疹 経胎盤感 染 関す 研究

風疹 ^ウ ィ ^{ル ス} の 経 胎 盤 感染^に関 す^る研 究

金沢大 学が ん 研究 所ウ ィ ル ス鋸(主任^: 波川野基一･U^一教 授) 金沢医 科 大学 産 科婦 人科学 教 案 ( 主 任^: 乗 場 惣 除 数撲)

杉 浦 宰

( 昭和^{5 6}年^{1 2}月^{2 6}= 受 付)

先天性 風疹 症 候 群 (C R S) を研 究す るにあ た り, 風 疹ウィ⁾L^/ス(R V) の経 胎 盤 感雲如^{こ つ い}て in vitr ｡

実 験を行な^った^. 材料は 正常ま た は R V 感 染妊 婦か ら人工流 産に よ り得た絨 毛, 脱 落膜, 胎 児組 織を開い た. R V 感 染 妊婦^の風 疹 赤 血 球 凝 集抑 制 抗 体 価お よび補 体 給 合 抗 体 価は, 1^:5 1 2, 1^:1 6 であっ た. R V感 染妊婦よ り得た絨 毛お よ び胎 児 (C R,F R) 細胞か ら R V が分離さ れ, 中和 試 験に よ り分離ウイ ル ス の抗原 性, 生物学 的性 質は R V 樽 準 株M ^‑3 3 と類 似し ていること が 示 さ れ た. これ ら C R お よ ぴ F R 細 胞は堵餐 液^中に常に 1 0^{2 〜}1 0⁴F F U (フ ォ ^ー カ ス形成単位)/0.1ml の R V を放 出し, 螢光抗体 法 (I F) で は 1 ^〜2 ケ月 の間 陽性を呈 し, R V 持続感染^である^こと が証明さ れ た. しか し, R V 感染妊婦より得た脱 落膜 (D R) 細胞 で は, R V 産 生は認め られ ず, 膵 も陰性^であった. 正常^妊婦より 得^た絨 毛 (C N) 細胞^{の in vitl･}0 増資細胞 に R V を感染^{さ せ る と}, R V 持続感染となった が^, 正常脱落膜(D N) 細胞で は成^{立し な かった. こ}れ ら R V

持続感染^{C N} 細胞に お^いてもR V が常^に藤 生され,I F 陽性^である^こと が証 明さ れ た.ま た,絨 毛 癌 由 来^BcW ｡

細胞を 用^いて R V 感染実 験 を 行っ た結凰 C N 細 胞の場合^と同楓 ^{R V} 持 続 感染系が容 易に成立し^.た. この 時, BeW o 細 胞に お け る人絨毛性性腺刺激ホ^{ル モ ン}活性^{は R V} 感染^の初期^に極^{め て}抑 制さ れ た が, そ の后 次 第に正常域ま で回復^した. な お, 絨 毛細胞内^に潜伏内在す る C 型R N A ウイ ル スが R V 感染に よ り活性 化され, C R S 発生に関与^{す る}可能性を考え, 逆 転写 酵 素 酒 性を測定したところ, R V 感染^{C R,C N} 細 胞培 養系か ら抽出し た培養鞭の少 数例に有意^に高^い悟性が見出さ れ た. 以 上の所 見よ り, 絨 毛細 胞は R V に対 する感 受性^が強く, 容 易に R V 持 続感染となる が, 脱 落 膜 細 胞で は こ れ ら の傾 向 を認め な^{い こ}と が 示唆さ れた. R V の経胎盤感染の実 態は, 絨毛細胞感染を 経て, そ の結果成立 する持 続 感 染である と思わ れ る.

E^e_y w o rds r ubella vir u s, Cho rio nic c ell

, tr a n S^‑Pla c e ntal infe ctio n_, p^{e r s}iste nt in fe ctio n

妊娠 中の風 疹vir u s (r ubella vir u s : R V) 感 染^によ る胎 児 異 常 発 生は, 先天性 風 疹 症 候 群 (^{c o n}ge nital

r ube11a syndr o m e :C R S) と し て知ら れ て^おり, その 予防は近 年社 会 問題^{と も なっ て き ている.}

C R S の報 告は 1 9 4 1 年, オ ^ー スト ラ リ アの眼 科 医 Gr eg g^l)が白 内障と^の関 係に つ いて報 告し た の が最 初^で あ る. そ の後, 特に 1 9 6 2 ^〜1 9 6 4 年, 米 国にお け る風疹 大 流 行後の大 量の異常 児 発 生^について数 多く^の研 究が な さ れ^{2ト1 0)},R V の研 究は大き く発 展す る事と なった.

