生物試験分野

生物試験分野 Division

o f  

教授 渡辺 裕司 Professor

H i r o s h i  Watanabe ( P h . D . )  

P r o f e s s o r   K i n z o  Matsumoto ( P h . D . )  

P r o f e s s o r   M i c h i h i s a  Tohda ( P h . D . )  

A s s o c i a t e   Y u k i h i s a  Murakami ( P h . D . )  

^{R e s e a r c h  A s s i s t a n t   Qi Zhao} 

技術補佐員 中村 政美 Research

A s s i s t a n t   Masami Nakamura 

Aims of t h e  r e s e a r c h  p r o j e c t s  

本研究室では，和漢薬の新しい薬効一制面法を確立するための基礎研究，和漢薬の中枢作用を定量的に評価し，

その作用本体を追求する研究及びその作用機序を分子レベルで明らかにすることを目的とした研究を行ってい

る。

く〉研究概要

Research p r o j e c t s  

I. 和漢薬の新しい薬効評価法を確立するための基礎的研究

1）脳血管性痴呆病態モデル動物の確立とそれによる和漢薬および抗痴呆薬の薬効評価 2）情動ストレス反応の不安・うつ病態モデルとしての応用と和漢薬作用

3）新規リード化合物の開発を φ ざした各種民族薬の薬理作用の探索と作用機構の解析

II. 中枢作用薬の神経薬理学的研究

1）心理的ストレス反応に関わる神経機構，受容体機能修飾因子，分子機序の解析 2）神経伝達物質の脳内動態および代謝回転の解析と薬物作用

Ill. 遺伝子発現を指標とした薬物作用の解明と和漢薬作用に関する研究

1）慢性脳虚血により発現する脳内遺伝子のクローニングとその機能解析 2）うつ病態関連脳内遺伝子の発現変化と抗うつ薬・和漢薬の作用解析

く〉著書 Books

1 ）渡辺裕司，松田治己：行動における諸指標 1.4 旋回行動， 1.5 特異的薬物による誘発行動 (1 ）ア ポモルヒネ，生物薬科学実験講座11，佐藤公道，野村靖幸編，神経（脳）

2 ,   pp 

東京， 2003:

2 ）東国道久，渡辺裕司：パーキンソン病・バーキンソン症候群，百瀬弥寿徳編，ファーマシューテイ

カルノート， pp. 27-32，医学評論社，東京， 2003.

く〉原著

O r i g i n a l  p a p e r s  

1  )  Tohda, M. and Watanabe H . :  Determination method of s e n s e  sequence b a s e d ｷ  on RT/PCR. 

J o u r n a l  of B i o c h e m i c a l   &  B i o p h y s i c a l  Methods 

2 0 0 3 .  

A b s t r a c t :  When n o v e l  s e q u e n c e s  a r e  i s o l a t e d  by d i f f e r e n t i a l  d i s p l a y  a n d  o t h e r  m e t h o d s ,  i t   s e e m s  u s e f u l  t o  d e t e r m i n e   which i s   a  s e n s e  s e q u e n c e  a t  a n  e a r l y  s t a g e  b e f o r e  f u r t h e r  e x p e r i m e n t s .  A n o v e l  s e q u e n c e ,  named 

w h i c h   shows e n h a n c e d  e x p r e s s i o n  i n  t h e  p e r m a n e n t  i s c h e m i c  r a t  b r a i n ,  was i s o l a t e d  by d i f f e r e n t i a l  d i s p l a y .  B a s e d  on t h i s   s e q u e n c e ,  a  p r i m e r  s e t  f o r  b o t h  d i r e c t i o n  was d e s i g n e d .  Each p r i m e r  was u s e d  t o  make a  cDNA a n d  PCRs p e r f o r m e d   w i t h  e a c h  cDNA a n d  b o t h  p r i m e r s .  One p r i m e r  u s e d  i n  t h e  RTstep p r o d u c e d  a  PCR  p r o d u c t  a t  t h e  e x p e c t e d  p o s i t i o n ,   b u t  a n o t h e r  p r i m e r  i n  t h e  r e v e r s e  d i r e c t i o n  c o u l d  n o t .  T h i s  r e s u l t  i n d i c a t e d  t h a t  t h e  ̲ p r i m e r  t h a t  made t h e  e x p e c t e d   PCR p r o d u c t  i s   a n t i s e n s e .  

2) Puia G . ,  M i e n v i l l e  J . ‑ M . ,  Matsumoto K . ,  Takahata H . ,  Watanabe H . ,  Costa  E .   and 

A . :   On t h e  p u t a t i v e  p h y s i o l o g i c a l  r o l e  of allopregnanolone on GABAA r e c e p t o r  f u n c t i o n .   N e u r o p h a r m a c o l o g y .   4 4 :  

2 0 0 3 .  

A b s t r a c t :   To o b t a i n  d e f i n i t i v e  e v i d e n c e  f o r  a  p h y s i o l o g i c a l  a l l o s t e r i c  m o d u l a t o r y  r o l e  f o r  e n d o g e n o u s  b r a i n  ALLO  on GABAA r e c e p t o r  f u n c t i o n ,  we s t u d i e d  GABAA r e c e p t o r  a c t i v i t y  u r i d e r  c o n d i t i o n s  i n  w h i c h  t h e  c o n c e n t r a t i o n  o f   e n d o g e n o u s  b r a i n  ALLO was d e c r e a s e d  by a b o u t  80% f o r  l o n g e r  t h a n  5  h  f o l l o w i n g  t h e  a d m i n i s t r a t i o n  o f  SKF 

