精度管理の基本と
報告書の書き方
埼玉社会保険病院
見城千春
精度管理 準備の流れ
会
議
血
液
セ
ン
タ
ー
へ
血
液
譲
渡
依
頼
血
液
製
剤
受
け
取
り
選
択
調
整
分
注
箱
詰
め
・
発
送
血液型用
220ml÷
170
＝1.3ml
不規則抗体用
220ml÷
100
＝2.2ml
精度管理 結果のまとめ
一
覧
表
入
力
入
力
確
認
評
価
評
価
確
認
精
度
管
理
事
業
報
告
書
の
作
成
平成 22 年度 輸血検査精度管理成績報告書 施設コ－ド 施設名 検査担当者 連絡先 ○ 検査担当者の職種いずれかに○を記入してください。 （職種： 臨床検査技師 衛生検査技師 医師 看護師 その他 ） ○ 平成 21 年度製剤使用量 赤血球製剤： 単位 新鮮凍結血漿： 単位 血小板製剤： 単位 １．ABO 血液型、Rho（D）血液型検査 【試料 41・42】 （血液型確認者数： 人） 試薬会社名 試薬商品名 検査方法 試薬 抗 A 血清、抗 B 血清 番号記入 番号記入 抗 D 血清 番号記入 番号記入 ２．不規則抗体スクリ－ニング検査 【試料 43・44】 ３．不規則抗体同定検査 【試料 45】 ４．アンケ－ト（該当する方へ○印を付けてください） ① 血液製剤管理を輸血部あるいは検査部で行っている。（はい・いいえ） ② 血漿分画製剤（アルブミン・グロブリン）の管理を輸血部あるいは検査部で行っている。（はい・いいえ） ③ 輸血療法委員会あるいはそれに相当する組織がある。（はい・いいえ） ④ 施設に認定輸血検査技師がいる。（はい・いいえ） ⑤ 輸血管理料を請求している。（はい・いいえ） 請求の場合、管理料（ Ⅰ ・ Ⅱ ） ５．検査方法に関するアンケ－ト 機種名 方法名 ABO 血液型オモテ検査 ABO 血液型ウラ検査 ABO
総合判定 Rho（D）生食法 D 陰性確認試験 Rho（D） 総合判定 抗 A 抗 B オモテ判定 A1 血球 B 血球 ウラ判定 抗 D 対照 抗 D 対照 試料 41 試料 42 検査方法 酵素試薬 ク－ムス血清 反応増強剤 番号記入 番号記入 番号記入 番号記入 生食法 酵素法 抗グロブリン法 判定 試料 43 試料 44 抗体名 試料 45 備考（追加検査、御意見等）
精度管理 結果記入用紙
精度管理 評価基準
ABO式血液型
（試料41、42）
評価 基準内容 A 正解：凝集の強さが十分であること B リスト以外からの記入 中間判定未記入（１箇所） C ウラ検査で４＋のものが２＋以下 オモテ検査で４＋のものが３＋以下（スライド法の３＋は可） 中間判定未記入（２箇所以上） D 総合判定未記入 誤判定 判定保留 ウラ検査未実施 評価 基準内容 A 正解：試料41：Rho（D）陰性 （陰性でも可） 試料42：Rho（D）陽性 （陽性でも可） B リスト以外からの記入 試料41が判定保留 不必要なD陰性確認試験 C 凝集が４+であるものが２＋以下 反応態度未記入 対照陽性 D 判定保留 総合判定未記入 誤判定Rh式血液型
（試料41、42）
Ⅳ．報告書用選択肢 １．ABO血液型検査、Rho（D）血液型検査 【試料41・42】 ABO血液型オモテ検査、Rho（D）血液型検査の確認者人数を記入して ください。 使用している抗A・抗B血清、抗D血清の会社名・商品名を記入してく ださい。 使用している抗A・抗B血清、抗D血清の検査方法、試薬をそれぞれの 選択肢から該当する番号を選択し報告書に記入してください。 続いて試料41-A・B、42-A・BのそれぞれについてABO血液型検査、 Rho（D）血液型検査を実施してください。各項目についてそれぞれの 選択肢から該当するものを選択し報告書に記入してください。 抗Dの生食法で陰性と判断した施設でD陰性確認試験が実施できない場 合は、総合判定を陰性と記入してください。
