MEK Inhibitor for Gastric Cancer with MEK1 Gene Mutations

全文

(1)学位論文審査結果の報告書氏. 名. 生年月日. 曽我部俊介. H召禾口. 本籍(国※割. 年. 56. 16. 日. 日本. 学位の種類. 博. 学iイ立言己番・号・. 医第//ク4 号. 学位授与の条件. 月. 10. 士(医学). 学位規程第5条該当. (博士の学位). 論文題目. MEK. Inhibitor. With MEKI. for. Gene. Gasttic. Mutations. 審査委員. (副主査) ユ. (副主査). 盆. 、剤正. イ L↓入. ,,賀. ι、、. 舮赤. (主査). Cancer. ゛ '、. ^ 器=. ＼ミ'ゞ》タ. (副査). @. (副査). @. -37ー.

(2) 論文内容の要旨. 【背景】. 最近の化学療法の進歩にも関わらず,切除不能進行・再発胃癌患者の予後は依然として不良のままである. epidermal groW血 factorreceptor (EGFR) type2 (HER2)の過剰発現を有する胃癌に対するトラスッズマブのように治療薬が有効と予測される患者の層別化や, KRAS変異型大腸癌に対して抗EGFR 抗体の効果が期待できないとされるような効果を予測するバイオマーカーの同定が切除不能進行・再発胃癌においても必要とされている. 佃的】. 進行・再発胃癌における分子標的治療の治療効果を予測するバイオマーカーの検索【方法】. 8種類の胃癌細胞株に分子標的治療薬を投与し薬剤感受性を測定.また胃癌細胞株の遺伝子変異を解析し,遺伝子変異の有無と分子標的薬の薬剤感受性の相関を検索.確認された遺伝子変異の腫傷原性を3T 3 focusformation assayで確認.またウィルスベクターを作製し,遺伝子変異を入れ腫傷原性(MAPK 経路の活性化)・分子標的治療薬の薬剤感受性を検討.次にSCID (重度複合免疫不全)マウスに遺伝子変異を移植し,分子標的治療薬の抗腫傷効果を測定.最後に進行胃癌患者の摘出標本の臨床腫傷検体を用いて遺伝子変異の頻度を検討した. 【結果】. 3種類の胃癌細胞株で, MAPK経路を構成するものの1つのMEK 1を選択的に阻害する MEK 1阻害薬(GSKH20212 および PD032590D の著効を認めた.胃癌細胞株における KRAS・ BRAF ' MEK I. にっいての遺伝子解析の結果, MEK 1阻害薬の著効を認めた胃癌細胞株の1つに既報のないMEK 1遺伝子変異(MEKIS72G)を認めた. MEK 1阻害薬の著効を認めたその他の2つの細胞株では既知の遺伝子変異(KRAS G12V およびMEKI Q56P)を認めた.上記の3つの遺伝子変異にっいて3T 3 focus formationassayでいずれも腫傷原性を確認できた. MEK1遺伝子変異を有する細胞株においてMEK1阻害薬はERK I/2のりン酸化の抑制(MAPK経路の活性化の抑制)およびアポトーシスの誘導を認めた異種移植片研究においても MEK1遺伝子変異(MEKIS72G)を移植したSCIDマウスでMEK 1阻害薬投与による著明な腫傷縮小効果を認めた.また46の進行胃癌患者の摘出標本の臨床腫傷検体にっいて MEK1遺伝子解析を行い,1つの低分化型管状腺癌患者の臨床検体にMEK1遺伝子変異を認めた【結論】. 今回,胃癌細胞株で既報のないMEK 1遺伝子変異(MEKIS72G)を見付け,その MEK 1遺伝子変異(ME凱 S72G)の腫傷原性および, MEK1阻害薬による抗腫傷効果を証明した.以上の研究より, MEK 1遺伝子変異を有する胃癌患者は, MEK1阻害薬を用いた分子標的治療の良い対象となり得る可能性が示唆された. -38-.

(3) ノπ、. 月. 年. 2014年9月24日. 出版物の種類及び名称. 日. ノえ、. 表. ノ＼. 表. 出版物名 Molecular cancer Therapeutics. 容. 博士論文の印刷公表. 表. doi:10.1158/1535-7163. MCT、140429. 内. 2014年9月24日全. 文. -39-. Online 掲載.