105111 ・ 17J3-17-[bis

( l m e t h y l e t h y l )  a m i n o  

a c i d  ( S K F ) ,  a  p o t e n t  i n h i b i ｭ t o r  o f  

Type I  a n d  I I .   We  u s e d  t h e  i n  

t e c h n i q u e  t o  r e c o r d  GABA‑evoked 

a n d   s p o n t a n e o u s  i n h i b i t o r y  p o s t s y n a p t i c  c u r r e n t s  (  s I P S C s )  f r o m  p y r a m i d a l  n e u r o n s  i n  n e o c o r t i c a l  s l i c e s  o f  v e h i c l e ‑o r   S K F ‑ t r e a t e d  m i c e .  The p o t e n c y ,  b u t  n o t  t h e  e f f i c a c y ,  o f  e x o g e n o u s l y  a p p l i e d  GABA was d e c r e a s e d  i n  s l i c e s  

m i c e  t r e a t e d  w i t h  SKF. When n e o c o r t i c a l  s l i c e s  w e r e  t r e a t e d  i n  v i t r o  f o r  3  h  w i t h  1 0  ｵM  SKF, ALLO was a l s o  r e ｭ d u c e d  ( 2 5 ‑ 3 0 % )  a n d  i n  a d d i t i o n ,  t h e  GABA d o s e ‑ r e s p o n s e  c u r v e  was s h i f t e d  t o  t h e  r i g h t ;  however t h i s  s h i f t  was n o t   a s  marked a s  t h e  s h i f t  i n  t h e  s l i c e s  o b t a i n e d  f r o m  m i c e  t r e a t e d  w i t h  SKF, i n  k e e p i n g  w i t h  t h e  s m a l l e r  d e c r e a s e  o f  t h e   ALLO c o n t e n t  i n  t h e s e  s l i c e s .   F u r t h e r m o r e ,  d i r e c t  a p p l i c a t i o n  o f  ALLO t o  t h e s e  s l i c e s  s h i f t e d  t h e  

c u r v e  o f  GABA  b a c k  t o w a r d  a  non‑SKF t r e a t e d  p r o f i l e .  We  t h e n  a n a l y z e d  GABAergic s I P S C s  i n  n e o c o r t i c a l  s l i c e s  

obtained 仕om

v e h i c l e  o r  S K F ‑ t r e a t e d  m i c e .  Mean d e c a y  t i m e  a n d  c h a r g e  t r a n s f e r  w e r e  s i g n i f i c a n t l y  r e d u c e d  by SKF  t r e a t m e n t .  The d e c a y  o f  s I P S C s  was b e s t  f i t t e d  by two e x p o n e n t i a l s ,  b u t  o n l y  t h e  f a s t  c o m p o n e n t  was d e c r e a s e d  i n   t h e  SKF g r o u p .  D i r e c t  

o f  ALLO (lOOnM) n o r m a l i z e s  t h e  s I P S C  k i n e t i c s  i n  s l i c e s  f r o m  ALLO d e p l e t e d   m i c e .  No c h a n g e s  w e r e  d e t e c t e d  i n  t h e  a m p l i t u d e  o r  f r e q u e n c y  o f  s I P S C s .  T h e s e  d a t a  d e m o n s t r a t e  t h a t  e n d o g e n o u s   ALLO p h y s i o l o g i c a l l y  r e g u l a t e s  s p o n t a n e o u s l y  i n d u c e d   e r   ^{c u r r e n t  by a c t i n g  on a  ｷ s p e c i f i c  r e c o g n i t i o n  s i t e ,  w h i c h}  

i s  p r o b a b l y  l o c a t e d  on GABAA r e c e p t o r s  ( a  r e c e p t o r  on a  r e c e p t o r ) ,  t h e r e b y  p r o l o n g i n g  i n h i b i t o r y  

by f a c i l i ｭ t a t i n g  c o n f o r m a t i o n a l  t r a n s i t i o n  o f  t h e  GABA‑gated  e r   ^{c h a n n e l  . t o   a n  o p e n  s t a t e .}  

3)  Pinna G . ,  Dong  E . ,   Matsumoto K . ,  Costa  E .   and G u i d o t t i  A . :  In s o c i a l l y  i s o l a t e d  m i c e ,  t h e  r e ｭ v e r s a l   of brain  allopregnanolone 

mediates  t h e   a n t i ‑ a g g r e s s i v e   a c t i o n   of  fluoxetine ‘ Proceedings of t h e  N a t i o n a l  Academy of S c i e n c e s  of t h e  U n i t e d  S t a t e s  of  America 

100:2035・2040,

2 0 0 3 .  

A b s t r a c t :   S o c i a l  i s o l a t i o n  ( S I )  o f  m a l e  mice l a s t i n g  >4 weeks i s   a s s o c i a t e d  w i t h  a g g r e s s i o n  t o w a r d  i n t r u d e r s  a n d   a  d o w n ‑ r e g u l a t i o n  of b r a i n  a l l o p r e g n a n o l o n e  ( A l l o )  c o n t e n t .  S I  o f  f e m a l e  mice f a i l s  t o  d o w n ‑ r e g u l a t e  b r a i n ‑A l l o  c o n ｭ t e n t ｷ o r  t o  i n d u c e  a g g r e s s i v e n e s s .  F l u o x e t i n e  ( P r o z a c  i n  c l i n i c a l  u s e )  i s   a n  S ‑and R ‑ f l u o x e t i n e  (FLX) m i x t u r e ,  which  i n  mammals i s   m e t a b o l i z e d  i n t o  , g ̲  a n d  R ‑ n o r f l u o x e t i n e  (NFLX). The S  i s o m e r s  o f  FLX and NFLX a r e  more a c t i v e   t h a n  t h e i r  r e s p e c t i v e  R i s o m e r s  i n  n o r m a l i z i n g  b r a i n  A l l o  d o w n ‑ r e g u l a t i o n  and i n  r e d u c i n g  t h e  a g g r e s s i v e n e s s  i n ｭ d u c e d  by S I .  T h u s ,  FLX s t e r e o s p e c i f i c a l l y  r e d u c e s  b r a i n  A l l o  d o w n ‑ r e g u l a t i o n  and t h e  a g g r e s s i v e n e s s  i n d u c e d  by S I ,   w h e r e a s  s e r o t o n i n  (5‑HT) u p t a k e  i n h i b i t i o n  l a c k s  s t e r e o s p e c i f i c i t y .  The d o s e s  of S‑FLX and S‑NFLX t h a t  r e d u c e  a g ｭ g r e s s i v e n e s s  and A l l o  b r a i n  c o n t e n t  d o w n ‑ r e g u l a t i o n  i n d u c e d  by S I  a r e  a t  l e a s t  o n e  o r d e r  o f  m a g n i t u d e  l o w e r  t h a n   t h e  d o s e s  t h a t  b l o c k  5‑HT r e u p t a k e .  Doses o f  i m i p r a m i n e  t h a t  i n h i b i t  