―手引書より抜粋―
精度管理 評価基準
不規則抗体
スクリーニング
（試料43、44）
評価 基準内容 A 正解：（試料43：陰性 試料44：陽性） B リスト以外からの記入 C 反応態度未記入 試料４3：陽性 試料４4：判定は陽性だがIATが陰性 D 試料４4：陰性 判定未記入 評価 基準内容 A 正解：（抗E） B 抗Eを含む複合抗体 Eのみの記載 C 消去不十分 D 誤判定不規則抗体
同定（試料45）
報告書の書き方
できれば、読みやすい字で記入してください
• 手引書をよく読み、手引書に従って間違い
のないように記入する
• 記入漏れのないように注意する
• 提出前にもう一度確認する
１．３～５％赤血球浮遊液の作製法
１）検体は、多本架遠心機で1,200G(3,000rpm)5分間遠心し、 患者名を明記した試験管に血清（血漿）を分取する。 ２）患者氏名（または識別番号）を明記した赤血球浮遊液用 の試験管に生理食塩液約1mLを入れ、スポイトで赤血球 沈査1滴（約50μL）を加える。 ３）よく混和後、洗浄ビンで7～8分目まで満たす。 ４）判定用遠心機で900～1,000G、1～2分遠心。 ５）赤血球沈査が流れ出ないように生食を素早く捨てる。 ６）生理食塩液を約1mL再添加し3～5%赤血球浮遊液に調 整する。 注1.生食の分注はスポイト、マイクロピペット等でも良い。 注2.赤血球浮遊液の濃度は、赤血球試薬の色調や自動血 球計数装置のHt値を参考にしても良い。 注3.スポイトの1滴量≒約50μL。バラツキがあるため予め 確認しておく。 ＊一般的に樹脂製スポイトは傾斜して操作すると、垂直で 操作したときよりも1滴の容量は減少する。 約1mL 約1mL 約1mL 約1mL 約1mL 約1mLⅠ.基本操作
２．試薬・検体の分注
１）検査用試験管の準備 (1)検査用試験管に患者名（識別番号）や試薬名を明記する。 (2)分注ミスを避けるため、検査用試験管は識別番号や試薬名がよく見えるように管口をきち んとそろえて試験管立てに準備する。 ２）赤血球試薬と赤血球浮遊液 (1)赤血球試薬や赤血球浮遊液は必ず使用時にピペットでよく混和し、濃度を均一にしてから 用いる。 (2)赤血球濃度を一定に保つため、分注後にスポイト内に残った試薬はすべて元の浮遊液へ 戻す。 ３）試薬・検体の分注操作手順と留意点 (1)分注忘れを目視確認できるよう、被検血清（血漿）や抗体試薬は赤血球試薬よりも先に添 加する。 (2)試薬や検体の分注では、スポイトの先端が試験管に触れないように注意し、管底へ直接 滴下する。 (3)試薬と検体の分注状態は、次のステップへ移る前に必ず目視確認する。 (4)インキュベーションは、試験管をよく振って十分に混和してから行う。３．凝集反応の見方
＊試験管は
目の高さ以下
で操作し、白色
（光）を背景にして判定する。
１）凝集と背景の色調の観察
(1)試験管を判定用遠心機で900～1,000G
（3,400回転）15秒または100～125G（1,000
回転）1分遠心する。
(2)遠心後、まず溶血の有無を確認する。
(3)試験管を傾けて赤血球沈査を流し、試
験管を揺らしながら凝集の有無を確認す
る。
(4)赤血球沈査を流すのは試験管の2/3ま
でとし、凝集塊の大きさから反応強度を判
定する。
(5)赤血球沈査が均一に再浮遊するまで
（３）（４）を繰り返す。
反応の強さは、試験管を小刻みに揺ら し、赤血球沈渣をほぐしながら、凝集 塊の大きさや数、背景の色調（非凝集 赤血球の濁り）を基準にして分類する 遠心後、白色(光)を背景にし、まず上清 の溶血の有無を確認する ①遠心後、はく色（光）を背景に し、上清の溶血の有無を確認 する。 ②引き続き試験管を傾け、赤 血球沈査が流れ出す際に認め られる凝集塊や非凝集赤血球 の有無を観察する. ＊陰性では、凝集してない赤血 球が糸状に流れ出す ③反応の強さは、試験管を小 刻みに揺らし、赤血球沈査をほ ぐしながら、凝集塊の大きさや 数、背景の色調（非凝集赤血 球の濁り）を基準にして分類す る.凝集反応の分類
