岡 山 医 誌 (1992) 104, 809∼820
遅発 型気 道反 応 にお け る
IgGサ ブ ク ラス抗 体 に関 す る研 究
第2編
気管支肺胞洗浄液 中抗原特異的IgGサ
ブ クラス
抗体 と遅発 型気道 反応 の関連 につ いて
岡山 大学 医学 部 第二 内 科学 教 室(指 導:木 村 郁郎 教 授)
小 栗 栖
和
郎
(平 成4年4月23日 受 稿)Key words:遅 発 型 気 道 反 応,IgGサ ブ ク ラ ス 抗 体,気 管 支 肺 胞 洗 浄, 難 治 性 喘 息,抗 原 吸 入 誘 発 試 験
緒
言
難治 性 喘 息 の機 序解 明 に関 す る研 究 は 現在 ま
でに そ の臨床 像 が 類 似 す る遅 発 型気 道 反 応 を対
象 に 多 くの検 討 が な され てお り,特 にそ の 中 で
IgG抗 体 の 関与 が重 点 的に検 討 されてお り1234),
著 者 も第1編 で血 清 中IgGサ
ブ ク ラス抗 体 との
関 連性 につ い て報 告 した如 く,成 人 の気 管支 喘
息,特 に 中高年 発 症 型 難治 性 喘 息(LOIA)の
発
症 機序 にIgG抗
体 及 び リンパ 球 の 関与 が 明 らか
にな りつ つ あ る5)6).
Reynoldsら7)が
気 管 支 肺 胞 洗 浄 法(bron
choalveolar lavage, BAL)を
呼 吸器 疾 患 の病
態 解 折 に応 用 して以 来,本 法 は 主 に 呼吸 器疾 患
の診 断 に広 く応用 され て お り,木 村 らは,本 法
を1978年 最 初 に気 管 支 喘 息,特 に 難 治性 喘 息 の
病 態解 折 に用 い て い る8)9).本編 で は気 道 反 応 局
所 に お け る免 疫 グロ ブ リンの役 割 をよ り明 らか
にす る 目的 で,気 管 支 肺 胞洗 浄 液 中 の抗 原 特 異
的 総IgG, IgG 1抗 体 を測定 し,抗 原 吸 入後 に 惹
起 され る気 道 反 応 との 関 連 につ いて検 討 した.
対 象 と 方 法
岡 山大 学 第2内 科 呼 吸 器外 来 を受 診 中 あ る い
は入 院 中 の気 管支 喘 息 患 者 の 中 で,ハ ウス ダ ス
トまた は カ ン ジダ に よ る即 時,遅 発,遅 延 型 皮
膚 反 応 の 何 れ か が 陽 性 で あ っ た10症 例 及 び18症 例 を 対 象 に 選 び,入 院 の 上 非 発 作 時 にBALを 施 行 し た.ま た 対 照 と し て 健 常 人7例 に もBAL を 施 行 し た.BALは 既 報 の ご と く8)9)気管 支 フ ァ イ バ ー ス コー プ を右 肺B4ま た はB5にwedgeし, 生 理 食 塩 水 を1回50mlず つ を 注 入 後,吸 引 す る 操 作 を4回 繰 り返 し,計200mlの 生 理 食 塩 水 に て 洗 浄 した.回 収 し た 洗 浄 液 は ス テ ン レ ス 製 メ ッ シ ュ に て 濾 過 し た 後,遠 沈 に よ り上 清 を 採 取 し 抗 体 及 び ア ル ブ ミ ン 測 定 ま で-20℃ に 凍 結 保 存 し た.回 収 細 胞 は 総 細 胞 数 を 算 出 し,May-Giemsa染 色 標 本 に よ り細 胞 分 類 を行 っ た.気 管 支 肺 胞 洗 浄 液(BAL fluid, BALF)中 の 抗 原 特 異 的 総IgG, IgG 1抗 体 は 第1編 で 詳 述 した 如 く 著 者 の 考 案 し たavidin-biotin ELISA (enzyme linked immunosorbent assay)法 に て 測 定 した.な お,BALFは ×1, ×10, ×100に,血 清 は × 500, ×1,000, ×4,000, ×16,000に 希 釈 し て 測 定
し た.各 抗 体 価 は,ダ ニ(Dermatophagoides farinae)ま た は カ ン ジ ダ(Candida albicans)
抗 体 を有 す る 標 準 血 清 を 基 に し た 標 準 曲 線 を作 成 し て,標 準 単 位 に 換 算 し て 表 し た(Fig. 1). ま た,BALF中 の 抗 体 価 は,BALF中 ア ル ブ ミ ン 濃 度 で 補 正 し た 値(U/mg)で 比 較 検 討 し た . BALF及 び 血 清 中 の ア ル ブ ミン は レ ー ザ ー イ ム ノ ア ッ セ イ に よ り測 定 し た10). 809
BALを 施 行 して 約2-4週 間 後 に 気 管 支 喘 息 患 者 に 対 し,抗 原 吸 入 誘 発 試 験 を ア レ ル ギー 学 会 の 気 管 支 喘 息 に お け る 吸 入 試 験 の 標 準 化 案11)
に 基 づ い て 施 行 した.抗 原 吸 入 時 よ り経 時 的 に FEV1 .0 (forced expiratory volume in one second)をpulmonary function indicator(米
国NCG社 製)に よ り,ま たpeak expiratory flow rate (PEFR)をminilight peak flow meter(英 国 ク レ メ ン ト ・ク ラ ー ク社 製)に て 測
定 し,FEV1,0ま た はPEFRが20%以 上 低 下 し た 場 合 を気 道 反 応 陽 性 と し た.抗 原 吸 入 後1時 間 以 内 に 陽 性 を 示 し た 場 合 を 即 時 型 気 道 反 応 (immediate asthmatic response, IAR), 3時 間 以 上10時 間 以 内 に 陽 性 を示 した 場 合 を 遅 発 型 気 道 反 応(late asthmatic response, LAR)と
した.ま たIAR出 現 後 再 びLARの 出 現 した 症 例 は 二 相 性 気 道 反 応(dual asthmatic response, DAR)と 分 類 し た12).尚,今 回 は 健
常 人 も 含 め す べ て 非 喫 煙 者 を選 ん で 検 討 し た. ま たBALF中 の 抗 原 特 異 的 総IgG, IgG 1抗 体 が 血 清 か ら のleakageに 由 来 す る も の か,肺 局 所 で の 産 生 亢 進 に よ る も の か を 検 討 す る 目的 で,抗 原 特 異 的 総IgG, IgG 1抗 体,ア ル ブ ミ ン (albumin, Alb)各 々 のBALFと 血 清 中 濃 度 の 比,quotients 103 ([protein] BALF/[pro tein] serum)を 算 出 しQ protein,す な わ ち そ れ ぞ れQIgG, QIgG 1, QAlbと し13), IgG, IgG 1抗 体 の 分 泌 係 数(relative coefficients of
excretion, RCE)を そ れ ぞ れQIgG/Qalb, QIgG 1/Qalbと し た13)14).