u p t a k e  n e i t h e r  r e d u c e  a g g r e s s i v e n e s s  n o r   n o r m a l i z e  b r a i n  A l l o  d o w n ‑ r e g u l a t i o n .  We  c o n c l u d e  t h a t  A l l o  b r a i n  c o n t e n t  n o r m a l i z a t i o n  i s   a  b e t t e r  c a n d i d a t e  t h a n   5‑HT r e u p t a k e  i n h i b i t i o n  t o  e x p l a i n  t h e  r e d u c t i o n  of a g g r e s s i v e n e s s  e l i c i t e d  by S‑FLX and S‑NFLX. 

4)  Vajtagupta  0 . ,   Boonchoong  P . ,   Sumanont  Y . ,   Watanabe  H . ,  

Y.  and  Kammasud N . :  Manganese‑Based complexes of r a d i c a l  scavengers a s  meuuoprotective a g e n t s .   B i o o r g a n i c   &  M e d i c i n a l  C h e m i s t r y   1 1 : 2 3 2 9 ‑ " 2 3 3 7 ,  2003. 

A b s t r a c t :   Manganese .   was i . n c o r p o r a t e d  i n   t h e   s t r u c t u r e  o f  t h e   s e l e c t e d  a n t i o x i d a n t s  t o   mimic t h e   s u p e r o x i d e   d i s m u t a s e  (SOD) and t o  i n c r e a s e  r a d i c a l  s c a v e n g i n g  a b i l i t y .  F i v e  manganese c o m p l e x e s  

showed p o t e n t  SOD  a c t i v i t y  i n  v i t r o  w i t h  I C s o  o f  1 . 1 8 ‑ 1 . 8 4  ｵMand a c t i o n  a g a i ̲ n s t  l i p i d  p e r o x i d a t i o n  i n  v i t r o  w i t h  I C s o  o f  1 . 9 7 ‑ 8 . 0 0  ｵM  g r e a t e r  t h a n  t h e i r  l i g a n d s  and t r o l o x .  The manganese c o m p l e x e s  were i n i t i a l l y  t e s t e d  i n  v i v o  a t  5 0  mg/kg f o r  a n t a g o ｭ n i s t i c  a e t i v i t y  on n i e t h a m p h e t a m i n e  

h y p e r m o t i l i t y  

dopamine r e l e a s e  i n  t h e  m i c e  b r a i n .   Only manganese c o m p l e x e s  o f  k o j i c  a c i d  ( 1 )  and 

( 3 )   e x h i b i t e d  t h e  s i g n i f i c a n t  s u p p r e s s i o n s  on  MAP‑induced h y p e r m o t i l i t y   and  d i d   n o t   s i g n i f i c a n t l y   d e c r e a s e   t h e   l o c o m o t o r   a c t i v i t y   i n   n o r m a l   c o n d i t i o n .   Manganese complex 3  a l s o  showed p r o t e c t i v e  e f f e c t s  a g a i n s t  l e a r n i n g  and memory i m p a i r m e n t  

c e r e b r a l   i s c h e m i c  m i c e .  T h e s e  ｷ r e s u l t s  s u p p o r t e d  t h e  b r a i n  d e l i v e r y  and t h e  r o l e  o f  manganese i n  SOD a c t i v i t y  a s  w e l l  a s  i n   t h e  m o d u l a t i o n  o f  b r a i n  n e u r o t r a n s m i t t e r s  i n  t h e  a b e r r a n t  c o n d i t i o n .  Manganese complex 

7

hydroxyflavone was t h e  p r o m i s i n g  c a n d i d a t e  f o r  r a d i c a l  i m p l i c a t e d  n e u r o d e g e n e r a t i v e  d i s e a s e s .  

5)  Mahakunakorn  P . ,   Tohda M., Murakami Y . ,  Matsumoto  K . ,   Watanabe  H.  ' a n d  Vajaragupta  0 . :   Cytoprotective and c y t o t o x i c  e f f e c t s  of curcumin: Dual a c t i o n  on 

o x i d a t i v e   c e l l  damage i n  N G   108‑15 c e l l s .   B i o l o g i c a l   & P h a r m a c e u t i c a l  B u l l e t i n  

2003. 

A b s t r a c t :   The a b i l i t y  of c u r c u m i n ,  a  n a t u r a l  a n t i o x i d a n t  

C u r c u m a  l o n g a ,   t o  i n h i b i t  h y d r o g e n  p e r o x i d e  

(H202）ーinduced

c e l l  damage i n  NG 

c e l l s  was e x a m i n e d .  When a d d e d  .  s i m u l t a n e o u s l y  w i t h  500 ｵM  H 2 0 2 ,   c u r c u m i n  