反応強度 4+ 3+ 2+ 1+ w+ 0 mf H(PH) スコア 12 10 8 5 2 0 特徴と外観 1個の大きな凝集塊 数個の大きな凝集塊 中程度の凝集塊 小さな凝集塊 ごくわずかな微小凝集 凝集も溶血も見られない 部分凝集 完全溶血（部分溶血） 背景の色調 透 明 透 明 透 明 赤く濁る 赤く濁る 赤く濁る 赤く濁る 赤く透明(濁る) mf：mixed field agglutination、H：hemolysis、PH：partial hemolysis＊Technical Manual 16th．AABBから一部改変して引用
反応強度 4+ 3+ 2+ 1+ w+ 0 mf H(PH) スコア 12 10 8 5 2 0 特徴と外観 1個の大きな凝集塊 数個の大きな凝集塊 中程度の凝集塊 小さな凝集塊 ごくわずかな微小凝集 凝集も溶血も見られない 部分凝集 完全溶血（部分溶血） 背景の色調 透 明 透 明 透 明 赤く濁る 赤く濁る 赤く濁る 赤く濁る 赤く透明(濁る) mf：mixed field agglutination、H：hemolysis、PH：partial hemolysis
Ⅵ.器材・器具・試薬
１．主な器材類
（※は必要に応じて準備する器材）
１）遠心分離器 （１）多本架遠心機：血清(血漿)分離、赤血球洗浄 （２）判定用遠心機：凝集判定、赤血球洗浄 （３）自動血球洗浄遠心機：直接･間接抗グロブリン試験の自動洗浄、凝集判定 ２）恒温槽（37～60℃）： 交差適合試験・不規則抗体検査、熱解離、補体不活化など ３）冷蔵庫・冷凍庫 （１）冷蔵庫（2～８℃）：試薬の保管や1～2週間程度の患者検体(赤血球と血清/血漿)の保管 （２）冷凍庫（-20℃以下）：凍結が必要な試薬や患者検体(血清/血漿)の長期保管 《 輸血用血液製剤の保管は、自記温度記録計および警報装置付の専用保冷庫を用いなけ ればならない。検査試薬と検体は冷蔵保管するが、その際輸血用血液製剤と同一の保冷 庫に保管してはならない。また、試薬や検体用の保冷庫も自記温度記録計および警報装 置付が望ましい。》 ※４）イムノビューア：凝集判定 ※５）顕微鏡（×100～×200）：凝集と連銭形成の鑑別など ※６）拡大鏡（凹面鏡）：凝集判定 ※７）自動輸血検査装置２．主な器具類
１）試験管：Φ12×75mm（またはΦ10×75mm）、ガラス製
２）試験管立て：上記の試験管が立てられるもの
３）スポイト：約50μL/滴、樹脂製（採用前に1滴の量を確認する）
４）洗浄ビン：500mLの生理食塩液が入る樹脂製のもの
５）温度計：恒温槽の実温度測定
６）タイマー
３．主な試薬類
（※は必要に応じて準備する試薬）
１）ABO血液型 （１）オモテ検査用試薬：抗A試薬、抗B試薬 （２）ウラ検査用試薬：3～5%のA1赤血球、B赤血球 ※O型赤血球 ２）Rh(D)血液型 （１）抗D試薬 （２）Rhコントロール（抗D試薬の添付文書に従う） ３）交差適合試験と不規則抗体検査 （１）不規則抗体スクリーニング用赤血球（Dia抗原陽性の赤血球含む） （２）不規則抗体同定用パネル赤血球 （３）反応増強剤 ① ポリエチレングリコール液(PEG) ② 低イオン強度溶液(LISS)のうち、少 なくとも 1種類 ※③ ウシ(重合)アルブミン液 （４）酵素溶液：不規則抗体同定用補助試薬として ① ブロメリン液 ② フィシン液 ③ パパイン液のうち、少なくとも1種類 （５）抗ヒトグロブリン試薬 ① 多特異 ② 抗IgG（PEG-IAT法や直接抗グロブリン試験） ※③ 抗補体 （６）3～5％IgG感作赤血球 （７）0.85%生理食塩液４．機器および試薬の精度管理
