気管支喘息における遅発型気道反応の機序に関する研究　第2編　Candida 抗原による遅発型気道反応局所の細胞反応及びロイコトリエンの変動

気管支 喘 息 におけ る遅発型気道 反応 の

機 序 に関 す る研究

第2編 Candida抗 原 に よ る 遅 発 型 気 道 反 応 局 所 の 細 胞 反 応 及 び ロ イ コ ト リ エ ン の 変 動 岡 山 大 学 医 学 部 第 二 内 科 学 教 室(指 導:木 村 郁 郎 教 授) 難 波 一 弘 (平成4年11月25日 受 稿)

Key words: Candida antigen, bronchoalveolar lavage, inflammatory cell, late asthmatic response, leukotrienes

緒 言 臨 床 上 最 も解 決 の 急 が れ て い る疾 患 の 一 つ に 重 症 難 治 性 喘 息 が あ る が,そ の病 態 は わ れ わ れ の 一 連 の研 究1-6)に よ りか な り明 確 に な っ て きて い る も の の な お 不 明 な 点 が 多 い .一 方,抗 原 の 吸 入 誘 発 試 験 後3-10時 間 後 に起 こ る遅 発 型 気 道 反 応(LAR)の 発 症 機 序 に つ い て は,以 前 の Pepysら の 報 告7)か ら もLARはIARに 比 べ 発 作 が 長 時 間 持 続 し,治 療 剤 に 対 す る 反 応 性 の 鈍 さ,ス テ ロ イ ド剤 の 有 効 性 な どの 臨 床 像 か ら, LARの 機 序 と重 症 難 治 性 喘 息 の 病 態 との 間 に 共 通 した 基 盤 の 存 在 す る こ と が 容 易 に 想 定 され て い る.ま た 成 人 喘 息 患 者 で はCandidaの 遅 発 型 ・ 遅 延 型 反 応 陽 性 率 が 高 く8),特に 重 症 難 治 群 で は BALF中 リン パ 球 のCandida抗 原 に 対 す る 幼 若 化 反 応 の 亢 進9)やIL-2産 生 能 の 亢 進10)な ど の 教 室 の 一 連 の 成 績 よ り,リ ンパ 球 を 中 心 と し た 炎 症 細 胞 か らのCandida抗 原 に 対 す るⅣ 型 ア レ ル ギ ー 反 応,す な わ ち サ イ トカ イ ン の 産 生 亢 進 が 重 症 難 治 化 の 一 因 を な して い る とい う こ と が 示 唆 さ れ,Candidaは 第1編 で検 討 を加 え た HDよ り も さ ら に 喘 息 の 重 症 化,難 治 化 と よ り 密 接 に 関 与 して い る と想 定 さ れ る. 従 っ て,本 編 で はCandidaが 原 因 抗 原 と考 え ら れ る気 管 支 喘 息 患 者 にCandida抗 原 の 吸 入 誘 発 試 験 を施 行 し,遅 発 型 気 道 反 応 が 発 現 し た 後 に 気 管 支 肺 胞 洗 浄(以 下BAL)を 施 行 し,BAL 液(以 下BALF)中 の 細 胞 成 分 比 率 と化 学 伝 達 物 質 と してleukotriens(以 下LTs)を 測 定 し た.同 時 に,経 時 的 に 採 取 し た 末 梢 血 中 顆 粒 球 比 率 やLTsの 変 動 と遅 発 型 気 道 反 応 との 関 連 性 に つ い て も検 討 を 加 え,興 味 あ る知 見 を 得 た の で 報 告 す る. 対 象 と 方 法 1.  対 象 当 院 外 来 通 院 中 の 気 管 支 喘 息 患 者 の う ち, Candidaの 遅 発 型 あ る い は 遅 延 型 皮 膚 反 応 が 陽 性 で,検 査 前12時 間 以 上 気 管 支 拡 張 剤 な どの 服 用 を 中 止 し て も発 作 の 認 め ら れ な い症 例 に つ い てCandida抗 原 の 吸 入 誘 発 試 験 を実 施 し,吸 入 3-12時 間 後 に 発 作 の み ら れ たLAR陽 性 例 の う ち,検 査 内容 と意 義 を説 明 し承 諾 の 得 られ た 9例 を対 象 と し,入 院 の 上,以 下 の検 査 を行 っ た.な お,対 象 症 例9例 の ア レ ル ギ ー 学 的 背 景 と して は,Table 1に 示 す ご と く男4例,女5 例,平 均 年 齢42.56±10.41歳 で あ り,血 清IgE 値 は平 均478.03±498.73IU/ml, Candidaに 対 す るIgEのRAST scoreは1例 の み3+で あ っ た が,他 の8例 は 陰 性 で あ っ た.ま た 沈 降 抗 体 も1例 の み が 陽 性 で あ っ た.9例 は す べ て 過 195

196難 波 一 弘

Table 1 Characteristics of patients with bronchial asthmatics examined by bronchial provocation test with Candida extract.