ｵM) e f f e c t i v e l y  p r o t e c t e d  

o x i d a t i v e  d a m a g e .  H o w e v e r ,  when t h e  c e l l s  were p r e t r e a t e d   w i t h  c u r c u m i n  ( 2 5 ‑ 1 0 0  ｵM) f o r  1 . 5  h  b e f o r e  H202 e x p o s u r e ,  c u r c u m i n  was u n a b l e  t o  i n h i b i t  

c e l l  damｭ a g e .  I n s t e a d ,  i t   c a u s e d  a  s i g n i f i c a n t  c o n c e n t r a t i o n ‑ d e p e n d e n t  d e c r e a s e  i n  c e l l  v i a b i l i t y  a f t e r  H202 e x p o s u r e .  T h i s  d u a l   a c t i o n  o f  c u r c u m i n  s u g g e s t s  t h a t  p r e t r e a t m e n t  w i t h  c u r c u m i n  by i t s e l f  d i d  n o t  h a v e  any s i g n i f i c a n t  e f f e c t  on t h e  v i ｭ a b i l i t y  o f  t h e  NG 

c e l l s ,  b u t  i t   s e n s i t i z e d  them t o  o x i d a t i v e  damage i n d u c e d  by H202 u n d e r  o u r  e x p e r i m e n t a l   c o n d i t i o n s .   I t   a p p e a r s  t h a t  t h e s e  e v e n t s  may n o t  r e l a t e  t o  t h e  a n t i o x i d a n t  

s c a v e n g i n g  a c t i v i t i e s  o f   curcumm. 

6) Jeenapongsa  R . ,   Tohda M. and Watanabe  H . :   E f f e c t s  of 

and <Chotoko on thiopen‑

tal・induced

s t e e p i n g  t i m e .   J o u r n a l  of T r a d i t i o n a l  M e d i c i n e s  

Z003. 

A b s t r a c t :   Choto

san h a s  b e e n  u s e d  f o r  t r e a t m e n t  o f  c e n t r a l l y  r e g u l a t e d  d i s o r d e r s  s u c h  a s  d e m e n t i a ,  h y p e r t e n s i o n ,   h e a d a c h e  and v e r t i g o .  Our l a b o r a t o r y  showed t h a t  

i m p r o v e d  l e a r n i n g  memory i n  i s c h e m i c  m i c e .   I t   i s  

t i c e a b l e .  t h a t  C h o t o ‑ s a n  t r e a t e d  a n i m a l s  and u n d e r w e n t  c o n d u c t i n g  o c c l u s i o n  o f  common c a r o t i d  a r t e r i e s   (2VO) 

o p e r a t i o n  s l e p t ｷ  l o n g e r  t h a n  t h e  n o r m a l  a n i m a l s .  T h e r e f o r e ,  t h i s  s t u d y  a i m e d  t o  

e f f e c t s  o f  

a n d   i t s   r e l a t e d  

C h o t o k o  a n d  C h o t o ‑ s a n  w i t h o u t  C h o t o k o  on t h i o p e n t a l ‑ i n d u c e d  s l e e p i n g  t i m e .  The r e s u l t s   show t h a t  

( 0 . 3 ,   1  a n d  3  g / k g ,  

d o s e  d e p e n d e n t l y  p r o l o n g e d  t h e  s l e e p i n g  t i m e  i n d u c e d  by t h i o p e n t a l   ( 5 0  m g / k g ,  

( 7 1 . 4  m g / k g ,  

a n d  d i a z e p a m  ( 1   m g / k g ,  i . p . )   a l s o  i n c r e a s e d  t h e  s l e e p i n g  

w h i l e  

Choto・san

w i t h o u t  C h o t o k o  (  1  g / k g ,  

h a d  no e f f e c t .  T h i s  i n d i c a t e s  t h a t  t h e  e f f e c t s  o f  

a n d  C h o t o k o ,   main a c t i v e  c o n s t i t u e n t   of  C h o t o ‑ s a n ,  may b e  m e d i a t e d  i n  p a r t  v i a  t h e i r  s u p p r e s s i v e  e f f e c t  on t h e  c e n t r a l  n e r v o u s  s y s ｭ tem o f  which t h e  p r e d s e  m e c h a n i s m s  r e m a i n  u n k n o w n .  

7)  Sukma M.; TohJa M . , .  Watanabe H . :  Chronic Treatment With Imipramine I n h i b i t s  C e l l   Growth and Enhances Serotonin 2C Receptor mRNA  Expression m N G   108‑15 C e l l s .  Journal  of  P I J , a r m a c o l o g i c a l  S c i e n c e s  92:433‑436, 2003. 

A b s t r a c t :   W e .  p r e v i o u s l y  r e p o r t e d  t h a t  NG  1 0 . 8 : ‑ 1 5  c e l l s  c o n t a i n  i n t r i n s i c  s e r o t o n i n  2C r e c e p t o r  ( 

The e f ｭ f e c t s  o f  i m i p r a m i n e ,  a 

a n t a g o n i s t ,  on c e l l  g r o w t h ,  c e l l  v i a b i l i t y ,  a n d  t h e  5‑HT2CR mRNA l e v e l  

i n ‑‑

v e s t i g a t e d  i n  t h i s  

R e p e a t e d .  t r e a t m e n t  w i t h  i n : t i p r a m i n e  a t  c o n c e n t r a t i o n s  o f  

ｵ  M f o r  5  d a y s  i n h i b i t e d   c e l l  g r o w t h  i n  a  c o n c e n t r a t i o n ‑ d e p e n d e n t  manner w i t h o u t  a f f e c t i n g  c e l l  v i a b i l i t y .  I n  a d d i t i o n ,  t h e  l e v e l  o f  

mRNAwas e l e v a t e d .  At 3 0   ｵ  M, i m i p r a m i n e  s i g n i f i c a n t l y  r e d u c e d  c e l l  v i a b i l i t y .  Our f i n d i n g s  s u g g e s t  t h a t  t h e  e f f e c t   o f  i m i p r a m i n e  on n e u r o n a l  g r o w t h  may b e  . r e l a t e d  t o  i t s   e f f e c t s  on 

8)  Watanabe  H . ,   Zhao  Q . ,   Matsumoto  K . ,   Tohda 

R置ahakunakorn

P . ,  Maruyama Y . ,  Sakakibara I . ,   Aimi N . ,  Takayama  H . :   Pharmacological  evidence f o r  antidementia e f f e c t  of 

( G o u t e n g ‑ s a n ) ,  a  t r a d i t i o n a l  Kampo m e d i c i n e .   Pharmacology B i o c h e m i s t r y   &  Behavior 

2 0 0 3 .  