機器や試薬の精度管理は、あらかじめ作成した精度管理手順書に沿って定期的に実施し、 記録を残す。 １）判定用遠心機の管理 （１）回転数 （２）タイマー （３）異常音、バランス ２）自動血球洗浄遠心機 （１）ノズル、ボトル、ラインなどのメンテナンス （２）生理食塩液の分注量や洗浄後の残量の点検 （３）洗浄遠心機の設定条件の確認 ３）恒温槽 （１）サーモスタットの温度コントロールの動作状態 （２）別の温度計による温度点検と記録 ４）輸血用血液製剤の専用保冷庫 （１）自記温度記録計がない場合の温度管理：始業時、終業時の2回の温度点検と記録 （２）自記温度記録計が付いている場合：保冷庫の表示温度と記録用紙の温度確認 （３）別の温度計による温度点検（温度計による庫内温度と内蔵温度センサーによる 外部表示温度の点検） （４）警報装置がある場合はアラームテストと警報システムの確認 （５）エアーフィルターの汚れ確認抗Ｂ 1滴 赤血球浮遊液 1滴 抗Ｄ 1滴 赤血球浮遊液 1滴 血清(血漿) 各2滴 A1、Ｂ赤血球 各1滴 3～5%患者赤血球浮遊液 患者血清(血漿) 抗Ａ 抗Ｂ Rh cont 混和後、900～1,000G(3,400rpm)15秒 ＊図中、1、2、3、4は分注の順番を示す 抗Ｄ Ａ1 赤血球 Ｂ 赤血球 Rhｺﾝﾄﾛｰﾙ 1滴 血球浮遊液 1滴 判 定 Rh(D) 検査 ウラ 検査 オモテ 検査 抗A 1滴 赤血球浮遊液 1滴 1 1 3 3 1 1 3 3 4 4 2 2 抗Ｂ 1滴 赤血球浮遊液 1滴 抗Ｄ 1滴 赤血球浮遊液 1滴 血清(血漿) 各2滴 A1、Ｂ赤血球 各1滴 3～5%患者赤血球浮遊液 患者血清(血漿) 抗Ａ 抗Ａ 抗Ｂ抗Ｂ Rh cont 混和後、900～1,000G(3,400rpm)15秒 ＊図中、1、2、3、4は分注の順番を示す 抗Ｄ Ａ1 赤血球 Ｂ 赤血球 Rhｺﾝﾄﾛｰﾙ 1滴 血球浮遊液 1滴 判 定 Rh(D) 検査 ウラ 検査 オモテ 検査 抗A 1滴 赤血球浮遊液 1滴 1 1 3 3 1 1 3 3 4 4 2 2 1.分注順番 血清→血球 2.試験管の並べ順 決まりではない
ポイント
血液型検査
操作手順
操作手順
（1）患者検体は1,200G(3,000rpm) 5分遠心し、患者名を明記した試験管に血清(血漿)を分取 する。 （2）試験管7本（赤血球浮遊液用：1本、検査用：６本）を準備する。 （3）赤血球浮遊液用と検査用の試験管に患者氏名（または検体番号）と試薬名を明記する。 （4）赤血球浮遊液用試験管に3～5％患者赤血球浮遊液を作製する。 （5）抗A、抗B、抗D、Rhコントロール(Rh cont)の試験管に各試薬を１滴ずつ滴下する。 （6）ウラ検査用試験管に血清(血漿)を2滴ずつ滴下する。 （7）患者血清(血漿)や抗体試薬の分注もれを確認する。 （8）（5）のオモテ検査およびRh(D)検査用試験管に3～5％患者赤血球浮遊液を1滴ずつ滴下 する。 （9）ウラ検査用試験管によく混和したA1赤血球とB赤血球の各試薬を1滴ずつ滴下する。 （10）患者赤血球浮遊液や赤血球試薬の分注漏れを確認し、よく混和する。 （11）試験管を900～1,000G(3,400rpm)15秒または100～125G(1,000rpm)1分遠心する。 （12）凝集や溶血の有無を観察し、判定結果を記録する。 注１：Rhコントロールは、その代用となるものがあれば省略できる（試薬の添付文書に従う）。ABO血液型判定
抗A 抗B 判定 A1赤血球 B赤血球 判定
＋ 0 A型 0 ＋ A型 A型
0 ＋ B型 ＋ 0 B型 B型
0 0 O型 ＋ ＋ O型 O型
＋ ＋ AB型 0 0 AB型 AB型