な お 推 計 学 的 検 討 に は,平 均 値 はstudent-t検 定 を,百 分 率 の 比 較 に はx2検 定 を 用 い た.
結 果
1. 気 管 支 喘 息 群 及 び 健 康 対 照 群 に お け る BALF中 ダ ニ 及 び カ ン ジ ダ 特 異 的 総IgG, IgG 1抗 体 の 検 討
ハ ウ ス ダ ス ト抗 原 吸 入 予 定 症 例 のBALF中 ダ ニ 特 異 的 総IgG, IgG 1抗 体 は 健 康 対 照 群 に 比 し て,Table 1の ご と く有 意 に 高 値 を 示 し た(共
Fig. 1 Dose response curve for measurements of antigen-specific IgGl antibody. Results for each assay were expressed in
arbitrary units with reference to dou bling dilutions of a standard serum for each antigen.
Table
1 BALF IgG and IgG 1 antibodies to mite
in bronchial asthmatics
who were test
ed with
inhalation
of house
dust
antigen and healthy subjects. The date
are
represented
as standard
serum
units corrected
by albumin concentra
tions.
*p<0.05
Table
2 BALF IgG and
IgG 1 antibodies
to
Candida
antigen
in bronchial
asth
matics who were tested with inhalation
of Candida
antigen
and healthy
sub
jects. The data are represented as stan
dard serum units corrected by albumin
concentrations.
遅 発 型 気 道反 応 とBALF中IgGサ
ブ ク ラス抗 体
811
にp<0.05).ま た,カ ン ジ ダ 抗 原 吸 入 予 定 症 例 のBALF中 カ ン ジ ダ 特 異 的 総IgG, IgG 1抗 体 も健 康 対 照 群 に 比 し て 有 意 に 高 値 を 示 し た(共 にp<0.05)(Table 2). 2. BALF中 ダ ニ 及 び カ ン ジ ダ 特 異 的IgG 1抗 体 価 別 に よ る 気 道 反 応 の 検 討 気 管 支 喘 息 群 を 健 康 対 照 群 の 抗 原 特 異 的IgG 1抗 体 価 の 平 均 値(M)及 び 標 準 偏 差(SD)に よ りA群(M+2 SD以 上)とB群(M+2 SD未 満)の2群 に 分 類 し,A群 とB群 に お け る 気 道 反 応 の 比 率 に つ い て 比 較 検 討 した. ハ ウ ス ダ ス ト抗 原 吸 入 症 例 で は,Fig. 2の ご と くA群(n=6)にDAR 16.7% (1/6), LAR 83.3% (5/6)を 認 め,B群(n=4)で は LAR 25.0% (1/4), IARが75.0% (3/4)を 占 め た.即 ち,A群 で はDARを 含 め たLAR症 例 が100%を 占 め,B群 に 比 し て 有 意 に 高 率 で あ っ た(p<0.05). カ ン ジ ダ抗 原 吸 入 症 例 で はFig. 3の ご と くA 群(n=12)にDAR 33.3% (4/12), LAR 66.7 % (8/12),一 方,B群(n=6)にNR 66.7% (4/6), LAR 33.3% (2/6)を 認 め,A群 で は DARを 含 め たLAR症 例 が100%を 占め,B群 に 比 し て 有 意 に 高 率 で あ っ た(p<0.01). 3. 気 道 反 応 別 に よ るBALF中 ダ ニ 及 び カ ン ジ ダ特 異 的 総IgG, IgG 1抗 体 の 検 討 先 ず 抗 原 吸 入 誘 発 に よ る 気 道 反 応 様 式 に つ い て 述 べ る.即 ち ハ ウ ス ダ ス ト抗 原 吸 入 症 例 の10 例 中3例 がIAR, 6例 がLAR, 1例 がDAR
を 呈 し た.一 方,カ ン ジ ダ 抗 原 吸 入 症 例 の18例
中10例 がLAR, 4例 がDAR, 4例 が 気 道 反 応 を示 さ な い 無 反 応(non-responder, NR)症 例 で あ った(Table 3). BALFの 細 胞 分 類 はTable 4の 如 くで 健 康 対 照 群,喘 息 群 共 に 気 管 支 肺 胞 領 域 の 情 報 を反 映 し て い る と考 え ら れ た.
