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鳥 型 結 核 菌 の 変 異 に 関 す る 研 究

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Academic year: 2022

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(1)576.. 852.. 211. 鳥 型 結 核 菌 の 変 異 に 関 す る 研 究 第1編 原 株,変. 異 株 の 生 物 学 的 並 び に 物 質 代 謝 の比 較 研 究. 岡山大学医学部微生物学教室(主 任:村 上 栄教授) 赤. 木. 和. 彦. 〔昭和32年5月12日. 受稿〕. 目 1.緒. D.. 言. 2.供 A.培. catalaseの. E.物. 試 菌株 の由 来 と使 用 培 地. 3.実. 次 比較. 質代謝の比較. 験 成績. イ.脱. 水 素 酵 素 反応 の比 較. 養性状. ロ.酸. 素 消 費 量 の比 較. B.染. 色 性 並 びに 抗 煮沸 性. 4.総. C.各. 種 薬 剤 に対 す る抵 抗 性. 5.結. 括 並 びに 考 案 論. て 結 核 菌 の 非 抗 酸 化 が 長 谷 川 一 門8) 9)に よ り 1.緒. 言. 報 告 さ れ た.即. 結 核 免 疫 が 感 染 免 疫 に よ る もの で あ る 限 り 結 核 菌 の 弱 毒 化 は 重 要 な 問 題 で あ る.し. か し. digitonin, dealin等. ち 結 核 菌 培 地 にdigitalin,. comvallamarin,. digicorin,. ro. を 添 加 す る こ と に よ り,速 や か な 非. て 毒 力 の 低 下 は 如 何 に し て 起 る もの で あ る か,. 抗 酸 化 が 可 能 で あ り,又 該 菌 は グ リセ リ ン を. こ の 問 題 に 関 し て は,直. 含 ま ぬ 普 通 寒 天 培 地 に 良 好 な 発 育 を 示 し,そ. す る 方 法 と,菌. 接 毒 力 の低 下 を究 明. の 非抗 酸 化 を第 一 歩 に 撰 ん だ. も の の 二 つ の 流 れ が あ る. Fleischman1)は. れ を グ リセ リン加 培 地 に還 元 す る こ とに よ り 病 原 性 も復 帰 す る と述 べ,そ. 不適 当な 培 地 に継 代 を続 け. る と 菌 の 毒 力 の み な ら ず 生 活 力 を も失 うが,. の 他 培 養 性 状,. 血 清 反 応 を 比 較 検 討 し て い る. 結 核 菌 の抗 酸 性 脂 質 と毒 力 の関 係 は極 め て. 好 適 な 培 地 に 於 け る継 代 で は 毒 力 に 変 化 は 起. 興 味 深 く, Anderson. ら な い と述 べ て い る.本. 格 的 弱 毒 化 はCal. Lederer13)等. mette,. リ セ リ ン加 牛 胆 汁 馬. 又 抗 酸 性 脂 質 の 量 は 培 地 中 の グ リセ リ ン の 濃. Guerin2)が5%グ. 10), Choucroun11),. 鈴 薯 培 地 に 毒 力 株 を13年 間 継 代 す る こ と に よ. 度 が 高 い 程 増 加 す る こ と をLong. り著 明 に 毒 力 を 低 下 せ しめ たBCG株. ner14)は 染 色 試 験 で 見 て い る.. 的 に 得 た こ とに 始 ま る.但 確 で な い た め,対 は 不 可 能 で あ る. H37. Rv株(毒. を人工. し原株 の由 来が 明. 応 す る毒 力 株 との比 較 研 究 Steenken3)が. 力 株)よ. 人 型 結 核 菌. り無 毒 のH37. の解 離 を 報 告 し て 以 来,こ. Ra株. の両 株 の使 用 に よ. り比 較 研 究 は 極 め て 容 易 と な りMartin4), Asselineau5),. Seibert6),. Stein and. Moore7)等. は 特 に 菌 体 成 分 の 比 較 分 析 を 報 告 し て い る. 一 方我 が 国 に於 ては. ,弱. 毒化 の 第 一 歩 と し. Dieryck15)は. Bloch12),. に よ り詳 細 に 追 究 さ れ て い る.. and. Fin. Chargaff. and. 結 核 菌 が 脂 質 を 合成 す る の に グ. リ セ リ ン が 用 い られ る こ とは 明 ら か で あ る と 述 べ て い る. 今 村16)等 は 培 地 か ら グ リ セ リ ン を 漸 減 す る こ と に よ り遂 に 普 通 寒 天 培 地 に 発 育 し 得 る 変 異 株 を 得 て い る.彼 BCGの. は変 異株 は 毒 力 が 低 下 し. 代 用 と な り得 る 株 の あ る こ とを 暗 示. し て い る が,普. 通寒 天 に於 け る発 育 は極 め て. 不 良 の た め,試. 験 はす べ て グ リセ リン加 培 地.

