ヒ トの 尿 路 性 器 由 来 の マ イ コ プ ラ ズ マ の 検 出 に つ い て
-Mycotrim-GUTM培 地 と 慣 用 培 地 と の 比 較 広 島大学医学部泌尿器科学教 室 中 野 博 広 島大学医学部泌尿器科学教 室 岩 佐 嗣 夫 広島総合病院泌尿器科 角 井 徹 (昭和62年6月1日 受付) (昭和62年6月25日 受理)Key words: Mycotrim-GUTM, Ureaplasma urealyticum, Mycoplasma hominis
要 旨
ヒ トの 尿 路 性 器 の マ イ コ プ ラ ズ マ で あ るMycoplasma hominisとUreaplasma urealyticumの 検 出 性 能 をMycotrim-GUTM培 地(Hanna Media, Berkeley, Calif.)と 慣 用 培 地(M. hominis はPPLO-broth, A7 agar, PPLO-agar, U. urealyticumはT-broth, A7 agarな ど)と の 間 で 比 較 検 討 した 。
Mycotrim-GUTM培 地 はM. hominisあ る い はU. urealyticumの 標 準 株 に よ る検 討 で は 前 者 は105 CCU/ml菌 液 の10-4希 釈 ま で,後 者 は106CCU/ml菌 液 の10-5希 釈 ま で 検 出 可 能 で あ っ た 。 この 成 績 は 慣 用 培 地 に 勝 る と も劣 ら な か っ た. 尿 路 性 器 由 来 の 由来 の 臨 床 材 料 に よ る 検 討 で は27検 体 の うち,慣 用 培 地 で はU.urealyticumを18検 体 (67%)か ら,M. hominisを4検 体(15%)か らそ れ ぞ れ 分 離 した 。 そ れ に対 し てMycotrim-GUTM培 地 で は そ れ ぞ れ15検 体(56%)お よ び4検 体(15%)か ら 分 離 した.す な わ ちMycotrim-GUTM培 地 で は, 慣 用 培 地 でU. urealyticumが 分 離 され た18検 体 の うち,3検 体(11%)に お い て バ ク テ リア の 増 殖 に よ り,U. urealyticumの 検 出 は不 可 能 で あ っ た 。 しか し,残 る24検 体 で は 慣 用 培 地 と の 陽 性 お よ び 陰 性 一 致 率 は と も に100%で あ っ た.以 上 の 事 か らMycotrim-GUTM培 地 は 尿 路 性 器 か ら材 料 を 対 象 と して の マ イ コ プ ラ ズ マ の検 索 に は バ ク テ リア の増 殖 が 認 め ら れ た 場 合 に は,再 分 離 を 必 要 とす るが,一 般 病 院 に お け る 検 査 法 と し て は 簡 便 か つ 有 用 な シ ス テ ム と考 え ら れ る. 序 文 ヒ トの感 染 症 を 引 き起 す マ イ コプ ラズ マ の 中 で 尿 路 性 器 か ら し は し は 分 離 さ れ る 菌 種 と して は
Mycoplasma hominisお よ びUreaplasma
urealy-ticumな ど が あ る1).尿 路 性 器 に 分 布 す る これ ら
の マ イ コプ ラズ マ は新 生 児 の 時 期 に は 極 め て少 な い が2),年 齢 と共 に 増 加 す る と いわ れ て い る.マ イ
コ プ ラ ズ マ は 性 行 為 に よ って 伝 達 す る こ とか ら性
行 為 感 染 症Sexually transmitted disease(以 下
STD)の 病 原 体 と され る3)が,ヒ トの 尿 路 性 器 に お け る意 義 や 病 原 性 に つ い て は現 在 まで の と こ ろ まだ 議 論 の あ る と こ ろ で あ る1).マ イ コ プ ラ ズ マ の 尿 路 性 器 に お け る意 義 や 病 原 性 を 明 確 に す るた め に は臨 床 の 場 に お い て これ ら微 生 物 の検 索 を 続 け る こ とが 必 要 で あ る.し か しな が らそ の 分 離 法 は 培 地 の調 整 な どが繁 雑 な こ とか ら ほ とん ど実 施 さ れ て い な い.今 回Hana-Biologics社(Ber-別 刷 請 求先:(〒735)広 島県 安芸 郡 府 中 町青 崎 南2-15 マ ツ ダ病 院 泌 尿器 科 中 野 博