ハ ウ ス ダ ス ト抗 原 吸 入 症 例 と 健 康 対 照 群 の BALF中 ダ ニ 特 異 的 総IgG, IgG 1抗 体 価 は, LAR群6例 で は,IAR群 に 比 べ,ダ ニ 特 異 的 総IgG, IgG 1抗 体 と もに 有 意 に 高 値 を 示 した(共 にp<0.01).ま たLAR群 で は 健 康 対 照 群 と 比 較 して も,総IgG, IgG 1抗 体 と も に 有 意 に 高 値 を 示 し た(各 々p<0.01, p<0.05)(Fig. 4). 次 に,カ ン ジ ダ抗 原 吸 入 症 例 と健 康 対 照 群 の BALF中 カ ン ジ ダ 特 異 的 総IgG, IgG 1抗 体 を 検 討 し た(Fig. 5),カ ン ジ タ 抗 原 吸 入 に てLAR を 呈 し た 群10例 で は,NR群 に 比 ベ カ ン ジ ダ 特 異 的 総IgG, IgG 1抗 体 と もに 有 意 に 高 値 を 示 し た(各 々p<0.05, p<0.01).ま たLAR群 で は 健 康 対 照 群 と 比 較 して も総IgG, IgG 1抗 体 と もに 有 意 に 高 値 を示 し た(共 にp<0.01).DAR 群 も カ ン ジ ダ 特 異 的IgG 1抗 体 は 健 康 対 照 群, NR群 に 比 べ 有 意 に 高 値 を 示 し た(共 にp< 0.05). 次 に ハ ウ ス ダ ス ト抗 原 吸 入 症 例 の ダ ニ 特 異 的 総IgG, IgG 1抗 体 の 分 泌 係 数(RCE)を 検 討
した とこ ろ,LAR群 で はIAR群 に 比 較 してRCE は 有 意 に 高 値 を 示 し(各 々p<0.01, p<0.05), さ ら に1.0よ り も 明 か に 高 値 で あ っ た.ま た健 康 対 照 群 と 比 較 して もIgG, IgG 1抗 体 のRCEは 有 意 に 高 値 で あ っ た(各 々p<0.01, p<0.05)
Fig. 2 Percentages of bronchial responses after inhalation of house dust antigen in group A and group B.
IAR: immediate asthmatic response, DAR: dual asthmatic response, LAR:
late asthmatic response
Fig. 3 Percentages of bronchial responses after inhalation of Candida antigen in group A and group B.
NR: non-responder, DAR: dual asth matic response, LAR: late asthmatic response
Table
3 Characteristics
of bronchial asthmatics
and healthy subjects.
NR: non-responder, IAR: immediate asthmatic response, DAR: dual asthmatic response, LAR: late asthmatic response
Table 4 Cellular parameters
and albumin in the BALF of bronchial asthmatics
and healthy subjects.
NR: non-responder, IAR: immediate asthmatic response, DAR: dual asthmatic response, LAR: late asthmatic response
(Fig. 6).
ま た,カ ン ジ ダ 抗 原 吸 入 症 例 と健 康 対 照 群 の カ ン ジ ダ 特 異 的 総IgG, IgG 1抗 体 のRCEを 検 討 し た と こ ろ,LAR群 で は カ ン ジ ダ 特 異 的 総 IgG及 びIgG 1抗 体 の 分 泌 係 数(RCE)が,健
康 対 照 群,NR群 に 比 較 し て 高 値 を 示 す 傾 向.に あ っ た.し か し,LAR群 のRCEはIgG, IgG 1 抗 体 共 に1.0前 後 で あ っ た(Fig. 7).
遅 発 型気 道 反 応 とBALF中IgGサ
ブ クラ ス抗体
813
Fig. 4
Relationship
between
asthmatic
responses after inhalation of house dust
antigen and specific IgG and IgG1 anti
bodies to house dust mite in the BALF,
expressed as standard
serum units cor
rected
by albumin
concentrations.
In
asthmatics
with
LAR, the
levels
of
antigen-specific
IgG and IgG1 antibodies
were significantly
(p<0.01) higher than
those
in asthmatics
with
IAR
and
healthy subjects.
IAR: immediate
asthmatic
response,
DAR: dual asthmatic
response, LAR:
late asthmatic
response
Fig. 5
Relationship
between
asthmatic
responses
after
inhalation
of Candida
antigen and specific IgG and IgG1 anti
bodies to Candida antigen in the BALF,
expressed
as standard
serum units cor
rected
by albumin
concentrations.
In
asthmatics
with
LAR, the
levels
of
antigen-specific
IgG and IgG1 antibodies
were significantly
(p<0.01) higher than
those in non-responders
and healthy sub
jects. In asthmatics
with DAR, the levels
of antigen specific IgG1 antibody were
significantly
(p<0.05) higher than those
in non-responders
and healthy subjects.
NR: non-responder,
DAR: dual
asth
matic
response,
LAR: late asthmatic
response
考
察
成 人 の 難 治性 喘 息 の病 態 を解 明す る研 究の 一
環 と して そ の臨 床像 に類 似 性 が認 め られ て い る
抗原 吸 入 後 のLARの
機 序 に抗 原特 異 的IgG抗
体 が関 与 す るか 否 か を明確 に す る 目的 で,抗 原
吸入 前 にBALを
施行 し,BALF中
の 抗 原特 異
的総IgG, IgG 1抗 体 を測 定 し抗 原 吸入 後 の各 気
道反 応 との 関連 を検 討 した.そ の結 果,BALF中
IgG 1抗 体 は気管 支 喘 息群 では健 康 人 よりも高 値
を示 し,高 値 を呈 す る場 合 に はLARを
高率 に
誘発 す る傾 向 を認 め た.又 一 方 で はハ ウス ダ ス
ト,カ ン ジダ共 に 後 にLARを
誘 発 した群 は
BALF中
抗 原特 異的 総IgG, IgG 1抗 体 が有 意
に高 値 を示 し,さ らにRCEに
よ る検 討 か ら吸
入性 抗 原 で あ るハ ウ スダス ト・ダニ に対 す るIgG
抗 体 は 肺局 所 で,カ ン ジ ダの そ れ は肺 局 所 の み
な らず他 臓 器 で も産 生 が 亢 進 して い る こ とが示
唆 され た.
