各種 間質性 肺 疾 患 に お け る
BAL液
並 び に 肺 組 織 中T-cell
subsetの
検 討
岡山大学医学部第二内科学教室(指 導:木 村郁郎教授)
難
波
次
郎
(平 成5年11月11日 受 稿)
Key words: bronchoalveolar lavage (BAL), transbronchial
lung biopsy (TBLB),
immunoperoxidase staining, T-cell
subset
緒 言 各 種 間 質 性 肺 疾 患 に お い て,背 景 と な る 病 態 は 必 ず し も一 定 し て い な い が,肺 間 質 に は 単 核 球 細 胞 浸 潤 と共 に 膠 原 線 維 の 増 加 を伴 う線 維 化 が 共 通 し て 認 め ら れ る.胞 隔 の 浸 潤 細 胞 は マ ク ロ フ ァー ジ,リ ン パ 球,線 維 芽 細 胞,組 織 球 な ど の 多 様 な 細 胞 群 に よ っ て 構 成 さ れ て い る.こ れ ら の 細 胞 成 分 は,間 質 性 肺 炎 の 維 持 進 展 に 働 く と共 に,線 維 化 過 程 に も関 与 し,種 々 の サ イ トカ イ ン の 影 響 下 に 活 発 な 細 胞 動 態 を 示 す と考 え ら れ て い る1,2). こ の 様 な 間 質 性 肺 炎 の 肺 局 所 病 態 に お い て 重 要 と考 え ら れ る リ ン パ 球 に 注 目 し,肺 組 織 中 に 存 在 す るT-cell subsetを 免 疫 酵 素 染 色 に よ り 同 定 し,肺 組 織 内 の 分 布 を 検 討 し た.さ ら に 気 管 支 肺 胞 洗 浄 法(bronchoalveolar lavage: BAL)に よ り肺 局 所 よ り 回 収 さ れ る細 胞 成 分 中 の リ ン パ 球 に つ い て もT-cell subsetを 検 索 し, 組 織 中 浸 潤 リ ン パ 球 とBAL液 中 リ ン パ 球 の 関 連 に つ い て も検 討 し た の で 報 告 す る. 対 象 と 方 法 過 敏 性 肺 臓 炎7例,サ ル コ イ ドー シ ス(サ 症) 2例,慢 性 関 節 リ ウ マ チ に合 併 し た 間 質 性 肺 炎 (RA+IP)2例,特 発 性 間 質 性 肺 炎(IIP)1 例 を 対 象 と し て 肺 生 検 並 び にBALを 行 い,健 康 人 対 照10例 に つ い て はBALの み を 行 っ た. BALは 既 報3)の 如 く,気 管 支 フ ァ イ バ ー ス コ ー プ(OlympusTI-10)を 右 肺 中 葉B4あ る い はB 5にwedgeし, 37℃ に加 温 し た 生 理 的 食 塩 水 50mlを4回 注 入 し,回 収 さ れ た 洗 浄 液(BAL fluid: BALF)は 遠 沈 に て,細 胞 成 分 と上 清 に 分 離 し た.細 胞 成 分 は 総 細 胞 数 の 算 定,細 胞 分 類 を 行 う と共 に,モ ノ ク ロ ナ ー ル(CD3, CD4, CD8)抗 体(Becton Dickinson社 製)を 用 い
たFlow cytometryに よ り, T-cell subsetを 測
定 した.
肺 組 織 中T-cell subsetの 同 定 は 凍 結 切 片 を
用 い た 免 疫 酵 素 染 色 法 に よ り検 討 し た.生 検 肺
組 織 をOCT compoundに 包 埋 し, -70℃ の
n-Hexane中 で 凍 結 後, cryostatに よ り6μ に
薄 切 し てslide glass上 にmountし た.こ の 組
織 切 片 に,一 次 抗 体 と し てOKT4, OKT8の
各 抗 血 清(Ortho社 製)を60分 反 応 さ せ,次 い
でphosphate buffered saline(PBS)で3回 洗
浄 した 後, biotin標 識 抗 マ ウ スIgG抗 体 を 用 い
てAvidin-biotin peroxidase complex法
(Vecta社 製)に よ り発 色 させ た.反 応 停 止 後 Hematoxylineに て核 染 色 を行 い,脱 水 封 入 し, 光 顕 で 観 察 し た.組 織 内T-cell subsetは,各 切 片 毎 に 連 続 切 片 と し て 対 応 し う る部 分 を選 ん で, X400の 倍 率 で 視 野 中 の 全 有 核 細 胞 数 に 対 す る 各 抗 体 陽 性 細 胞 の 比 率 で 表 し た.過 敏 性 肺 臓 炎 で は,肺 胞 構 造 の 保 た れ て い る 部 分 と,肉 芽 腫 様 の 部 分 に お け るT-cell subsetを 区 別 し て 検 討 し た(Fig. 1). 尚, BALと 肺 生 検 は 同 時 に 施 行 し た も の か ら, 3週 間 の 間 隔 ま で 様 々 で あ っ た が,い ず れ も治 療 前 で あ り, BALと 肺 生 検 実 施 の 時 点 で 病 23
Fig. 1 T-cell subsets as CD4 and CD8 in lung tissue were identified with
immunoperoxidase staining separately. A-1: CD4 in alveolar wall.