keley, Calif., USA)が 開 発 し たMycotrim-GUTM 培 地 は 薬 剤 デ ィ ス ク を 投 入 す る だ け の 調 整 で 済 み,一 般 病 院 の 臨 床 検 査 室 で も 容 易 に 使 用 で き る と 思 わ れ る.そ こ で,マ イ コ プ ラ ズ マ の 標 準 株 お よ び 尿 路 性 器 か ら の 臨 床 材 料 を 使 用 し て,そ の 有 用 性 を 検 討 し た. 材 料 と方 法 1. 対 象 1) 供 試 菌 株:標 準 株 と し てTaylor-Robinson 博 士(英 国)よ り分 与 を 受 け たU. urealyticum(T-960)お よ びM. hominis(PG-21)を 使 用 した. U. urealyticum(T-960)をT-brothに よ り,お よ びM. hominis(PG-21)をPPLO brothに よ り, そ れ ぞ れ1日 か ら3日 間 の 培 養 を し て,定 常 期 に 達 し た 菌 液 の 生 菌 数(CCU/ml)を 求 め る と 同 時 に,そ の 原 液 を10-1か ら10-6ま で の 各 希 釈 液0.2ml ず つ を 供 試 培 地 に 接 種 し て7日 間 培 養,観 察 を し た. 2) 臨 床 材 料:対 象 は1986年10月 か ら1986年12 月 に か け て 広 島 市 内 の 某 泌 尿 器 科 医 院 お よ び 某 産 婦 人 科 医 院 を 受 診 し た 患 者 の う ち,不 妊 症 女 性 患 者16名 お よ びSTDと し て の 尿 道 炎 や 頚 管 炎 等 が 疑 わ れ た が 淋 疾 が 否 定 さ れ た 男 性 お よ び 女 性 患 者 11名,合 計27名 を 対 象 と し た.不 妊 症 女 性 か ら は 自然 排 尿 に よ り採 取 した9尿 検 体 と滅 菌 綿 棒 に よ り採 取 し た 頚 管 のswab7検 体,STDが 疑 わ れ た 男 性 か ら は 尿 道 のswab3検 体,女 性 か ら は 頚 管 のswab8検 体 を そ れ ぞ れ 滅 菌 綿 棒 に よ り採 取 し た.尿 検 体 は そ の ま ま,swabは 輸 送 用 のT-broth 培 地1mlの 入 っ た 試 験 管 に 入 れ て よ く撹 拌 し た 後 に,そ れ ぞ れ の0.2mlを 各 供 試 培 地 に 直 ち に 接 種 した.培 地 の 観 察 は 毎 日 行 な い,7日 間 培 養 し た. 2. 培 地:Mycotrim-GUTM培 地 は25cm2の 組 織 培 養 の フ ラ ス コ の 中 に5mlの 液 体 培 地 とCaCl2の 選 択 固 形 培 地 を 有 す る.い ず れ の 培 地 も2.1% PPLO broth, 10%馬 血 清,10%fresh east ext-ract, 0.5%glucose, 0,5%arginine, 0.005%phe-nolredお よ び0.1%ureaな ど を 含 ん で い る.固 形 培 地 に は さ ら に1.0mM calcium chloride, 20mM potassium phosphate buffer(pH6.0)お よ び1.5 %agarが 加 え ら れ て い る.こ れ を 処 方 に 従 っ て 添 付 の 抗 生 物 質 デ ィ ス ク(nystatinとcefoperazo-neを 含 む)を 各 フ ラ ス コ 毎 に1枚,30分 間 加 え た も の を 使 用 し た.そ れ に 対 し て,U. urealyticum の 分 離 に は 慣 用 培 地 と し てTaylor-Robinsonら の 培 地 を 改 変 し たT-broth4)とA7agar5)と を 使 用 し た.ま たM. hominisの 分 離 に はChanockら6) の 変 法 培 地 にarginineを1%添 加 し たPPLO-brothとPPLO agarお よ びA7 agarを 使 用 し た.