本 編 と同様 の 目的 で,難 治性 喘 息 の 臨 床像 と
類 似 す る抗 原 吸 入 後 に 出 現 す るLARに お け る 気 道 細 胞 反 応 をBALに よ り検 討 し た 難 波 ら15) の 研 究 に よ る と,LAR惹 起 直 後 に は 好 中 球,好 酸 球16)及 び好 塩 基 球 ・肥 満 細 胞 系 の 多数 の 出 現 を 認 め て い る.ま た,BALF中 の ロ イ コ ト リエ ン (leukotriene, LT)の 測 定 で は,LAR症 例 に LTC4, LTD4, LTB4の 増 加 を認 め て い る.こ れ らは 抗IgG抗 体,Ca2+ ionophore刺 激 に よ る LTC4の 産 生 が 難 治 性 喘 息 の 末 梢 血 好 中球 にお い て は 亢 進 し て い る17)こ と と符 合 す る と思 わ れ る. ま た,肺 局 所 リ ン パ 球 は 特 に 難 治 性 喘 息 に お い て は カ ン ジダ に強 く感 作 され て お り,interleukin-2 (IL-2)産 生 能 の 亢 進 と,そ れ と相 関 し て 好 中 球 遊 走 因 子(neutrophil chemotactic factor, NCF)活 性 も亢 進 して お り18),ま た 末 梢 血 中 リン パ 球 に よ る 検 討 で あ る が,LAR症 例 で は 抗 原 刺 激 に よ りinterleukin-5(IL-5)な ど の リ ンパ 球 由 来 の 好 酸 球 遊 走 因 子(eosinophil
Fig. 6 The relative (to albumin) coefficients of
excretion (RCE) of specific IgG and IgG1
antibodies
to house dust mite in asth
matics who were tested with inhalation
of house dust antigen and healthy sub
jects. In asthmatics
with LAR, the RCE
of antigen-specific
IgG and IgG1 anti
bodies were significantly
(respectively
p<0.01 and p<0.05) higher than those in
asthmatics
with IAR and healthy
sub
jects.
IAR: immediate
asthmatic
response,
DAR: dual asthmatic
response, LAR:
late asthmatic
response
Fig. 7 The relative (to albumin) coefficients of
excretion (RCE) of specific IgG and IgG1
antibodies
to Candida
antigen in asth
matics who were tested with inhalation
of Candida antigen and healthy subjects.
In asthmatics
with LAR and DAR, the
mean RCE levels of antigen-specific
IgG
and IgG1 antibodies were high, compar
ed with those in non-responders
and
healthy subjects, but not significant.
NR: non-responder,
DAR: dual
asth
matic
response,
LAR: late
asthmatic
response
chemotactic factor, ECF)の 産 生 亢 進 が 認 め ら れ て い る19)20)21).す な わ ち,LARあ る い は 難 治 性 喘 息 は 肥 満 細 胞 や リ ンパ 球 由 来 の 各 種 細 胞 遊 走 因 子 に よ り,好 中球,好 酸 球 及 び 好 塩 基 球 が 気 道 局 所 に 集 積 し,抗 原 特 異 的IgG,特 にIgG 1抗 体 等 に よ り さ ら に 活 生 化 さ れ 喘 息 発 作 が 惹 起 さ れ る と い う木 村 の 提 唱 す る 細 胞 反 応 型 ア レ ル ギー22)の要 因 と して 働 い て い る可 能 性 が 示 唆 さ れ た. と こ ろ で 気 管 支 喘 息,特 にLARとIgG抗 体 に 関 して 血 清 中 抗 原 特 異 的IgG, IgG 1抗 体 と LARと の 関 与 を示 唆 す る 多 数 の 報 告 が い ま ま で に な さ れ て い る が23)24)25)26),気道 反 応 と肺 局 所 の 抗 原 特 異 的IgG抗 体 に 関 す る 研 究 は 未 だ な さ れ て い な い.Kayら27)はDARとIAR症 例 の
BALF中
総IgG抗
体 を測 定 検討 して い るが,
有 意 な差 を認 め て い な い.こ れ は 吸 入誘 発 した
抗 原 に該 当す る特 異 的IgG抗
体 の検 討 では ない
ため 今 回 の結 果 と異 な る と考 え られ る.
気 道 に お け る免 疫 グ ロブ リンに つ い て は先 天
的 なIgG抗
体,IgGサ
ブ ク ラス抗 体 やIgA抗
体 の欠 損 症 に よ りその 役 割 が徐 々 に明 らか に さ
れつ つ あ る.血 清 中IgA欠
損症 患 者 に お い て そ
の ほ とん どがIgG 2及 びIgG 4抗 体 の 低下 を と
もな って お り,IgA抗
体 を欠 損す るが 易 感 染症
状 を呈 さ ない症 例 との 検 討 か ら,反 復 す る気道
感 染 はIgG 2抗 体 やIgG 4抗 体 の 欠損 との 関連
が指 摘 されて い る28)29)30).特
に細 菌 の 多糖 体 に対
して は主 にIgG 2抗 体 が 感 染 防 御 的 に作 用 して
い る と考 え られ て い る31)32).ま