Table 2 The percentage of recovery and total cell count in BALF after bronchial inhalation in each case of Candida extract. 去 に 重 症 発 作 の 既 往 が あ る もの の,今 回 の 検 査 前1年 間 の 重 症 度 は 中 等 症 で,比 較 的 コ ン トロ ー ル 良 好 な 状 態 に あ り_{,経 口,吸 入 の ス テ ロ イ} ド剤 は 少 な く と も検 査 前1ヵ 月 間 は 使 用 して い な か っ た. 2.  方 法 抗 原 に よ る吸 入 誘 発 試 験 の 方 法 と しては,Can dida抗 原 乾 燥 末(鳥 居 薬 品 製)を 用 い て,ア レ ル ギ ー 学 会 の 『気 管 支 喘 息 に お け る吸 入 試 験 の 標 準 化 案 』11)基づ い て行 な っ た.か か る試 験 の 判 定 基 準 は,吸 入 後12時 間 ま で 経 時 的 にFEV1.0を Pulmonary function indicator (米 国NCG社 製)に て,ま たpeak expiratory flow rate

(PEFR) をMini light peak flow meter(英

国 ク レ メ ン ト・ク ラー ク社 製)に て 測 定 し,FEV1 .0 及 びPEFRが20%以 上 低 下 した場 合 を陽 性 と し た.な おFig. 1の ご と く,本 試 験 実 施 の 一 ヵ 月 以 上 前 に あ ら か じめ 吸 入 抗 原 濃 度 及 び,LAR発 症 ま で の 時 間 を知 る 目的 で,予 備 吸 入 誘 発 試 験 を実 施 して お き,そ の 後 同 じ閾 値 濃 度 に て,抗 原 吸 入 誘 発 試 験 を行 な っ た.す な わ ちCandida 抗 原 の ×106希 釈 液2.0mlをDevilibiss Model 646 Neblizerに 入 れ 吸 入 誘 発 試 験 開 始 液 と し, 即 時 型 気 道 反 応 が 認 め られ な い 場 合 は 順 次10倍 ず つ 濃 度 を あ げ,最 高 吸 入 濃 度 で あ る ×103ま で の 各 濃 度 液 を2分 間 ず つ 吸 入 し た.な お,今 回 の 対 象 症 例 で は本 試 験 約1ヵ 月 前 に あ ら か じめ 行 っ た 吸 入 試 験 に お い て,全 例Candida抗 原 で