3. 分 離,同 定 方 法:Mycotrim-GUTM培 地 で は 材 料 を マ ニ ュ ア ル に し た が っ て 接 種 し た 後, キ ャ ッ プ を 締 め,固 形 部 を 上 に し て37℃ で 培 養 し, 液 体 部 の 色 調 変 化 に よ るpHの 上 昇(M. hominis
Fig. 1 Decrease of pH of Mycotrim-GUTM medium 48 hours after inoculum of M. hominis strain PG-21 and U. urealyticum strain T-960.
Fig. 2 Colonies of M. hominis strain PG-21 (A) and U. urealyticum strain T-960 (B) in
で は 黄 色 か らorange-red color, U. urealyticum で は さ ら にdeep red colorへ の 変 化)(Fig.1)な ら び に,実 体 顕 微 鏡 下 で の 特 有 の コ ロ ニ ー(U. urealyticumで は 微 小 黒 色 コ ロ ニ ー,M. hominis で は 中 心 部 が 乳 首 上 の コ ロ ニ ー)の 形 成 を 観 察 し た(Fig.2).T-brothで は37℃ で 好 気 的 に 培 養 し, そ の 色 調 が 黄 色 か ら赤 紫 色 へ 変 化 し た も の をU. urealyticum陽 性 と 判 定 し た.PPLO-brothで は 37℃ で 好 気 的 に 培 養 し,そ の 色 調 が 黄 色 か ら 赤 紫 色 へ 変 化 し た も の をM. hominis陽 性 と し た.た だ しM. hominisに つ い て は 最 終 的 に は 抗M. hominis血 清 を 用 い て の 発 育 阻 止 試 験 に よ り 同 定
し た.A7 agarで は5%CO2・95%N2混 合 ガ ス 条 件 下 で 微 好 気 的 に37℃ で 培 養 し た.観 察 は 実 体 顕 微 鏡 下 で の マ イ コ プ ラ ズ マ お よ び ウ レ ア プ ラ ズ マ 特 有 の コ ロ ニ ー形 成 の 確 認 に よ り行 っ た. 成 績 1. 標 準 株 に よ る 培 地 性 能 の 比 較 U. urealyticumの106CCU/ml菌 量 の 接 触 で は 希 釈 が10-6よ り高 く な る と い ず れ の 培 地 で も観 察 期 間 中 に 色 調 の 変 化 や コ ロ ニ ー の 確 認 は 出 来 な か った.M. hominisの105CCU/ml菌 量 の接 種 で はA7agarで は 希 釈 が10-4よ り,そ の 他 の培 地 で は希 釈 が10-5よ り高 くな る とい ず れ の 培 地 で も観 察 期 間 中 に 色 調 の変 化 や コ ロニ ーの 確 認 は 出来 な か っ た. 2. 臨 床 材 料 に よ る培 地 性 能 の比 較 産 婦 人 科 医 院 と泌 尿 器 科 医 院 とで 採 取 した 尿 お よび 男 性 尿 道swabま た は 女 性 頸 管swabの 合 計 27検 体 を 供 試 材 料 と し,培 地 別 のU. urealyticum お よ びM. hominisの 検 出 能 を 比 較 した.そ の結 果,慣 用 培 地 に お い て は27検 体 中U. urealyticum を18検 体(67%)か ら,M. hominisを4検 体(15%) か らそ れ ぞ れ検 出 した.そ れ に対 してMycotrim-GUTM培 地 で は そ れ ぞ れ15検 体(56%)お よ び4検 体(15%)を 検 出 した.こ れ らの 中 でM. hominis が 検 出 され た4検 体 は いず れ の培 地 に お い て もU. urealyticumも 検 出 され た. Mycotrim-GUTM培 地 の3検 体 に お い て は 汚 染 した バ クテ リア の増 殖 に よ りマ イ コ プ ラズ マ の 判 定 が不 能 で あ っ た.し か しな が ら,こ れ らの3検 体 は 慣 用 培 地 に お い て は 全 てU. urealyticumが
Table 1 Sensitivities and specificities of Mycotrim-GUTM medium for the detection of U. urealyticum in 24 urogenital specimens compared with conventional syetems