オモテ検査 総合判定 ウラ検査 注1：採血時の取り違いや誤判定を防止するため、原則として異なる時点で採血された2検体 でそれぞれ検査を行い、両方の結果が一致することを確認し、血液型を確定する。 注2：抗M、抗P1や抗Lewisなどの低温反応性の抗体が、オモテ・ウラ不一致に関与している 場合がある。
注3：オモテ検査で部分凝集(mf：mixed field agglutination)を認めた場合は、異型輸血後や 造血幹細胞移植後の可能性も考えられるため、必ず輸血歴や移植歴を確認する。 注4：オモテ検査とウラ検査の結果が一致しない場合は、判定を保留しその原因を精査する
（Ⅳ-1オモテ・ウラ不一致、参照）。なお、ウラ検査ではBombay(Oh)型やparaBombay
(Ah、Bh)型患者が保有する自然抗体(抗Hや抗HI)の有無などを確認するため、必要に
Rh(D)血液型判定
抗D試薬 Rhｺﾝﾄﾛｰﾙ 判 定 抗D試薬 Rhｺﾝﾄﾛｰﾙ 判 定 ＋ 0 D陽性 0 0 D陰性 ＋ 0 weak D ＋ ＋ 判定保留 不要 不要 直後判定 D陰性確認試験 0 0 D陰性疑い 注１：Rhコントロールが陽性となった場合は判定保留とし、その原因を精査する。 注２：「判定保留」を確定するためには、直後判定後、引き続き｢D陰性確認試験｣を行う。 注３：反応時間については、試薬の添付文書に従う。 判定保留900～1,000G(3,400rpm) 15秒 または100～125G(1,000rpm) 1分 抗DとRhｺﾝﾄﾛｰﾙの２本の試験管を37℃ 15～60分間加温* 生理食塩液で3～4回洗浄 抗ヒトグロブリン試薬を２滴ずつ滴下する 判 定 抗Ｄ Rh cont 陰性の場合は、3～5％IgG感作赤血球を1滴 加えて再遠心し、凝集することを確認する 900～1,000G(3,400rpm) 15秒 または100～125G(1,000rpm) 1分 抗DとRhｺﾝﾄﾛｰﾙの２本の試験管を37℃ 15～60分間加温* 生理食塩液で3～4回洗浄 抗ヒトグロブリン試薬を２滴ずつ滴下する 判 定 抗Ｄ Rh cont 陰性の場合は、3～5％IgG感作赤血球を1滴 加えて再遠心し、凝集することを確認する
【
D陰性確認試験】
オモテ・ウラ不一致の原因
不規則抗体スクリーニング
（生理食塩液法）(－)
抗原 減弱オモテ検査
ウラ検査
・抗A1 ・血液疾患 i) 白血病 ii) MDS iii) ホジキン病 ・先天性 i) 亜型(Ax/Bx etc.) 反応性の 減弱/消失 ・悪性腫瘍 i) 過剰型物質 ・BMT/PBSCT i) 抗A/B産生能消失 潜在/修飾 抗原 ・重症感染症 i) T抗原化 ii) 獲得性B(＋)
連銭形成 ・不規則抗体 i) 抗M/N ii) 抗P1 ・寒冷凝集素 i) 抗I/i ・高γグロブ リン血症ウラ検査
部分 凝集 ・ABO不適合 i) 輸血 ii) BMT/PBSCT ・先天性 i) 亜型(A3/B3 etc.) ii) キメラ 抗体 非特異 抗体 的凝集 ・寒冷凝 集素病オモテ検査
抗原減弱
潜在/修飾抗原
部分凝集
反応性の減弱/消失
連銭形成
抗体
①臨床側へ疾患名/病態の問い合わせ ②亜型との鑑別
T抗原化/獲得性B：異なるモノクローナル抗体試薬で再検査
①過剰な型物質：患者赤血球をよく洗浄して除去
②免疫寛容状態：造血幹細胞移植の有無の確認
高γグロブリン：生理食塩液を1滴滴下し、連銭形成の消失確認
①抗A
1：A
2赤血球との反応性
②不規則抗体：抗Mや抗P
1の同定
③寒冷凝集素：i) 患者赤血球と4℃で抗I/iを吸着
非特異的凝集
【赤血球側の原因】
【血清(血漿)側の原因】
オモテ・ウラ不一致への対応
1) オモテ･ウラ検査の不一致 2) ウラ検査の反応減弱 時に(+) モノクローナル抗A (+) (-) (-) O (+) (-) Am Ael ≦3+ A1 A2 (+) (-) A3 Ax 抗A1 (-) (+) 抗原減弱 A・H 唾液中和試験 H 部分凝集 吸着解離試験 糖転移酵素活性 または または 4+ （分泌型の場合） （ 37℃反応性の抗Aを保有するA亜型患者には、O型赤血球を選択する） (+) (-) (+) 血漿（血清）中の抗A