A b s t r a c t :   To 

c l i n i c a l  e f f i c a c y  o f  o n e  o f  t h e  t r a d i t i o n a l  m e d i c i n e s  i n  t h e  t r e a t m e n t  o f  

w i t h  v a s ｭ c u f a r  d e m e n t i a ,  we i n v e s t i g a t e d  t h e  p h a r m a c o l o g i c a l  a c t i v i t i e s  o f  

i n  a n i m a l  m o d e l s .  P r e t r e a t m e n t  w i t h   C h o t o ‑ s a n  ( 0 .  

g / k g  p o ) ,  a  c o m p o n e n t  h e r b ,  C h o t o k o  ( 7 5 ‑ 6 0 0  mg/kg p o ) ,  a n d  i n d o l e  a l k a l o i d s  a n d  

f r a c t i o n s  o f  C h o t o k o  p r e v e n t e d  i s c h e m i a ‑ i n d u c e d  i m p a i r m e n t  o f  s p a t i a l  l e a r n i n g  b e h a v i o u r  i n  w a t e r  maze p e r f o r m ｭ a n c e  o f  m i c e .  A s i n g l e  a d m i n i s t r a t i o n  o f  C h o t o ‑ s a n  ( 0 . 5  t o  6 . 0  g / k g  p o )  o r  C h o t o k o  ( U n c a r i a  g e n u s )  p r o d u c e d  a  d o s e ‑ d e p e n d e n t  a n t i h y p e r t e n s i v e  e f f e c t  i n  s p o n t a n e o u s l y  h y p . e r t e n s i v e  r a t s  (SHR) a n d  p a r t l y  i n h i b i t e d  t h e  i n d u c t i o n  

‑ o f  t h e  a p o p l e x y  i n  s t r o k e ‑ p r o n e  SHR ( S H R ‑ S P ) .  

C h o t o k o ,  a n d  i t s   p h e n o l i c  c o n s t i t u e n t s ,  

a n d  c a f f e i c  a c i d ,  s i g n i f i c a n t l y  p r o t e c t e d  NG  1 0 8 ‑ 1 5  

i n j u r y  i n d u c e d  by H202 e x p o s u r e  i n  v i t r o  a n d  a l s o  i n ｭ h i b i t e d  l i p i d  p e r o x i d a t i o n  i n  t h e  b r a i n  h o m o g e n a t e .  I n d o l e  a l k a l o i d s ,  r h y n c h o p h y l i i n e  a n d  i s o r h y n c h o p h y l l i n e  ( 1 ‑ 1 0 0   ｵ M ) ,  r e v e r s i b l y  r e d u c e d  N ‑ m e t h y l ‑ D ‑ a s p a r t a t e  (NMDA)‑induced c u r r e n t  c o n c e n t r a t i o n  d e p e n d e n t l y  i n  NMDA  r e ｭ c e p t o r ‑ e x p r e s s e d   X e n o p u s  o o c y t e s .  

T h e s e  r e s u l t s  s u g g e s t  t h a t  a n t i d e m e n t i a  e f f e c t s  o f  C h o t o ‑ s a n  a r e  d u e  t o  a n t i h y p e r t e n s i v e ,  f r e e  r a d i c a l  s c a v e n g i n g  a n d   a n t i e x c i t o t o x i c  e f f e c t s ,  w h i c h  a r e  a t t r i b u t e d  a t  l e a s t  p a r t l y  t o  p h e n o l i c  compounds a n d  i n d o l e  a l k a l o i d s  c o n t a i n e d  i n   C h o t o k o .  

9)  Matsumoto  K . ,   Nomura  H . ,   Murakami Y . ,  Taki  K . ,   Takahata  H . ,   Watanabe  H . :  

s o c i a l  i s o l a t i o n  enhances p i c r o t o x i n  s e i z u r e  s u s c e p t i b i l i t y  i n  m i c e :  up‑regulatory r o l e  of e n ｭ dogenous  brain  allopregnanolone  i n   GABAergic s y s t e m s .  Pharmacology B i o c h e m i s t r y   & 

Behavior 

A b s t r a c t :   A l l o p r e g n a n o l o n e  (ALLO, 

) ,   a  p o s i t i v e  a l l o s t e r i c  m o d u l a t o r  o f  a c t i o n s  o f   y ‑ a m i n o b u t y r i c  a c i d  (GABA) a t  GABAA r e c e p t o r s ,  i s   s y n t h e s i z e d  i n  t h e  b r a i n  f r o m  p r o g e s t e r o n e  by t h e  s e q u e n t i a l   a c t i o n  o f  two 

I 

a n d  a 

o x i d o r e d u c t a s e .  We  p r e v i o u s l y  demonｭ

S位ated

t h a t  l o n g ‑ t e r m  s o c i a l  i s o l a t i o n  o f  m i c e  c a u s e d  a  s i g n i f i c a n t  d e c r e a s e  i n  b r a i n  ALLO c o n t e n t  v i a  s u p p r e s s i o n  

o f  t y p e  I 

a n d  i t s  mRNA  e x p r e s s i o n .  I n  

t o  

a  p h y s i o l o g i c a l  r o l e  o f  e n d o g e n o u s  b r a i n   .  ALLO, we i n v e s t i g a t e d ｷ  c h a n g e s  i n  s e i z u r e  s u s c e p t i b i l i t y  o f  m i c e  f o l l o w i n g  p r o t r a c t e d  s o c i a l  i s o l a t i o n  a n d  c o m p a r e d   w i t h  t h o s e  of 

w i t h  SKF  1 0 5 1 1 1  ( S K F ) ,  a n  i n h i b i t o r  o f  t y p e s  I  a n d  I I .  