(4) 言△. 文. 査. イ、. の. ^. 最近の化学療法の進歩にもかかわらず、切除不能進行・再発胃癌の予後は依然として不良であるが、その治療成績の向上には、肺癌などの他の腫傷で治療成績向上に貢献している分子標的薬の導入が必須と考えられる。そこで本研究では、胃癌における分子標的治療の効果を予測するバイオマーカーの検索を目的とした。方法. 8種類の胃癌細胞株に畑部且害薬を添加し薬剤感受性を測定した。そして高感受性を呈した胃癌細胞株の遺伝子解析により見いだされた遺伝子変異1こつし＼てSwisS 3T3糸田1包を用し＼た focus f01'mation assayと. 加morigeniC北y assayを行った。 ME獲遺伝子変異を持つホ醐包株でMEN阻. 害薬による駅KI/2のりン酸化の抑制(NIAPK経路の活性化の抑御D およびアポトーシスの誘導を解析した。また、これらの遺伝子変異を導入した SwisS 3T詠醐包をSCIDマウスに移植しME部且害薬の感受性を検討した。そし. て、進行胃癌46症例の摘出標本における腫傷部分の糊K1遺伝子解析を施行した。. 結果. 8種類の胃癌糸畍包株のうち、 HSC"、 OCU川、 okajimaがM風1阻害薬に対して高い感受性を示した。いずれもスキルスタイプの細胞株でHSC44こは K玲Sの遺伝子変異、OCUM1にはME駐の遺伝子変異が報告されていたが、今. 回okajimaで未知の畑K1の遺伝子変異(ME蹴 S72G)を見出した。既知の畑KI Q56P ・新規のMEKI S72Gともに3T3 focus formation assay .. tumorigeniC北y assayで腫傷原性を確認した。 OCUM-1、 okajimaのネ醐包株でMEN阻害薬による駅KI/2のりン酸化の抑制(ⅧPK経路の活性化の抑罰D およびアポトーシスの誘導を確認した。また異種移植片実験においてもME駐遺伝子変異(MEKIS72G)を導入した線維芽細胞を移植したSCIDマウスでMEK1阻害薬投与による著明な腫傷縮小効果を確認した。最後に進行胃癌46症例のうち、 1例の低分化型管状腺癌の臨床検体に畑K1遺伝子変異(Q56P)を認めた。. 考察今回、胃癌細胞株で未知のM肱1遺伝子変異(ME碓 S72G)を見出し、その. 変異の腫傷原性および,MEn阻害薬による抗腫傷効果を証明した。これらの知見は、このM肌1遺伝子変異を有する胃癌患者が、畑磁阻害薬を用いた分子標的治療の良い対象となり得る可能性があると考察した。学位申請者は本研究を中心となって遂行しており、本研究分野に関する理. 解と造詣も十分で、最終試験では合格と判定した。本研究は、切除不能進テ・再発胃癌に対する新しい分子標的薬治療の戦略開発における極めて有用な情報となる成果であり、本論文は医学博士の学位に値する論文と判定した。. -40-.

(5) 課・論博. 博士学位論文最終試験結果の報告書. ttJ. 曽我部俊介. 学位申請者氏名. ノぢ. 審査委. ⑳ 副査. 生. 1. 種投晰有住メお、 βP K6 MQ のにりて ) 2Gかよし. 譚、書子藤. K M. 、、. ゛. E. し. 糸. ア1. よお. の. 佑抑゛. 、、、. スし. ブ. 1. 4. ナ、. ゛、. 、. つK,応つ、W床あ究. 力の. .ーロロ. の註・. 質、、胴. ル. いが匝退のしが. ・だあ肱忙伝M EΥ 、学. 異. n. 、. 、つつ関. mつ. Utた. atの. て行にの. 、、. 、. つ験口染MEを 0. いをかと鞭行. 、. イ細週由片ヘ.Nで解し X レしス、ー理植かhスな断 ,、キ,つシ駅た移モW一切判、スー一⑥ し種ホHベ適と一)違卜仏目異はD夕は格、癌a相ポ注て異a一者合い胃りのアてにい変、デ請に打るよンるい薬っ子Υぐ圃申験査イけつ害に伝いa位試. 、癌(包子 ,毛テ原臭の答:た. 駅来ME. ーの二阻方舮. 舌1{青法、、 ⑱たい連. >、株薬にた )かてに.如で. 本、、つ. 分ス序⑤出児報K1aに文゛ E 1 ノJ 、キ用て如験たのイ頻位用の作し症. 票三口. 、、断用樹のれか変且昔. もつが薬つこの織たに異薬に1本組. ,、し且リ土、つし司の. "、く型っ Hて、織に. ,)Mの低て. 71 す郎の ( K 7 でた阻イ変 2 G リい ES る授対、 0湘知 1 r子北確こ、未 1 K K 云 E E イ口びメがよあEて冨鳥を 1 n ブ゛、し株 1 しおイも注異Pな、と包 P Ⅱ 6 的細 0.詔ウ重E 変鮖 n、れる r確 1M 、罷一度れあのー.ーーロ性工つ下肱フ悪 M t 1 、軍 1. イてつ. ヒイ 1. こ. ,. 株. '. 、. ノP. 且. 害. こ. るよ. 卸K. い経. 路. 0の. ノ. 由月. の. 類す禾を L. ﹁受、、. 、一鳧. 一局. の. 刃. 糸癌. ノ. 請癌旨申田月. 立. 移植片実験として、この遺伝子変異を導入た繊維芽細胞を移植したSCID 与による著明な腫癌縮小効果を確認した。た進行胃癌46症例の摘出標本ノー、 1 /＼升11ム=、'品口にこのMEK1遺伝子変異を認め、. イ ' 植を移卜を析ポ刀牛角マ. は公聴会において、今回の学位申請研究に関して以下のような報告を行. 要学ち. -41-. 孫 1、. '1. 員. MEK lnhibitor for Gastric cancel' with MEKI Gene Mutations. 目. 論文題. 副主査. 一丁よ:.・'ゞ:. j-,ヘ悉i lF.i、ン副主査. 熊印ウ.、'1 "'、、、1J、、1i. アtL圦盆共主査. 日 0 i. 月 ^. 寸年平成. 1ゞ.一如ゞ゛、.

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