ABO亜型の血清学的鑑別法(１)
モノクローナル抗B (-) B B3 (+) 部分凝集 (-) ≦3+ 4+ 吸着解離試験 (+) (-) O または Bm Bel 糖転移酵素活性 (+) (-) 唾液中和試験 B・H H または （分泌型の場合） Bx 唾液中和試験 抗原減弱 B・H H （分泌型の場合） 1) オモテ･ウラ検査の不一致 2) ウラ検査の反応減弱 （ 37℃反応性の抗Bを保有するB亜型患者には、O型赤血球を選択する） 時に (+) (-) (+) 血漿（血清）中の抗B (+)
ABO亜型の血清学的鑑別法(２)
患者血清 (血漿 ) 2滴 3～5％供血者赤血球浮遊液 1滴 判 定 PEG または LISS 2滴 37 ℃ 10 ～15 分間 生理食塩液で 3～4回 洗浄 判 定 抗ヒトグロブリン試薬 2滴 900 ～1,000 G (3,400rpm) 15 秒 または 100 ～125 G (1,000rpm) 1 分 3～5%IgG 感作赤血球 1滴 （ただし， 陰性を呈した試験管のみ） 凝集を確認する（凝集しない場合は無効） 900 ～1,000 G(3,400rpm) 15 秒 または 100 ～125 G(1,000rpm) 1 分 900 ～1,000 G(3,400rpm) 15 秒 または 100 ～125 G(1,000rpm) 1 分 反応増強剤無添加 37 ℃ 60 分間 * 患者血清 (血漿 ) 2滴 3～5％供血者赤血球浮遊液 1滴 判 定 患者血清 (血漿 ) 2滴 3～5％供血者赤血球浮遊液 1滴 判 定 PEG または LISS 2滴 37 ℃ 10 ～15 分間 生理食塩液で 3～4回 洗浄 判 定 抗ヒトグロブリン試薬 2滴 900 ～1,000 G (3,400rpm) 15 秒 または 100 ～125 G (1,000rpm) 1 分 3～5%IgG 感作赤血球 1滴 （ただし， 陰性を呈した試験管のみ） 凝集を確認する（凝集しない場合は無効） 900 ～1,000 G(3,400rpm) 15 秒 または 100 ～125 G(1,000rpm) 1 分 900 ～1,000 G(3,400rpm) 15 秒 または 100 125 G(1,000rpm) 1 分 反応増強剤無添加 37 ℃ 60 分間 * Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅰ Ⅱ Ⅲ 【不規則抗体スクリーニング】 PEG：polyethylene glycol， LISS：low-ionic-strength solution， IAT：indirect antiglobulin test
＊反応増強剤の特徴をよく理解し、 日常検査ではいずれかを選択する。 詳細は、「新輸血検査の実際」（日本 臨床衛生検査技師会出版）を参照する。
不規則抗体
スクリーニング
操作手順
不規則抗体スクリーニング
臨床的意義のある37℃反応性の同種抗体を検出するため、不規則抗体スクリーニングでは必ず 間接抗グロブリン試験(indirect antiglobulin test、IAT)を実施する。以下に、生理食塩液法から反応