S o c i a l  i s o l a t i o n  o f   m i c e  f o r  7  weeks p r i o r  t o  t h e  e x p e r i m e n t s  c a u s e d  a  s i g n i f i c a n t  i n c r e a s e  o f  s e i z u r e  s u s c e p t i b i l i t y  t o  t h e  GABAA r e ｭ c e p t o r  a n t a g o n i s t  p i c r o t o x i n  b u t  n o t  t o  t h e  g l y c i n e  r e c e p t o r  a n t a g o n i s t  

o r  t h e  g l u t a m a t e  r e c e p t o r  a g o n i s t   k a i n i c  a c i d .  The c h a n g e  i n  t h e  s e i z u r e  s u s c e p t i b i l i t y  was c o m p l e t e l y  r e v e r s e d  by 2 . 5  mg/kg i p  ALLO, a  d o s e  t h a t  p e r   s e  had no e f f e c t  on p i c r o t o x i n ‑ i n d u c e d  s e i z u r e .  T r e a t m e n t  o f  m i c e  w i t h  SKF ( 2 0  mg/kg i p )  a l s o  r e d u c e d  a  t h r e s h o l d   d o s e  o f  p i c r o t o x i n ,  b u t  n o t  t h a t  o f  s t r y c h n i n e  o r  k a i n i c  a c i d ,  w h i c h ｷ  was r e q u i r e d  t o  e l i c i t  s e i z u r e  i n  g r o u p ‑ h o u s e d   m i c e .  The e f f e c t  o f  SKF was a t t e n u a t e d  by ALLO ( 2 . 5  mg/kg i p  ) .   I n  c o n t r a s t ,  

had no e f f e c t  on  p i c r o t o x i n ‑ i n d u c e d  s e i z u r e  i n  s o c i a l l y  i s o l a t e d  m i c e .  T h e s e  f i n d i n g s  s u g g e s t  t h a t  e n d o g e n o u s  b r a i n  ALLO p l a y s  a  s u p p r e s s i v e  r o l e  i n  s e i z u r e  s u s c e p t i b i l i t y  v i a  a  p o s i t i v , e  m o d u l a t i o n  o f  GABAA r e c e p t o r  f u n c t i o n  a n d  t h a t  s o c i a l  i s o ｭ l a t i o n  e n h a n c e s  s e i z u r e  s u s c e p t i b i l i t y  i n  m i c e  v i a  r e d u c t i o n  o f  GABAA r e c e p t o r  f u n c t i o n  c a u s e d  by a  d e c r e a s e  o f  e n ｭ d o g e n o u s  ALLO. 

1 0 )   Vajragupta  O . ,   Boonchoong P . ,   Watanabe  H . ,   Tohda M., Kummasl!lld N . ,   S u m a n o l l 1 t   Y . :   Manganese complexes of curcumin and i t s  d e r i v a t i v e s :  e v a l u a t i o n  f o r  t l h l e   r a d i c a l  scavenging  a b i l i t y  and n e u r o p r o t e c t i v e  a c t i v i t y .   F r e e  R a d i c a l  B i o l o g y   & Medicine 

2 0 0 3 .   A b s t r a e t :   I n  t h i s  s t u d y ,  t h r e e  m a n g a n e s e  c o m p l e x e s  o f  c u r c u m i n  ( C p )  a n d  r e l a t e d  c o m p o u n d s ,  d i a c e t y l c u r c u m i n   ( A c y l C p )  a n d  e t h y l e n e d i a m i n e  d e r i v a t i v e  ( C p E D ) ,  w e r e  

a n d  e v a l u a t e d  i n  v i t r o  f o r  a n t i l i p i d  p e r o x i d a t i o n   a n d  s u p e r o x i d e  d i s m u t a s e  a c t i v i t y .   The m a n g a n e s e  c o m p l e x e s  e x h i b i t e d  a  g r e a t  c a p a c i t y  t o   p r o t e c t  b r a i n  l i p i d s   a g a i n s t  p e r o x i d a t i o n  w i t h  I C s o  o f  6 . 3 ‑ 2 6 . 3  ｵM. A l l  m a n g a n e s e  c o m p l e x e s  showed much g r e a t e r  SOD a c t i v i t y  t h a n   t h e i r  c o r r e s p o n d i n g  a r i t i o x i Q . a n t  l i g a n d s  a s  w e l l  a s  t r o l o x  w i t h  I C s o  v a l u e s  o f  8 . 9 ‑ 2 9 . 9  ｵM. AcylCp a n d  c u r c u m i n   m a n g a n e s e  c o m p l e x e s  (AcylCpCpx a n d  CpCpx) a l S o  g a v e  t h e  h i g h e s t  i n h i b i t o r y  a c t i v i t y  t o  

c e l l  damｭ a g e  ( o x i d a t i v e  s t r e s s )  a t  0 . 1  mg/ml(< 0 . 2  ｵM) i n  

c e l l s ,  w h i c h  w e r e  more p o t e n t  t h a n  c u r c u m i n  a n d  r e ｭ l a t e d  c o m p o u n d s .  The n e u r o p h a r m a c . o l o g i c a l  t e s t s  i n  m i c e  s u p p o r t e d  t h e  i d e a  t h a t  t h e  SOD m i m i c k i n g  c o m p l e x e s   w e r e  a b l e  t o  p e n e t r a t e  t o  t h e  b r a i n  a s  w e l l  a s  t h e i r  r o l e  i n  t h e  m o d u l a t i o n  o f  b r a i n  