Fig. 1 Procedure of BAL-examination in late asthmatic response の 即 時 型 気 道 反 応 が 認 め ら れ な か っ た ため,本 試 験 の 際 に は最 初 か ら ×103液 を2分 間 吸 入 させ た.ま た 吸 入 試 験 開 始 前,40分 後,3時 間 後 及 び,LAR発 作 時 に 末 梢 血 を採 取 し,末 梢 血 中 細 胞 成 分 及 びLTsを 測 定 した.さ らにLAR発 作 を約1時 間 観 察 し た 後 に,キ サ ン チ ン 製 剤, β-刺 激 薬 な ど を用 い て 治 療 を行 い,理 学 的 所 見 及 び 自覚 症 状 が 改 善 し,PEFR値 が 吸 入 誘 発 開 始 前 と ほ ぼ 同 様 の 値 に 回復 した こ と を確 認 し た 後 にBALを 施 行 し た.な お,対 照 と して は, 各 々 の 症 例 に つ い て 吸 入 試 験 未 施 行 で 非 発 作 の 時 期 にBALを 施 行 し,BALF中 へ の 出 現 細 胞 比 率 とLTsを 測 定 し た(Table 2). BALの 方 法 は 気 管 支 フ ァ イ バ ー(オ リン パ ス BF1T10)を,右 中葉 に 喫 入 し て 生 理 食 塩 水50 mlを 注 入 ・吸 引 を4回 繰 り返 し,洗 浄 液 を 回 収 し た.か か るBALFの うち5mlを 直 ち に 氷 冷 し た 純 エ タ ノー ル20mlと と も に 遮 光 し た 遠 沈 管 内 で 混 和 し,窒 素 ガ ス に て 置 換 後 密 封 し,LTs測 定 ま で-80度 に て保 存 した.ま た,BALF中 の 細 胞 成 分 は,オ ー トス メ ア(小 西 六 写 真 社 製CF -12SB)に _{て 塗 抹 標 本 を作 製 し,May-Giemza} 染 色 を 行 い 強 拡 大(×1000)に て 検 鏡 し た.末 梢 血 は,抗 原 吸 入 前,抗 原 吸 入40分 後,3時 間 後,及 びLAR発 作 出 現 後 の 合 計4回 採 取 し, 直 ちに そ の10mlを 純 エ タ ノ ー ル40mlと 混 合 し, BALFと 同 様 の 処 理 を行 な っ た.ま た,同 時 に 白 血球 数,細 胞 比 率 な どの 算 定 も行 な っ た.LTs の 測 定 は,BALF,末 梢 血 と も に400×gで10分 間 冷 却 遠 沈 し,エ タ ノー ル 層 をSEP-PAC C18 (Waters社 製)に て2回 処 理 した後 蒸 発 乾 固 し, 50%ア セ トニ ト リル500μlに 溶 解 して再 度 冷 却 遠 沈 し,そ の 上 清 を 高 速 液 体 ク ロ マ トグ ラ フ ィー (HPLC)に 注 入 し てLTC4, LTD4, LTB4を 定 量 し た. 得 られ た 数 値 は す べ てmean±SEMに て 表 し た.統 計 学 的 検 討 はStudents t-testに て 行 い p<0.05を 有 意 差 あ り と した. 結 果 1.  BALF中 出 現 細 胞 成 分 の 検 討 ま ず,今 回検 討 し たBALF中 出 現 細 胞 数 及 び 回 収 率 は,非 発 作 時 に は6.2±1.027×106cell/l と54.667±4.309%,ま たLAR発 作 後 のBALF で は14.144±4.484×106cell/l並 び に42.178± 4.596%で あ っ た. 次 に,ア レ ル ギー 反 応 局 所 で あ るBALF中 へ の 各 細 胞 成 分 の 出 現 率 に つ い て 検 討 した 結 果, Fig. 2の ご と く好 中 球 に つ い て は 対 照 の 吸 入 試 験 未 施 行 で 非 発 作 時 のBALFに は1.70±1.31% の 出 現 率 で あ っ た が,Candidaの 吸 入 誘 発 試 験 後 で は2.07±1.24%と や や 増 加 す る傾 向 に あ っ た.ま た,好 酸 球 に つ い て も非 発 作 時 のBALF 中 に は3.30±2.66%の 出 現 が み ら れ,ま たLAR 後 のBALF中 に は6.84±5.44%と 推 計 学 的 に有 意 に 増 加 して い た(p<0.05).好 塩 基 球 ・肥 満 細 胞 系 は 非 発 作 時 のBALF中 に0.013±0.013 %, LAR発 作 後 のBALF中 で は0.14±0.040 %と 有 意 に 増 加 し て い た(p<0.01).さ ら に リ ン パ球 に つ い て み る と,非 発 作 時 が16.86±3 .96 %と 既 に 高 値 を示 し,LAR発 作 後 は15.00±4.00 %と ほ とん ど変 動 を 認 め な か っ た. 2.  BALF中LTsの 検 討 BALF中 のLTsを 測 定 す る とFig. 3の ご と

198難 波 一 弘 く,ま ずLTC4は 吸 入 試 験 未 施 行 で 非 発 作 の 時 期 に8.70±4.724ng/ml,で あ っ た の に 比 し て, LAR後 で は さ ら に36.96±11.42ng/mlと 増 加 し て お り推 計 学 的 に 有 意 に 高 値 を 示 し た(p< 0.01).一 方,LTD4は 吸 入 試 験 未 施 行 時,LAR 後 と も に ほ と ん ど測 定 で きず,LTB4も 非 発 作 時 に は ほ と ん ど測 定 し え な か っ た が,LAR後 に は 0.06±0.05ng/mlと や や 増 加 し て い た. 3.  末 梢 血 中 出 現 細 胞 の 経 時 的 変 動 の 検 討 吸 入 誘 発 試 験 直 前,40分 後,3時 間 後,及 び LAR時 の 末 梢 血 中 各 種 顆 粒 球 の 変 動 につ いて 検 討 し た 結 果,ま ず 好 中 球 はFig. 4の ご と く3時 間 後 ま で は 次 第 に 漸 増 しLAR時 に は 減 少 し て い た.ま た 好 酸 球 は,Fig. 5の 如 く吸 入 誘 発 試 験 前,40分 後,3時 間 後 ま で ほ とん ど 変 動 を示 さ な か っ た が,LAR発 作 時 に は 軽 度 に 減 少 す る 傾 向 が あ っ た(p<0.05).好 塩 基 球 は 好 中球 と 同 様 に 吸 入 誘 発 試 験 前 か ら3時 間 後 まで 漸 増 し, LAR発 作 時 に は 減 少 す る傾 向 が 窺 わ れ た.

