尿 中NRK49-F細
胞 増 殖 促 進 活 性の 各 種 腎疾 患 の
病 態 に お け る役 割
岡 山 大 学 医 学 部 小 児 科 学 教 室(指 導:清 野 佳 紀 教 授)
江 口 純 治
(平成6年3月29日 受 稿)
Key words: TGF-β, NRK49-F, colorimetric bioassay
緒 言 腎 糸 球 体 に お け る メサ ン ギ ウ ム 基 質 や メサ ン ギ ウ ム 細 胞 の 増 加 は,慢 性 糸 球 体 疾 患 の 特 徴 的 組 織 像 で あ り,そ の 程 度 は 予 後 を 決 定 す る重 要 な 変 化 で あ る.近 年,種 々 の 腎 疾 患 に お け る 糸 球 体 障 害 の 発 症.進 展 に,い くつ か の サ イ トカ イ ン の 関 与 が 示 唆 され て お り,こ れ らの サ イ ト カ イ ン に 関 す る研 究 が 活 発 に 行 わ れ て い るが, 小 児 の 臨 床 的 検 討 の 報 告 は少 な い. 糸 球 体 障 害 に 関 与 し て い る と考 え られ て い る サ イ トカ イ ン と し て は, TGF-β(transforming growth factor-β)1) 2), PDGF(platelet-derived growth factor)3) 4), Interleukin-65)等 が あ る.
そ の 中 で もTGF-β は,分 子 量25kDの2量 体 の ポ リペ プ チ ドで,多 くの 細 胞 に 対 し て 増 殖 抑 制 因 子 と して は た ら くほ か,細 胞 外 基 質 の 蓄 積, 免 疫 能 の 抑 制,単 球 の 遊 走 促 進 な ど多 彩 な作 用 を有 す る 成 長 因 子 で あ る6).抗Thy-1抗 体 型 腎 炎 に お け る研 究1) 2)や,遺 伝 子 導 入 技 術 を 利 用 し た 研 究7)か ら, TGF-β は メ サ ン ギ ウ ム 基 質 の 増 加 等 を介 して,糸 球 体 障 害 に 関 与 して い る と考 え ら れ て い る. 一 方,こ の よ うな サ イ トカ イ ン の 研 究 に お い て,現 在,分 子 生 物 学 的 ア プ ロ ー チ が 広 く行 わ れ る よ うに な っ て き た が,腎 生 検 標 本 を用 い た PCR(polymerase chain reaction)法 やin situ hybridizationに よる研 究 結 果 は免 疫 組 織 化 学 的 研 究 か ら 予 想 され る域 を越 え な い.ま た こ の よ うな 研 究 結 果 が,そ の 糸 球 体 障 害 の 病 因 で あ る の か,二 次 的 な 変 化 で あ る の か を 判 断 す る に は, 経 過 を追 跡 し な け れ ば な ら な い が,腎 生 検 標 本 で そ れ を 行 う こ とは,臨 床 的 に,特 に 小 児 で は 困 難 で あ る. そ こ で,小 児 の 腎 疾 患 の 発 症,進 展 に お け る サ イ トカ イ ン の 関 与 を明 らか に す る 目的 で,尿 中 生 理 活 性 物 質 の 検 討 を, TGF-β に よ っ て 増 殖 が 促 進 さ れ る正 常 ラ ッ ト腎 線 維 芽 細 胞NRK49-F8)の 培 養 細 胞 系 を用 い たbioassay系 を 構 築 し 測 定 し た. 対 象 と 方 法 1.対 象 岡 山 大 学 小 児 科 で フ ォ ロー 中 の ネ フ ロ ー ゼ 症 候 群(寛 解 期)7例(ス テ ロ イ ド抵 抗 群4例, ステ ロ イ ド反 応 群3例),未 治 療 のIgA腎 症4例, 発 症 か ら6ヶ 月 以 上 経 過 した 紫 斑 病 性 腎 炎5例, 先 天 性 ネ フ ロー ゼ 症 候 群1例,無 症 候 性 血 尿3 例,お よび 腎 機 能 や 尿 所 見 に 異 常 の 認 め ら れ な い正 常 小 児4例 を対 象 と した(表1) .