u n d e r  t h e  a b e r ｭ r a n t  c o n d i t i o n s .  The c o m p l e x e s  s i g n i f i c a n t l y  i m p r o v e d  t h e  l e a r n i n g  a n d  memory i m p a i r m e n t  i n d u c e d  by t r a n s i e n t   i s c h e m i c / r e p e r f u s i o n .  AcylCpCpx, CpCpx, a n d  CpEDCpx showed s i g n i f i c a n t  p r o t e c t i o n  a t  6 . 2 5 ,  2 5 ,  a n d  5 0  mg/kg  ( i . p . ) ,  r e s p e c t i v e l y ,  w h e r e a s  m a n g a n e s e  a c e t a t e  a n d  c u r c u m i n  h a d  no . e f f e c t  a f  d o s e s  o f   5 0   m g / k g .  I n  a d d i t i o n ,  t r e a t ｭ ment o f  AcylCpCpx a n d  c u r c u m i n  s i g n i f i c a n t l y  a t t e n u a t e d  MPTP‑induced s t r i a t a l   d o p a m i n e  d e p l e t i o n  i n   m i c e ,   w h i c h  was i n  a c c o r d a n c e  w i t h   t .  . h e  i n c r e a s e  i n  t h e  d e n s i t y  o f  d o p a m i n e r g i c  n e u r o n s  when c o m p a r e d  w i t h  MPTP‑

t r e a t e d  m i c e .  T h e s e  r e s u l t s  s u p p o r t  t h e  i m p o r t a n t  r o l e  o f  m a n g a n e s e  i n  i m p o r t i n g  SOD a c t i v i t y  a n d  c o n s e q u e n t l y ,  t

h e   e n h a n c e m e n t  o f  r a d i c a l  s c a v e n g i n g  a c t i v i t y .  AcylCpCpx a n d  CpCpx seem t o  b e  t h e  m o s t  p r o m i s i n g  n e u r o p r o t e c t i v e   a g e n t s  f o r  v a s c u l a r  d e m e n t i a .  

く〉学会報告

S c i e n t i f i c   p r e s e n t a t i o n  

1 ）松本欣三， Puia

G . ,  Mien  v i l l e  J .  

E . ,   G u i d o t t i  

2 ）萎太絃，村上孝寿，松本欣三，高山虞光，北島満里子，相見則郎，渡辺裕司：リンコフィリン及びイ ソリンコフィリンの NMDA 受容体に対する抑制効果：アヌリカツメガエル卵母細胞受容体発現系 での検討．第76回白本薬理学会年会， 2003, 3/24-26，福岡．

3) Sukma 

iting. 第76回日本薬理学会年会， 2003, 3/24-26 ，福岡．

4) ｷJeenapongsa 

因子 vof-21 の発現抑制と薬物誘発睡眠増強効果．第76回日本薬理学会年会， 2003, 3/24-26，福岡．

5 ）越埼，村上孝寿，東国道久，渡辺裕司：脳卒中易発症高血圧ラットにおける釣藤散構成生薬エキス の抗高血圧効果．第20回和漢医薬学会大会， 2003, 8/30-31 ，熊本．

6 ）松本欣三，萎太絃，村上孝寿，東田道久，渡辺裕司，高山慶光，北島満里子，相見則郎：釣藤鈎アル

カロイド成分リンコフィリン及びイソリンコフィリンの in vitro 海馬虚血モデルにおける神経保護 作用とその機序．第20回和漢医薬学会大会， 2003, 8/30-31 ，熊本．

7 ）東田道久，渡辺裕司：神経分化・増殖へのセロトニン 2C 受容体の関与と和漢薬作用．第 14回天然 薬物の開発と応用シンポジウム， 2003, 11/6-7，仙台．

8 ）渡遺裕司，越埼， v張紹輝，萎太絃，村上孝寿，東田道久，松本欣三，高山虞光，相見則郎，榊原巌：

釣藤散の脳血管性痴呆改善効果の薬理学的裏付け．第 14 回天然薬物の開発と応用シンポジウム，

2 0 0 3 ,  

9) Mahakunakorn.P., Tohda M., Murakami Y . ,  Matsumoto K . ,  Watanabe  H . :   Antioxidant and  f r e e  r a d i c a l  scavenging a C t i v i t y  o f  Choto‑san and i t s  r e l a t e d  

ｷ 

1 0 )  J a r u c h o t i k a m o l   A . ,  Watanabe H . ,  Mahakunakom P . ,  P r i p r e m   A . :  P o t e m t i a l  c y t o t o x i c i t y  o f  a s t a x a n t h i n .  The  s i x t h  j o i n t  s e m i n a r :  R e c e n t  a d v a n c e s  i n  n a t u r a l  m e d i c i n e  r e s e a r c h ,  2 0 0 3 ,  1 2 / 2 ‑ 4 ,  B a n g k o k .  

1 1 )   H u s s e i n  G . ,  Zhao Q . ,  Nakamura M . ,  l g u c h i  T . ,   Goto H . ,  Sankawa U . ,  Watanabe H :  A n t i h y p e r t e n s i v e  and  n e u r o p r o t e c t i v e  e f f e c t s  o f  

i n  e x p e r i m e n t a l  . a n i m a l s .  The s i x t h  j o i n t  s e m i n a r :  R e c e n t  a d v a n c e s  i n   n a t u r a l  m e d i c i n e  r e s e a r c h ,  2 0 0 3 ,  

B a n g k o k .  

く〉その他

Others 

1) W a t a n a b e ,  H . :  CNS e f f e c t s  o f  w a t e r  e x t r a c t  o f U n c a r i a  s p p .  T e l e c o n f e r e n c e  w i t h  UC  D a s v i s  and Mars F o o d s ,   2 0 0 3 ,   5 1 2 ,   S a i t a m a .  ｷ 

2) W a t a n a b e ,  H . :  T r a d i t i o n a l  m e d i c i n e  f o r  o r a l  h e a l t h .  J o i n t  S e m i n a r  w i t h  TMPU, UC  D a v i s  and M a s t e r  F o o d s ,   2 0 0 3 ,  8 / 2 3  .   H . o n o l u l u .  