Fig. 2 Cellular components

in BALF

of asth

matics with late responses after Candida

allergen challenge. (n=9)

4.  末 梢 血 中LTsの 経 時 的 変 動 の 検 討 まず 直 接 気 管 支 平 滑 筋 を収 縮 させ る作 用 の あ るLTC4の 末 梢 血 中 で の 経 時 的 変 動 は,Fig. 6 の 如 く吸 入 誘 発 試 験 前,40分 後,3時 間 後 に 比 してLAR発 作 時 に 有 意 に 増 加 し て い た(p< 0.01).ま たLTD4に つ い て は,吸 入 試 験40分 後

Fig. 3 Concentration of LTB4, LTC4 and LTD4 in BALF of asthmatics with late responses after Candida allergen inhala

tion. (n=9)

Fig. 4 Change in the percentage of neutrophils in peripheral blood of asthmatics with late responses after Candida allergen inhalation. (n=9)

Fig. 5 Change in the number of eosinophils and

basophils

in peripheral

blood of asth

matics with late responses after Candida

allergen inhalation.

(n=9)

Fig. 6 Change of plasma LTC4, LTD4 and LTB4 level of asthmatics with late responses after Candida allergen inhala

tion. (n=9) で0.88±0.85ng/mlと わ ずか に 測 定 し得 た ものの, 他 の 吸 入 誘 発 試 験 前,3時 間 後,LAR時 に は い ず れ も測 定 で き な か っ た.一 方,LTB4は 吸 入 誘 発 試 験 前,40分 後,3時 間 後 に 次 第 に 漸 増 した が,LAR時 に は 測 定 で き な か っ た. 考 察 近 年 の 目覚 しい ア レ ル ギ ー 学 研 究 の 進 歩 に よ り,小 児 や 青 年 期 に お け る 気 管 支 喘 息 の 病 態 や 機 序 は,IgEを 中 心 に 明 ら か に さ れ,そ の 治 療 法 も確 立 さ れ た 感 が あ る.一 方,成 人 の 難 治 性 喘 息 患 者 に お い て は,ス テ ロ イ ド剤 以 外 で は な か な か 症 状 の 改 善 が 得 られ な い 症 例 が 多 く,そ の 発 症 機 序 も十 分 に 解 明 さ れ て い な い.し か し, Candidaを 抗 原 と し,キ サ ン チ ン 製 剤 や β-刺 激 薬 に よ る 治 療 に 抵 抗 性 を 示 し,症 状 が 遷 延 化 し易 い な ど の 理 由 か ら,そ の 病 態 はPepys7)に よ り提 唱 さ れ たLARと 類 似 して お り,そ の 発 症 機 序 に 共 通 の 基 盤 が あ る こ とが 想 定 さ れ る. 以 上 の 観 点 か らLARの 機 序 を解 明 し,ひ い て は 重 症 難 治 性 喘 息 の 病 態 を解 明 す る 目的 で, 今 回 著 者 ら はCandidaを 抗 原 に 選 び,抗 原 の 吸 入 誘 発 試 験 を行 い,か か る ア レ ル ギ ー 反 応 局 所 に お け る遊 出 細 胞 とchemical mediatorの 態 度 をBALF所 見 に よ り検 討 し,同 時 に 末 梢 血 に お い て も同 様 の 検 討 を加 えた.そ の 結 果,ま ずBALF 中 で は 非 発 作 で 安 定 した 時 期 に 比 べ,LAR後 に は こ れ ま で に 全 く知 ら れ て い な い 現 象 と して 好 塩 基 球 は有 意 に 増 加 し,さ ら に 好 中球 及 び 好 酸 球 が 反 応 局 所 に 多数 遊 出 して お り,ま た こ れ ら の 細 胞 由 来 と考 え られ るLTC4が 有 意 に 高 値 を 示 した.さ らに,LARを 呈 す るCandida喘 息 症 例 に お い て は 非 発 作 時 に も既 にBALF中 リン パ 球 数 が 増 加 し て お り,リ ン パ球 を介 す る 反 応 系 も強 く関 与 し て い る こ とが 窺 わ れ た.一 方, 末 梢 血 中 の 顆 粒 球 及 びLTsの 動 き で は,好 中 球 及 び 好 中 球 の 遊 走 活 性 を有 す るLTB4は と も に LAR前 に 漸 増 し,LAR時 に は 減 少 し,末 梢 血 中 好 酸 球 及 び 好 塩 基 球 もLAR時 に は 減 少 し て お り,好 塩 基 球 ・肥 満 細 胞 系 由 来 のLTB4, ECF -A_{, PAFの み な ら ず 増 加 した リ ンパ 球 由 来 の}