ネ フ ロー ゼ 症 候 群7例 の う ち,症 例1, 2, 4, 5の4例 (ス テ ロ イ ド抵 抗 群3例,ス テ ロ イ ド反 応 群1 例)が 再 発 し,再 発 時 に つ い て も検 討 し た. 2.検 体 の 採 取,保 存 患 者 の早 朝 第 一 尿 を, 1500rpm10分 で 遠 心 分 離 し,沈 渣 が 再 浮 遊 し な い よ うに 上 清 の み を採 取 して, -40℃ で 凍 結 保 存 し た.な お, NRK49-F 細 胞 増 殖 活 性 の 検 査 に 使 用 す る検 体 は,凍 結 前 に0.2μmの ブ イ ル タ ー(DynaGard, Microgon 社)を 通 し て 滅 菌 処 理 を行 い,無 菌 的 に 保 存 し た. 875
表1 対 象 3. Colorimetric bioassay 96wellの マ イ ク ロ プ レ ー ト(Costar社)に1 wellあ た り4×103個 のNRK49-F細 胞(JCRB 細 胞 バ ン クか ら入 手)を 播 種 し, 5%仔 ウ シ 血 清(FCS, Irvine社)加DMEM(Dulbecco's
modified Eagle's medium)で 培 養 し た. 24時
間 後,細 胞 をDMEMで 洗 浄 し,そ の 後 患 児 尿 検 体1%を 含 む 無 血 清DMEMに 培 地 を変 更 し て さ ら に48時 間 培 養 し た. NRK49-F細 胞 増 殖 活 性 が 認 め ら れ た 場 合,そ れ がTGF-β 活 性 に 基 く も の か 否 か を検 討 す る 目的 で,希 釈 尿 に 最 終 濃 度5μg/mlの 抗TGF-β 中 和 抗 体(R&D System社)を 添 加 し,同 様 に 培 養 し た.培 養 終 了 後, Absherら9)の 方 法 を 一 部 改 変 したColor imetric bioassayを 行 い,細 胞 増 殖 活 性 を 測 定 した.ま ず 培 養 液 を 除 去 し て リン 酸 緩 衝 生 食 水 で 細 胞 を 洗 浄 し,ホ ル マ リ ン で30分 間 固 定 し た. 10mMほ う酸 ほ う砂 緩 衝 液(pH 8.5)で 洗 浄 し, 1%メ チ レ ン ブ ル ー で10分 間 染 色 して,大 量 の 水 で 充 分 に 洗 浄 し た.水 を 充 分 除 去 して エ タ ノ ー ル と1NHClの 等 量 混 合 液 で 細 胞 内 の メ チ レ ン ブ ル ー を 抽 出 し, 600nmの 吸 光 度 を 測 定
(ELISA READER, BIO RAD社)し た.培
養 開 始24時 間 後 か らFCSを 含 有 し な いDMEM で 培 養 し たwellの 吸 光 度 を 基 準 値 と し て,各 検 体 のwellの 吸 光 度 の 比(proliferation index,
PI)で 増 殖 活 性 を評 価 し た.尚,各 検 体 と も6
個 のwellを 使 用 してwell毎 にPIを 算 出 し,
そ の 平 均 を そ の 検 体 のPIと し た. さ ら に, 1%FCS含 有DMEMで 同 様 に 培 養 し たwellの 吸 光 度 を陽 性 対 照 と し,こ のPIが 2以 上 の 増 殖 促 進 活 性 を 認 め る場 合 の み 検 討 対 象 と した. 統 計 学 的 処 理 はStudet t-testを 用 い, p<0.05 を 有 意 差 あ り と し た. 4. Western immunoblotting 上 述 の 凍 結 保 存 検 体10μlにINHCl 3μlを混 和 し,室 温 で10分 静 置 し た 後, INNaOH 3μlを 添
加 し て 中 和 さ せ た.