A-2: CD8 in alveolar wall. B-1: CD4 in granuroma. B-2: CD8 in
granuloma.
Table 1 Cellular components in BALF of patients with various interstitial pneumonia
Abbreviation: TCC; total cell count, MƒÓ; macrophage, Ly; lymphocyte, Nt; neutrophil, Eo/Mc; baso phil/mast cell, HP; hypersensitivity pneumonitis, Sar; sarcoidosis, RA+IP; rheumatoid arthritis with interstitial pneumonia, IIP; idiopathic interstitial pneumonia.
態 に 大 き な 差 は 無 い と思 わ れ た.
成 績
1. BALF中 細 胞 成 分
1) BALF中 リン パ 球 比 率
対 象 と な っ た 過 敏 性 肺 臓 炎7例,サ 症2例,
RA+IP 2例, IIP 1例 のBAL液 中 細 胞 成 分 は
Table 1に 示 す 如 く,総 細 胞 数 は い ず れ も増 加 し て お り,リ ン パ 球 に つ い て は 過 敏 性 肺 臓 炎 が81.8 %と 最 も高 値 で あ り,次 い でサ 症49.2%, IIP 27.4 %,健 康 人 対 照10.2%, RA+IP 6.6%の 順 で あ っ た. 2) BALF中T-cell subset BALFよ り得 ら れ た 単 核 球 の う ちCD3は 過 敏 性 肺 臓 炎93.7±3.1%,サ 症65.7±25.9%, RA+IP 78.7±17.6%, IIP 97.2%,健 康 人 対 照
T-cell subset in BALF
of various interstitial pneumonia
Fig. 2 T-cell subsets in BALF of various inter stitial pneumonia and helthy controls. Each column indicates the mean •}SD. The highest CD4/CD8 ratio was shown in sarcoidosis and the lowest in hyper sensitivity pneumonitis. 76.0±44.6%で あ り,い ず れ の 群 に お い て も BALF中 リンパ 球 はT-cellが 多数 を 占め て い た. CD4に つ い て は過 敏 性 肺 臓 炎24.5±7.4%と 低 率 で あ っ た 他 は,サ 症55.2±22.9%, RA+IP 55.1±9.5%, IIP 46.4%,健 康 人 対 照45.0± 28.0%と い ず れ も50%前 後 の 比 率 を 示 して い た. 一 方, CD8に つ い て は 逆 に 過 敏 性 肺 臓 炎71.9± 7.0%と 最 も 高 率 で あ り,サ 症 で は17.5±5.2% と最 も低 率 で あ っ た.ま たRA+IP 41.9±21.1 %, IIP 46.4%で あ り,健 康 人 対 照 は33.9±24.6 %で あ っ た. CD4/CD8比 は 過 敏 性 肺 臓 炎 0.36±0.17,サ 症3.10±0.38, RA+IP 2.59± 0.42, IIP 1.07,健 康 人 対 照1.50±0.40で あ り, 過 敏 性 肺 臓 炎 が 最 も低 値,サ 症 が 最 も高 値 で あ っ た(Fig. 2).
Fig. 3 T-cell subset/nucleated
cells in lung tis
sue of various intertitial
pneumonia
(A).
CD4 and CD8 in lung tissue were divided
by CD3 to exclude the influence
of nu
cleated cells except T lymphocytes
(B).
Table 2 T-cell subset in BALF and lung tissue
HP; hypersensitivity pneumonitis, Sar; sarcoidosis, RA+IP; rheumatoid arthritis with interstitial pneu
2.肺 組 織 中T-cell subset 1)有 核 細 胞 を 母 数 と し たT-cell subset 組 織 中T-cell subsetに つ い て 陽 性 細 胞 を 同 一 視 野 中 の 全 有 核 細 胞 で 除 し て 表 し た . CD3は サ 症79.1±15.4%, RA+IP 61.8±30.2%, IIP 56.6%,過 敏 性 肺 臓 炎39.9±7.0%の 順 で あ っ た. CD4に つ い て は サ 症70.2±23.8%, RA+ IP 53.1±27.2%, IIP 24.5%,過 敏 性 肺 臓 炎 17.8±5.2%とCD3の 比 率 と 同 様 で あ っ た. 一 方 , CD8で は 逆 に 過 敏 性 肺 臓 炎 が34.8± 9.5%と 最 も 高 値 で あ っ た が,他 は サ 症26.8%, RA+IP25.7%, IIP 22.1%で あ っ た(Fig. 3A).