(2) 1258. 赤. に 還 元 培 養 し て か ら供 試 し て い る.著 つ て 人 型,牛 lm,. 型 の 両 株 を 用 い,こ. digitonin等. 者はか. れ にrodea. 全 に抗 酸 性 を 除 去 す る こ. 普 通寒 天 に発 育 し得 る変 異 菌 も得 ら. れ な か つ た.. 彦. 養 源 と な し得 る こ と が 可 能 に な つ た た め と思. 以 後6ケ. 天 に 発 育 不 能 の 鳥 型Avian.. A株. を 用 い,そ. の 大 量 菌 を 直 接 普 通 寒 天 に 移 植 し,発 無 に か か わ ら ず10〜14日 す る こ とに よ り約2ケ. 育の有. 月 に し て 一 定 の,殆. ん ど安定 した 発. 育 を 見 る に 至 つ た の で 供 試 し た. 使 用 培 地:グ. リセ リン加 寒 天 培 地 並 び に普. リ セ リ ン 加 ブ イ ヨ ン培 地 と普 通 ブ イ ヨ ン 培 地 は 前 寒 天 培 地 の そ れ ぞ れ よ り,寒 天 を 除 い た もの で あ る. 4%グ. 毎 に普 通 寒 天 に継 代 年 に して 該 培 地 に 発 育. 可 能 な 変 異 株 を 得 る こ とが 出 来 た(詳 次 頁 に 於 て 述 べ る).か. 細には. か る方法 を 撰 ん だ 理. 村 等 の グ リ セ リ ン漸 減 に よ る 不 適 培. 地 へ の 適 応 化 と は 別 にYegian等17)の. 述べ る. 如 く,細. 菌 の突 然 変異 を 主 眼 にお い た た め で. あ る.し. か し極 め て 簡 易 な 方 法 に 頼 つ た た め,. リセ リ ン 加 寒 天 培 地 の 組 成.グ. リ ン40cc,ペ. プ トン10g,食. の 組 成 で あ り, NaOHに. 普 通 寒 天 培 地 の 組 成:ペ 4g,肉. 汁1lでpHは. プ ト ン10g,食. 補正. 塩. た.. A.培. 験 成 績. 養性 状. 普 通寒 天培 地 上 の変 異 株 の発 育 を,グ. 質 代 謝 に よ る 比 較 実 験 を 試 み た.. 汁1l. 前培 地 同 様 に 補正 し. 3.実. 以 下 変 異 株 と原 株 と の 間 に 於 い て 生 物 学 的. 塩4g,肉. てpHを7.0に. リセ. した も の で あ る.. 突 然 変 異 を 主 張 す る こ とは 勿 論 出 来 な い.. 性 状,物. 験 的 根 拠 に 立 つ も の で は な い.. 通 寒 天 培 地 の 組 成 は 下 記 の と う りで あ る.グ. そ こ で 伝 染 病 研 究 所 よ り分 与 さ れ た 普 通 寒. 由 は,今. 和. わ れ るが,実. を作 用せ しめ 長 谷 川等 の 試. 験 を 追 試 し た が,完 と も,又. 木. リセ. リン寒 天 培 地 上 に 発 育 せ る標 準 株 と比 較す る 2.供. 試 菌 株 の 出来 と使 用塔地. 標 準 株(Avian.. 染 病 研 究所 よ り. リン寒 天培 地 に還 元 培 養 す る と初 代 よ り発 育. リセ リン 加 寒 天 培 地 に. は 旺 盛 で あ り標 準 株 との 間 に 著差 は見 られ な. A株)伝. 分 与 を 受 け た 後4%グ. 継 代 し て い る も の を 供 試 し た.標 20mg. per ccの. の0.1ccを. と極 め て不 良 で あ る.し か し変 異 株 を グ リセ. 準 株 は. 生 理 的 食 塩 水 浮 游 液 と し,そ. 普 通 寒 天 培 地 に 培 養 せ る も 全 く発. こ れ は 緒 言 に 於 て 既 説 し た 如 く,. 標 準 株 の4%グ た 菌 塊 を,そ. リセ リ ン 加 寒 天 培 地 に 発 育 せ の ま ま大 量 釣 菌 し,普. 斜 面 に 充 分 に 塗 沫,培. 標 準 株,変 異株 の生 理 的 食 塩水 浮 游 液1mg per ccの0.1ccを. 培 地 に 移 植 し,日 を追 つ て. 集 落 の性 状,菌 形 を比 較 検討 して 見 た.標 準,. 育 は 認 め られ な か つ た. 変異株. い.. 養 し,以. 通寒 天 の. 下10〜14日. 