有芽胞嫌氣性菌の腐敗菌に対すろ抗菌性に就て（第2報）

(1)

金沢医科大学細菌学教室（主径谷教授）

塩見釜朗

Afas iro Sliivfjfi （昭和24年4月18日受附）

第1章緒

夏期高温多野な氣候を有する本邦に干ては食品特に動物性蛋白の腐敗防止は重要な問題であるが，大量処理部門に於てすら食品防腐設備は不充分であり，一般家庭に於ける冷藏装置も同様で之が急速な補充も不可能な現況である．近年「ペニシリン」，「ストレプトマイシン」等を先駆とする抗菌性物質の主要研究は病原菌を目標として研究されてるるが，若しこの理論を腐敗菌の発育阻止に学術することが出門るならば食晶貯藏にも新方面を開拓することになる訳で

ある。

著者1｝は比較的実験例の少なV・有芽胞肝管性菌の拮抗性に就て実験中，腐敗菌に対し拮抗性

言

を有する15株の嫌氣性菌を分離しその形態学的生物学的性状から之等の菌株を佐々木菌2）及その類似菌に属する菌株であると決定した。この

菌株は相磯3）及その共同研究者4）5）fi） 7）が食品

防腐に憲暫した菌株と類似すると想豫されるので，著者もとの菌株を用ひて抗菌作用を明かにするために本菌株の高度の抗菌価を示す謄写を探求し更にその有効物質の抽出に成功した．この抽出物質は特に腐敗菌発育阻止に有効で，人間に対しても無毒であるため食品腐敗防止に利用され得る可能性があb，著者の之に関する基礎実験に於ても有望な結論に到達した．舷に報告して諸賢の御批判を講ふ次第である．

第2章高度の抗菌債を得る培養條件の探求第1節種々の培地に於ける

抗菌価の状況 1．実験方法

JarrOzi肝臓ブイaン」8）2％葡萄糖肝織ブイヨン」，

相磯攣法培地1），2％葡萄糖ブイヨン」の4種培地を

作り，No．35株の肝魔ブイヨン」24時間培養液ユ滴

宛を接種し37。C 24時間培養した．この際葡萄糖ブイ

ヨン」のみは飯森式嫌氣性培養10＞（内山5mmHg）を

行った，この培養液の遠心上溝を探り別に用意した

pH 5・0の普通ブイヨン」で3cc系統の倍々稀羅列を作り，之に緑膿菌及び普通大腸菌の「ブイヨン培養疲

1白金耳宛を加え24時間培養後更にその1白金耳を寒

天廠に塗抹接mi，37・C48時間好氣的培養により

護生した集落激から培養液の腐敗菌に封ずる拮抗力の

強さを判定した．

2．実験成績

線膿菌に対する培養液の殺菌はJaroizi肝臓ブイヨン」培養液では16倍稀釈まで，相磯変法培地，葡萄糖ブイヨン」，2％葡萄糖肝臓ブイヨン」では32倍稀釈まで．叉大腸菌に対する殺菌は肝臓ブイヨン」では8倍稀釈まで，他の3培地では6倍稀釈までfあった。（第1表参照）

［ 9 ］

(2)

10 盤見

第1表：4種類培地に於ける抗菌甲

乙菌緑膿菌 i ^{曹通大腸菌}

r 一

H 羅 ^…｝一一

^P

2 4 8 16 32 64 128 2 4 8 16 32 64 128

培地＼

肝ブイヨン一一一一 i斗畳什・冊

一一一十辮柵柵 2％葡萄糖肝ブイヨン」

一一一一一十十柵

一一占一十柵冊

2％葡萄糖「ブイヨン」一一一一一十十冊一一・一一｛斗柵柵

相磯憂法一一一一一十十柵

一一一一十柵冊

配

註帯集落面積が魚倉の施以上集落面磧が塞天の％〜殆

十集落面積が寒天の1／3以下

集落叢生なし

第2節肝臓ブイヨン」に於ける葡萄糖：量の抗菌価に及ぼす影響 1．実験方法

含有葡萄糖量が0，⑪・5，1・⑪，2・0，5・0％なる5種のpH 7・2肝臓ブイヨン」を作りNo・35株の培養

液1滴宛を加へ，その37。C 24時聞培養液に就て前述の方法を用ひて抗菌贋を測定した．

2．実験成績

緑膿菌に対しても大腸菌に対しても葡萄糖をカ1へざるものが最も抗菌価低く，α5％葡萄糖加ブイヨン」が之に次ぎ，1．0％〜5．⑪％葡萄糖ブイヨン」までは最良でその間に差はなかった．