2) CD3を 母 数 と し たT-cell subset 各T-cell subsetを 同 一 視 野 の 有 核 細 胞 で 除 し た 値 で 表 す と 組 織 中 の 線 維 芽 細 胞,マ ク ロ フ
Fig. 4 Correlation
of CD4/CD8 ratios in BALF
and in lung tissue. Significant
correla
tion was shown between
T-cell subsets
in BALF and lung tissue of various inter
s-titial pneumonia.
Fig. 5 Correlation
of CD4/CD8 ratios in BALF
and in lung tissue. Significant
correla
tion was shown between
T-cell subsets
in BALF and lung tissue of hypersen
sitivity pneumonitis.
アー ジ 等 のTリ ン パ 球 以 外 の 有 核 細 胞 の 増 加 の 程 度 に よ り影 響 を受 け る.そ こ でCD3陽 性 細 胞 を 分 母 と して, CD4/CD3, CD8/CD3の 各 々 を 求 め た(Fig. 3B). CD4/CD3は サ 症87.5± 13.1%, RA+IP 86.4±1.8%, IIP 43.3%,過 敏 性 肺 臓 炎43.0±13.6%の 順 で あ り, CD4/有 核 細 胞 の 値 と 比 べ て 高 率 と な っ て い る が,疾 患 相 互 の 比 較 で は 同 様 の 関 係 で あ っ た. CD8/CD 3に つ い て は過 敏 性 肺 臓 炎 で80.3±5.6%と 最 も 高 値 で あ り,次 い でRA+IP 43.3±13.1%, IIP 39.0%,サ 症33.9±0.8%で あ り, CD4と 同 様 に 有 核 細 胞 を 分 母 と した 場 合 に 比 べ 高 率 と な っ て い た.し か し な が ら,疾 患 に よ っ て そ の 変 化 の 程 度 に は 多 少 の 差 が 認 め ら れ た. 3) CD4/CD8比 肺 組 織 中CD4/CD8比 に つ い て は,過 敏 性 肺 臓 炎0.52±0.15,サ 症2.59±0.45, RA+IP 2.25±0.47, IIP 1.11で あ り,サ 症 で 最 も 高 値,Fig. 6 CD4/CD8 ratios in alveolar
wall and in
granuloma
were measured
separately.
CD4/CD8 ratios
in alveolar
wall were
significantly
lower
than
those
in
granuloma.
過 敏 性 肺 臓 炎 で 最 も低 値 で あ っ た.
3. BALF中 と肺 組 織 中T-cell subsetの 対 比
1)各 疾 患 に お け る 対 比 CD4/CD3をBALF中 と肺 組 織 中 で 対 比 し た.過 敏 性 肺 臓 炎 でBALF中 平 均26.8%に 対 し, 組 織 中43.0%と 組 織 中 で 高 値 で あ っ た 他,サ 症, RA+IP, IIPで は 各 々 近 似 し た値 を示 し た. CD 8/CD3に つ い て も 同 様 に 対 比 し た と こ ろ,過 敏 性 肺 臓 炎 で はBALF中76.0%に 対 し組 織 中80.3 %,サ 症 で は27.2%に 対 し33.9%と 組 織 中 が い ず れ も や や 高 値 で あ っ た.一 方, RA+IP, IIP で は 逆 にBALF中 のCD8/CD3が や や 高 値 で あ っ た. CD4/CD8比 に つ い て もBALF中 と肺 組 織 中 を対 比 す る と各 疾 患 群 に お い て,過 敏 性 肺 臓 炎 とIIPで は 組 織 中 が や や 高 値 で,サ 症, RA+IPで はBALF中 が や や 高 値 で あ っ た (Table 2). 2) T-cell subsetの 相 関 の 検 討 各 疾 患 を 一 括 した 全 体 でBALF中 と肺 組 織 に お け るT-cell subsetの 相 関 を検 討 し た. CD4/ CD3とCD8/CD3の い ず れ に お い て も有 意 (p<0.05)の 正 の 相 関 が 認 め られ た. CD4/CD8 比 に つ い て も相 関 を 検 討 し た と こ ろ 有 意(r= 0.937, p<0.01)の 正 の 相 関 を 認 め た(Fig. 4).