酸 処 理 後 の 検 体 をLaemmliの 方 法10)に 従 っ て, SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis)で 蛋 白
質 を 分 離 し た.即 ち,検 体16μlに 同 量 の サ ン プ ル 緩 衝 液(62.5mM Tris-HCl, 10% glycerol, 3% SDS, 5% 2-mercaptoethanol, 0.1 Bromophenol blue, BPB)を 加 え, 100℃ 1分 の 熱 処 理 を 行 っ た.こ の 溶 液 の う ち20μlを11% の 濃 度 の ア ク リ ル ア ミ ド ゲ ル に か け,ミ ニ ゲ ル 電 気 泳 動 装 置(Mini-PROTEIN II; BIO RAD 社)を 用 い て 通 電 し た. BPBが ゲ ル 下 端 ま で 泳 動 さ れ た と こ ろ で ゲ ル を 取 り 出 し,セ ミ ド ラ イ プ ロ ッ テ イ ン グ 装 置(LKB pharmacia社)を 用 い て ニ ト ロ セ ル ロ ー ス 膜(Hybond-C; Amer sham社)に 転 写 し た. 次 に 蛋 白 の 転 写 さ れ た ニ ト ロ セ ル ロ ー ス 膜 に, 一 次 抗 体 と し て 抗TGF-β 中 和 抗 体 を60分 間 , 二 次 抗 体 と し て ビ オ チ ン 化 抗 ニ ワ ト リIgG (VECTOR社)を30分 間 反 応 さ せ た. ABC試 薬(Vecta-stain ABC; VECTOR社)を 添 加
し た 後, ECL(enhanced chemiluminescence) Western blotting detection kit(Amersham
社)で, Kodak X-OMAT film上 に 抗 原 抗 体 反 応 を検 出 し た. 結 果 1.尿 中NRK49-F細 胞 増 殖 促 進 活 性 ま ず,今 回行 っ たbioassay系 の 妥 当 性 を検 討 す る た め に, NRK49-F細 胞 増 殖 促 進 活 性 が 中 等 度 で あ っ た 尿 検 体 に お け る 測 定 間 及 び 測 定 内 の 変 動 係 数(coefficient of variation, CV) を算 出 した.測 定 間CVは7.8%で,測 定 内CV は9.2%で あ っ た こ とか ら,本bioassayの 結 果 は 評 価 の 対 象 と な る と考 え られ た. 1)ネ フ ロー ゼ 症 候 群 図1に ネ フ ロー ゼ 症 候 群 のPIを 示 し た. 寛 解 期 の ネ フ ロー ゼ 症 候 群 で は, 1例 を 除 き 増 殖 促 進 活 性 を 認 め な か っ た(平 均PI=1,06). 増 殖 促 進 活 性 を 認 め た1例(PI=1.29)の 抗TGF -β 抗 体 添 加 時 のPIは1 .31で,抗 体 添 加 に よ る 活 性 低 下 は 認 め られ な か っ た. 再 発 の 認 め ら れ た4例(ス テ ロ イ ド抵 抗 群3 例,ス テ ロ イ ド反 応 群1例)で は,再 発 時 の 尿 全 て に 増 殖 促 進 活 性 を 認 め た(平 均PI=1.60). こ れ ら4例 を組 織 学 的 に 分 類 す る と巣 状 糸 球 図1 ネ フ ロ ー ゼ 症 候 群 のProliferation Index 寛 解 期 の ネ フ ロ ー ゼ 症 候 群7例,再 発 時 の ネ フ ロ ー ゼ 症 候 群4例,先 天 性 ネ フ ロ ー ゼ 症 候 群(CNS) 1 例,正 常 群4例 に つ い て,各 群 の 尿 中NRK49-F細 胞 増 殖 促 進 活 性 を検 討 し た,
体 硬 化 症(focal glomerular sclerosis, FGS) 2例(症 例2, 4)と 微 小 変 化 群(minimal change, MC)2例(症 例1, 5)で あ っ た.こ の2群 で 抗TGF-β 抗 体 添 加 に よ る増 殖 促 進 活 性 の 変 化 を 比 較 し た(図2,図3).そ の 結 果, FGS群 で は そ の 活 性 が 低 下 し た の に 対 し, MC 群 で は 抗 体 添 加 に よ る低 下 は 認 め られ なか っ た. 先 天 性 ネ フ ロ ー ゼ 症 候 群 は1例 の み で あ っ た が, PI=1.05と ほ とん ど 増 殖 促 進 活 性 は 認 め ちれ な か っ た. 2) IgA腎 症 及 び 紫 斑 病 性 腎 炎 IgA腎 症 で は4例 と もPIは1以 下 で 増 殖 促 進 活 性 を認 め な か っ た の に 対 し,紫 斑 病 性 腎 炎 全 例 に 増 殖 促 進 活 性(PI=1.04∼1.44)を 認 め た. こ の 活 性 は 抗TGF-β 抗 体 添 加 に よ っ て,有 意 に 低 下(平 均PI=1.01)し た(図4). 