Table 2 Sensitivities and specificities of Mycotrim-GUTM medium for the detection of M. hominis in 24 urogenital specimens compared with conventional system
Table 3 Comparison of inoculum size for the growth of U. urealyticum strain and M. hominis strain in Mycotrim-GUTM medium and conventional media
*CCU/ml of pure cultured strains: U. urealyticum 106CCU/ml, M. hominis 105CCU/ml
(+)indicates a shift to alkaline pH or colony formation in medium. (-)indicates no color change nor colony formation in medium.
検 出 され た.そ こで これ らの3検 体 を除 い た24検 体 に つ い て 慣 用 培 地 とMycotrim-GUTM培 地 との 性 能 比 較 を 行 な った.そ の結 果 はU. urealyticum (Table 1),M. hominis(Table 2)の いず れ の場 合 に も陽 性 一 致 率,陰 性 一 致 率 と も に100%で あ っ た. 考 察 M. hominisやU. urealyticumの ヒ トの 尿 路 性 器 に お け る意 義 や 病 原 性 に つ い て は まだ 議 論 の あ る と ころ で あ る.に もか か わ らず,臨 床 の 場 に お い て は マ イ コ プ ラ ズ マ の 感 染 に よ る と思 わ れ る 臨床 症 状,所 見 な ど を認 め た 場 合 に は,マ イ コプ ラズ マ を 除 去 す る に十 分 な 治療 を 行 な うこ とが 要 求 され る こ と もあ る.し か し,こ れ らマ イ コ プ ラ ズ マ は 分 離 と同定 が 繁 雑 で あ り,一 般 病 院 に お い て は そ の 検 索 は 通 常 は ほ と ん ど 行 な わ れ て い な い. これ らマ イ コプ ラズ マ の 検 索 に 当 って,そ の意 義 を 明 らか に す る た め に は 検 体 採 取 の 方 法 や 保 存 の 問 題 に注 意 を 払 わ ね ば な ら な い事 は 一 般 の 細 菌 の 場 合 と同様 で あ る.し か し基 本 的 に は 正 確 な分 離,同 定 の技 術 が 必 要 で あ る.最 近,間 接 蛍 光 抗 体 法 を 用 い て,検 体 の直 接 塗 抹 標 本 よ りマ イ コプ ラズ マ の 迅 速 検 出法 な ど が報 告 され て い る が7), 一 般 的 に は そ の 検 出 は 培 養 に よ り行 な わ れ て い る.そ の 検 出方 法 の 原 理 は そ れ らの マ イ コ プ ラズ マ が存 在 す る と液 体 培 地 で はpHの アル カ リ化 が 生 じ,色 調 が 変 化 す る こ と,ま た 固 形 培 地 で は マ イ コ プ ラ ズ マ の コ ロ ニ ー が 特 徴 の あ るfried egg の 形 状 を示 す こ と を利 用 した も の で あ る. 尿 路 性 器 の マ イ コプ ラズ マの 手 軽 な 分 離 検 出培 地 と して 開 発 され たMycotrim-GUTM培 地 は1つ の 容 器 に 液 体 培 地 と 固 形 培 地 とを 有 し,myco-plasma spp, U. urealyticumの 何 れ も検 出 可 能 で あ る.一 般 的 に マ イ コ プ ラズ マ の 分 離 に 使 用 さ れ る培 地 を 長 期 間 保 存 す る と分離 性 能 が 低 下 す る と 言 わ れ,Kundsinら8)は 培 地 を 作 成 後 少 な く と も 1ヵ 月 以 内 に 使 用 す べ き で あ る と述 べ て い る. Mycotrim-GUTM培 地 は6ヵ 月 間 の保 存 が 可 能 で あ る と言 わ れ て お り,著 者 らの 成 績 で も培 地 性 能 の 劣化 は 求 め られ なか っ た .こ れ らの事は培地 に 関 す る省 力 化 を 意 味 し て お り,一 般 病 院 の 臨 床 検 査 室 で は 大 変 魅 力 的 で あ る.こ
のMycotrim-GUTM培 地 を 用 い,M. hominisお よ びU.