Fig. 7 Correlation
of CD4/CD8 ratios in BALF
and lung tissue were evaluated in alveo
lar wall and granuloma,
respectively.
Statistically
significant
correlation
was
shown
between
CD4/CD8
ratios
in
BALF and in alveolar wall (A), while no
correlation
was shown between
CD4/
CD8 ratios in BALF and in granuloma
(B).
こ の 中 で 症 例 数 の 多 か っ た 過 敏 性 肺 臓 炎 の み に つ い て 検 討 したBALF中 と組 織 中 のCD4/CD 8比 に お い て も,や は り有 意(r=0.750, p< 0.05)の 正 の 相 関 が 認 め ら れ た(Fig. 5).従 っ て,肺 組 織 中 に 浸 潤 し て い るT-cell subsetの 状 態 がBALF中T-cell subsetに 反 映 さ れ て い る と考 え ら れ た. 4.過 敏 性 肺 臓 炎 に お け る 肺 組 織 中 部 位 別T-cell subsetの 検 討 症 例 数 の 多 い 過 敏 性 肺 臓 炎 に お い て,肺 組 織 を 胞 隔 部 分 と 肉 芽 腫 部 分 に 区 分 してT-cell sub setの 検 討 を 行 っ た.過 敏 性 肺 臓 炎 に 関 し てCD 3は 肉 芽 腫 の 周 辺 部 分 に 多 く分 布 し て お り,肉 芽 腫 中 心 部 に は 比 較 的 疎 で あ っ た 。 こ の 肉芽 腫 の 中 心 部 に は 主 にCD4が,周 辺 部 に はCD8が 存 在 し て い た.肉 芽 腫 に お け るT-cell subsetに 関 し て は サ 症 で も 同 様 で あ り,中 心 部 にCD4, 周 辺 に はCD8が 多 く認 め られ た.過 敏 性 肺 臓 炎 の 中 心 部 と 周 辺 部 を 合 わ せ た 肉 芽 腫 部 のCD4/ CD8比 は0.61±0.33で あ り,胞 隔 部 分 に お け る CD4/CD8比0.42±0.21と 有 意 差(p<0.05) が 認 め ら れ た.従 っ てCD4とCD3の 各T-cell subsetが 過 敏 性 肺 臓 炎 に お い て は 肺 組 織 の 部 位 に よ り分 布 比 率 の 異 な るこ とが 示 され た(Fig. 6). さ ら に,過 敏 性 肺 臓 炎 に つ い て,胞 隔 部 分 と 肉 芽 腫 部 分 を 区 別 し て 各 々 とBALF中CD4/CD 8比 と の 相 関 を 検 討 し た.胞 隔 部 分 で は 有 意 の 正 の 相 関(r=0.964, p<0.01)を 認 め た が, 肉 芽 腫 部 分 に 限 っ た検 討 で はBALFと の 相 関 は 認 め な か っ た(Fig. 7).従 っ て, BALFは 胞 隔 部 分 の 変 化 を 反 映 し て い る と考 え られ た.考
察
び まん性 肺 疾 患 の検 討 方法 と してBALが
行
わ れ る.本 法 は比 較 的侵 襲 が少 な く,各 種 び ま
ん性 肺 疾 患 に おい てBALF中
の細 胞 成分 や液 性
成分 を解 析 す る こ とに よ り,診 断 だけ で な く,
病 態解 明 や予 後 の推 定 に も有 用 とされてい る1,3)
.
BALは
下 気 道 を通 じて 生 理 的 食塩 水 を注 入 し,
肺 胞 に一 旦 貯 留 し既 に肺 胞腔 あ る い はサ ー フ ァ
クタ ン ト中に 遊 走 して い る細 胞 成 分 や 液 性 成 分
が吸 引 に よ り回収 され る.従 って, BALF中
に
は肺 胞 領 域 や 肺 間 質 の状 態 が 反 映 され るの み で
はな く,末 梢 気 道 領 域 の 細 胞 反応 も含 め て 表現
され る こ とに な る.例 えば,び
まん性 汎 細 気 管
支 炎 の 組 織所 見 と しては 著 明 な単 核 球 浸 潤,肉
芽 形 成 で あ るが, BALF中
の好 中球 の著 増4)は末
梢 気 道 の 状 態 を反映 して い る と思 われ る.従 っ
て,呼 吸器 疾 患 の 中で 間質 の病 変 が 主体 で あ り,
気 道 病 変 の 乏 しい病 態 に限 れ ば, BALF中
に 見
られ る細 胞 反 応 か ら肺 組 織 中 の変 化 を推 定 で き
る と考 え,各 種 間 質性 肺 疾 患 に つ い てBALFと
肺 組 織 中の 特 に リンパ 球 を対 比 して検 討 を行 っ
た.