200難 波 一 弘 遊 走 因 子 を 介 してLARの 気 道 反 応 局 所 で あ る BALFに 集 積 す る もの と思 わ れ た.ま た,LTC4 はLAR時 に 有 意 に 高 値 を 示 して お り,LAR反 応 局 所 に 多 数 出 現 す る よ う な 末 梢 血 中 の 好 中 球3),好 酸 球12)か ら のLTs産 生 能 が 亢 進 す る こ と と合 わ せ,LARの 際 に は 気 道 局 所 でLTsが 大 量 に 産 生 さ れ,そ の 結 果 と し て 強 く長 時 間 に わ た る 気 管 支 収 縮 反 応 が 惹 起 され る もの と思 わ れ,か か る気 道 反 応 を惹 起 す るmediatorの 一 つ と し て 重 要 で あ る と考 え られ た. 成 人 気 管 支 喘 息 の 病 態 の う ち 内 科 領 域 で 最 も 問 題 と され るの は 中 高 年 発 症 の 重 症 難 治 性 喘 息 で あ る が,小 児 喘 息 と は 異 な りそ の よ う な 症 例 は ア ト ピー 素 因 が 明 瞭 で な い 場 合 が 多 く,し か もIgEよ りもむ しろIgG抗 体 の 関 与 が 優 位 で13), か つ 発 作 が 通 年 性 で 遷 延 しや す い な どの 特 徴 を 有 して お り,か か る喘 息 を木 村 は 独 立 した 疾 患 群 と して 「中 高 年 発 症 型 難 治 性 喘 息 」 と提 唱 し て い る14).特 にCandidaを 抗 原 とす る喘 息 は 重 症 難 治 性 の 発 作 を起 こ しや す く,実 際 に 重 症 難 治 性 喘 息 に お い て はCandida抗 原 に対 す る皮 内 反 応 陽 性 例(特 に 遅 発 型,遅 延 型)が 多 く,吸 入 誘 発 試 験 で も 陽 性 例 が 多 く 認 め ら れ て い る15-18).以 上 の 如 く難 治 性 喘 息 と 関 連 の 深 い Candida喘 息 の 発 症 機 序 と して は Ⅲ 型,Ⅳ 型 ア レ ル ギ ー 反 応 の い ず れ もが 関 与 す る と考 え ら れ る. まず Ⅲ 型 ア レル ギー の関 与 につ いて は,Candida の 菌 体 蛋 白 成 分(46KDな ど)が,IgE抗 体 の エ ピ トー プ を持 つ こ とは 知 られ て い る19)が,今 回 吸 入 に 用 い たCandida抗 原 液 はCandida培 養 濾 液 で あ り,マ ンナ ンが そ の 主 成 分 で あ る19). しか る に マ ン ナ ン成 分 は む しろCandida特 異 的 IgG抗 体 産 生 に 重 要 な要 因 と な る こ とが 報 告 さ れ て お り20),教 室 の 成 績 に お い て もCandida特 異 的IgG抗 体 産 生 株 か ら の モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 の 大 部 分 が マ ン ナ ン部 分 に 結 合 す る こ と を確 認 し て い る21).ま たCandida抗 原 の 添 加 に よ る末 梢 血 好 塩 基 球 か ら の ヒ ス タ ミ ン 遊 離 がIgE (RAST) scoreに 比 例 して 起 こ る との 報 告 と か22),月 岡 がCandida喘 息 患 者 に お い て,タ ン ニ ン酸 処 理 感 作 赤 血 球 凝 集 反 応 が 健 康 人 あ る い は 深 在 性Candida症 患 者 を上 回 る ほ ど高 い凝 集 抗 体 価 を示 して い る 報 告23),さ ら に は 小 栗 栖 の 報 告24)か らCandida喘 息 患 者 では 抗 原 特 異 的IgG 抗 体 の 関 与 が 推 定 さ れ る.ま た,Mary Lou Callerameら は 気 管 支 喘 息 患 者 の 気 管 支 粘 膜 の 基 底 膜 にC 3, IgM, IgGの 沈 着 を認 め25),尾 崎 が 非 ア ト ピー 型 症 例 の 末 梢 気 道 肺 胞 領 域 に は IgG産 生 細 胞 が 増 加 して い る こ と を報 告26)し て い る.さ ら に 木 村 ら の,好 塩 基 球 ・肥 満 細 胞 系 や 好 中 球,好 酸 球 のIgG receptor刺 激 に よ る LTs,ス ー パ ー オ キサ イ ドな ど 多彩 な化 学 伝 達 物 質 の放 出機 序 を は じめ,多 くのIgG抗 体 を 介 す るア レ ル ギー 反 応 を示 唆 す る報 告8)16)27)28)29)など か ら も そ の 関 与 が 示 唆 さ れ る. 次 に Ⅳ 型 ア レ ル ギー 反 応 の 関 与 に つ い て は, 重 症 難 治 群 のBALF中 リン パ 球 はCandidaに よ る幼 若 化 反 応 が 亢 進 し て お り,ま た 末 梢 血 リ ンパ球 のCandida抗 原 刺 激 に よ るIL-2産 生 能, NCA,あ る い はECA産 生 能 も同 様 に 亢 進 して い た こ とか ら,リ ン パ 球 のCandida抗 原 に 対 す る Ⅳ 型 ア レル ギ ー 反 応,す な わ ち サ イ トカ イ ン の 産 生 亢 進 が 認 め られ て い る8)10)30)31).かか る観 点 よ り,Candida抗 原 に よ るLARは,house dust抗 原 と異 な り,抗 原 の 暴 露 に よ り好 塩 基 球 ・ 肥 満 細 胞 系 よ りむ し ろ リンパ 球 な どか らIL-331), IL-531-34), IL-835), GM-CSF36)な ど の サ イ ト カ イ ン が 放 出 さ れ,反 応 局 所 へ 好 中球,好 酸 球, 好 塩 基 球 な ど の 炎 症 細 胞 が 遊 走 集 積 し,LTC4な どの 気 管 支 収 縮 物 質 が 放 出 され,LARが 惹 起 さ れ る と想 定 さ れ る.木 村 は か か る Ⅲ 型,Ⅳ 型 ア レル ギ ー 反 応 の 共 存 す る炎 症 細 胞 ネ ッ トワ ー ク を 細 胞 反 応 型 ア レ ル ギ ー,"cell-mediated allergy"と 提 唱 し て い る37). 以 上 よ り,LARは 一 見IARと 連 続 した 反 応 で あ るか の ご と く思 え る症 例 も あ る が,お そ ら く そ の 大 部 分 は 異 な っ た も の と考 え られ る.ま た,第1編 で 報 告 したHDを 抗 原 とす るLAR と本 編 で のCandidaを 抗 原 と す るLARに お い て は,好 塩 基 球 ・肥 満 細 胞 系 のIgG receptor を 介 す る反 応 に よ り放 出 さ れ たNCA, LTB4, な ど の 遊 走 因 子 が 好 中 球,好 酸 球,好 塩 基 球 な どの 顆 粒 球 を局 所 に 集 積 させ,そ の 集 積 し た 炎 症 細 胞 か らIgGを 介 す る反 応 に よ っ てLTC4が 産 生 さ れLARが 惹 起 さ れ る.特 にCandidaを

