−regulateされるこ と,TGF一αは皮疹形成後の維持に作用することが考 えられた.  8.Mycoρ’∂sm∂ρηeσmoη’∂e感染症における

DNAプローブ法の検討

    (小児科)       江波戸景子・横田 和子・伊藤知賀子・       安部 美希。石井のぞみ・近藤 恵里・

      崔信明・坂内優子・関千夏・

      中野 育子     (ラジオアッセイ科)       岩近千津子・出村 黎子     (微生物学免疫学)       内山 竹彦・荒目美奈子  吻60ρ如s窺α伽磯〃zoη伽(以下乃4.ρη)感染症にお けるDNAプローブ法について検討した.咳鳳,発熱等 の臨床症状,血液検査,胸部レントゲン所見からル1.御 感染症と考えた33例について,Genprobe社開発の肺 炎マイコプラズマDNAプローブ「中外」を用いて,ル1.

御のrRNAを検出した.DNAプローブ法は陰性コン

トロール比3.0以上を陽性と判定した.33例中,陽性24 例,陰性9例であった.陽性例と陰性例では,重症度, 血液検査所見,検体採取病同等に有意差を認めなかっ た.検体採取以前に,有効抗生剤を投与されていた11 例では陽性率は50%であったが,有効抗生剤非投与例 では80%であった.DNAプローブ法は, CF, PHA等 の庫清抗体価が上昇する以前にも,陽性となることか ら,早期診断に有用と思われる.しかし,有効抗生剤 投与により陽性率が低下することから,血清診断との 併用によって,確定診断を行う一方で,早期治療を有 効に行うことが可能となると思われる.  9.C①mplete ass①ciation with HLA−DR4 and insu藍in−processing to stimulate proliferatio皿of autologous T cells i皿the insulin autoimmune syn・

drome

    (糖尿病センター)       内潟 安子・平田 幸正・大森 安恵  昨年の本談話会で発表したように,インスリン自己 免疫症候群(IAS)患者は調べた限り全員がHLA−DR4 を保持していた.その後日本人30名,さらに韓国人2 名,台湾人1名のIAS患者を調べたが,すべてHLA−

DR4をもっていた.これらのDR4をDNAダイビング

してみたところ,すべてDRB1*0406であり,DQは日 本人においてこれと連鎖不平衝を示すDQA1*0301/ DQB1*0302であった.すなわち, IAS患者すべてが DRB1*0406/DQA1*0301/DQB1*0302をもつこと がわかった.そのうちの7名について,autologous MLR試験をしてみた. Antigen−presenting cellに40 μMのインスリンを/8h exposureした後,同一患者の Tcellsを加え6 days incubateした.最後の18hに加 えた3H−thymidine uptakeをよインスリン非存在下やグ ルカゴン添加時に比べ10−20倍となった.HLADRB1 *0406/DQA1*0301/DQB1*0302由来の分子がイン スリンの提示と認識の際,有意な拘束性を示すことが わかった.  10.IgA腎症におけるICAM・1の発現について     (第四内科)       浅野美和子・湯村 和子・大図 弘之・       内田 啓子・川嶋  朗・新田 孝作・       二瓶  宏  糸球体腎炎の発症進展を考える上で,糸球体の主要 な構成細胞である血管内皮細胞一白血球等の相互作用 の関与は重要と思われる.特に炎症増強時,リンパ球, 白血球浸潤に重要な役割を持つと考えられる接着分子 ICAM−1(intercellular adhesion molecule−1)の腎組 織内での発現を検討した.ICAM・1に対するモノクロ ナール抗体を用い,正常コントロール4例,ループス 腎=炎9例,IgA腎症10例,微少変化群6例,膜性腎症 6例を蛍光抗体間接法により染色した.正常コント ロール群では,ほぼ全例でICAM−1が染色された.陽性 所見はぞ糸球体三二壁,尿細管周囲の毛細血管,メサ ンジウム領域に認められ,IgA腎症では,尿蛋白が多 い症例,組織障害が強い症例で強く染色される傾向を 認めた.今後,腎生検で得られた新鮮凍結切片を利用 し,PCR法(polymerase chain reaction)によって ICAM4の確認,その他これらの調節因子とされるサ イトカインの関与を検討する予定である.  11.RT−PCR法によるヒトT細胞抗原レセプター Vβの解析     (微生物学免疫学)       加藤 秀人。八木 淳二・       今西 健一・内山 竹彦 一1055一

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142  ブドウ球菌や連鎖球菌外毒素(SEs, TSST・1, SPE− A)はヒトやマウスのMHCクラスII分子に直接結合 し,この複合体を特定のVβをもつT細胞が認識して 活性化される.さらに,これらの抗原の種類によりVβ が特定されることも判明した.これらの抗原とT細胞 間の認識機構を究明する目的で我々は,22種類のヒト Vβ特異的プライマーを用いたPCR法によりこれを 定量した.その結果,Kappler等の同様な実験結果 (Proc Natl Acad Sci USA 86:8941−8945,1989)と ほぼ同じであった.若干の違いは,SEBで刺激したと きVβ13.2陽性細胞が,SEEで刺激したときVβ16陽 性細胞がそれぞれ増加していた点である.これらの違 いは日本人特有のものであるかもしれない.  12.EBウイルスのウサギ眼感染実験における抗体 の推移     (第二病院眼科)       亀井 裕子・宮永 嘉隆     (日本医大微生物免疫)       渡理 英二・高橋めぐみ  我々はEpstein−Barrウイルス(EBV)をウサギ眼硝 子体中に注入することにより,EBV特異抗原に対する 抗体が上昇することをすでに報告している.今回は, ウサギに対するEBV感染についてさらに検討する目 的で,初期抗体の推移,抗体価の長期的推移,PCR法

を用いた眼局所におけるEBVの消長の検討を行っ

た,実験には白色ウサギ,EBV感染B95・8細胞(予研 分与株)を用い,抗体価の測定は蛍光抗体法にて VCA, EAに対する抗体について検討した.その結果, EBVを硝子体に注入することにより,免疫学的一時応 答,ならびに二次応答が惹起されることが確認された. また,注入されたEBVは少なくとも3日は眼局所に とどまっており,EBV注入眼を注入後24時問目に摘出 しても抗体が上昇することが確認された.EBVがいか なるメカニズムで抗体産生系に取り込まれるかについ ては,今後さらに検討を重ねる必要がある,  13.ミエリン塩基性タンパクの免疫特異部位につい て     (脳神経センター神経内科)       太田 宏平・清水 優子・江島 光彦・       田中 久恵・植田 美加・大橋 高志・       丸山 勝一  ミエリン塩基性タンパク(MBP)は強い脳炎惹起性 を有するが,その抗原特異部位は,例えば,アレルギー 性実験性脳脊髄炎では動物の種,系統で異なっている. 一方,ヒトの場合はこの検討はまだ不充分であるが, 本研究では日本人のMBPの免疫特異部位について検 索し,これまで主に欧米人で報告されたMBPの免疫 特異部位と比較検討した.その結果,日本人健常成人

のMBPに対するTcellの出現頻度は短期Tcellク

ローニング法では約4%と欧米人のそれと変わりがな かった.また,MBP反応性Tcell lineの抗原特異部 位の検討では欧米人で報告されたMBPアミノ酸配列 の84∼102,143∼168に対し多数のTcell lineが特異 的反応を示した.このことより,ヒトMBPの抗原特異 部位は,人種を越えて共通である可能性があると考え られた. 一1056一

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