婦人科癌における癌抑制遺伝子ｐ１６の発言と細胞増殖調節機構

Title

婦人科癌における癌抑制遺伝子ｐ１６の発言と細胞増殖調

_{節機構( はしがき )}

Author(s)

横山, 康宏

Report No.

平成7年度-平成8年度年度科学研究費補助金 (基盤研究(C)(2)

_{課題番号07671773) 研究成果報告書}

Issue Date

1996

Type

研究報告書

Version

URL

http://hdl.handle.net/20.500.12099/272

M･,TamaYa T･0verexpressed _{p21Wafl/Ciplreduces}

telomerase activityin HeLa _{ce11s.87th Annual}

Meeting _of the american association for Cancer

Researchr Apri120-24′1996r Washington D･C.

研究成果

子宮頚痺培養細胞Hela､子宮内膜痺培養細胞工Shikawa,卵巣痺培養細胞2780より

RT-PCRで全open reading _{frameを含むfulllengthのp16=NK4} cDNA,

p21WAFIcDNAを作製し､TA-Cloning vector _{pCR==THに組み込んだ｡Sequence解析}

で=shikawa,Helaはp16=NK4はWilt tYPe,P21WAFlはcodon 31に点突然変異が確認

された｡しかしp16工NK4には遺伝子変異は観察されなかった｡これらは共にp16工NK4のmRNAは

Northern _{blottingでは明らかに発現が観察された｡一方p21WAFlの発現量はWestern} blotting,Northern _{blottingで弱い発現が見られた｡Hela細胞2780にpMAMneoに} Wild type _{p21WAFl､P16=NK4を組み込み遺伝子導入した｡遺伝子導入した細胞のうち}

2780,Hela細胞にexogenous wild tYPe _{P21WAFlの強発現が観察され これらの細胞亜}

株では発現量に応じた細胞増殖抑制が観察された｡しかしp16工NR4はmRNA _{レベルで発現量の} 増加は観察できなかった｡

次にp21WAFl､P16=NK4遺伝子をretoviralvector _{pXTlにSubcloningし}

ecotropic

packaglng Cellline _{Am12に感染させた｡G418で耐性株を選択し遺伝子組み替え}

retrovirusを作製した｡

Hela細胞､2780細胞からp21WAFl高発現株を得た｡これらは明らかな増殖能の低下､ Anchorage-independent増殖能の低下､ならびにTelomerase活性の低下がみられた｡し

たがってp21WAFl蛋白質には形質変換した細胞に対して分化を誘導するとともに､不死化した症 細胞を可死化する作用を有することが判明した｡