毎. に発 育 の 有無 は か かわ らず継 代 した.. 変 異,還 元 の何 れ の株 に て も,集 落 は乾燥, 粗 造 で光 沢 な きR‑型. の 発 育形 態 を 示 した.. 標 準 株 は 培養10日 目に して 判 然 と集 落 の形態 が 認 め られ,時. 日の経 過 と共 に著 明 な発 育を. 示 し, 15日 頃 に は集 落 は 癒 合 し全 斜面 を覆 い,. 普 通寒 天 初 代 に於 ては僅 かに 発 育 を 認 め た. 以 後 皺壁,肥 厚 が 著 し く色 調 も淡 黄 白色 まで. が,こ れ は菌 体 内保 存 栄養 物質 の効 果 に よ る. 変 化 して 来 るが,変 異 株 に 於 て は 培養10日 で. もの と思 われ る.以 後 発 育 は全 く見 られ な く. は 僅 か に集 落 の形 成 が 認 め られ るに とど ま り,. な り, 4代 目頃 よ り菌 の膨 化, Ziehl‑Neelsen. 肉眼 的 に は形 態 は 判 明 しな い.以 後集 落 の癒. 氏 染 色 に よる染 色 力 の低 下,崩 壊 像 が 次第 に. 合,あ. 増 加 して来 る.こ の時 期 よ り継 代 毎 に 加 熱死. 形 成 は 認 め られ るが,皺 壁 形 成 に は 至 らず勿. 菌 を 同 時 に添 加 した処,約1年6ケ. 月の継 代. で 培 地 表面 に 発 育 像が 認 め られ るに 至 つ た. この現 象 は 残 存 菌が 多 くの 菌崩 壊 物 質 を栄. るい は凝 固 水 部 に 於 け る僅 か な 菌膜の. 論 肥 厚 感 は見 られ ない.集 落 の着 色 の程 度 も 標 準 株 の 如 く淡 黄 白色 に まで は 至 らなか つた. 還 元 株 に 於 け る集 落 性 状 は 変 異 株 よ りもむ し.

(3) 鳥型 結 核 菌 の 変 異 に関 す る研 究 ろ標準 株 に 近 い性 状 を 示 した.. 1259. 間 に位 す るが 変 異 株 の 示 した 傾 向 に 近 い感 が. 次 に各 株 に於 け る菌 の形 態 を比 較 す る と,. あ る.変 異 株 を 普 通 ブ イ ヨ ン培 地 に 発 育 せ し. 標 準株 では,何 れ の時 期 の もの も大 体 桿 状形. め る と,発 育 は 液全 面 に拡 が る程 度 に と ど ま. で 均一 性 を 示 すが,変 異 株 に於 ては 常 に 菌 形. る.更 に 普 通 ブ イ ヨ ン培 地 に 於 け る沈 澱 発 育. は 不定 で あ り,典 型 的 桿状 の もの よ りも膨 化. も可 能 で あ る.但 し標 準 株 で は 普 通 ブ イ ヨ ン. した もの,球 菌様 形 態 を示 す ものが 多 く,極. 培 地 の 液 面 は勿 論,沈 澱 発 育 を 認 め ら れ な. め て 多様 性 に 富 んで い る.還 元 株 は両 株 の 中. い(第1表,第2表).. 第1表. 第2表. 還元 株 の 培養 性 状. 標 準株 と変 異 株 の培 養 性 状 の 比 較. B.染. 色性並びに抗 煮沸性. 1乃 至数 個 の菌(菌 浮 游 液)か ら培 養 を開 始 した場 合,標 準 株 は 培養15日 に してZiehl‑ Neelsen氏 染 色 に よ り赤 染 し,し か も 赤 染 度 は 一様で あ るが,変 異 株,還 methylen. 元 株 に於 て は. blauで 青 染 す る 菌体 も大 部 認 め ら. れ,こ の傾 向 は 特 に 変異 株に 強 い.又 変 異 株, 還元 株 中 膨 化 した 菌体 に は赤染 度 の 弱 い もの が 非 常 に 多 い. 以 上 の 成 績 は抗 煮 沸 性 と重 要 な 関係 の あ る こ とを 想定 し,沸 騰 水 中 に 於 け る脱 色 試 験 を 検 討 した.染 谷18)は脱 色 試 験 に 於 て 使 用 す る 沸 騰 水 のpHが. 影 響 す る こ とを述 べ て い る の. で 同 一 条件 を撰 ぶ た め 蒸溜 水 をNaOH液. に. て 中性 に補 正 した もの を 使 用 した. 各 試 験株 とも培 養 日数 の経 過 と共 に抗 酸 性 は強 くな るが,何 れ の 時 期 に 於 て も標 準 株 は.