た健 康 喫 煙 者 にお
遅 発 型 気 道 反応 とBALF中IgGサ
ブ クラス 抗体
815
け るBALF中IgG抗 体 につ い て はIgG/albumin で 比 較 す る と血 清 よ り もBALFで 高 値 を示 し, 非 喫 煙 者 との 比 較 で もBALFで は 高 値 を示 して い る7)33)34)35)36).IgGサ ブ ク ラ ス 抗 体 に つ い て は, 喫 煙 者,非 喫 煙 者 と もIgG 4抗 体 及 びIgG 3抗 体 の 割 合 は 血 清 に 比 べBALFで 高 い37).今 回 は 非 喫 煙 者 を 対 象 と し抗 原 特 異 的IgG, IgG 1抗 体 の み 検 討 を 行 っ た が,多 糖 体 や 蛋 白 な ど吸 入 抗 原 の 性 質 等 を 考 慮 し て他 のIgGサ ブ ク ラ ス に つ い て の 検 討 や 喫 煙 者 に お け る 検 討 も要 す る と考 え られ る.特 にIgG 4抗 体 に つ い て は 感 染 防 御 の 役 割 以 外 に 気 管 支 喘 息 に お い て は ア ナ フ ィ ラ キ シ ー 反 応 を惹 起 した り38)39),反対 にI型 ア レ ル ギ ー 反 応 を 抑 制 す るblocking antibodyと し て の 役 割 が 想 定 さ れ て お り興 味 深 い40)41)42). 気 管 支 喘 息 患 者 の 非 発 作 時 に 経 気 管 支 肺 生 検 (transbronchial lung biopsy, TBLB)を 施 行 し肺 末 梢 気 道 組 織 を 採 取 し,組 織 酵 素 抗 体 法 に て 細 気 管 支 領 域 に 分 布 す る免 疫 グ ロ ブ リ ン 含 有 細 胞 の 分 布 を検 討 し た尾 崎43)は,非 ア トピー 型 喘 息 肺 で は ア トピー 型 喘 息 肺 に 比 し てIgG含 有 細 胞 の 比 率 が 有 意 に 高 く,IgE含 有 細 胞 の 比 率 は 有 意 に 低 い こ と を観 察 し て い る.こ の こ とは 非 ア トピ ー 型 喘 息 とか 難 治 性 喘 息 あ る い は そ の 臨 床 像 と 類 以 す るLARのBALF中 抗 原 特 異 的 IgG, IgG 1抗 体 が 高 値 を 示 し た 今 回 の 結 果 と 一 致 す る と思 わ れ る.LAR症 例 で 気 道 局 所 に お い て 抗 原 特 異 的IgG, IgG 1抗 体 がRCEに よ る 検 討 か ら局 所 産 生 が 亢 進 し て い る こ と が 示 唆 さ れ た が,BALF中 リ ン パ 球 と の 相 関 が 認 め ら れ な か っ た.こ れ はBALF中 や 気 道 に 局 在 す る 表 面IgG,特 に 抗 原 特 異 的IgGを 有 す るB cell との 相 関 を 検 討 す れ ば 肺 局 所 に お け る抗 体 産 生 の 亢 進 が よ り明 確 に な る と思 わ れ る. 気 道 に お け るIgG抗 体 のhalf-timeに 関 す る 研 究 は 殆 ん ど 無 い.Reynondsら44)の 犬 に よ る 研 究 で は,血 清 のIgG抗 体 のhalf-timeが9日 間 で あ る の に 対 しBALF中IgG抗 体 のhalf-time は7.5日 間 と報 告 さ れ て い る.一 方 ヒ トに 関 して は 血 清 で はIgG 3抗 体 のhalf-timeが 約7日 間 と 短 く,他 の サ ブ ク ラ ス は 約21日 間 と 比 較 的 長 い が45), BALF中 で は 血 清 と比 較 し てIgG 3, IgG 4抗 体 の 割 合 が 高 い こ と よ り37)気道 に お け る こ れ ら の 抗 体 の 局 所 産 生 や 代 謝 は 血 清 と 異 な る 可 能 性 が 考 え ら れ る.本 研 究 で はBALを 施 行 して 約2∼4週 後 に 抗 原 吸 入 誘 発 試 験 を行 っ た が,気 道 局 所 のIgGサ ブ ク ラ ス 抗 体 に 関 す る こ の よ う な 基 礎 的 検 討 も 今 後 さ らに 必 要 と思 わ れ る.気 道 に お け る免 疫 グ ロ ブ リ ン特 にIgGとIgA 抗 体 に つ い て のWaldmanら46)の 報 告 に よ る と IgG:IgAがnasal washingで は1:3で あ る の に 対 しBALFで は2.5:1と 下 気 道 に お い て は む し ろIgA抗 体 よ り もIgG抗 体 が 相 対 的 に 増 加 して い る こ とが 示 さ れ て い る.し か し気 道 局 所 に 集 積 し た 各 種 細 胞,特 に 種 々 の サ イ トカ イ ン に よ っ て 活 性 化 され た 好 酸 球 はIgG抗 体 以 外 にIgA抗 体,分 泌 型IgA抗 体 に よ っ て も活 性 化 さ れ,MBP (major basic protein), ECP (eosinophil cationic protein), EDN (eosinophil-derived neurotoxin)な ど の 放 出 や PAF (platelet activating factor), LTC4を 産 生 す る こ とが 報 告 さ れ て お り47), BALF中 のIgA 抗 体 と各 種 気 道 反 応 の 関 連 性 に つ い て も検 討 が 必 要 と思 わ れ る. 今 回 のIgG抗 体 測 定 に は ダ ニ 及 び カ ン ジ ダ 粗 抗 原 を 用 い た が,ダ ニ 抗 原 に つ い て はIgE抗 体 と各IgGサ ブ ク ラ ス 抗 体 で は 反 応 す る エ ピ トー プ が 異 な る可 能 性48)も示 唆 さ れ て い る.