Title
血精アポA-IV濃度測定とその臨床栄養学的意義に関する研
究( 内容の要旨(Summary) )
Author(s)
鳥澤, 英紀
Report No.(Doctoral
Degree)
博士（医学）乙 第1073号
Issue Date
1996-09-11
Type
博士論文
Version
URL
http://hdl.handle.net/20.500.12099/15198
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氏名 (本籍) 学位の種類 学位授与番号 学位授与日付 学位授与の要件 学位論文題目 審 査 委 員 鳥 澤 美
紀(岐阜県)
博 士(医学) 乙第 1073 号 平成 8 年 9 月11日 学位規則第4条第2項該当 血清アポA-】∨漉度測定とその臨床栄養学的意義に関する研究 (主査)教授 武 藤 泰 敏 (副査)教授 岡 野 幸 雄 教授 野 間 昭 夫 論 文 内 容 の 要 旨 アポA-Ⅳは1974年に初めてSwaneyらがラットの血柴中に見いだした比較的新しいアポリボ蛋白であり,その 後ヒト血祭中にも存在していることが明らかとなった｡アポA-Ⅳは脂肪吸収の際.小腸粘膜内において合成さ れ,新しく形成されたカイロミクロン粒子の表面に存在する｡血祭中においてアポA-ⅣはアポC-Ⅲとの置換に よりただちにカイロミクロンの表面から離脱し,1ipoproteinlipase(LPL)によるカイロミクロンの水解を間 接的に促進させるとされている｡その他,1ecithin:Cholesterolacyltransferase(LCAT)のcofactorとしての 機能,末梢細胞からのコレステロールの抜き取り作用なども明らかにされており,抗動脈硬化作用を持つアポリボ蛋白として注目されている｡また,最近ラットにおいてアポA-Ⅳが食欲中枢に働いて摂食行動を規制してい
ると報告されている｡このように,アポA-Ⅳは小腸における脂肪吸収以外にも種々の生理的機能を持ってい■る と考えられる｡しかし,これまでのアポA-Ⅳの機能に関する研究は,玩L扇roでの実験が中心であり,種々の臨 床的疾患における血清アポA-Ⅳ濃度の比較検討や.その測定の臨床的意義に関しての詳細な観察はほとんどな されていない｡ そこで申請者は,自製した抗ヒトアポA-Ⅳ抗体を用いて種々の疾患の血清アポA-Ⅳ濃度を測定し.またアポA-Ⅳ濃度の変動を同一症例において観察し,アポA-Ⅳ測定の臨床的意義について検討した｡ 対象および方法 Ⅰ.対象:急性肝炎18例,劇症肝炎7例,慢性肝炎33例,肝硬変45例,肝細胞癌27例,肝内胆汁うっ滞症15軌 totalparenteralnutrition(TPN)施行患者19例,慢性膵炎5例,慢性腎不全52例,糖尿病44イ札 総数265例で ある｡なお健常者82名(男性 53名,女性 29名,34±19歳)を対照群とした｡採血は原則として14時間絶食後 の空腹時に行い,その血清を試料とした｡なお慢性腎不全(52例)は透析患者であり,糖尿病(44例)は食事療 法中の患者である｡またコバルト照射治療を受けた食道癌患者(61歳男性),S字結腸癌の外科的手術時のTPN 施行患者(48歳男性),薬剤性肝内胆汁うっ滞症(30歳男性)に関してはt それぞれの臨床経過におけるアポA-Ⅳ濃度の経時的変動を観察した｡さらに2名の健常者男性におけるアポA-Ⅳの日内変動を観察した｡ II.方法:1.アポA-Ⅳの精製:アポA-Ⅳの精製はWeinbergとScanuの方法を一部修飾して行った｡得られ た蛋白はWeber-Osbornの方法によるSDS-pOlyacrylamidegelelectrophoresis(SDS-PAGE)にてアポA一Ⅳを 分離精製した｡2.抗アポA-Ⅳ抗体の作製:分離精製したアポA-Ⅳ500∼1000FLgをFreund'scompleteadjuvant に混和して家兎に免疫し,抗アポA-Ⅳ抗体を作製した｡抗休の特異性はWestern blotにより確認した｡3.ア ポA-Ⅳの測定:アポA-Ⅳの測定はsingle radialimmunodiffusion(SRID)法およびLaurellのロケット免疫電 気泳動法によった｡スタンダードに健常者のプール血清を二次標準物質として用いて検量緑を作製して各検体の アポA-Ⅳ濃度を定量した｡4.他の測定項目:他のアポ蛋白(アポA-Ⅰ,A-Ⅲ,B,C-Ⅲ.C-II.E)はSRID 法により測定した｡血清脂質(TG,TC)は酵素法により測定した｡5.統計学的処理:健常者群との比較検定はStudent's t testにより行い,アポA-IVと他項目との相関は1inear regression analysisにより行った｡ 結 果 Ⅰ.アポA-Ⅳの精製とその抗体作製:1.アポA-Ⅳの精製:イントラリビッドに吸着した蛋白から精製した アポA-Ⅳのアミノ酸組成に関しては他の報告者のものとよく一致していた｡2.抗アポA-Ⅳの作製:家兎に免 疫して12過後に高力価の抗体を得た｡3.アポA-Ⅳの測定:l)SRID法:検量線は片対数グラフを用いて検体 のアポA-Ⅳ濃度を定量した｡同時再現性のCVは6.2%以下で目差変動のCVは5.9%以下であった｡また測定感度 は0.025mg/dPであった｡2)ロケット免疫電気泳動法:同時再現性および目差変動のCVはそれぞれ5.3%以
-65-下,5.8%以下であった｡測定感度は0.025mg/dPであった｡Il.健常者および各疾患における血清アポA-Ⅳ 濃度:1.健常者82名の平均アポA-rV濃度は11.3mg/dBであった｡健常者と比較して有意に低下していたのは 急性肝炎(急性期),劇症肝炎,胆汁うっ滞症,TPN施行患者および慢性膵炎であり,反対に有意に増加してい たのは慢性腎不全と療尿病であった｡しかし,肝硬変.慢性肝炎,肝癌は健常者と差が認められなかった｡2.