(4) 1260. 赤. 木. 変 異 株 に比 して,抗 煮 沸 性 は 著 し く高 く,例. 和. 彦 著 者 は 標 準 株 と変 異 株 を 用 い 各 種 薬 剤 に 対. えば 培養20日 の標 準 株 は15分 の 煮沸 に 耐 え得. す る 抵 抗 性 を 比 較 検 討 し た.標. るが,変 異 株は 僅 か5分 の 煮 沸 に抵 抗 出来 な. 養 菌 を,変. か つ た.還 元株 の 抗 煮沸 性 は 標 準 株 と変 異 株. 菌 を 使 用 し た.供. のほ ぼ 中 間 に位 して い る.グ. リセ リン と菌 の. NaOH,. 抗 酸 性 とは深 い関 係 は あ るが,非 病 原 性 抗 酸. の4種. 異 株 は 発 育 が 不 良 の た め14日 培 養. 5%. 試 薬 剤 に2%. H2SO4,. で あ る.各. 菌 浮 游 液 と し, carbolの 間, NaOH,. く,変 異 株 も抗 酸 性 を保 持 して い る.し か し. streptomycinで. そ の程度 は標 準 株 に 比 し遙 か に弱 い結 果 を 得. 37℃. で 作 用 さ せ た 後,直. し,速. か に0℃. 第3表. 煮沸 試 験(Kf)に. よ る脱 色. cc streptomycin. 薬 剤 溶 液1ccに. に も よ く発 育 し,し か も抗 酸 性 を 有 す る 如. H2SO4で. 120,. に て10000. 10‑3, 10‑4mgと の0.1ccを. 10, 20分. 30,. 60分. 240,. 480分. 間, 間,. ち に氷 冷 水 中 に浸 r. p. m.に. て10. 清 の 作 用 薬 液 を 除 き,こ. 等 量 の 生 理 的 食 塩 水 を 加 え,更. 時間 の 比 較. 対 し1mg. 場 合 は5,. は10,. は60,. 分 間 遠 心 し,上. carbol, 10%. 1γper. 菌 の多 くが グ リセ リン を含 まぬ 普 通寒 天 培 地. た(第3表,第4表).. 準 株 は10日 培. に10‑1,. れ と 10‑2,. 生 理 的 食 塩 水 に て 稀 釈 し,そ. 小 川 氏 中 性 培 地 に 移 植 し,成. 績 は. 20日 後 に 発 育 集 落 数 を 算 定 す る こ と に よ り判 定 し た. 2%. carbolは. 使 用 した 薬 剤 中 最 も 殺 菌 力. が 強 力 で あ つ た.し. か して両 株 の間 に 有 意 の. 差 は 明 か に 認 め ら れ た.即. ち10分 間 作 用 せ し. め る と変 異 株 で は 発 育 は 全 く 認 め ら れ な くな つ た が,標. 第4表. 還 元株 の抗 煮 沸試 験. 準 株 に 於 て は20分 間 の 作 用 で も僅. か な が ら生 存 菌 の あ る こ とが 確 か め ら れ た. 又NaOHを. 用 い た 場 合 に もcarbolの. 場 合 と. 大 体 に於 て 同一 の傾 向 を 示 し有意 の差 が 認 め ら れ た(第5表). H2SO4の NaOHで. 場 合 に 於 て は 両 株 の 間 に, carbol, 見 ら れ た 如 き 判 然 た る 差 は 認 め難 い. が 僅 か な が ら 変 異 株 が 抵 抗 性 が 弱 い 様 で あ る. 又streptomycinで い.即 C.各. 種薬 剤 に対 す る抵 抗 性. は 有 意 の 差 が 認 め ら れ る が,抗. 結 核 菌 の 理 化 学 的 抵 抗 性 を 検 討 す る 場 合, 抗 酸 性 物 質 を 除 外 して 論 ず る こ と は 出 来 な い と思 う. Jordan. and. Burrows19)は. は 殆 ん ど差 は 認 め ら れ な. ち 殺 菌 化 学 薬 剤 特 にcarbol,. 熱,乾. 燥,. 消 毒 薬 品 に 対 し抗 酸 性 菌 以 外 の も の よ り も一. streptomycinで. NaOHで. 地 物質 で ある. は 全 く差 が 示 さ れ な い(第6. 表). D.. catalaseの. 比較. グ リセ リン 寒 天,普. 通 寒 天 に そ れ ぞ れ10日. 般 に 抵抗 性 の強 い のは 結 核 菌 の有 す る蝋 質 に. 培 養 し た 標 準 株 並 び に 変 異 株 に つ きcatalase. よ る と述 べ, Suyenaga20)は. の 存 在 の 有 無 を 定 性 に よ り検 査 し た 結 果,両. 非 抗酸 性 結 核 菌 が. 抗 酸 性 を 有 す る も の よ り もgentianaviolette,. 株 共反 応 が 陽 性 で あ る こ と が 確 認 出 来 た.な. methylen. お 変 異 株 の前 記 グ リセ リン ブ イ ヨ ンに於 け る. blauの. 述 べ, Warnery21)は. 殺 菌作 用 に 対 し弱 い こ とを 古 い 培 養 菌 ほ どH2SO4. に 対 す る 抵 抗 力 が 強 い こ とを 確 か め て い る.. 沈 澱 発 育 菌 に 於 て も微 弱 な が ら 陽 性 の 結 果 を 得 た..