組 織 中 に お い て 単 核 球 細 胞 浸 潤 と し て マ ク ロ フ ァ ー ジ や 組 織 球 等 と一 括 して 理 解 さ れ て き た リンパ 球 は,免 疫 酵 素 染 色 法5,6)の 開 発 に よ り個 々 の 細 胞 がTリ ン パ 球 で あ る か ど う か,さ ら に は T-cell subsetの 解 析 ま で 可 能 と な っ た.免 疫 酵 素 染 色 に 関 す る 報 告 は1978年 にLamelin, J. P. ら5)が扁 桃 腺 のTリ ン パ 球 とBリ ンパ 球 を蛍 光 法 に よ っ て 識 別 した の が 最 初 で あ り, ABC法 に つ い て は1981年 にMcMi llan, E. M.ら6)が ヒ トの 扁 桃 腺 を 用 い てTリ ンパ 球 な らび にT-cell subset の 識 別 を行 っ た の が 最 初 で あ る.一 方, Haslam, P. L.7), Tinley, N. L.8)ら が 同 時 期 に 組 織 中 リ ン パ 球 に 関 し て 行 っ た 報 告 は,い ず れ も 肺 生 検 材 料 を 細 切,分 解 し た 組 織 抽 出 液 中 の 細 胞 成 分 を 用 い て い る.こ の 様 な 方 法 で は 肺 組 織 中 の 細 胞 分 布 が 分 か ら ず,肺 組 織 のT-cell subsetが ど の 程 度 反 映 さ れ て い る の か も 明 ら か で な い.従 っ て 今 回 の 検 討 に あ た っ て は, BALF中T-cell subsetはFlow cytometryに よ り,ま た 肺 組 織 中T-cell subsetはABC法 に よ り判 定 し,組 織 中 の 局 在 を 含 め て 検 討 を行 っ た. 過 敏 性 肺 臓 炎 は 吸 入 抗 原 に 対 す るIII型 な ら び にIV型 ア レ ル ギ ー に よ っ て 引 き起 こ さ れ,東 日 本 に 多 発 す る 農 夫 肺 で はMycropolysporafaeni, Thermoactinomyces vulgarisな ど が 抗
原 と な り,西 日本 に 多 発 す る夏 型 過 敏 性 肺 臓 炎9) で はTrychosporon cutaneum,そ の 他 の 真 菌 が 原 因 抗 原 と な る と 考 え ら れ て い る.組 織 学 的 に は 肺 胞 隔 壁 お よ び 細 気 管 支 壁 に 多 核 巨 細 胞 を 伴 う 非 壊 死 性 類 上 皮 性 肉 芽 腫 を 形 成 す る.過 敏 性 肺 臓 炎 に お け るBAL所 見 の 特 徴10)と して は, 総 細 胞 数 の 著 明 な 増 加 と リ ン パ 球 比 率 の 著 増 が 知 ら れ て お り,沈 降 抗 体 と並 ん で 診 断 上 有 用 と さ れ て い る.今 回 検 討 し た7例 の 過 敏 性 肺 臓 炎 に お い て もBALF中 総 細 胞 数 の 著 増 が あ り,細 胞 分 類 で は リ ンパ 球 平 均80%以 上 を 占め, T-cell subsetに つ い て はCD4/CD8比 平 均0.36とCD 8が よ り増 加 し て い た. CD4/CD8比 の 低 下 を 特 徴 とす る 夏 型 過 敏 性 肺 臓 炎 に 対 し て,農 夫 肺 に お い て はBALF中CD4/CD8比 の 上 昇 が 報 告11)さ れ て お り, CD8の 増 加 す る 夏 型 過 敏 性 肺 臓 炎 との 差 異 が あ る に も か か わ ら ず 臨 床 病 像 は 共 通 す る な どT-cell subsetの 表 面 抗 原 と機 能 や そ の 役 割 に つ い て は 依 然 と し て 充 分 明 ら か で は な い. 過 敏 性 肺 臓 炎 の 肺 組 織 中CD4/CD8比 に 関 し て の 報 告 は 極 め て 少 な い.富 地 ら はBALF中 にCD4の 増 加 す る 農 夫 肺3例 の 肺 組 織 中CD 4/CD8比 を検 討 し,肺 組 織 中 で も同 様 にCD4/ CD8比 は 上 昇 し て お り, BALFと 肺 組 織 の T-cell subsetに 相 関 が あ っ た と報 告12)し て い る. 今 回 検 討 し た 夏 型 過 敏 性 肺 臓 炎 に お い てBALF 中CD8が 増 加 し て お り,肺 組 織 中 に お い て もCD 8が 増 加 し, CD4/CD8比 に つ い て も両 者 共 に