（第2表参照）

第2表：肝ブイヨン」に於ける葡萄糖：量の影響

；・i・：lri

5．Oe／e

緑膿

2 4 8 16 32

一一一一 H 一一一一一十

菌 1 …

64 128 ［

柵柵1

珊冊

粁・冊

暑柵

十十柵

大腸菌

2 4 8 16 32 64 128

一一一十柵柑柵

?一一一十十十十甘柑

?一一一十柵・二

?一一一一十紐搬

?一一一十柵・｝什

第3節相磯変法培地に於ける糖類の抗菌価に及ぼす影響 1．実験方法

糖類としては Glucocep Saccharose e Malt⑪se，

Lactose一及びAmylumの5種類を用ひ，この際併用

の「ペプトン」は照内ペプトン」を使用した。此等を用ひて書方の如くpH：7・2相磯鍵法培地を作り，之に

No．35の肝臓ブイヨン」24時間培養液1滴を加へ，

その37。C 24時聞培養液に就て緑膿菌及難菌に封ずる

抗菌便を測定した．

2．実験成績

G】ucose， Maltose， Lactose， Saccharoseを用

ひた培地では抗菌価に差を認めす，Amylumの場合のみ僅かに低かった．（第3表参照）

第4節相磯変法培地に於ける「ペプトン」種類の抗菌価に及ぼす影響 1．実験方法

「カルノ」，「ポリ」，照内，極東，大島の5種類の「ペプトン」を用ひ下方の如く相磯麺法培地を作りNo・ 3，5

株を接奪して37ごC24時間培養した・この培養液の遠

心上清に就て緑膿菌及難菌に射する抗菌債を測定する

と第3表の成績となった。部ち「カルノペプトソ」は

最も優秀で他の4種は同様な威績であったが著明な差

は認めなかった．（第3表参照）

(3)

第3表：糖及「ペプトン」の種類の抗菌価に及ぼす影響

敗菌

∵諮］・

腐緑

膿

菌

4 8 16 32 64 128

Glucose Maltose

Zactose

Saccharose

Amglum b

i 一一一一一．

一一一一一一一一

一一一一一 ff

一一一一什一一一軒

帯柵柑

菌

2 4 8 16 32 64 128

一一十柵四一一一十柵柵一一十柵冊一一一十柵柵

一一一十÷ 惜柵圏内ペプトン」

「ポリペプトン1

「カルノペプトソi一一一一一

極東ペプトン一一一一一一一

大島ペプトン i一一一一一

一一一一一 Y柵1一一一一＋三日

一一一一一刑一一一一＋柵一

十柑柵柵冊構

一一一一一回覧一一一一一十柵一一一一一十柵柵

第5節相磯変法培地に於ける起始：PH：及培養時聞の抗菌価に及ぼす影響

1．実験：方法

起始PHが6・0，7．0，7．5，8．0，8．5の5種類相

磯攣i法培地（100cc宛分注）を作り之にNo・35株の肝臓ブイヨン」培養液1cc宛を加へ37。Cで培養し

た．之を培養9，ユ2，15，18，21，24，36，40，60ジ 72時間及5，7，10日に就て「ブイヨン」（ph 5・O）で稀羅し前述方法で抗菌便を測定した，

2，実験成績

線膿菌に対してpH 6．0の場合を除き・9時聞培養で4倍稀釈，12〜15時聞では5種類共8倍稀釈まで殺菌作用を認めた．18時間培養では pH 7・0のみが16倍となり，21時間培養で5種類共16倍，24時聞培養で全部32倍，48時間培養で全部64倍，60時間乃至5日培養で全部32倍となった。i衆で7日加養ではpH 7．0のみ32倍で他は16倍となり次第に低下した．即ちpH 7・0 培地が比較的早期から逞くまで高V・抗菌価を示したが，起始pHにより特に高い抗菌価は得られなかった．（第4表参照）

第6節葡萄糖ブイヨン」に於ける増養内圧の抗菌価に及ぼす影響 1，実験方法

pHア・2葡萄糖ブイヨンllにNo・35株を援種し飯

第4表：起始PH．及培養時聞の抗菌価に及ぼす影響

幽㌻・レ・

9 時 12 t1 15 e 18 ti

2工〃

24

36 t1 40 x1 48 t／

6e ls 72 it

5 日 7 日

1⑪ 日

1 7・司8・⑪ 1

8， 5

o倍 8 8

8

16

32 32

32

64 32 32 32

ユ6

8

14倍海倍

8188i8

16！8

lll麗 32132 32i32 64i64

32 32 32

， 32

16

32 32 32

ユ6

8

4倍恒倍

sls

8

8 16

32

8 8 16 32

32 1 32

32

64

32

32 16 8

64 32 32 32 16 8

（註表申激字は縁膿菌に封ずる抗菌債）

森式嫌氣性培養法に依む培養内塵を2，30，ユ00，300

mmH9として24，48，72時間培養した，この培養液

に就て二二二二大腸菌に封ずる抗菌債を測定した．

2．実験成績

2mm及30mm内圧培i養では24時間培養が最高で32倍稀釈まで殺菌し，48時間培養以後は16 倍と低下した．叉1⑪Omm内圧では24時間培養で32倍，以後は8倍と低下した．300mm内圧