(5) 鳥型 結核 菌 の変 異 に 関す る研 究 第5表. 註. carbol,. NaOHに. 1261. 対 す る抵 抗 性 の 比 較. 〓 … … 集 落 全 斜 面 を 被 い 個 立 が 認 め ら れ な い も の. 〓 … … 集 落 個 立 は し て い る が 計 算 不 能 の も の. 〓… …集 落 を 認 めな い もの. 数 字 … 集 落 数 を 示 す. 第6表. H2So4,. streptomycinに. 対 す る抵 抗 性 の 比 較. 註.参 照事項 は表5に 準ず. E.物. 質代謝の比較. 変異 株 が グ リセ リンを添 加 しな い普 通 寒 天. に 集 め, pH. 7.0に. M/10燐. 酸 緩 衝 液(0.85%NaCl加),. 浮 游 させ4000. r. p. m.で20分. 培 地 に発 育 可能 で あ り,し か も抗 酸 性 の著 し. 心 洗 滌 し,以. い低 下,薬 剤 に対 す る抵 抗性 の減 弱等 よ り考. 後 の 沈 澱 菌 を 滅 菌 濾 紙 上 に 集 め 脱 水,秤. え て,物 質代 謝 に 関 して も従 来 と異 る ものが. 氷 冷 し な が ら磨 砕 フ ラ ス コ 中 に て 磨 砕,上. あ るの で は ない か と推 察 し,脱 水 素 酵 素反 応. 緩 衝 液 に て20mg. 並 び に酸 素 の 消 費量 の面 よ り比 較 検 討 を加 え. 試 し た.. た. イ.脱 水 素 酵素 反 応 の比 較 供 試 株 は グ リセ リン寒 天 並 び に 普通 寒 天 に それ ぞ れ 大 量 に培 養 し10日 間 発 育 させ た標 準 株 と変 異株 を 使 用 した. 菌 浮游 液 の作 製:上 記 培 養 菌 を遠 心 沈 澱 管. 基 質:各. 後 同 様 の 操 作 を5回. 種 糖,有. 間遠. 反 復 し,最 量 し,. 機 酸,ア. ミノ 酸 で 何 れ も. 市 販 の 最 純 品 で あ り,蒸 溜 水 に てM/10溶 と し, pHは7.0に10%NaOH液. 溶 液 と した.. Merk製. 液. に て補 正 し. た. methylenblau:. 記. per ccの 菌 浮 游 液 と な し供. 品 を 撰 びM/5000.

(6) 1262 方 法:. 赤 Thunberg氏22)法. 0.25cc.副. 彦 各 種 ア ミノ酸 の脱 水 素 反応 の比 較. 質0.5cc,. 管 に 菌 浮 游 液0.5cc. を 容 れ,氷. 冷 しな が ら真 空 ポ ン プに て 水 銀 柱. 3〜5mgHgに. て 約5分 間 吸 引 し,直 ち に 菌 浮 游. 液 を 主 管 内 に 注 ぎ 込 み,そ. の 時 よ り37℃. 温 槽 中 に て, methylenblauが methylenblauに. 和 第9表. に 従 い, Thunberg. 管 の 主 管 に 前 記 緩 衝 液0.5cc,基 methylenblau. 木. 恒. 還 元 さ れleuco. な る まで に 要 す る 時 間 を 測. 定 し た. 成 績:基. 質 を 添 加 し な い 場 合 に 於 け るMb. の 脱 色 時 間 は 各 対 照 に 見 られ る 如 く,変 で 確 か に 短 縮 され て い る(第7, 第7表. 異株. 8, 9表).. 各 種 糖類 の 脱 水 素 反 応 の 比 較. 変 異 株 の 間 に 有意 の差 を 求 め る こ とは 出来 な か つ た)第7表). 有 機 酸 を 基 質 と した 場 合 は,標 株 と もpyruvateに が 速 進 さ れ,特. 準 株,変. 於 て 著 し くMb還. 異. 元速 度. に 変 異 株 で そ の 傾 向 は 強 い.. lactateも 両 株 に と り優 れ た 基 質 で あ り 得 る がpyruvate程. 還 元 速 度 の 短 縮 は 著 し くな い.. 標 準 株 はpyruvate,. lactateを. 除 き他 に 還 元. 速 度 を 短 縮 す べ き 基 質 は 認 め ら れ な い が,変 異 株 に 於 て は, acetate,. citrate, n‑butyrate. も 還 元 速 度 短 縮 し た(第8表).. 第8表. 各 種 有機 酸 の脱 水 素 反 応 の比 較. ア ミ ノ 酸 を 基 質 に 撰 ん だ 場 合 は ア ミノ 酸 中, histidine,. valine,. prolineは. 株 共 に 還 元 速 度 を 速 進 し,特 促 進 作 用 は 著 し い. arginineは 作 用 は 認 め ら れ な い.標. 標 準 株,変. 異. にhistidineの 両 株 共 に促 進. 準 株 で は, alanine,. asparagine,. leucineは 促 進 が 殆 ん ど認 め られ. な い が,変. 異 株 で は 還 元速 度 が 短 縮 され 得 る. 結 果 が 得 ら れ た(第9表). ロ.酸 供 試株. 素 消費 量 の 比 較 標 準 株,変. 異 株 の10日 培 養 菌 を 使. 菌 浮 游 液 の 作 製:前. 記 脱 水 素 酵 素 反 応 に於. 用 し た.. け る と全 く同 一 の 作 製 法 に 従 つ た が,洗. 糖 類 に於 ては,対 照 よ りMb還. 元 速 度 を著. し く速 進 すべ き基 質 は見 当 らず,又 標 準 株,. 滌並. び に 最 後 の 菌 浮 游 液 作 製 に 用 い た 緩 衝 液 は, M/50燐. 酸 緩 衝 液pH. 7.0(0.85%NaCl加).