低 下 す る な どBALF中 と肺 組 織 中 のT-cell sub
setは よ く相 関 し て い た.し か し な が ら, CD4 比 率 はBALF中 よ り も組 織 中 で や や 高 値 で あ り, CD4とCD8の 肺 内 分 布,あ る い は 走 化 性 の 差 な ど が 影 響 し て い る 可 能 性 が 考 え ら れ た. サ 症 は 過 敏 性 肺 臓 炎 と同 じ く肉 芽 腫 性 疾 患 で は あ る が,過 敏 性 肺 臓 炎 と異 な り全 身 を 病 変 の 場 と す る疾 患 で あ る.一 方,肺 病 変13)の 出 現 頻 度 は 他 臓 器 に 比 べ95%以 上 と圧 倒 的 に 高 率 で あ る が,呼 吸 器 症 状 自体 は20%前 後 と低 率 で あ る. サ 症 のBALF所 見 に つ い て は 過 敏 性 肺 臓 炎 ほ ど 著 明 で は な い が,同 様 に 総 細 胞 数 の 増 加,リ ン パ 球 比 率 の 上 昇 が 知 ら れ て い る. BALF中 で 増 加 す る リ ン パ 球 は 大 部 分 がT-cellで あ り, CD 4の 著 明 な 増 加 が よ く知 ら れ て い る14).今 回 の 検 討 で もBALF中 リン パ 球 比 率 は 平 均49.2%と 高 値 で あ り, CD4/CD8比 は 平 均3.10と や は りCD 4優 位 の 成 績 で あ っ た. Hunninghake, G. W. ら15)は肺 病 変 の あ る サ 症 に お い てBALF中 リ ン パ 球 のCD4/CD8比 が 肺 野 病 変 の な いサ 症 や 健 常 人 対 照 よ り有 意 に 高 値 と な る こ とか ら,サ 症
の 肉 芽 腫 形 成 にCD4が 重 要 な 役 割 を果 た し てい る と考 え て い る,サ 症 の 組 織 中T-cell subsetに つ い てModlin, R. L.ら16)は 皮 膚,肺,リ ン パ 節 の 組 織 を 免 疫 酵 素 染 色 に よ り検 索 し,肉 芽 腫 周 囲 に は 主 にCD8陽 性 細 胞 が,肉 芽 腫 自体 に は 主 にCD4陽 性 細 胞 が 分 布 す る と 報 告 して い る. 今 回 の2例 の 検 討 で も肺 組 織 中CD4/CD8比 は 平 均2.59でBALF中 の3.10よ りは や や 低 値 な が ら共 に 高 い 値 で あ っ た.ま た,肉 芽 腫 の 確 認 で き た1例 で も 肉 芽 腫 の 主 体 はCD4陽 性 細 胞 で あ りCD8は 周 辺 部 に い くらか 存 在 す る程 度 であ っ た. RAで は 全 身 性 疾 患 と し て 関 節 の み な らず 肺 に も病 変 を 伴 う こ と が 知 られ て い る. RAの 肺 病 変 出 現 頻 度 に つ い て の 報 告17,18)は 約2%か ら 30%と 様 々 で あ る. RAに お け る 胸 部X線 像 で の び ま ん 性 間 質 性 陰 影 は 肺 結 節 や 胸 膜 病 変 が 存 在 し な い 場 合 にIIPと の 区 別 は 困 難 と さ れ て い る. RA+IPのBAL所 見 は 過 敏 性 肺 臓 炎 や サ 症 と 比 べ る と特 徴 的 で な く,細 胞 数 や 細 胞 分 類 に 際 だ っ た 変 化 は な い と さ れ て い る. 長 井 ら19)は膠 原 病 肺 のBALF中 リ ンパ 球 の
T-cell subsetはCD4<CD8で あ り, IIPで は
CD4>CD8で あ る こ とか ら鑑 別 に有 用 で あ る と 報 告 し て い る.し か しな が ら,自 検 例 のRA+ IPで はCD4/CD8比2.25±0.47と む し ろCD 4>CD8に な っ て お り,長 井 らの グ ル ー プ も そ の 後T-cell subsetの 値 が 種 々 存 在 す る こ と を 示 し て い る. 20)
RA+IPに お け る肺 組 織 中T-cell subsetを
検 討 し た 報 告 は 検 索 し た 範 囲 内 に は 見 い だ せ な か っ た.今 回 の 検 討 で はBALF中 と肺 組 織 中 の CD4/CD8比 は 一 致 し た 値 を 示 し, T-cell sub setに 関 し て はBALF所 見 が 組 織 中 に お け る変 化 を 反 映 し て い る と思 わ れ た. IIPは 原 因 不 明 で あ り,び ま ん 性 に 胞 隔 炎,線 維 化 が 進 行 し,蜂 窩 肺 に い た る疾 患 で あ る. IIP のBALF中 細 胞 成 分 に つ い て は,好 中 球 や 好 酸 球 の 増 加 が 指 摘21)さ れ て い る.木 村22)はIIPの 治 療 前 に 施 行 し たBALF中 の 好 中 球 比 率 の 高 い症 例 が 予 後 不 良 と な る傾 向 の あ る こ と を 報 告 し て い る. Turner-Warwick, M.ら23)はcryptogenic