［ 11 ］

(4)

12 見

培養は明かに不良で24時闇培養で16倍までS あった．（第5表：i蓼照）

第5表1内圧の抗菌価に及ぼす影響

巨眼培酬終末pH隣菌「大腸菌1

2mmHg

30皿m

24 i 4．6 48 1 4．5

7．F． 1 4．5

24 48 72

32倍［

4．6 4．5

4．5

1eomm

24 1 4．7

鋤1：1

3eomm 劉1：1

72

｢・6

16 16

32倍

16

16 32

16 16

32 8 8

32 16

ユ6

32

8 8

a

16 8 2

16 4 2

｝

第7節燐酸塩の抗菌価に及ぼす影響 1．実験方法

起姶pH 7．2相磯攣法培地及之より燐酸盤を除いた pll 7・2馬鈴薯糖ブイヨン」を摩り之にNo・35株を

接種し37。Cで1，2，3，5日後に就て緑膿菌に劉する抗菌債を測定した．

2．実験成績

燐酸塩加の場合は48時間培養で64倍（最高）となった，燐酸塩を加へざる培地では24時間培養で32倍（最高）となり，48時間培養では16倍と低、

下した。各菌液の二二pHは4・5〜4・6で差は認めなかった．叉NaOH：を以て両者の48時聞培養液のpHを7．2と再修正し更に24時聞培養したものはpH 4．6となのeこの線膿菌に対する抗菌価は8倍と低下した．即ち燐酸塩の抗菌価に及ぼす影響は軍に燐酸塩の培地pHに対する綾衝作用の外に何等か別の関係が存在すると考へられる．（第6表参照）

第6表燐酸塩の抗菌価に及ぼす影響

藩竺融（＋）

24 49

72 5

剛32倍（・・6）

時時

日

64 （4．5）

32 （4．5）

燐酸（一）

32｛音（4・6）

16 （4．5）

8 （4．5）

第5章有効成分抽出法 L培養液の製法培地はpH 7．2相磯変法

培地を用ひる．分注液：量は50cc宛が良い．

200cc以上の大：量培養では抗菌価が低い．培養菌株はNo．35としその肝臓ブイヨン」24時聞培養液1ccを50cc培地に接種する．之を37。C 48時間培養して絡末pH：45〜4．7となりたるもコ

のを用びその緑膿菌に対する抗菌価を測定する．この2日欄培養液は氷室に保存すれば抗菌価は低下しない．線膿菌に対する抗菌価は64倍以上のものを用ひるべきである．

2．濃縮培養液を20⑪0回，30分聞遠心して沈澱を除き之を60〜70。C，20mmHgで原量の

1／loとなるまで減圧濃縮する．

3．吸着 3％割に活性炭を加へ2時間振盈した後，遠心して沈澱を集める．

4．抽出沈澱に約5倍量のHCI酸性pH

20の「アルコール」を加へ良く振盤後濾紙を以て濾過し，更に50。C，2emmHgで↓i o量になるまで濃縮する．この濃縮液に5倍量り「アセ

トン」を加へると沈澱を生する．之を氷室に1 夜保存して沈澱させ上暦の「アセトン」を除き

「アルコール」に再溶輻して乾燥すれば次白色粉

末を得る．

第4章抽出物質の性欺 1．形態友白色無晶形粉末．無臭で吸滋性

が彊い．

2．耐熱性 100倍稀釈の水溶液（pH 5．0）として之を10⑪。C3時間水浴中に加熱したもの，

(5)

及120。C 1時間Aut⑪klav中で加熱したものを pH 5．0普通ブイヨン」を以て倍々稀釈し，之に線膿菌の「ブイヨン」培養1白金耳宛接種して線膿菌に対する抗菌価の変動を槍査した．その成績によれば100。C 3時聞加熱12⑪。C 1時間加熱共に対照たる非加熱材料に比し抗菌価の低下を認めなかった．（第Z表参照）

3．溶解性水，酒精には容易に溶解するが rエーテル」，「アセトン」には難溶性である．

4．化学的性質分解点243。C，：N， S， Cl の反慮陽性なる有機化合物である。

5．毒性抽出物質の0・05grを05ccの水に溶解し「マウス」2匹に飲ませたが4H闘観察申変化を認めなかった．ヌ．1000倍稀釈道中に 2日浸した魚肉約30grを入間に食せしめたが障害を認めなかった．