3)無 症 候 性 血 尿 お よ び 正 常 群 腎 機 能 に 異 常 の 無 い こ れ ら の 群 のPIは 0.74∼1.05と 増 殖 促 進 活 性 は 認 め られ な か った. 2. Western immunoblottingに よ る検 討 尿 中NRK49-F細 胞 増 殖 促 進 活 性 を認 め た症 例 で,抗TGF-β 中 和 抗 体 添 加 に よ っ て 増 殖 活 性 の 低 下 を 認 め た もの は,図5に 示 す よ うに, Western immnoblot法 で, TGF-β に よ る と考 え ら れ る25kDの バ ン ドが 検 出 され た.さ ら に, 検 体 に よ っ て は 活 性 型TGF-β の 単 量 体 で あ る 12.5kDの バ ン ド も検 出 で き た. 寛 解 期 の ネ フ ロ-ゼ 症 候 群 でNRK49-F細 胞 増 殖 活 性 を 認 め,抗TGF-β 中 和 抗 体 添 加 に よ っ て 増 殖 活 性 の 低 下 を 認 め な か っ た 症 例(症 例 5)で は, TGF-β と思 わ れ るバ ン ドは 検 出 さ れ な か っ た(図5レ ー ン3). 一 方, NRK49-F細 胞 の 増 殖 促 進 活 性 を 認 め なか っ た が, Western immunoblotでTGF-β の バ ン ドが 検 出 され た 例 が 寛 解 期 の ネ フ ロ-ゼ 症 候 群 に1例(症 例1,図5レ ー ン5)存 在 し た. 考 察 種 々 の 腎 疾 患 に お け る 糸 球 体 障 害 の 発 症 ・進 展 に, TGF-β1) 2), PDGF3) 4), Interleukin-65)等 の サ イ トカ イ ン が 関 与 して い る と考 え られ て い る. TGF-β に 関 して は,抗Thy-1抗 体 型 腎 炎 で,メ サ ン ギ ウ ム 基 質 の 蓄 積 と並 行 し て,糸 球 体 で のTGF-β の 発 現 が 増 加 し2),こ の 基 質 の 増 加 は,抗TGF-β 中 和 抗 体 を投 与 す る こ とに よ っ て,著 明 に 抑 制 さ れ た と報 告 さ れ て い る1), こ の よ う にTGF-β が 糸 球 体 硬 化 に 大 き な 影 響 を 与 え て い る こ とが,実 験 動 物 で は 証 明 され て い る が,人 体 でin situ hybridizationやPCR 法 等 の 分 子 生 物 学 的 研 究 を 行 うに は,限 界 が あ る.こ れ ら に 対 す る ア プ ロ ー チ と し て,今 回, NRK49-F細 胞 を用 い たbioassayに よ り,尿 中 に排 出 され る生 理 活 性 物 質 に つ い て 検 討 した. NRK49-F細 胞 増 殖 促 進 活 性 は 紫 斑 病 性 腎 炎 5例,ネ フ ロ ー ゼ 症 候 群 再 発 時4例,お よ び 寛 解 期 の ネ フ ロ ー ゼ 症 候 群1例 に お い て 認 め られ た.こ れ ら10検 体 の う ち, 7例 が 抗TGF-β 抗 体 に よ っ て そ の 活 性 が 中 和 され た こ と,お よび Western immunoblotで25kDの バ ン ドが 認 め ら れ た こ とか ら,尿 中 のNRK49-F細 胞 増 殖 促 進 活 性 物 質 と し てTGF-β が 考 え られ た. 一 方,増 殖 促 進 活 性 を認 め な か っ た に も か か わ ら ず, Western immunoblotで25kDの バ ン ド を認 め た 例 が1例 存 在 した.こ れ は,尿 中 にTGF -β が 存 在 した に も 関 わ らずNRK49-F細 胞 の 増 殖 刺 激 とな り得 な か っ た と考 え られ る.こ の 原 因 と して は, 1)NRK49-F細 胞 の 増 殖 に は TGF-β だ け で は な く, TGF-α(transforming growth factor-α)や 血 清 成 分 の 共 存 が 必 要 で あ る とす る 報 告5)も あ る こ とか ら,こ の検 体 に はTGF -β 以 外 の こ れ らの 因 子 が 欠 乏 して い た,あ る い は2)細 胞 増 殖 を 抑 制 す る 因 子 が 含 まれ てい た,と 推 察 さ れ る. ネ フ ロー ゼ 症 候 群 の 再 発 時 に お け る 増 殖 促 進 活 性 は,図2に 示 す よ う に,抗TGF-β 抗 体 添 加 に よ っ て, FGS群 は 活 性 が 低 下 した の に 対 し, MC群 は 活 性 が 中 和 さ れ な か っ た.