近 年で は, 本 症 発 生機 転の解 明には, 免 疫^{1 1卜 川}, イン

Studie s o n Tr a n s^‑P la c e ntal Infe ctio n of

Of V ir olog y (^{D ir e cto r : Pr of. M . H ata n o}),

タ ^ー フ ェロ ン^{7 ) 1 5)}な ど^の概 念も導入 さ れ,同 時^にその予

防と し て弱 毒 風疹 生v a c cin e の開 発に至^って^いる. し か し,C R S 発 生機 序^に関し て はし^ユま だ 不 明点も多く,

ワ クチン によ る 予防は可能で あ^っ て も, 治療あ る^いは C R S 発 生^の診 断は容 易で は な く, 近 年ま す ま す‑^→般の

妊 婦 風疹 感^卓如^こ対す る関心 は高ま り^{つ つ}あ る^. C R S 発 生 機 序 解 明^には R V の経 胎 盤 感 染^の実態,お よ び胎盤 経 由R V 感 染 成 立^の特 異性を検 討す る 必要が あ る. 胎 児^{へ の}風疹 感 染 径 路は, 経 胎 盤 感染 (^{tr a n s･}

pla c e ntal infe ctio n) あ る^い は血 行 性 胎 盤 胎 児感染

R ubella V ir u s. :K ohich i Sugi ^{u r a, D epa rtm e nt} Ca n c e r Re s e r ch In stitute, K a n a z a w a Univ e r^･ Si_{t y} a nd Dep^artm e nt of O bstetric s a nd G_yⁿ e c olog y (^{D ir e cto r : Pr of.S.K u w aba r a}),K a n a^･ Z a W a M edic al Univ e r si_{t y}.

風 疹^‑ソ ィ ル ス の綽 胎 盤 感 染に関^する研 究

(he m atOge n O u S Pla c e nt()^･fetal infe ctio n) と考え^ら れて^いる1 6 卜 2 0 )

. すな わ^ちR V は柑体 循 確に偵人 しvi^･

remi^a と な り, 胎 盤 感 鵜を起し, こ こで増 殖し たviru S

が胎児血中^{へ入 る. …} 方, 胎 盤は妊 娠 中^の外 部か らの

侵入を防禦す る働き が あ り, いわ ゆ る胎 盤 関 門(pla c e nt^･ al ba r rie r)^{u )}存在が知ら れ^{1 8)}, 縫 胎 盤 感 染が成 立す る には, こ の胎 盤 関門を通 過し な く^ては な ら な^い. しか し従来^{のC R S} 発生な どの疫 学 統 計な どからみる と,R V は比較的容易^に経 胎 盤感 珠がお こ^f)_, 妊 娠8遇以舶^の 母体^{のR V} 感 染で は, 胎 盤^へは 鵬 % が, 胎 児へは 5()% の感染移行が あ る と雷わ れ ている^{2 1 )}. C R S ^の発 生頻 度 は報告者^によt)異な り,妊 娠 初潮 感 狼^{で 9.72 2 1 〜5 7.92 3 }}% とさ れ て^いる. 著 者は, これ ら絹 胎 盤感 染^の絆紬を検 討する目 的で,R V 感 染と胎蔓臥 特に絨 屯 細胞^と山関 係

について細 胞増 魔法^によ る研 究を行な ^った^. 材料^およ び方 法

Ⅰ^. 実験 材料 1. 細 胞 1) 初代増 資細 胞

i ) 風 疹 感 染 妊 婦 山 楽 絨毛 (ch() rio n), 脱 落 (de cidu a), 胎 児(fetu s) 細 胞^: 発疹, リン パ節 腫 脹 な ど典型 的な 風疹 症状が出現し て か ら約7 ‖‖の妊 婦

に対し 人 工妊娠 中絶 術を施 行し, 得^られ た 子種 内 容 物 を胎盤と胎 児^にわ け, さら に前 者は絨 毛^およ び脱 落 膜

に分離し, 各^々を初 代培 蔑に供し た. 忠^一緒はこ の時 椎 娠1 2過で,血 清学 的棟備^にて 風疹^′れ血球 凝牒沌1 喘り^{( H I)} 抗体価5 1 2倍, 補体 結 合( C F )抗 体 仙¹⁽‖如 順 性 傾が 見ら れ た^.