6．稀釈液：pHと抗菌価の関係pH 5・0，6・⑪，

7．0，8．0，9．0の5種「ブイヨン」を作砂，之に

抽出物質を溶解稀釈しτ線膿菌に対する発育阻止能力を測定した．37。C 24時間培養後「ブイ

ヨン」潤濁より発育を判定するに，pH 5・0の場合は320⑪倍まで完全阻止，pH 6．0は32⑪0倍が多少1函濁，pH 7．⑪以上では800倍で癸育阻止を示した．即ちpH 5．0の場合が最高価を示した．（第7表参照）

プ．保存日数による影響抽出物質を粉末のまs 37。C 7日保存したもの，及抽出物質をpH 5．0蒸溜水を以て10⑪倍に稀釈したものを37。C 及氷室（4。C）に7日，14日保存したものに就て，pH 5．0「ブイヨン」稀釈によ夢線膿菌に対する抗菌価を測定した．その成績によれば粉末のまs保存したもの及氷室内に水溶液：として7

第7表：抽出物質の性状（緑膿菌に封ずる抗菌憤）

wa理方法1抗菌便

射農無虞理 ^6・400倍

加

熱

西出液

PHの

保存

日

数

水素

イオン

の影響

100。C 3時間

1200C 1時闇

pH． s．e

1！ 6．O

tl 7．0，

11 8．0

．N 9．e

6．400 6．400 6．40e 6．400 3．200

．900

粉末 37。C．7日

溶液 370C． 7日

溶液 370C・ 14日

溶液氷室 7日溶液氷室 14目

24

時闇放置

7

日

間放置

pll・ 2．O

fl 4．O tt 6．O ff 8．0

pH． 2．O

tf 4．O rg 6．g 8．0

6．400 3．2QO 3．20e 6．40e 3．200 6．400 6．400 6．4eo

．geo

3．200 3．200 3．2ee

．400＞

Pt理方法i抗菌償

光線のL 影響

眞

申

金浜

イ

オ

ン

の影響

粉末太陽1時間粉末紫外線1時間溶液太陽1時闘溶液紫外線1時唖

聾末溶液溶液

14

7 14

引目日

Fe Cn Pp Zn

Hg

：N量

Al

イオソイオソイオンイオンイオンイオンイオン

6．40e 6．400 6．400 6．400 6．400 6．400 6．400

夜放置

6．4eo 1．6eo 1．600 1．600 1．600 6．400 6．400

7

日

間

放

置

Fe Cu

PI）

Zn Ilg Ni

Al

イオソイオソイオンイオソイオンイオンイオン

6：器1」

総

．400＞

6．400 6．400

［ 13 ］i

(6)

14 _見

日保存したものは抗菌価の低下を示さなかったが，水溶液として39。C 7日以上保存したもの及氷室14日保存しだものでは抗菌価の低下を認めた。（第7表参照＞

8．水素イオン」濃度の影響抽出物質を蒸溜水を以て400倍に稀釈し之を塩酸及苛性曹達

を以てpH 2．⑪，4．⑪，6．0，8．Oの4種類に修正

し之を室溜．（10。C）に24時間及7日間放置後pH 5．0「ブイ日ン」を以て稀釈しその線膿菌に対する抗菌価を測定した．その成績によれば24時間放置ではpH 2．0〜6．0の酸性側では抗菌価の低下は認めなかったが，pH 8．0の場合は著しVb 低下を示した．又7日室温放置の場合はpH

2．O〜6、⑪の酸性側では3200倍となIP l pH8．0で

は400倍以下に低下した．〈第7表参照）

9．光線による影響抽出物質の粉末及10⑪ 倍水溶液（pH 5．0）を太陽直射及紫外線により々1時間照射したものをpH 5．0「ブイヨン」

で稀釈し線膿菌に対する抗菌性を測定した．両材料に就て太陽，紫外線照射共に対照に比し抗菌価の低下は認めなかった．（第7表参照）

10．眞室中に保存の影響抽出物質の粉末及 10⑪倍水溶液（pH 5．⑪）を飯森式嫌氣性藍内で殆んど四聖（内圧4〜6mmHg）とし，之を室温

（1⑪。C）に14日間放置した後， pH 5．0ブイヨン」

を以て稀釈して線膿菌に対する抗菌価を測定した．その成績では粉末に於ても：水溶液中に於ても抗菌価の低下は認めなかつだ。又対照として室盗（10。C）で室氣中に保存（14日間）した水溶液では抗菌価は3200倍に低下した．（第7表