3) Matsumoto K .  P i n n a  G . ,  Watanabe H . ,  G u i d o t t i  A . ,  C o s t a . :  P s y c h o p a t h o l o g i c a l  r o l e s  o f  e n d o g e n o u s  b r a i n   a l l o p r e g n a n o l o n e :  

i n .  a  mouse model of p r o t r a c t e d  s o c i a l  i s o l a t i o n .   1 s t  I n t e r n a t i o n a l  symposium  o f  n e u r o b e h a v i o r a l  p h a r m a c o l o g y ,  2 0 0 3 ,  . 9 1 1 3 ‑ 1 5 ,  Okayama. 

4 )  

A . ,   Costa 

'  2 0 0 3 ,  

く〉共同研究

C o ‑ o p e r a t i v e  r e s e a r c h e s  

1 ）相見則郎，高山虞光，北島満里子：千葉大学大学院薬学研究院，「タイ薬用植物中のインドールア ルカロイド類に関する創薬基礎科学研究」 1994,

4 ‑

2 ）山崎和男，笠井良次：広島大学大学院医歯薬学総合研究科，ク。エン・チー・スー・フォン：ベトナ

ム薬物研究所，「ベトナム人参の薬理作用の研究J

1 9 9 4 ,   4 ‑

3) Erminio Costa  Alessandro 

4‑

4) Boonyong 

^4/1‑

5) Opa 

研究」 2001,

^4/1 ‑

く〉研究費取得状況 Acquisition

o f  ‑ r e s e a r c h  f u n d s  

1 ）文部科学省科学研究費，萌芽的研究（代表：渡辺裕司）「和漢処方処置による脳内遺伝子発現変化 に関する基礎的研究」 180万 Cl/2年目）

2 ）文部科学省科学研究費，基盤研究c （代表：松本欣三）「GABA神経系機能調節およびストレス病 態発現における内因性神経ステロイドの役割」 270万 Cl/2年目）

3 ）文部科学省科学研究費， 21世紀中核的研究拠点形成プログラム（分担：松本欣三）「東洋の知に立 脚した個の医療の創生」 200万

4) 受託研究費，（財）北陸産業活性化センター（代表：渡辺裕司）地域新生コンソーシアム研究開発 事業「藻類培養によるアスタキサンチンの製造及び健康補助食品の開発」 1,000万

5 ）富山県，和漢薬・バイオテクノロジー研究費，（代表：渡辺裕司〉「免疫系。血液血管系に作用する 家庭薬や薬食同源食品の開発：脳血管性痴呆，高血圧などの生活習慣病を予防治療する和漢薬の研

究J 50万

く〉研究室在籍者

R e s e a r c h  ｷ m e m b e r s  

Sumanont 

大学院後期 3 年： Monrudee

ｷ  Sukma  Pramote Mahakunakorn 

外国人客員研究員：

日本学術振興会・拠点大学交流事業

Ms. Tran My  T i e n  

2 / 3 ‑ 3 / 3 1 )   D r .  Duong Kim Toa 

3 / 3 ‑ 3 / 3 1 )  

D r .  Somsak R u c h i z a w a t  

3 / 2 0 ‑ 3 / 2 7 )  

D r .   B o o n s r i  O n g i p i p a t t a n a k u l  

3 / 2 2 ‑ 3 / 2 9 )   D r .  Boonyong T a n t i s i r a  

3 / 2 8 ‑ 3 0 )  

D r .  Mayuree T a n t i s i r a  

3 / 2 8 ‑ 3 0 )   Ms. O r a t h a i  T a n g v q r a s i t t i c h a i  

2 / 2 0 ‑ 3 / 3 1 )   Ms. J a r u c h o t i k a m o l  A t i k a  

7  / 2 ; ̲ 9  / 2 6 )   D r .  N e t i  Warachu 

7  / 1 4 ‑ 2 6 )  

Mr. Boon  t i  um  Kongsaktrakoon 

8 / 1 8 ‑ 9 / 3 0 )   D r .  Nguyen T h i  Thu Huong 

8 / 2 5 ‑ 1 2 / 2 6 )  

東京生化学研究会外国人研究者招鴨奨学金

D r .  Rattima J e e n a p o n g s a  

4 / 1 ‑ 2 0 0 3 ,  4 / 1 0 )  

相縛博士（2001,

4 / 1 ‑ )  

D r .  G h a z i  H u s s e i n  ( 2 0 0 1 ,   4 / 1 ‑ )  

D r .  S u r e e  Jianmongkol 

2 0 0 3 ,   3 / 1 5 ‑ 5 / 1 5 )  

その他

D r .  J u s t i n  Dann ( M a s t e r  Foods J a p a n ;  2 0 0 3 ,  1 0 / 1 ‑) 

Ms. Chantana Boonyarat 

4 / 2 6 ‑ 2 0 0 3 ,  4 / 1 9 )  

Ms. Onrawee Khongsombat （日本国際教育協会，チュラロンコン大学大学院， 2002, 5 / 2 6 ‑ 2 0 0 3 ,   4 / 2 5 )  

Ms.  Y  aowared Sumanont 

1 0 / 1 ‑ 2 0 0 3 ,  3 / 3 1 )  

く〉学位取得者

Academic d e g r e e s  and t h e s e s  

Kang T a i ‑ H y u n   S t u d y  on o x i n d o l e  a l k a l o i d s  i s o l a t e d  f r o m  U n c a r i a  s p e c i e s :  n e u r o t r a n s m i t t e r  r e c e p t o r ‑ b a s e d   a p p r . o a c h e s  f o r  t r e a t i n g  a n d  p r e v e n t i n g  n e u r o d e g e n e r a t i v e  d i s o r d e r s  w i t h  memory i m p a i r m e n t  

博士： 2003年 9 月

Monrudee Sukma  The e x p r e s s i o n  a n d  p h y s i o l o ? i c a l  f u n c t i o n s  o f  

r e c e p t o r  mRNA i n  NG 

c e l l s :  i n v o l v i n g  RNA e d i t i n g  i n  n e u r o n a l  d i f f e r e n t i a t i o n  a n d  p r o l i f e r a t i o n .