増強剤を用いるIATの操作手順について示す。生理食塩液法の目的は低温反応性の抗体を積極的 に検出するためではなく、引き続き行う間接抗グロブリン試験で弱陽性を示した場合、その原因が 低温反応性の抗体にあるかを推察するためである。 不規則抗体スクリーニングが同種抗体などによって陽性となった場合は、抗体を同定し適合血を選択 する。抗体同定のための検査のポイントや手順については、Ⅳ-2を参照する。また、血清学的問題解 決の詳細、血液型抗体の反応態度や適合率については「新輸血検査の実際」（日本臨床衛生検査技 師会出版）を参照する。 操作手順 【生理食塩液法】 （１）検体は1,200G(3,000rpm)、5分遠心し、血清(血漿)を患者名を明記した試験管に分取する。 （２）スクリーニング赤血球の本数分の検査用試験管を用意する（自己対照は省略可）。 （３）検査用試験管に患者氏名（または識別番号）、スクリーニング赤血球の番号等を明記する。 （４）検査用試験管に患者血清(血漿)を2滴ずつ滴下する。 （５）患者血清(血漿)の分注もれを確認する。 （６）スクリーニング赤血球（Dia抗原陽性を含む）をよく混和し、1滴ずつ滴下する。 （７）スクリーニング赤血球の分注漏れを確認し、よく混和する。 （８）試験管を900～1,000G(3,400rpm)15秒または100～125G(1,000rpm)1分遠心する。 （９）凝集や溶血の有無を観察し、判定結果を記録する。
【間接抗グロブリン試験】 （10）引き続き（７）の試験管に反応増強剤を2滴ずつ加え、よく混和後、37℃で10～15分加温する。 （11）生理食塩液で3～4回洗浄する（最終洗浄後の生理食塩液は完全に除去する）。 （12）洗浄後、抗ヒトグロブリン試薬を2滴ずつ加え、よく混和する。 （13）試験管を900～1,000G(3,400rpm)15秒または100～125G(1,000rpm)1分遠心する。 （14）凝集や溶血の有無を観察し、判定結果を記録する。 （15）陰性を呈した試験管に3～5％IgG感作赤血球を1滴ずつ加え、よく混和後、900～1,000G (3,400rpm)15秒または100～125G(1,000rpm)1分遠心し、IgG感作赤血球が凝集すること を確認する。 注1：自己対照は省略できる。ただし、抗体同定の際には陰性対照として必ず実施する。 注2：試薬の添加量、反応時間や洗浄回数は試薬の添付文書に従う。 注3：生理食塩液法で凝集を認めた場合は37℃で5～10分加温し、遠心後、凝集の有無を確かめ る。凝集が減弱または消失した場合は低温反応性の抗体を疑う。 注4：反応増強剤を用いる間接抗グロブリン試験では、低温反応性抗体の影響を受け陽性となるこ とがある。しかし、反応増強剤無添加間接抗グロブリン試験で陰性化する抗体は、臨床的意義 はない。 注5：母親の不規則抗体検査が陰性である場合は、胎児や新生児の不規則抗体検査は省略できる。 ただし、ABO不適合妊娠の可能性がないにもかかわらず、胎児や新生児の溶血性貧血が疑わ れる場合には、低頻度抗原に対する抗体による反応を疑い、精査が必要な場合がある。 注6：Bombay(Oh)型やparaBombay(Ah、Bh)型の患者は自然抗体として抗Hや抗HIを保有するた め、H抗原のあるＯ型赤血球と反応し，抗体スクリーニングでは陽性となる。
抗体特異性の推定
不規則抗体スクリーニング
1) 反応パターン
2) 反応温度
3) 凝集の強さ
反応態度
（陽性のパネル赤血球）
消去法
（
陰性のパネル赤血球
）
1) 量的効果
可能性の高い抗体
否定できない抗体
不規則抗体スクリーニング陽性時への対応
‘
可能性の高い抗体
’ とは？
陽性反応が抗原表のいずれかの抗原パターンと
完全に一致する抗体
（反応強度から
2つ以上の抗体が推定できる場合も含む）
‘
否定できない抗体
’ とは？
陽性反応が特定の抗原パターンに含まれてしまい、
反応強度からもその特異性が確認できない抗体
【目的】
【ポイント】
抗原/抗体の特徴を理解し、反応パターン、反応温度、
凝集の強さから‘
可能性の高い抗体
’ と、
消去法によって‘
否定できない抗体
’ に分類すること
抗体の見逃しを回避するため、パネル検査の結果から
考えられる抗体特異性を明確化すること