し た が っ て, MC群 で も再 発 時 尿 にNRK49-F細 胞 増 殖 促 進 作 用 を有 す る 生 理 活 性 物 質 が 排 出 さ れ て い るが, そ の 生 理 活 性 物 質 と し てTGF-β の 関 与 は 少 な く,そ の ほ か の 因 子 が 増 殖 促 進 活 性 を示 し た と 考 え ら れ る.こ の よ うに,組 織 像 に よ っ て,抗 TGF-β 抗 体 添 加 に よ る活 性 の 変 化 に 違 いが 認 め ら れ た こ とか ら,こ れ ら2つ の 群 の ネ フ ロー ゼ 症 候 群 再 発 に 関 わ る成 長 因 子 に 相 違 が あ る こ と
図2 抗TGF-β 抗 体 添 加 に よ る増 殖促 進 活 性 の 変化-FGS群 ネ フ ロー ゼ症 候群 で再 発 を認 め たFGSの2例 各 々 に つ い て,抗TGF-β 抗体 添 加 に よ るNRK49-F細 胞 増 殖 促進 活 性 の 抑 制効 果 を検討 した. 図3 抗TGF-β 抗 体 添 加 に よる増 殖 促 進 活性 の変 化-MC群 ネ フ ロー ゼ症 候 群 で 再 発 を認め たMCの2例 各 々 につ いて,抗TGF-β 抗体 添加 に よ るNRK49-F細 胞 増 殖 促 進 活性 の 抑 制効 果 を検 討 した.
図4 抗TGF-β 抗体 添加 に よ る増殖 促 進 活 性 の 変化-IgA腎 症,紫 斑 病 性 腎 炎,無 症 候 性 血 尿
IgA腎 症(IgA)4例,紫 斑 病 性 腎炎(HSP)5例,無 症 候 性 血 尿(AH)3例 につ いて,抗TGF-β 抗
体 添 加 に よるNRK49-F細 胞 増 殖促 進 活性 の 抑 制効 果 を検 討 した. 図5 Western immunoblot法 に よるTGF-β の 検 出 レー ン1紫 斑 病 性 腎 炎(症 例11),レ ー ン2 正 常 児(症 例21),レ ー ン3ネ フ ロー ゼ 症候 群(寛 解 期)(症 例5),レ ー ン4ネ フ ロ-ゼ 症 候 群(再 発 時)(症 例4),レ ー ン5ネ フ ロ ー ゼ症 候 群(寛 解 期)(症 例1) ,レ ー ン6 IgA 腎症(症 例14),レ ー ン7紫 斑 病 性 腎 炎(症 例12). が 考 え ら れ る.さ ら に 著 者 ら が 行 っ たFGS群 に お け る免 疫 組 織 化 学 染 色 で は,糸 球 体 病 変 に TGF-β が 高 率 に検 出 さ れ る11)ことを合 わせ る と, TGF-β が硬 化 病 変 の 進 展 に 関 与 して い る可 能 性 も考 え ら れ る.一 方,こ れ らネ フ ロ ー ゼ 症 候 群 再 発 時 の よ うに 多 量 の 尿 蛋 白が 認 め ら れ て い る と きの こ れ ら の 尿 中 生 理 活 性 物 質 の 起 源 と し て 1)糸 球 体 性 蛋 白 尿 と し て の 尿 中 へ の 漏 出, 2) 尿 細 管 性 蛋 白 尿 と し て の 尿 中へ の 喪 失, 3)糸 球 体 病 変 で 局 所 的 に 産 生 さ れ た も の が 尿 中 へ 漏 出,等 が 考 え ら れ る.し か し,今 回 同 時 に 検 討 を行 っ た 先 天 性 ネ フ ロ-ゼ 症 候 群 で は 増 殖 促 進 活 性 は 認 め られ なか っ た.し た が っ て,糸 球 体 性 蛋 白 尿 や 尿 細 管 性 蛋 白 尿 に よ る もの で は な く, 糸 球 体 で 局 所 的 に 産 生 さ れ た もの が 尿 中 に 排 出 さ れ て い る 可 能 性 が あ る. IgA腎 症 と紫 斑 病 性 腎 炎 との 比 較 で も,図4に 示 す よ う に,増 殖 促 進 活 性 に 相 違 が 認 め られ た. 即 ち, IgA腎 症 で は 活 性 を 認 め なか っ たの に 対 し, 紫 斑 病 性 腎 炎 で は 活 性 を 認 め,抗TGF-β 抗 体 に よ っ て そ の 活 性 が 中和 さ れ た.