参照）

11．金属イオン」の影響抽出物質の400倍水溶（pH 5．⑪）液を作b，之を7本の中試験管 va 2cc時分注し夫々に鉄，銅，亜鉛，鉛，水銀，

「＝ッケル」，「アルミ＝ウム」を約O．5gr加へ室温（IO。C）に1夜及7日闇放置したこの水溶液に就て緑膿菌に対する抗菌価を洲下すると女の成績を得允．即ち：Fe，：Ni， A1イオン」では7日間放置後も抗菌価は低下しなかったが，

Cu， Pb， Zu， Hgイオン」では1夜放置により著しい抗菌価の低下を示し，7日放置後では殆んど溝失した．（第7表参照）

第5章抽出物質の各種細菌に封ずる畿育阻止能力に就て 1．実験方法

抽出物質を蒸溜水で稀糧して10倍液を作り，之を

pH 5・O「ブイヨン」1cc入れ試凹凹列で100倍より倍々稀晒する，之に大腸菌，葡萄賦球菌，販菌，枯草菌，

馬鈴薯菌，緑膿菌，螢光菌，「チブス菌，「パラチブZ A菌，「パラチブス：B菌，「コレラ菌，酵母の「ブイヨン」培養，一筆朕徽の葡萄糖ブイヨン」10日培養1白金耳を夫々に接種し37。Cで24時間培養した，但し筆

第8表1抽出物質の抗菌価

細菌名

抗菌便大腸菌（衛生）

萄菌（寺島）

無菌（東大）

枯草菌（青木）

馬丁薯菌（青木）

魚形菌（敢室）

緑膿菌（教室）

螢光菌（鞭見）

「チブス菌（相川）

「パラA菌（ユ015）

「パラ］B菌（80⑪6）

1．200倍 51．200

6．400 3．200 6．4CO 3．200 6．40D 6．400 ．200 ．200 ．Ieo

細菌

名

抗菌贋

「コレラ菌（原型）

肺炎双球菌（1型）

溶連菌（豫研S−8）

酵母（酒）

酵 f摯（イースト）

筆賦徹

We】c髄（三保）

Novyi （ZeisslR）

Put・Verrucos （傳研：）

1｛｝Fst〔〉ユ｝7t呈cus （北研）

乳酸桿・菌

3．2CO 3．2eo 1．600

．800

．10e＞

． 100＞

．100＞

6．400

．Ieo＞

．Ioe＞

(7)

状徽は25。Cで7日間培養した．肺炎双球菌，溶血性

蓮鐙朕球菌は血清ブイヨン」を，：又乳酸菌，「ウエル

シー菌，「ノピ菌，Bacillus putrificus Verrucosusは

肝臓ブイヨン」を使用して糠増した．この培養による潤濁，瓦斯護生により抽出物質の細菌一洗阻止能力を

判定した，

2，実験成績

腸闇系病原菌に対する抗菌価は低かったが，

葡萄1伏球菌，霊菌，馬鈴薯菌，Bacillus putrificu＄

Verrucosusに対しては6400倍迄，枯草菌，変形菌，螢光菌に対しては3200倍迄発育を阻止した．（第8表参照）

第6章実際的防腐試験第1節加熱魚肉の防腐試験

1．実験方法

鯖肉を栂指頭大に切り1⑪0。C 10分間「コッホ釜中で加熱後，抽出物質の1000倍水溶液（盤酸を以てpH 5．0

とす．無色無臭である）中に2時間浸し滅菌シャーレ」

内に移す．之に大腸菌，漁協，枯草菌，馬鈴薯菌，攣形菌，緑膿菌，螢光菌の「ブイヨン」培養1白金耳を魚肉表面に接種し「シャーy」内の乾燥を防ぐため底

部に水を入れた硝子壼内に入れて密閉し25。Cで2週

聞放置した．之を逐日的に取出して一方に魚肉上の憂化を肉眼的に観察し，：又1，3，5，7，10日放置後に魚肉の表面から1白金耳宛を寒天李板に塗抹培養し腐

敗菌の消長を槍点した．

2．実験域績

鯖肉の腐敗臭及肉眼的変化は2週聞観察中全く認めなかった．接種菌の浩長に関する培養実験では放置1日目は全株を良く検出したが3日放置から次第に減少し，7日放置以後は全株が殆んど消失した．（第9表参照）