ii ). 正常^ヒト絨 毛^およ び脱 落膜 細 胞^: 臨 床 的, 血 酒 学的^に風疹 感染が否定さ れ, ま た妊 娠 経 過に流 劇壇向 な どの異常を認^めない妊 娠を対 象と し て, 優 性 保 護 法

に基づいて 人 工妊鋸 中絶 術を施 けし掛^‑,れ た 子宮 内 零 物を,絨毛^およ び脱 落 膜に分離し^.初代 培 養を行な^った.

本実験では, 風疹 非 感 染 初代^ヒト絨毛細 胞^{と して 3} 株 (C N‑^{1: 妊}娠1 2 過,C N ‑2^: 妊 娠 7 過,C N ∴i: 妊 娠6過),お よ び風疹 非 感 染初 代^ヒト脱 落 膜細胞と し て 1株( D N‑^3: 妊娠6 遇) を 用し^ゝた.

これ ら, i), ii) の細 胞 培 養には 1 0% 牛 胎 児 血 清 加 Dulbe c c o

'

s m od ified M E M を用^いた.

2) 絨毛癌 細胞(^{BeW o}) ^: 既^に樹 た化さ れ た絨 毛癌 細 胞と し て Pat ti1lo ら^細によ る BeW o が よ ( 知ら れ て^い る. こ の細胞は, ヒト絨 毛 性性 腺 刺 激^{ホ ル モ ン}(hu m a n Cho rio nic go n adotr op i^{n :} H C G ) な どのho r m o n を分 泌し, 癌細 胞_{で は あ る が}絨 毛細 胞の性 格を有す るc e11 Iin eと し て R V の経 胎 盤 感 染^の1 つ の モ デル に本細 胞 を用^いた. BeW o 細 胞培 養^には W aym o uth^,s M B 75 2

4 3

･^{1 5 0}% , Gey

's B S S 4 0% ^, 牛 胎 児血 清^{1 0}% の培 薬 液 を用^いた.

:3) V ^{e r o}対朋包^: R V によ る特 異 的細 胞 変性 効 果(cy to^･ p^ath ic effe ct: C P E) を観 察し, R V 分離^に本細 胞を 用^いた. 2% c alf s e ru r n を含む Eagle^,s M E M で継 代 培 饗し, R V s am ple 感 染 後はc alf s e ru m 撫 棒 Eagle^'s M E M で維 持し た.

4) R K∵1 3 細 胞^: R V ^の力 価 測 定, す な わ ち fo c u s

fo rmi ng a s s ay に用^いた. 通 常の増 穂 紙代には 5% c alf

S e r u m を含む Eagle

'

s M E M を使用 し た.

2. V ir u s : R V の櫻 準 株と し て,既に金沢 大 学が ん研

究 所ウ イ ル ス郎^にてclo ning さ れ た M ^‑33 株を用^いた^｡

Ve r o 細 胞^盾用^いて継 代 増穂さ せ ^‑8 0^￠c に て保 存し た も

のを 用^いた｡

ⅠⅠ. 実験 方 法 1

. 紙 毛, 脱 落膜,胎 児組 織の初代壇談法^: 従 来よ り,

特^に絨 毛和柑包^の初 代培 凍^は比較 的 困 難と さ れ て^いる が,

い い^Jかの報 告が あ る3 5 ) 2 6 1

. 著 者ほ^, 種々 の条件の も と に初 代 絨 毛 細胞^の増 発法^{に つ い}て基 礎実験 を 行^い検 討 し た^{ヱ7 I}. そ^の結 果, Fig^.1 に示す方法が, 収魔お よ び そ の後の増 穂 率^の点に お^いて靡も適当である と考え, 本 法によ ^って増 強 実験 を行 なった. 脱落^{膜お よ}び胎 児 細 胞も同 様の方 法によっ た^. す な わ ち組 織を分離し, 充 分^に洗 潤 後D isp^{a s e2 8 ‑}5 0 0u/ ^ml に て 3 7⁰C, 5分 間綾 徐

に かく は ん し て細 胞を分 散^し,Clo s ed sy^ste m にて 3 7⁰C で静置 増 資^を子fな^r) た^. 細 胞 培 凍には常^に1 ^〜2^×1 0^$/

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