(7) 鳥 型 結 核菌 の変 異 に 関 す る研 究 と し た.な. お 菌 浮 游 液 濃 度 は15mg. per ccと. 又lactateを 基 質 とせ る場 合 に於 て もPyru vateが 合 成 され て い た が, glycerolの 場 合 に. し た. 基質. 1263. glycerol並. び にTCA,. cycleに. 直 接. 関 与 す る 有 機 酸 を 撰 び 蒸 溜 水 に てM/10液 な し, NaOH液 方 法:. に てpH. Warburg法. 燐 酸 緩 衝 液pH 副 室 は20%. 7.0に. に 従 い,主. 7.0を0.7cc,菌. で15,. 30,. 補 正 した.. 4.総. 室 に基 質0.3cc 60, 90,. 120分. と. 酸 素 消 費 量 を 測 定 し た. 成 績:標. 括及び考案. 今 村16)等は培 地 中 の グ リセ リン濃度 を漸 次 減 少 す る こ とに よ り,普 通寒 天 に 発 育可 能 な 変 異 株 を 得 る こ とに 成 功 して い る.し か し発 育 極 め て不 良 のた め,一 度 グ リセ リ ン培 地 に. 準 株 と 変 異 株 の 比 較 に 於 て,基. 相 互 間 に は 有 意 の 差 は 認 め ら れ な い.し 変 異 株 に 於 て はendogenenous 極 め て 低 い が,標. 素消 費 が 高 い 結果 を得 た(第1図,第2図).. 室 に はM/50 浮 游 液2.0cc,. KOH液0.5cc,側. を 容 れ37.5℃. と. は痕 跡程 度 で あつ た. acetateは 両 株 共 に 酸. 質. か し. respirationが. 準 株 に 於 て は 著 し く高 く,. 還 元 培養 した ものを 実 験 に使 用 して い る.人 型,牛 型 結 核菌 は 分 裂 速 度 が弛 か で発 育 に 長 期 間 を 要 す るた め,著 者 は比 較的 発 育 の速 か な鳥 型 結 核 菌Avian.. A株 を 撰 び今 村 と は. 強 度 の 休 止 菌 と さ れ ざ る 限 り,基 質 に よ る 有. 異 つ た 方 法 で変 異 菌 を 得 た.即 ち 普通 寒 天 培. 効 酸 素 消 費 量 は うか が え な い. pyruvateを. 地 に 発 育不 能 のAvian.. 基 質 とした場 合 の酸 素 消 費が 両 株 と もに高 く. 通 寒 天 に移 植 し,発 育 の 有無 に か かわ らず 継. な い の で 測 定 後pyruvate,. 代 し約2年 に して 発 育 し得 る 変異 株 を 得 た.. lactate, glycerol. を 基 質 と せ る も の に つ きpyruvateの 試 み た 結 果,基. 質, pyruvateに. 定性 を. 於 て は,こ. A株 を大 量,直 接 普. 変 異 株 は 諸 実験 に 当 り,グ リセ リン培 地 に 還 元 培 養 の 要 な き程 度 に発 育可 能 で あ る.グ. リ. れ が 相 当 量 利 用 さ れ て い る こ とが 認 め られ た.. セ リン培地 に於 け る標準 株 の発 育 は 極 め て 旺. 第1図. 盛 で 集 落 は肥 厚 感 を 持 つが,普 通 寒 天 上 の 変. 標準 株 のO2消 費 に 対 す る基 質 の影 響. 異 株 に は肥 厚感 は 全 く認 め られ な い.し か し 集 落 形態 は両 株 ともにR型 で あつ た.又 変 異 株 の菌 形 は 極め て 不 均 一性 で膨 化 現 象 が 起 り, 又 球 菌 様 の変 形 した ものが 多 数 認 め られ た. 抗 酸性 の比 較で は 変 異株 に著 しい低 下が 見 ら れ た. 即 ち 抗酸 性 は 発 育 日数 と共 に強 化 し,標 準 株 は20日 培 養 以 上 に な る と15分 間 の煮 沸 に も 耐 え られ るが,変 異 株 は何 れ の培 養 期 間 の も 第2図. 変 異 株 のO2消 費 に対 す る基 質 の影 響. の も5分 間 以 上 の 煮 沸 に は耐 え られ な か つ た . しか し以 上 の変 異 株 の諸 性 状 は グ リセ リン培 地 に還 元 す る こ とに よ り,次 第 に 標 準 株 に 近 い性 状 に逆 変 化 を起 して来 る. 以 上 の こ とか ら結 核菌 とグ リセ リンは 密 接 な間 係 のあ る こ とは確 か で あ るが,変 異 菌 が 普 通 寒 天 に 発 育 し うる事 実 は,山 村23)の述 べ て い る如 く,結 核 菌 は適 応 に よ りC源 を よ く 利 用 し得 る.こ の こ とが 著 者 の場 合 に も適 用 出来 る と思 う. 化 学 薬 品 に対 す る抵 抗 性 に於 て も,こ れ が.