第9表：接種した腐敗菌の消長

菌種

大腸菌

憲菌

枯草菌

馬鈴薯菌

攣形菌緑膿菌螢光菌

放置日激

1131517ile114

柵

里宮1 柵柵

十十

十F

11 0 11

十十

4

14

6 0 6 3 0 0 0

o o o o o o

o

e

OIO

（註記號は第1表と同じ）

第2節、鮮魚の防腐試験 1．実験方法

新鮮なる三二を頭，鯉，内臓，尾を除いて約100gr 宛に切り，之を抽出物質の1000倍稀繹液に10分，30

分，1時，3時，5時間浸した後滅菌「シヤ・・一レ」に入れ底部に水を入れた州内に置き25。Cに保存，他方

稀澤液中に投入したままのもの3本と25。9に保存し

て逐日約に臭，肉眼的墜化，寒天培養試瞼より防腐効

果を梅査した．

2．実験成績

10分及30分間浸したものは48時間放置で槌了し悪臭を生じrグラム陰性桿菌を槍出した．1

〜5時間液申に浸したものは4日放置で腐敗臭を生じ「グラム陰性桿菌を分離した．稀釈液申に保存したものは2週間に亘り悪臭を生ぜす．

5Fl放置頃から配色し始めたが腐敗現象は認めなかった．叉1例よりは「グラム陽性にして芽胞，蓮動を認めぎる桿菌を5日放置以後で槍出

した．

第5節生肉の防腐試験 1．実験：方法

市販の牛肉を100gr約の大きさのまま抽出物質の

IOOO倍稀胆液（pH 5・0）中に投じ25。Cで14日闇放置した．その闇逐目的にその色，臭，形態に就て観察

し牛肉の腐敗朕況を梅査した．

2．実験成績

3日放置により肉表面の膨化，5日放置より肉表面の遜色を認めたが14日間悪臭発生はなかった．rk 7日及14日放置後この肉塊を申黒して肉の細心部の磯況を検査した所7日放置のものでは購入時と殆んど同様であったが14日放置のものでは偲色，膨化拉に軽度腐敗臭を認めた．

［ 15 ）

(8)

16

臨

見

第4節果物の防腐作用 1．実験方法

林檎を生のまま，及牛割したものを抽出物質の1⑪0⑪ 倍稀羅液（pH 5・0）中に投じて之を25。Cに放置し逐

日的に林檎の肉眼的攣化を観察した。叉射照として

pH 5・0水道水中に牛割した林檎を入れ同襟に観察し

た．

2．実験成績

水道水中に放置した牛割の林檎は24時間：放置後で水道水澗濁，瓦斯発生を著明に認めたが，

抽出物質の溶液申にて放置したものは5日聞著変を認めなかった．但し林檎の切断面は焼色に変じ，叉6日放置後は林檎組織が著しく直れ易

くなった．そのま山容液中に放置した林檎では

9日聞放置後も全く変化を認めなかった．叉実験前から腐敗し始めてみた林檎は溶液申に入れ 25。Cに放置しても腐敗を阻止しなかった．

第5節・野茱の防腐作用 1．実験方法

抽出液の1000倍稀羅液（pH 5・O）及水道水（pH 5．O）

中に白磁を入れ25。Cに放置して逐日的にその肉眼的

攣化を観察した．

2．実験成績

水中：放置のものでは24時国後に液の潤濁白茱．

の変化を認めたが抽出物質溶液中放置のものでは3日聞変化を認めす，4日放置以後次第に白血の変色，変形を示した．

第7章総括鮫に老按

以上の実験成績を総括拉に考按すれば次の如

くである．

L抗菌物質産生に適する培養法の探求先づ肝臓ブイヨン」，2％葡萄糖加肝臓ブイヨン」，

葡萄糖ブイヨン」及相磯変法培地を用ひたNo．

35株の抗菌価を測定すると，相磯変法培地は比較的抗菌価高く且材料入手が容易で叉培養方法

も簡箪であった．次で「ペプトン」の種類，糖の種類1燐酸塩の有無，培養内圧の抗菌物質産生に及ぼす影響を比較実験すると，糖は1％

の割に加へたものが比較的良好で Glucose，

Maltose，：Lactose， Sttccharoseが優れ，：叉「ペ

プトン」の種類では「カルノペプトン」が多少優れてみた。又燐酸塩加培地では高い抗菌価を持続する時闘が長くなり，葡萄糖ブイヨン」培養では：内圧30mmH：9以下が適当であった．即ち以上を総合すると相磯変法培地は抗菌調質産生に比較的適当した培地である．