こ の2つ の 疾 患 は,病 理 組 織 学 的 に は 非 常 に 類 似 して い るに もか か わ らず,尿 中 生 理 活 性 物 質 に 相 違 が 認 め ら れ た,し た が っ て,紫 斑 病 性 腎 炎 に お け る糸 球 体 障 害 で は, IgA腎 症 と 比 較 し て, TGF-β の 関 与 が 大 き い と考 え られ た.ウ サ ギ に 腎 炎 を 惹 起 させ て 尿 中 のTGF-β の 経 過 を み た 実 験 で は, 腎 炎 の 早 期 か ら 尿 中TGF-β の 活 性 が 上 昇 し た り12),発病 の 早 期 に 重 要 な役 割 を して い る と考 え られ る報 告13)が あ る. TGF-β は本 来 組 織 修 復 に 働 く こ とか ら,実 験 腎 炎 の よ う に 急 性 の 変 化 の あ っ た と きに 発 現 さ れ る とす る と, IgA腎 症 の よ
う な 慢 性 の 変 化 よ り も紫 斑 病 性 腎 炎 の よ う に, 急 性 な い し は 亜 急 性 の 変 化 で 発 現 さ れ る 可 能 性 が あ る と考 え ら れ た. 結 論 1. NRK49-F細 胞 を用 い た 尿 中 生 理 活 性 物 質 の 簡 便 な 測 定 系 を 開 発 した. 2.ネ フ ロー ゼ 症 候 群 の 再 発 時 に お け る尿 中生 理 活 性 物 質 の 相 違 か ら, FGS群 の 再 発 で は, MC 群 に 比 しTGF-β の 関 与 が 強 い と考 え ら れ た. 3. IgA腎 症 と紫 斑 病 性 腎 炎 は,そ の 発 症,進 展 に 関 与 す る サ イ トカ イ ン に 相 違 が あ り,紫 斑 病 性 腎 炎 で はIgA腎 症 に 比 し, TGF-β の 関 与 が 強 い と考 え ら れ た. 稿 を終 え るに あ た り,御 指 導,御 校 閲 を賜 りま し た 岡 山大 学 医 学部 小 児 科 学 教室 清 野佳 紀 教 授 に謹 ん で感 謝 の 意 を表 す る と と もに,終 始 直接 に御 指 導, 御 教 示 いただ きま した田 中 弘之 先 生 に深 謝 致 します.
文
献
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12) Noh JW, Wiggins R and Phan SH: Urine transforming growth factor-ƒÀ activity is related to the degree of scarring in crescentic nephritis in the rabbit. Nephron (1993) 63, 73-78.
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NRK49-F cell proliferation activity of urine in renal diseases Junji EGUCHI
Department of Pediatrics,
Okayama University Medical School, Okayama 700, Japan
(Director: Prof. Y. Seino)
To evaluate the roles of transforming growth factor-ƒÀ (TGF-ƒÀ) on the glomerular cell proliferation and sclerosis, a new colorimetric bioassay system for urinary excretion of TGF-ƒÀ has been developed by using NRK49-F cell culture. The urinary TGF-ƒÀ activity was detected
by this method in focal glomerular sclerosis (FGS) and purpura nephritis but not in minimal change nephrotic syndrome and IgA nephropathy. The bioassayed TGF-ƒÀ activity was
confirmed by a blocking experiment using a neutralizing antibody and by Western immuno blotting. These findings suggest that TGF-ƒÀ plays an important role in the progression of the glomerular lesions, in FGS and purpura nephritis.