抗 原 とす るLARで は,そ の よ う な 反 応 系 の 他 に リン パ 球 を介 す る反 応 が よ り強 く存 在 し,そ の 結 果,サ イ トカ イ ン を 介 す る細 胞 集 積 反 応 が 強 力 か つ 遷 延 す る こ とか ら,Candida抗 原 と重 症 難 治 性 喘 息 の 深 い 関 連 性 が 想 定 さ れ る. 結 論 重 症 難 治 性 喘 息 の 発 症 機 序 に密 接 に 関 連 して い る と い わ れ るLARの 発 症 機 序 を解 析 し,ひ い て は 重 症 難 治 性 喘 息 の 病 態 を解 明 す る 目的 で Candidaに よ る 吸 入 誘 発 試 験 を 行 い,LARの 発 作 寛 解 約2時 間 後 にBALを 施 行 し,BALF 中 の 出 現 細 胞 比 率 並 び に,LTsを 測 定 した.同 時 に 経 時 的 に 末 梢 血 の 細 胞 分 類 及 び,LTsの 測 定 を行 っ た結 果,以 下 の 成 績 を得 た. 1.  BALF中 の 出 現 細 胞 比 率 は,LARで は 吸 入 誘 発 試 験 未 施 行 で 非 発 作 の 時 期 に 比 べ 好 中 球 に て は 増 加 傾 向 が あ り,好 酸 球 及 び 好 塩 基 球 ・ 肥 満 細 胞 系 は 推 計 学 的 に 有 意 に 増 加 し て い た (p<0.05, p<0.01). 2.  BALF中 のLTC4は,LAR時 に 推 計 学 的 に 有 意 に 増 加 し て お り(p<0.01), LTB4も 増 加 傾 向 が 認 め ち れ た が,LTD4は いず れ の 場 合 も ほ と ん ど 同 定 で き な か っ た. 3.  末 梢 血 で は,好 中 球 及 び 好 塩 基 球 がLAR 前 ま で 漸 増 しLAR時 に は 減 少 す る傾 向 が 認 め ら れ,好 酸 球 はLAR時 に 有 意 に 減 少 した(p< 0.05). 4.  末 梢 血 中 のLTC4は,LAR時 に 有 意 に 増 加 し た(p<0.01).ま たLTB4は 好 中 球 と 同様 にLAR前 ま で 漸 増 し,LAR時 に 減 少 し た. 一 方_{,LTD4は い ず れ の 場 合 もほ とん ど 同 定 さ れ} な か っ た. 以 上 よ り,Candidaに よ るLARの 機 序 に は 好 塩 基 球 ・肥 満 細 胞 系 だ け で な く好 中球,好 酸 球 な ど の 血 液 細 胞 が 深 く関 与 し て い る こ と を見 出 し,histamineよ り もむ し ろLTC4が 重 要 な 化 学 伝 達 物 質 と し て の 役 割 を 果 た して い る 可 能 性 が 想 定 さ れ た. 稿 を終 え るに あ た り,御 指 導 ・御校 閲 を賜 った 恩 師 木村 郁 郎 教授 に深 甚 の 謝意 を表 す る とと もに,終 始 御 懇篤 な る御 指 導 を賜 っ た高橋 清 講 師 に深 謝 致 し ます. 文 献 1) 木 村 郁 郎, 高 橋 清, 原 田 寛, 中 村 之 信, 中 山 堅 吾:末 梢 気 道 に 変 化 を伴 っ た 中 高 年 発 症 重 症 難 治 性 喘 息 症 例 の 検 討.ア レ ル ギ ー の 臨 床 (1984) 4, 210-212. 2) 清 水 一 紀, 松 岡 孝, 塩 田 雄 太 郎, 多 田 慎 也, 高 橋 清, 木 村 郁 郎, 周 藤 真 康, 谷 崎 勝 朗:気 管 支 喘 息 患 者 好 中 球 のleukotrienes及 びsuperoxide産 生 能 の 検 討-重 症 難 治 性 喘 息 との 関 連 に つ い て-.ア レ ル ギ ー (1984) 33_{, 688 (抄 録).} 3) 高 橋 清, 難 波 一 弘, 尾 崎 公 孝, 中 山 堅 吾, 宗 田 良, 多 田 慎 也, 木 村 郁 郎, 谷 崎 勝 朗:難 治 性 喘 息 の 病 態 -経 気 管 支 肺 生 検 と気 管 支 肺 胞 洗 浄 液 所 見 を 中 心 に_{.日 内 会 誌 (1987) 76, 288.} 4) 高 橋 清:中 高 年 発 症 型 難 治 性 喘 息 と遅 発 型 反 応.ア レ ル ギ ー (1986) 35, 583. 5) 岡 田 千 春, 高 橋 清, 宗 田 良, 松 岡 孝, 難 波 一 弘, 荒 木 洋 行, 木 村 郁 郎, 岸 本 卓 巳:遅 発 型 気 道 反 応 に お け る 好 塩 基 球 表 面 結 合 免 疫 グ ロ ブ リ ン の 検 討-IgGレ セ プ タ ー の 関 与 を 中 心 に-.ア レ ル ギ ー (1988) 37, 5-11. 6) 難 波 一 弘, 高 橋 清, 多 田 慎 也, 清 水 一 紀, 中 藤 研 一, 岡 田 千 春, 辻 光 明, 沖 和 彦, 木 村 郁 郎: House dustに よ る 気 管 支 喘 息 患 者 遅 発 型 気 道 反 応 の 発 症 機 序 に 関 す る 検 討-気 管 支 肺 胞 洗 浄 法 を 中 心 に-.ア レ ル ギ ー (1988) 37, 67-74.