2．抽出物質に就て培養液を濃縮し活性炭に吸着させ，酒精に溶聞して「アセ1・ン」を加へると沈澱を生する．之を集めて乾燥すると荻

白色無晶形粉末を得る．この粉末は酸性溶液として特に腐敗菌に対して強v・抗菌性を示し耐熱

性が彊v・．忍辱性菌の抗菌性に就て佐々木11）は産生される酸によるとした．相磯12）は酪酸菌の抗菌性に就てその産生する種々の有機酸の割合

を考慮：し後13）には「アルコール」，「＝一テル」，

「アセトン」に溶解し水に難溶性の液体を分離

した．叉Neuberg u Ari賦eill 14）は：Bacillus

butyv丘us：Fitzから抗菌性脂酸を得てCaproic，

Caprylic， Capric酸を証明した．著者の今回抽出した物質が之等の物質と異なる事は明かであ

り，叉種々の有機酸の特殊な混合と恩考えられないが，この本態に就ては不明である．

3．実際的防腐試験抽出物質のpH 5．0，

1000倍水溶液に加熱した魚肉を浸し，次で之に各種の腐敗菌を接種したが，その発育は極めて不良で次第に浩滅した，叉鮮魚肉を1時間以上浸し夏期室温に近い25。Cに放置した場合は4

日目に腐敗現象を示した．更に鮮魚肉，牛肉，

果物，野菜を生のまS液中に入れて25。Cで放置すると鮮魚肉は2週闇に亘り腐敗を認めす／

牛肉は7日放置まで腐敗せす，叉果物，野茱では3日〜5日間腐敗現象を認めなかった．

この液は無色無臭で浸した食品の風味を害せす，叉食用として人休に無害である．即ちこの

(9)