(8) 1264. 赤. 木. mycin)に. 準 株 との 間 に 著 差 は 認 め ら. れ な か つ た.結. 核菌 の理 化 学的 環 境 に対 す る. 抵 抗 性 に は,抗. 酸 性 が 強 く影 響 す る こ と を 多. く の 研 究 者 が 述 べ て い る が,抗. る.又. 基質. 還 元 速度 は常 に 変 異株 が 速 か で あ. 糖 類 を 基 質 と した 場 合 は 両 株 の 間 に 有 機 酸 中pyruvate,. 準 株 は そ れ以 外 に は 有効 な 基 質. は 見 ら れ な い.然 citrate, た.ア. る に 変 異 株 で はacetate,. n‑butyrateも. 促 進 作用が認 め られ. ミ ノ酸 中histidineは. 度 が 速 進 され た.し leucineは. 両 株 共 に還 元 速. か しalanine,. asparagine,. 標 準 株 で は 促 進 作 用 は 殆 ん ど認 め. ら れ な い が,変. 1.普. 通 寒 天 に 発 育 不 能 の 鳥 型Avian.. A. 代 す る こ とに よ. り,こ れ に 発 育 し得 る 変 異 株 を 得 た. 2.普. 通 寒 天 上 に 於 け る変 異 株 の 発 育 は,. グ リ セ リ ン培 地 の 標 準 株 に 比 較 して 不 良 で あ る.. lactateは 両 株 共 に 還 元 速 度 は 対 照 よ り促 進 され る が,標. の こ とを う. 論. 株 を 直 接 普 通 寒 天 に 移 植,継. 次 に 脱 水 素 酵 素 反 応 の 比 較 に 於 て,無. 病原性. らず け る も の と思 う. 5.結. こ と も加 味 す べ き で あ る と思 う.. 意 の 差 は 認 め ら れ な い.有. 力 が 強 い こ と を 述 べ て い るが,こ. 酸 性 脂 質 を含. め た 細 胞 膜 の 透 過 性 が 薬 剤 の 種 類 に よ り異 る. で のMbの. Bloch12)が. の弱 い 結 核菌 或 は 非 病原 性 抗 酸 菌 は脱 水素 能. 生 物 質 で あ る 場 合(strepto. は,標. 彦. が 強 い 結 果 を 得 た こ と は,. 殺 菌 薬 剤 で あ る 場 合 に は 変 異 株 は 著 し く抵 抗 性 が 弱 い が,抗. 和. 3.変. 異 株 の 菌 形 は 極 め て 不 均 一 性 で あ り,. 特 に 球 菌 様 の も の を 多 数 認 め た. 4.変. 異 株 は 抗 酸 性 が 著 し く低 下 し て い る.. 5.殺. 菌 性 薬 剤 特 にcarbol,. 対 し. て 変 異 株 の 抵 抗 性 は 著 し く低 下 して い る が, 抗 性 物 質 に 対 し て は,両. 株 の間 に著 差 を 認 め. な か つ た. 6.脱. 異 株 で は 認 め られ た.. 酸 素 消費 量 の比 較 検討 に於 て 基 質添 加 に よ. NaOHに. Mb還. 水 素 酵 素 反 応 に 於 て,無. 基 質 で の. 元 速 度 は 変 異 株 が 常 に 遠 か で あ り,酸. る 酸 素 消 費 量 の 差 は 殆 ん ど判 明 し難 い が,変. 素 消 費 量 の 比 較 で は 変 異 株 のendogenous. 異 株 に 於 て はendogenous. respirationは. respirationが. 低 い. に か か わ らず 標 準 株 に 於 て は 著 し く高 い 結 果 を 得 た.物. 標 準 株 よ り も 遙 か に 低 い.. 終 りに臨 み 終始 御 懇 篤 な る御 指 導 と御 校 閲 を賜 つ. 質 代 謝 と変 異 との 関 係 を 明 ら か に. た 恩 師村 上 教 授に 深 甚 の 謝意 を表 す ると共 に,実 験. す るに は 一 層 詳 細 な 試 験 を 要 す る こ と は 勿 論. に 終 始御 援 助 を下 さつ た微 生 物 学 教 室岡 好 万 氏 に感. で あ るが,抗. 謝 い た し ます.. 酸 性 の弱 い 変 異 菌が 脱 水 素能 力. 文 1) Fleischman,. L.:. Zent,. bl.. f. Tbk-forsch. 献 .,. 1, 53, 1907. 2) Calmette,. A.,. Ann.. Inst.. 626,. 1922.. 3) Steenken, 22,. 35,. et Negre, 561,. 1921,. L.: 36,. 14, 179,. 長 谷 川,西 1363,昭. 9). Am.. Rev.. Tuberc.,. 62,. Amer.. Chem.. Soc.,. 60 ,. 1938. J.. et al.:. 竹 内 他:結. 核,. 24,. 7‑8,. R. J.:. J.. 222,. Biol.. 1949. .. Chem.,. 83,. 505,. 1929.. 12) Bloch,. N.:. H.:. C. R.. Ac.. Sc., 230 ,. Science.,. Am.. 13) Asselineau, J. 166, 782,. F. B. et al.:. and. 2911‑2936,. Rev.. 98,. 327,. Tuberc.,. 1943, 67,. 629,. 1953.. 1950.. 72, 2678,. 京 医 事 新 誌,. 和10.. 11) Choucroun, J.. 1950.. 村:東. 10) Anderson,. G. J.:. 6) Seibert,. 7) Stein. Pasteur.,. A.. 1950.. 5) Asselineau, 877,. Boquet,. J. R.:. 4) Martin, 768,. Symp., 8). J.. Amer.. Chem.. Soc .,. 1950. Moore:. 14) Long,. E. R.. Tuberc., Cold.. Spring.. Habor .. and. 15) Chargaff,. Lederer,. E.:. Nature.,. 1950. and Finner,. 16, 523, F.. and. L. L.:. Am.. Rev.. 1927. Dieryck.:. Bioch.. Zeits.,.