ま た カ ン ジ ダ 抗 原 は 多 糖 体 抗 原 及 び 約26種 類 の 蛋 白 抗 原 が 存 在 す る と 言 わ れ,気 管 支 喘 息 や 全 身 性 カ ン ジ ダ 症 な ど カ ン ジ ダ の 関 与 す る ア レ ル ギ ー や 感 染 症 の 如 き 病 態 に よ り関 与 す る 抗 原 も 異 な る 可 能 性 が あ り49),また カ ン ジ ダ の 多 糖 体 抗 原 と蛋 白 抗 原 で は,吸 入 誘 発 時 に 出 現 す る 気 道 反 応 が 異 な る可 能 性 も あ り50),今 後 ダ ニ 及 び カ ン ジ ダ の 精 製 抗 原 を 用 い た 検 討 が 必 要 と思 わ れ る. 結 論 成 人 の 気 管 支 喘 息,特 に 中 高 年 発 症 型 難 治 性 喘 息(LOIA)の 発 症 機 序 にIgG抗 体 及 び リン パ 球 の 関 与 が 明 ら か に な りつ つ あ る.そ こ で そ の 臨 床 像 が 類 似 す る遅 発 型 気 道 反 応(LAR)の 機 序 に お け る抗 原 特 異 的IgG抗 体 の 関 与 を さ ら に解 明 す る 目 的 で 気 管 支 肺 胞 洗 浄 液(BALF)中 の 抗 原 特 異 的IgG抗 体 とLARと の 関 連 を 検 討 した,方 法 は,ハ ウ ス ダ ス トま た は カ ン ジ ダ 抗原 吸 入 前 に 施 行 し た 気 管 支 肺 胞 洗 浄 法(BAL) に よ るBALF並 び に 血 清 中 の 抗 原 特 異 的 総IgG 及 びIgG 1抗 体 をavidin-biotin ELISA法 に て 測 定 し,約2週 後 の 誘 発 に よ る気 道 反 応 と対 比 し た.又 後 の 抗 原 吸 入 でLARを 呈 し た 群 を, 健 康 対 照 群,即 時 型 気 道 反 応(IAR)群,二 相 性 気 道 反 応(DAR)群,無 反 応(NR)群 と 比 較 検 討 した. 1. 抗 原 吸 入 し た 気 管 支 喘 息 群 で は健 康 対 照 群 に 比 してBALF中 ダ ニ ま た は カ ン ジ ダ 特 異 的 総IgG, IgG 1抗 体 は 有 意 に 高 値 で あ っ た(共 に p<0.05). 2. 健 康 対 照 群 のBALF中 抗 原 特 異 的IgG 1抗 体 価 を も と に,抗 原 吸 入 した 気 管 支 喘 息 群 をIgG 1抗 体 高 値 群(A群)と 非 高 値 群(B群) に 分 類 し た と こ ろ,ハ ウ ス ダ ス ト抗 原 吸 入 症 例
で は,A群 のDARを 含 め たLAR症 例 は100 %で あ り,B群 に 比 して 有 意 に 高 率 で あ っ た(p< 0.05).ま た,カ ン ジ ダ 抗 原 吸 入 症 例 で は,A群 のDARを 含 め たLAR症 例 が100%を 占め,B 群 に 比 し て 有 意 に 高 率 で あ っ た(p<0.01).
3. ハ ウ ス ダ ス ト,カ ン ジ ダ 共 にLARを 呈 し た群 で はBALF中 の 抗 原 特 異 的 総IgG, IgG
1抗 体 が 各 々IAR群,NR群 に 比 し て 有 意 に 高 値 で あ っ た(共 にp<0.01).
4. ハ ウ ス ダ ス トでLARを 呈 し た 群 で は 抗 原 特 異 的 総IgG, IgG 1抗 体 の 分 泌 係 数(RCE) がIAR群 よ り も有 意 に 高 値 を示 し(各 々p< 0.01, p<0.05),さ ら に1.0よ り も高 値 で あ り,
こ れ らの 抗 体 産 生 が 肺 局 所 で 亢 進 し て い る こ と が 示 唆 さ れ た.カ ン ジ ダ のLAR群 で は 抗 原 特 異 的 総IgG, IgG 1抗 体 の 分 泌 係 数(RCE)は 1.0前 後 で ハ ウ ス ダ ス トに 比 し低 値 を 示 し,肺 以 外 の 他 臓 器 で の 産 生 を伴 う こ とが 推 定 さ れ た.
以 上,LAR群 で はBALF中 抗 原 特 異 的IgG 1抗 体 が 高 値 を示 し,分 泌 係 数(RCE)に よ る 検 討 か ら こ れ ら の 抗 体 産 生 が 肺 局 所 で 亢 進 して お り,LARの 機 序 に 重 要 な 役 割 を 担 っ て い る こ と が 示 唆 さ れ た. 稿 を終 え る に あ た り,終 始 御 指 導 御 校 閲 を賜 った 恩 師 木 村 郁 郎 教 授 に 深 甚 の 謝 意 を表 す と共 に,直 接 御 指 導 戴 い た高 橋 清 講 師 に 深 謝 い た し ます. (本論 文 の 要 旨は,第40回 日本 ア レル ギー 学 会 総 会 にお い て発 表 した.) 文 献 1) 松 岡 孝:気 管 支 喘 息 患 者 好 塩 基 球 の免 疫 グロ ブ リン レ セプ ター とIgG抗 体 の作 用 機 序 に 関 す る研 究.第 1編 重 症 難 治 性 喘 息 に お け るIgG抗 体 の役 割 に 関 す る検 討.岡 山 医 誌 (1986) 98, 525-535. 2) 岡 田 千春, 高 橋 清, 宗 田 良, 松 岡 孝, 難 波 一 弘, 荒 木 洋 行, 木 村 郁 郎, 岸 本 卓 巳:遅 発 型 気 道 反 応 に お け る好 塩 基球 表 面 免 疫 グ ロ ブ リン の検 討.ア レル ギー (1988) 37, 5-11. 3) 岡 田 千春:気 管 支 喘 息 患 者 好 塩 基 球 表 面 のIgG結 合 に 関 す る研 究.第1編 遅 発 型 気 道 反 応 に お け るIgG 抗 体 の 関 与 に つ い て.岡 山医 誌 (1989) 101, 1015-1025. 4) 岡 田千 春:気 管 支 喘 息 患 者 好 塩 基球 表 面 のIgG結 合 に 関 す る研 究.第2編 遅 発 型気 道 反 応 に お け るIgG サ ブ クラ ス の役 割 に つ い て.岡 山 医 誌 (1989) 101, 1027-1036.
5) Kimura I, Tanizaki Y, Saito S and Takahashi
K: Differences in response to anti-IgE and to anti-IgG
in basophils from patients with bronchial asthma. Clin Allergy (1981) 11, 31-36.