抗菌液を用ひる防腐作用は夏期に於ける生鮮食晶の簡軍な防腐法として充分慮用する価値のあ

るもの左思はれる

第8章結

1．佐々木菌及その類似菌株はpH 7．2相磯変法培地に於ける37。C48時闇培養で高価な抗

菌物質を作る．

2酒精，「アセトン」を以て培養液から抽出した友白色粉末はpH 5．0水溶液として腐敗菌に対する発育阻止能力が彊い．生鮮食品をこの

論

水溶液中に入れる事によりそれ等の防腐に利用

する：事が出來・る，

擢筆するに當り御懇篤なる御指導蚊に御校閲を賜はつた恩師谷叡授に裏心より感謝の意を表する，尚本論文の要旨は十全轡學曾第2回集回に於て醗表した．

文

1）塵見＝十全會雑誌，護表豫定． 2）佐々木：近世嫌氣性細菌學，71，南山堂嚢行（1934）・

3）相磯：公i衆衛生誌，3，190（昭23）． 4）

畠中：千葉醤大腐研報告，1，41（昭23）．

5）相磯，柳中，國井：千葉醤大腐研報告，1，54・

6）相磯：千葉醤大腐研：報告，1，27・ 7）楯磯，

柳澤書千葉醤大腐研報告，1，60・ 8）谷友次：

献

醤學微生物學，南山堂（昭23）．

十全會雑誌，34，111（1920 十全會雑誌38，1（昭8）．

衛生誌， 3， 190 （昭23）．

大腐研報告，1，79（昭23）．

10）飯森：

邑『々木：

12）相磯＝公衆

13）相磯：千葉醤

14） Neuberg

u Ariustein： Biochern． Z， 117， 261 （1921）．

［ 17 ］

有芽胞嫌氣性菌の腐敗菌に対すろ 抗菌性に就て（第2報）

Afas iro Sliivfjfi （昭和24年4月18日受附）

菌株は相磯3）及その共同研究者4）5）fi） 7）が食品

JarrOzi肝臓ブイaン」8）2％葡萄糖肝織ブイヨン」，

相磯攣法培地1），2％葡萄糖ブイヨン」の4種培地を

宛を接種し37。C 24時間培養した．この際葡萄糖ブイ

ヨン」のみは飯森式嫌氣性培養10＞（内山5mmHg）を

pH 5・0の普通ブイヨン」で3cc系統の倍々稀羅列を 作り，之に緑膿菌及び普通大腸菌の「ブイヨン培養疲

1白金耳宛を加え24時間培養後更にその1白金耳を寒

護生した集落激から培養液の腐敗菌に封ずる拮抗力の

P

2 4 8 16 32 64 128 2 4 8 16 32 64 128

一 一 一 十 辮 柵 柵 2％葡萄糖肝ブイヨン」

一 一 占 一 十 柵 冊

一 一 一 一 十 柵 冊

註 帯 集落面積が魚倉の施以上 集落面磧が塞天の％〜殆

集落叢生なし

液1滴宛を加へ，その37。C 24時聞培養液に就て前述 の方法を用ひて抗菌贋を測定した．

（第2表参照）

；・i・：lri

64 128 ［

珊 冊

粁 ・冊

暑 柵

十十 柵

大 腸 菌

2 4 8 16 32 64 128

一 一 一 十 柵 柑 柵

?一 一 一 十 柵 ・二

?一 一一 一 十 紐 搬

の「ペプトン」は照内ペプトン」を使用した。此等を 用ひて書方の如くpH：7・2相磯鍵法培地を作り，之に

その37。C 24時聞培養液に就て緑膿菌及難菌に封ずる

G】ucose， Maltose， Lactose， Saccharoseを用

株を接奪して37ごC24時間培養した・この培養液の遠

心上清に就て緑膿菌及難菌に射する抗菌債を測定する

と第3表の成績となった。部ち「カルノペプトソ」は

最も優秀で他の4種は同様な威績であったが著明な差

は認めなかった．（第3表参照）

敗 菌

膿

Glucose Maltose

Saccharose

i 一 一 一 一一．

一 一 一 一 一 ff

帯 柵 柑

一 一 十 柵 四 一 一 一 十 柵 柵 一 一 十 柵 冊 一 一 一 十 柵 柵

「ポリペプトン1

「カルノペプトソi一 一 一 一 一

極東ペプトン 一 一 一一 一一 一

十 柑 柵 柵 冊 構

一 一 一 一 一 回覧一 一 一 一 一 十 柵 一 一 一 一 一 十 柵 柵

起始PHが6・0，7．0，7．5，8．0，8．5の5種類相

た．之を培養9，ユ2，15，18，21，24，36，40，60ジ 72時間及5，7，10日に就て「ブイヨン」（ph 5・O）で 稀羅し前述方法で抗菌便を測定した，

24

5 日 7 日

8， 5

8

32 32

64 32 32 32

ユ6

8

16！8

32 32 32

， 32

32 32 32

ユ6

8

sls

8

32

8 8 16 32

32

64

32

64 32 32 32 16 8

森式嫌氣性培養法に依む培養内塵を2，30，ユ00，300

に就て二二二二大腸菌に封ずる抗菌債を測定した．

巨眼培酬終末pH隣菌「大腸菌1

30皿m

24 i 4．6 48 1 4．5

有芽胞嫌氣性菌の腐敗菌に対すろ抗菌性に就て（第2報）

pH 5・0の普通ブイヨン」で3cc系統の倍々稀羅列を作り，之に緑膿菌及び普通大腸菌の「ブイヨン培養疲

^P

一一一十辮柵柵 2％葡萄糖肝ブイヨン」

一一占一十柵冊

一一一一十柵冊

註帯集落面積が魚倉の施以上集落面磧が塞天の％〜殆

液1滴宛を加へ，その37。C 24時聞培養液に就て前述の方法を用ひて抗菌贋を測定した．

珊冊

粁・冊

暑柵

十十柵

大腸菌

一一一十柵柑柵

?一一一十柵・二

?一一一一十紐搬

の「ペプトン」は照内ペプトン」を使用した。此等を用ひて書方の如くpH：7・2相磯鍵法培地を作り，之に

敗菌

i 一一一一一．

一一一一一 ff

帯柵柑

一一十柵四一一一十柵柵一一十柵冊一一一十柵柵

「カルノペプトソi一一一一一

極東ペプトン一一一一一一一

十柑柵柵冊構

一一一一一回覧一一一一一十柵一一一一一十柵柵

た．之を培養9，ユ2，15，18，21，24，36，40，60ジ 72時間及5，7，10日に就て「ブイヨン」（ph 5・O）で稀羅し前述方法で抗菌便を測定した，

32｛音（4・6）

7．0，8．0，9．0の5種「ブイヨン」を作砂，之に

イオン

聾末溶液溶液

引目日

pH 5・O「ブイヨン」1cc入れ試凹凹列で100倍より倍々稀晒する，之に大腸菌，葡萄賦球菌，販菌，枯草菌，

馬鈴薯菌，緑膿菌，螢光菌，「チブス菌，「パラチブZ A菌，「パラチブス：B菌，「コレラ菌，酵母の「ブイヨン」培養，一筆朕徽の葡萄糖ブイヨン」10日培養1白金耳を夫々に接種し37。Cで24時間培養した，但し筆

細菌名

馬丁薯菌（青木）

魚形菌（敢室）

「パラ］B菌（80⑪6）

筆賦徹

肝臓ブイヨン」を使用して糠増した．この培養による潤濁，瓦斯護生により抽出物質の細菌一洗阻止能力を

鯖肉を栂指頭大に切り1⑪0。C 10分間「コッホ釜中で加熱後，抽出物質の1000倍水溶液（盤酸を以てpH 5．0

内に移す．之に大腸菌，漁協，枯草菌，馬鈴薯菌，攣形菌，緑膿菌，螢光菌の「ブイヨン」培養1白金耳を魚肉表面に接種し「シャーy」内の乾燥を防ぐため底

聞放置した．之を逐日的に取出して一方に魚肉上の憂化を肉眼的に観察し，：又1，3，5，7，10日放置後に魚肉の表面から1白金耳宛を寒天李板に塗抹培養し腐