(9) 鳥 型結 核 菌 の 変 異 に関 す る研 究 255, 16). 219,. 17) Yegian, J.. 大 微 生 物 病 研 究 所 年 報,. D.,. Bact.,. 18). 染 谷:結. 19). Jordan. 20) Suyenaga.:. 1932.. 今 村 他:阪. Budd,. 58, 核,. and. 4, 526,. 1, 1952.. V., Vanderlinde,. 9‑11,. Burrows.:細. Comparative. Am. Rev. 1920,. 21) Warnery,. R. J.:. M.:. Tuberc.,. 3, 473,. 1919,. 12, 260, 1925. C. R.. Soc.. Biol., 111, 575,. 1932.. 257, 1949.. 25,. Studies I:. 2,. 1265. 435,. 1950.. 菌 学(訳),. 2,. 346.. on the Variation studies of the. on the. original. 22). 岡. 23). 山 村:酵. 日本 細 菌 学 会 中,四 素 化 学 の 進 歩,. of Mycobacterium biological and. variant. 国 支 部 会, 2,. 269,. 1955.. 1950.. avium. and metabolic. aspects. strains. By Kazuhiko Akagi Department of Microbiology, Okayama University Medical School (Director: Professor Dr. Sakae Murakami) A large quantity of avian tubercle bacillus, avian A strain which could not multiply on the plain broth agar media, was trans-inoculated on the plain broth agar media and was successively cultivated on them. By this procedure a variant strain was obtained which could multiply on the plain broth agar media. The author tried the comparative studies on the various natures of the original and varient strains, and obtained the following results: 1) The multiplying rate of the variant strain on the plain broth agar media is worse than that of the original strain on the glycerine media. 2) The shape of the variant is full of diversity, and coccoid ones were particularly observed in large numbers. 3) The acid-fastness of the variant strain is remarkably diminished. 4) The variant strain showed a marked fall of resistance to phenol and caustic soda. 5) In the absence of any subatrate, the reduction rate of methylene blue is consistently speedier in the variant strain, while, as for the oxygen consumption, the endogenous res piration of the variant strain is remarkably lower than that of the original strain..

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参照

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