fibrosing alveolitisに お け る 初 回 のBALで リ
ン パ 球 比 率 の 高 い もの は ス テ ロ イ ド治 療 の 反 応 が 良 く,好 中 球 や 好 酸 球 の 増 加 し た 例 で は ス テ ロ イ ド治 療 が 無 効 でcyclophosphamideが 有 効 と報 告 して い る. IIPの 肺 局 所 に お い てT-cellが ど の 程 度 病 態 に 関 与 して い る の か は 明 らか で な い. Kradin, R. L.ら24)は 開 胸 肺 生 検 の 結 果usual interstitial pneumonia(UIP)と 診 断 さ れ た13例 の 肺 組 織 に つ い て,免 疫 酵 素 染 色 に よ りT-cellの 分 布 を 検 討 し,肥 厚 し た 胞 隔 部 分 にT-cellが 多 く存 在 す る こ と,さ ら に こ れ ら のT-cellの 多 くがCD8 陽 性 細 胞 で あ り, CD4は 小 血 管 や 単 核 球 集 簇 の 周 囲 に 少 数 認 め た の み で あ っ た と報 告 して い る.
Haslam, P. L.も cryptogenic fibrosing
alveolitisの 肺 組 織 を 同 様 に 免 疫 酵 素 染 色 で検 討 し,本 症 の 病 態 に お け るT-cellの 重 要 性 を 指 摘 し て い る.今 回 検 討 し たIIPの1例 は,同 一 開 胸 生 検 肺 組 織 中 に 正 常 な 肺 胞 部 分 と種 々 の 程 度 の 線 維 化 病 変 を 斑 状 に 混 じて お り,組 織 学 的 に はUIPと 考 え られ る 症 例 で あ っ た.本 症 のBAL で は リ ン パ 球 の 増 多 が 認 め ら れ, CD4/CD8比 はBALF中 も 組 織 中 も約1.1と よ く一 致 して い た.肺 組 織 中T-cell subsetと し て は や やCD 8が 増 加 し た 状 態 と考 え ら れ た.
Paradis, I. L.ら25)は サ 症, idiopathic
pulmo-nary fibrosis(IPF)各6例 に つ い てBALF中
と肺 組 織 中 のT-cell subsetを 比 較 し, CD4/ CD3比, CD8/CD3比 に 関 して は 両 疾 患 と も有 意 の 正 の 相 関 が あ っ た が, BALF中 の 各subset の 細 胞 密 度 で の 検 討 で は,サ 症 のCD3とCD4 陽 性 細 胞 に つ い て 肺 組 織 中 に お け る各CD3, CD 4陽 性 細 胞 と相 関 が あ り, IPFで は 相 関 が な か っ た と述 べ て い る.こ の 様 な 疾 患 に よ る差 を生 じ た 機 序 と して,サ 症 で はBALF中 に も 肺 組 織 中 に もCD8陽 性 細 胞 が 少 数 で あ る こ と, IPFで は 高 度 な 拘 束 性 障 害 の ため にBALF回 収 率 が 低 く, BALFが 胞 隔 部 分 で な く途 中 の 気 道 の 細 胞 成 分 を よ り 多 く反 映 し て い る 可 能 性 を 指 摘 し て い る. 今 回 の 肺 組 織 中T-cell subsetの 検 討 で は, 肺 組 織 内 の 各T-cell subset比 率 を表 現 す る 一 つ の 方 法 と し て 全 視 野 の 有 核 細 胞 を分 母 と し て
を 含 む 有 核 細 胞 の 密 な 部 分 と 疎 な 部 分 で の 各 T-cell subsetの 浸 潤 程 度 に つ い て 客 観 性 が え ら れ る と考 え ら れ た.さ ら に,組 織 中CD4とCD 8陽 性 細 胞 をCD3陽 性 細 胞 を母 数 と して 表 す こ と でBALF中T-cell subsetと の 対 比 が 容 易 と な っ た.こ う し た 方 法 で の 比 較 に よ り間 質 性 肺
疾 患 に お け るBALは 肺 組 織 中 のT-cell subset