6) 木 村 郁 郎:遅 発 ア レ ル ギ ー の 発 症 機 序-細 胞 反 応 を 中 心 に-;第3回 免 疫 薬 理 シ ン ポ ジ ウ ム 記 録 集,富 岡 玖 夫 編,デ ー ・エ ム ・ベ ー ・ジ ャ パ ン,東 京 (1985) pp 23-40.
7) Reynolds HY and Newball HH:
Analysis of proteins and respirftory
cells obtained
from human
lungs by bronchial lavage. J Lab Clin Med. (1974) 84, 559-573.
8) 竹 山博 泰, 谷 崎 勝 朗, 細 川正 雄, 多田 慎 也, 中村 之 信, 原 田 寛, 佐 藤 利 夫, 木 村 郁 郎:気 道 細 胞 反 応 か ら み た気 管 支 喘 息 患 者 の 病 態 に 関 す る研 究-気 管 支 肺 胞 洗 浄 法 に よ る検 討.ア レル ギー (1980) 29, 875-881.
遅 発 型気 道 反 応 とBALF中IgGサ
ブ クラ ス抗 体
817
9) 木 村 郁 郎:気 管 支 喘 息 に お け る気 道 洗 浄 液.医 の あ ゆ み (1982) 123, 401-411. 10) 名 部 誠:間 質 性 肺 疾 患 の病 態 に 関 す る研 究.第1編 気 管 支 肺 胞 洗 浄 液 に お け るFibronectinの 検 討. 岡 山 医 誌 (1987) 99, 1589-1600. 11) 牧 野 荘 平, 小 林 節 雄, 宮 本 昭 正, 信 太 隆 夫, 高 橋 昭 三, 可 部 順 三 郎, 中 島重 徳:気 管 支 喘 息 お よび 過 敏 性 肺 臓 炎 に お け る吸 入 試 験 の標 準 法.ア レル ギー (1982) 31, 1074-1076.12) Pepys J and Hutchcroft
BJ: Bronchial
provocation
tests in etiologic diagnosis
and analysis
of
asthma. Am Rev Respir Dis (1975) 3, 829-859.
13) Out TA, Jansen HM, van Steenwijk RP, de Nooijer MJ, van de Graaf EA and Zuijderhoudt
FMJ
: Clin Chim Acta (1985) 165, 829-835.
14) Delacroix DL, Marchandise
FX, Francis C and Sibille Y: Am Rev Respir Dis (1985) 132, 829-835.
15) 難 波 一 弘, 高橋 清, 多 田慎 也, 清水 一 紀, 中藤 研 一, 岡 田千 春, 辻 光 明, 沖 和 彦, 木 村 郁 郎, 谷 崎 勝 朗: Hust Dustに よる気 管 支 喘 息 患 者 の遅 発 型 気道 反 応 の発 症 機 序 に関 す る検 討-気 管 支 肺 胞 洗 浄 法 を中 心 に.ア レ ル ギー (1988) 37, 67-74.
16) de Monchy JGR, Kauffmann
HF, Venge P, Koeter GH, Sluiter HJ, Jansen HM and de Vries K:
Bronchoalveolar
eosinophilia
during allergen-induced
late asthmatic
reaction. Am Rev Respir Dis
(1985) 131, 373-376.
17) 高 橋 清, 清 水 一 紀, 難 波 一 弘, 中 山 堅 吾, 岡 田千 春, 辻 光 明, 中 藤 研 一, 多 田慎 也, 木 村 郁 郎, 周 藤 真 康, 谷 崎 勝 朗:重 症 難 治性 喘 息 患 者 に お け る末 梢 血 好 中球 分 画 か ら の ロ イ コ トリエ ン産 生 能 に 関 す る検 討.
ア レ ル ギー (1988) 37, 322-330.
18) 宮 川秀 文, 難 波 一 弘, 白石 高 昌, 名 部 誠, 棋 本 晃, 佐 藤 恭, 武 田 昌, 多 田慎 也, 高 橋 清, 木 村 郁 郎:重 症 難 治性 喘 息 に お け るIV型 ア レル ギー の 関 与 につ い て-Candida抗 原 に よ るIL-2産 生 能 と好 中球 遊 走 活 性-.ア レル ギー (1988) 37, 12-18. 19) 河 田一 郎:気 管 支 喘 息 の 発 症 機 序 に お け る好 酸 球 の動 態 に 関す る研 究.第1編 フ ロー サ イ トメ トリー を用 い た好 酸 球 分 離法 と好 酸球 遊 走 因 子 に つ いて.岡 山 医 誌 (1990) 102, 733-743. 20) 河 田一 郎:気 管支 喘 息 の 発 症 機 序 に お け る好 酸 球 の動 態 に 関す る研 究.第2編 カ ンジ ダ抗 原 に よる末 梢 単 核 球 由来 好 酸 球 遊 走 因 子 に つ い て.岡 山医 誌 (1990) 102, 745-755. 21) 高橋 寿保:気 管支 喘 息 に おけ る好 酸球 動 態 の調 節 に関 す る研 究.第1編 喘 息 患 者 末 梢 血 単 核 球 由 来 の 好 酸 球 遊 走 因 子(ECF)の 解 折.岡 山 医 誌 (1991) 103, 779-789. 22) 木 村 郁 郎;気 管支 肺病 変 に お け るア レ ル ギー と リン パ球.ア レル ギ ア (1990) 19, 12-16.
23) Pepys J, Faux JA, Longbottom
JL, McCarthy DS and Hargreave
FE: Candida albicans precipitins
in respiratory
disease. J Allergy (1968) 41, 305-318.