7) Pepys J and Hutchcroft BJ: Bronchial provocation tests in etiologic diagnosis and analysis of asthma. Am Rev Respir Dis (1975) 112, 829-859.

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202難 波 一 弘 9) 木 村 郁 郎, 武 田 昌, 谷 崎 勝 朗, 高 橋 清, 多 田慎 也, 塩 田 雄 太 郎, 佐 藤 恭, 田 村 尚 彦:気 管 支 喘 息 患 者 のBAL液 中 及 び 末 梢 血 中 リ ン パ 球 の 吸 入 抗 原 に 対 す る 反 応 性 の 検 討.ア レ ル ギ ー (1984) 33, 812 (抄 録). 10) 宮 川 秀 文, 難 波 一 弘, 白 石 高 昌, 名 部 誠, 槇 本 晃, 佐 藤 恭, 武 田 昌, 多 田 慎 也, 高 橋 清, 木 村 郁 郎:重 症 難 治 性 喘 息 に お け るIV型 ア レ ル ギ ー の 関 与 に つ い て-カ ン ジ ダ 抗 原 に よ るIL-2産 生 能 と 好 中 球 遊 走 活 性,ア レ ル ギ ー (1988) 37, 12-18. 11) 牧 野 荘 平, 小 林 節 雄, 宮 本 昭 正, 信 太 隆 夫, 高 橋 昭 三, 可 部 順 三 郎, 中 島 重 徳:吸 入 試 験 標 準 化 研 究 会 お よ び 「吸 入 試 験 標 準 化 に 関 す る研 究 」班:気 管 支 喘 息 お よ び 過 敏 性 肺 臓 炎 に お け る 吸 入 試 験 の 標 準 法.ア レ ル ギ ー (1982) 31, 1074.