消去法
Cell
No. D C E ｃ e K k Fya Fyb Jka Jkb Lea Leb Xga M N S s P1 Dia Dib Sal AHG
Ⅰ ＋ ＋ O O ＋ ＋ ＋ O ＋ O ＋ O ＋ ＋ O ＋ ＋ ＋ O O ＋ 0 0 Ⅱ ＋ O ＋ ＋ O O ＋ ＋ ＋ ＋ O O O ＋ ＋ ＋ O ＋ ＋ O ＋ 0 2+ Ⅲ O O O ＋ ＋ O ＋ ＋ O ＋ ＋ ＋ O ＋ ＋ O ＋ O ＋ ＋ ＋ 0 0
Rh
Duffy
Kidd
MNS
消去法の実例 (1)
(1) 量的効果のあるホモ接合体の抗原/量的効果を考慮しなくてよい抗原：
『×』
(2) 量的効果のあるヘテロ接合体の抗原：
『／』
(3) 最終的に『×』が１つ以上ある場合：抗原表の
抗原名に『×』
注 1
：Di（a＋b＋)赤血球や K＋k＋赤血球の反応が陰性の場合は、
暫定的に抗 Di
aや抗 K を消去する。
可能性の高い抗体
：抗E
否定できない抗体
：
抗Jk
a，抗ｓ
抗体同定までの検査手順
1) 反応条件の変更（検体量，温度など） 2) 反応性の単純化（酵素法併用，抗体中和、吸着解離試験etc.） 3) 酵素または化学処理した赤血球との反応性 患者情報 1) 輸血歴・妊娠歴・抗体保有歴 2) 当該抗原の有無 統計学 1) Fisher 確率計算法 追加試験抗体同定
追加パネル総合評価
1) 推定される複数抗体に対する抗原を１つもつパネル赤血球抗体特異性の絞込み
パネル赤血球による不規則抗体検査
可能性の高い抗体 否定できない抗体 （陽性の赤血球パネルの反応態度） （陰性の赤血球パネルによる消去法）複数抗体の見逃しをなくすためのポイント
１．反応条件の変更
1) 反応温度 ⇒
4℃、20℃、37℃
2) 検体量
⇒
2滴 → 4滴
3) 反応時間 ⇒
double incubation
２．反応性の単純化
1) 酵素法の併用
⇒
反応の一部消失
2) 型物質による抗体中和 ⇒
反応の一部消失
3) 吸着解離試験
⇒ 上清と解離液に
抗体を分散
３．患者血液型のフェノタイピング
⇒ 産生可能な抗体を推定
Cell
No. D C E ｃ e K k Fya Fyb JkaJkb LeaLebXga M N S s P1 Dia Dib Sal AHG ENZ
1 ＋ ＋ O O ＋ O ＋ ＋ O ＋ ＋ ＋ O O ＋ ＋ ＋ O ＋ O ＋ 0 0 0 2 ＋ ＋ O O ＋ O ＋ ＋ O ＋ ＋ ＋ O ＋ O ＋ ＋ ＋ O O ＋ 0 0 0 3 ＋ O ＋ ＋ O O ＋ ＋ ＋ O ＋ O O ＋ O ＋ ＋ O ＋ O ＋ 0 4+ 3+ 4 ＋ O O ＋ ＋ O ＋ O O ＋ ＋ ＋ O ＋ O ＋ O ＋ ＋ O ＋ 0 0 0 5 O ＋ O ＋ ＋ O ＋ O ＋ O ＋ O O O O ＋ ＋ ＋ ＋ O ＋ 0 2+ 0 6 O O ＋ ＋ ＋ O ＋ O ＋ ＋ O ＋ O ＋ O ＋ O ＋ ＋ O ＋ 0 4+ 2+ 7 O O O ＋ ＋ ＋ ＋ O ＋ ＋ O O ＋ ＋ ＋ O ＋ ＋ ＋ O ＋ 0 2+ 0 8 O O O ＋ ＋ O ＋ ＋ O O ＋ O ＋ O O ＋ ＋ ＋ ＋ O ＋ 0 0 0 9 O ＋ O ＋ ＋ O ＋ ＋ O ＋ O O ＋ O ＋ O O ＋ O O ＋ 0 0 0 10 O O O ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ O ＋ ＋ ＋ ＋ O ＋ O ＋ 0 1+ 0 11 ＋ ＋ O O ＋ ＋ ＋ O ＋ ＋ O O ＋ ＋ ＋ O ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 0 2+ 0 Auto 0 0 0