24) 伊 藤 幸 治, 工 藤 宏 一 郎, 奥 平 博 一, 吉 野 谷 定 美, 森 田 寛, 中川 武 正, 太 田 健, 中 田 俊, 庄 司俊 輔, 滝 沢 始, 木 谷 誠 一, 石 井 彰, 堀 内 正, 灰 田 美智 子, 山下 直 美, 本 田善 一 郎, 宮 本 昭 正, 早 川 哲 夫, 秋 山 一 男, 浦 田 誓 夫, 大 和 田 厚, 和 田 博:二 相 性 喘 息 反 応 に おけ る抗 体 な どの 血 清 蛋 白因 子 お よび各 種chemical mediatorの 時 間 的 推 移.日 胸 疾 患 会 誌 (1986) 24, 1113-1122,
25) Kurimoto
Y: Relationship
among skin test, bronchial challenge
and serology in house dust and
Candida albicans allergic asthma. Ann Allergy (1975) 35, 131-141.
26) Pelikan Z and Pelikan-Filipek
M: The late asthmatic
response to allergen challenge-Part
2. Ann
Allergy (1986) 56, 421-435.
27) Diaz P, Gonzalez MC,
Galleguillos FR, Ancic P, Cromwell O,
Shepherd D, Durham SR, Gleich GJ
and Kay AB: Leukocytes
and mediators
in bronchoalveolar
lavage during allergen-induced
late
phase asthmatic
reactions. Am Rev Respir Dis (1989) 139, 1383-1389.
IgG sabclasses in selective IgA deficiency. Importance of IgG2-IgA deficiency. N Engl J Med (1981)
304, 1476-1477.
29) Oxelius V-A, Berkel AI and Hanson LA: IgG2 deficiency in ataxia-teleangiectasia. N Engl J Med
(1982) 306, 515-517.
30) Beck CS and Heiner DC: Selective immunoglobulin G4 deficiency and recurrent infections of the
respiratory tract. Am Rev Respir Dis (1981) 124, 94-96.
31) Siber GR, Schur PH, Aisenberg AC, Weitzman SA and Schiffman G: Correlation between serum
IgG2 concentrations and the antibody response to bacterial polysaccharide antigens. N Engl J Med
(1980) 303, 178-182.
32) Fick RBJr, Naegel GP and Reynolds HY: Use of Pseudomonas aeruginosa lipopolysaccharide
immunoadsorbents to prepare high potency, mono-specific antibodies. J Immonol Methods (1980) 38,
103-116.
33) Merrill WW, Goodenberg D, Strober W, Matthay RA, Naegel GP and Reynolds HY: Free secretary
component and other proteins in human lung lavage. Am Rev Respir Dis (1980) 122, 156-161.
34) Warr GA, Martin RR, Sharp PM and Rossen RD: Normal human bacterial immunoglobulins and
proteins. Effects of cigarette smoking. Am Rev Respir Dis (1977) 116, 25-30.
35) Low RB, Davis GS and Giancola MS: Biochemical analysis of bronchoalveolar lavage fluids of
healthy human volunteer smokers and nonsmokers. Am Rev Respir Dis (1978) 118, 863-875.
36) Bell DY, Haseman JA, Spock A, McLennan G and Hook GER: Plasma proteins of the bron
choalveolar surface of the lungs of smokers and nonsmokers. Am Rev Respir Dis (1981) 124, 72-79.
37) Merrill WW, Naegel GP, Olchowski JJ and Reynolds HY: Immunoglobulin G subclass proteins in
serum and lavage fluid of normal subjects. Quontitation and comparision with immunoglobulin A and
E. Am Rev Respir Dis (1985) 131, 584-587.
38) Bryant DH, Burns MW and Lazarus L: New type of allergic asthma due to IgG "reaginic" antibody.
B
r Med J (1973) 4, 589-592.
39) Parish WE: Short-term anaphylactic IgG antibodies in human sera. Lancet (1970) 2, 591-592.
40) Stanworth DR and Smith AK: Inhibition of reagin-mediated PCA reactions in banboos by the human
IgG4 subclass. Clin Allergy (1973) 3, 37-41.
41) Vijay HM and Perelmutter L: Inhibition of reagin-mediated PCA reactions in monkeys and his
tamine release from human leukocytes by human IgG4 subclass. Int Arch Allergy Appl Immunol
(1977) 53, 78-87.
42) van der Giessen M, Homan WL, van Kernebeek G, Aalberse RC and Dieges PH: Subclass typing of
IgG antibodies formed by grass pollen-allergic patients during immunotherapy. Int Arch Allergy Appl
Immunol (1976) 50, 625-640.
43) 尾 崎 公 孝:ア レル ギー 性 肺 疾 患 に お け る末 梢 気 道 領 域 の免 疫 応 答 に 関 す る研 究.第2編 気 管 支 喘 息 に おけ る末 梢 気 道 肺 胞 領 域 の 免 疫 組 織 学 的検 討.岡 山医 誌 (1990) 102, 911-920.
44) Kazmierowski
JA, Durbin WA, Reynolds HY: Kinetics of immunoglobulin
transport
into canine
bronchial secretions. Proc Soc Exp Biol Med (1976) 152, 493-498.
45) Morell A, Terry WD and Waldmann
TA: Metabolic
properties
of IgG subclasses in man. J Clin
Invest (1970) 49, 673-680.
46) Waldman
RH, Jungensen
PF, Olsen GN, Ganguly R and Johnson JE III: Immune response of the
human respiratory
tract. I. Immunoglobulin
levels and influenza virus vaccine antibody response. J
遅 発 型 気道 反 応 とBALF中IgGサ
ブ ク ラス抗体
819
47) Fujisawa T, Abu-Ghazaleh
R, Kita H, Sanderson CJ and Gleich GJ: Regulatory
effect of cytokines
on eosinophil degranulation.
J Immunol (1990) 144, 642-646 .
48) 中 田 重 俊, 斎 藤 明 美, 安 枝 浩, 信 田 隆 夫, 中 川 武正, 灰 田 美 智 子, 伊 藤 幸 治, 宮 本 昭正:ダ ニ の ゲ ル ろ過 分 画 お よび 精 製 ア レル ゲ ン に対 す るIgE, IgG 1お よ びIgG 4抗 体 の 酵素 抗 体 法 に よ る測 定.ア レル ギー
(1989) 38, 9-15.