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13) 中 山 堅 吾, 小 橋 秀 敏, 竹 山 博 泰, 佐 々 木 良 英, 中 村 之 信, 合 田 吉 徳, 上 田 暢 男, 高 橋 清, 守 谷 欣 明, 木 村 郁 郎, 駒 越 春 樹, 谷 崎 勝 朗:重 症 難 治 性 喘 息 の 病 態 に 関 す る検 討.ア レ ル ギ ー (1982) 31, 551. 14) 木 村 郁 郎:喘 息 の 病 型 と そ の 本 質 論-中 高 年 発 症 型 難 治 性 喘 息 の 独 立 性.日 胸 会 誌 (1983) 21, 181-182. 15) 可 部 順 三 郎:真 菌 と ア レ ル ギー.治 療 (1986) 68, 2030-2034. 16) 木 村 郁 郎, 高 橋 清:老 人 喘 息 と そ の 対 策.現 代 医 療 (1985) 17, 2308-2312. 17) 木 村 郁 郎:遅 発 ア レ ル ギ ー の 発 症 機 序-細 胞 反 応 を 中 心 に-.第3回 免 疫 薬 理 シ ン ポ ジ ウ ム 議 事 録 (1985) 23-40. 18) 木 村 郁 郎, 谷 崎 勝 朗, 高 橋 清, 多 田 慎 也, 駒 越 春 樹, 周 藤 真 康, 貴 谷 光, 中 山 堅 固:気 管 支 喘 息 に お け る カ ン ジ ダ 抗 原 の 特 徴-統 計 学 的 観 察-.日 胸 疾 患 会 誌 (1986) 24, 150-155.

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30) 武 田 昌:気 管 支 喘 息 に お け る リ ン パ 球 機 能 に 関 す る 研 究 第2編 気 管 支 喘 息 に お け る suppressor cell 機 能 の 検 討.岡 山 医 誌 (1991) 103, 399-409. 31) 高 橋 清:気 管 支 喘 息 の 病 態 に お け る 好 塩 基 球 ・肥 満 細 胞 系 の 役 割 に 関 す る 最 近 の 知 見.臨 床 免 疫 会 誌 (1990) 13, 454-458. 32) 河 田 一 郎:気 管 支 喘 息 の 発 症 機 序 に お け る 好 酸 球 の 動 態 に 関 す る研 究 第2編 ン ジ ダ 抗 原 に よ る 末 梢 血 単 核 球 由 来 好 酸 球 遊 走 因 子 に つ い て.岡 山 医 誌 (1990) 102, 745-755. 33) 高 橋 寿 保:気 管 支 喘 息 に お け る好 酸 球 動 態 の 調 節 に 関 す る研 究 第1編 喘 息 患 者 末 梢 血 単 核 球 由 来 の 好 酸 球 遊 走 因 子(ECF)の 解 析.岡 山 医 誌 (1991) 103, 779-789. 34) 高 橋 寿 保:気 管 支 喘 息 に お け る 好 酸 球 動 態 の 調 節 に 関 す る 研 究 第2編 喘 息 患 者 末 梢 血 好 酸 球 の 遊 走 能 に 関 す る 検 討.岡 山 医 誌 (1991) 103, 791-801.

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204難 波 一 弘

Studies

on the mechanism

of late

asthmatic

response

using

a technique

of bronchoalveolar

lavage

Part

2. Bronchial

reaction

after

inhalation

of Candida

allergen

in bronchial

asthmatics

Kunihiro

NAMBA

Second

Department

of Internal

Medicine,

Okayama

University

Medical

School,

Okayama

700, Japan

(Director:

Prof. I. Kimura)

To clarify the mechanism of late asthmatic response (LAR) which is related to intractable asthmatic attacks, cellular and humoral components at the sites of LAR were examined by bronchoalveolar lavage fluid (BALF) obtained after bronchial inhalation of Candida allergen. BAL examination was performed 2 hours after the LAR attack. The differential cell count was obtained and the level of leukotrienes (LTs) in the BALF and peripheral blood determined by high performance liquid chromatography.

The percentages of eosinophils and basophil•Emast cells and neutrophils were statistically high in the BALF after LAR compared with the level in the non-attack state (p<0.05, p<0.01). The level of LTC4 was significantly higher in the BALF after LAR (p<0.01), and LTB4 also showed a similar tendency at LAR. However, LTD4 could not be detected in the BALF after LAR or in the non-attack stage. On the other hand, the percentage of neutrophils and LTB4 level in circulating blood showed a peak before LAR, and then decreased markedly during LAR. Eosinophils also decreased significantly during LAR, but the plasma LTC4 level increased significantly during LAR.

These findings suggest that neutrophils, eosinophils and basophil•Emast cells play an impor tant role in the pathogenesis of intractable asthma attack and LAR following release of leukotrienes.