urea-lyticumの 標 準 株 の 希 釈 系 列 を 用 い て の検 討 で も Mycotrim-GUTM培 地 は 慣 用 培 地 に 同 じ か 勝 る 検 出能 力 を 有 し て い た. また 尿 路 性器 の 臨 床 材 料 か らの検 出 率 は著 者 ら の 結 果 はWoodら9)の 成 績 と 同様 で,慣 用 培 地 に 匹 敵 す る成 績 で あ った.た だ し慣 用 培 地 に 臨 床 材 料 を 接 種 した 場 合 に は汚 染 バ ク テ リア の 増 殖 は認 め られ な か った の に 対 して,Mycotrim-GUTM培 地 で は11%(27例 中3例)に そ れ が 認 め ら れ た . Woodら9)も バ ク テ リアや 真 菌 に よ る 汚 染,増 殖 は慣 用 培 地 の4%に 対 し て,Mycotrim-GUTM培 地 で は7%に 認 め て い る.こ の 様
にMycotrim-GUTM培 地 は 慣 用 培 地 よ り も バ ク テ リ ア の 増 殖 を 生 じ 易 い と思 わ れ る.し か し な が ら,バ ク テ リ ア や 真 菌 の 増 殖 が 有 っ て もMycotrim-GUTM培 地 の 固 形 部 上 で は 慣 用 培 地 の 固 形 培 地 と 同 じ くmyco-plasma spp., U. urealyticumの 何 れ の コ ロ ニ ー も 検 出 可 能 で あ る と さ れ る9).し か し 自 験 例 で は 慣 用 培 地 で はU. urealyticumが 検 出 さ れ な が ら, Mycotrim-GUTM培 地 上 で は バ ク テ リ ア の コ ロ ニ ー の た め に マ イ コ プ ラ ズ マ の コ ロ ニ ー の 観 察 が 不 可 能 と な っ た.し た が っ て,バ ク テ リ ア な ど の 増 殖 が 認 め ら れ た 場 合 にMycotrim-GUTM培 地 は 再 検 す る か,慣 用 培 地 で 確 認 す る 必 要 が あ る. 稿 を終 える にあ た り終 始 御 丁寧 な御指 導 を賜 わ った,広 島 県立 衛 生研 究 所 金 本康 生 博 士 に深 く御礼 申 し上 げ ます. 文 献
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Isolation of Human Urogenital Mycoplasma, Mycoplasma hominis and
Ureaplasma urealyticum -omparative Study Between
Mycotrim-GUTM and Conventional Culture
Mehtods-Hiroshi NAKANO & Tsuguo IWASA
Department of Urology, Hiroshima University School of Medicine Tooru SUMII
Division of Urology, Hiroshima General Hospital