を 反 映 し て い る こ とが 明 ら か に な っ た.し か し な が ら, BALF中 と組 織 中 で は 各CD4, CD8 の 比 率 が 少 し ず つ 異 な っ て お り,同 じ間 質 性 肺 疾 患 で あ っ て も各T-cell subsetに よ っ て 組 織 か らBALFへ の 移 行 に 差 が あ る こ とが 推 察 さ れ た.こ れ に は 病 態 に よ り活 性 化 さ れ るT-cell subsetに 差 が あ り,さ ら に 組 織 中 か ら 肺 胞 腔 や 末 梢 気 道 に 到 達 す る ま で の 遊 走 過 程 の 相 違 な ど が 関 連 す る と考 え ら れ た.過 敏 性 肺 臓 炎 で は 胞 隔 部 分 と 肉 芽 腫 部 分 と に 区 別 し て 検 討 す る と, 肉 芽 腫 部 分 に はCD4陽 性 リンパ 球 が 比 較 的 高 率 に 存 在 し,胞 隔 部 分 に はCD8陽 性 リ ン パ 球 が 高 率 に 存 在 し て い た.サ 症 の 肉 芽 腫 で はCD8が 周 辺 に 存 在 し, CD4が 肉 芽 腫 自体 に 存 在 す る な ど 肺 組 織 内 部 で のT-cell subsetの 分 布 に 偏 りの あ る こ と が 明 らか と な っ た.さ ら に,過 敏 性 肺
臓 炎 に お け るBALFと 胞 隔 部 分 のT-cell subset
に は 相 関 が 認 め ら れ た が, BALFと 肉 芽 腫 部 分 に は 相 関 が 認 め ら れ な か っ た.こ の こ と か ら, 肺 組 織 内 でT-cell subset分 布 に 偏 りの あ る疾 患 に つ い て,局 所 的 に はBALF中T-cell subset は 注 入 さ れ た 洗 浄 液 と接 触 す る 機 会 の 多 い 胞 隔 部 分 の み を 反 映 し て い る こ と も示 唆 さ れ た.し か し な が ら肺 全 体 と し て 考 え る 時, BALF中 細 胞 成 分 が 肺 内 に お け る細 胞 反 応 を 表 現 し て い る こ と は 明 ら か で あ り,組 織 中 浸 潤 細 胞 に つ い て の 情 報 を 把 握 す る 上 でBALが 臨 床 上 有 用 な 検 査 方 法 で あ る と考 え ら れ た. 結 論 各 種 間 質 性 肺 疾 患12例(過 敏 性 肺 臓 炎7例, サ 症2例, RA+IP 2例, IIP 1例)に つ い て,
BALF中 と組 織 中 リ ン パ 球 のT-cell subsetの
比 較 検 討 を行 っ た.そ の 結 果 と し て は 1)各 種 間 質 性 肺 疾 患12例 に お け るBALF中 と 肺 組 織 中 のCD4/CD8比 の 間 に はr= 0.937, p<0.01と 有 意 の 正 の 相 関 が 認 め られ た. 2)内,過 敏 性 肺 臓 炎7例 に お け るBALF中 と肺 組 織 中 のCD4/CD8比 に 関 し て もr= 0.750, p<0.05と 有 意 の 正 の 相 関 が 認 め られ た. 3)過 敏 性 肺 臓 炎 の 肺 組 織 を 胞 隔 部 分 と 肉 芽 腫 部 分 に 区 分 し てT-cell subsetの 検 討 を行 っ た と こ ろ, CD4/CD8比 は 胞 隔 部 分 に つ い て は BALF中 と 良 く相 関(r=0.964, p<0.01)し て い た が 肉 芽 腫 部 分 と は 相 関 を 認 め な か っ た. 以 上 よ り, BALF中 細 胞 成 分 を 検 討 す る 際 に は,肉 芽 腫 形 成 等 の 特 殊 な 病 巣 を 肺 内 で 形 成 す る 病 態 で は,肺 組 織 中 の 特 定 の 領 域 に お け る 浸 潤 細 胞 の み が 回 収 さ れ る 可 能 性 が 示 唆 さ れ た. しか し な が ら,肺 全 体 と し て 考 え る 時BALは 肺 組 織 中 の 変 化 を把 握 す る 上 で 有 用 な 検 査 法 と 考 え ら れ た. 稿 を終 え るに あ た り御 指 導,御 校 閲 を賜 わ っ た恩 師 木 村 郁 郎 教 授 に 心 よ り感 謝 致 し ます.ま た 研 究 に あ た り直接 の 御 指 導 を い た だ い た 多 田 慎 也 講 師 に 深 謝 致 します.
文
献
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