試 験 管 内 胆 汁 色 素 生 成 過 程 に 関 す る 研 究
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(2) 8446. 山. 接,分. 光 光 度 計 の 観 測 槽(10mm平. 内 で,室. 温(15℃)に. 方,容 量5.Om1). 放 置,.空. 本 編 に の べ る実 験 は,す て,そ. 吹. 変 つ た.. べ て この 反 応 を 基 礎 と し. 々 の 検 討 を 加 え た も の で あ る. 尚,. hemin濃. chloroformの. に こ こ に記 し た も. 液 は0.5. mlと. し た.又. 蒸 発 に 伴 う反 応 液 の 濃 縮 は,そ. Warburg. &. E.. 方 法 に よ り調 製. hemin. 100mgを5%pyridine 溶 か し,. pyridineに. chloroform. 180mgのascorbin酸. を,. 溶 か し た も の を 加 え,室. 放 置, 60分 後Pyridine 温 で)し,. E. Negelein8)の. 方 法 に よ り,緑. を 分 離 し て 緑 色 粉 末 を 得 た.尚,以 遮 光 の 下 に 行 い,緑. pyridine. 色物 質. 上 の操 作 は すべ て. 1.. ㎏m5chrome及. び. 験. 成. heminにascorbin酸(35.20mg/dl)を 中 に 放 置 す る と 図1に. 溶 解 し な い が,. chloroformに. 溶解. す る と,暗. 液 と な り, 558,. 530mμ. に 極 大 を 持 つ,. llemichromeの. 吸 収 曲 線 を 示 し た.こ. に 極 大 を も つ,. 収 曲 線 と な つ た.こ 後 者 で420mμ. か に 反 応 を 起 し て,2〜3分. 527,. 480mμ. 極 大 が 消 失 し, 527mμ. し 始 め, 535mμ. に 極 大 を み と め た.尚, chloroformに. の 際 生 じ たhemichromeの. chloroformに. よ る645mμ. hemichromeの pyridineを hemin. が.こ. か し, ascor. 極 大 は 消 失 し,緑. 極 大 が 出 現 し た.完 10%以. 極 大 と な つ た.緑. に は665mμ. に 達 し た.尚. 542,. れ は10%の. 515mμ. 大 が 消 失 し てpyridine. hemichromeの. 加 え る と,前. 附. 極大 は消失し. れ ら の 極 大 は そ の ま ま 増 大 し て,反. 応80分. 目に. verdohemochromeに. 収 曲 線 と な り,反. 応 液 は 深 緑 色 と な つ た 。 そ し て,反. 時 に 行 つ た20%pyridine水. と し た 場 合 と,分 た.又. 一 致 す る吸. 置 し て も 進 行 し な く な つ た.以 を反 応 液. 光 学 的 に殆 ん ど相 違 をみ と め な か つ. 反 応 時 間 も 両 者 ほ ぼ 同 様 で,反. 応 速 度 に も余 り. 相 違 は み ら れ な か つ た. 630mμ. 物質生成につい て. 前 の 実 験 で,赤. 色 部 吸 収 極 大 は630mμ. hemochromeの665mμ. 質 が 生 成 さ れ て い る こ と は,ほ pyridine. か らverdo.. に 移 行 し てお り. , 630mμ 物. ぼ 確 実 で あ る が,. hemin‑ascorbin酸‑H2O2系. 反 応 に よ. 実 験 で き な か つ た.そ. 濃 度 を か え て 検 討 し た と こ ろ,次. 吸収曲線に. 目頃 か ら500mμ. 目に は558mμ. 上の. の極. 目. に極 大 を示 す 吸 収 曲 線 とな つ. 全 な. に 極 大 を もつ 吸 収 曲 線 を示 す. 割 にpyridineを. 応30分. 500mμ. 応20分. れ は 増 大 し て500mμ. る,純. 溶 解. 極 大 とな. は 最 高 値 に 達 し,. た.す esterはchloroformに. 反 応10分. 近 に 新 し い 吸 収 帯 が 出 現 し,こ. 535,. 目に は. 色 部 の 変 化 に対 応. 目 に630mμ. 色部. 要 し た.. 応5分. に 増 大 し な が ら長 波 長 側 に 移 つ て,反. 2.2.. heminは,. 極 大.がみ ら れ,又558mμ. 吸 収 曲 線 を 得 る に は,. dimethyl. し て645,. 者 で408,. 吸 収 曲 線 に は,. で 還 元 す る と, 645 mμ. に 完 全 なhemochromeの. 吸. も よ く溶 け る. の 肩 吸 収 が 漠 然 と し た 膨 隆 と な つ た.し bin酸. 527,. 後 反 応 の進 行 と共. 極 大 は長 波 長 側 に移 動. 色 部 吸 収 帯 は 反 応5分. り,更. 色 部558,. 極 大 は 低 下 し,赤. 色 部 の 極 大 は 急 速 に 低 下 し て,反. 上 の 過 程 は,同. れ にascorbin. は,前. れ に 伴 つ て,緑. のhemochromeの. 応 は こ こ で 停 止 し,放. Pyridine. hemochromeの. れ ら のSoret帯. 2.5,5%のpyridine が,そ. pyridine. 10%. 赤 色 の溶. 酸 を 少 量 加 え て 還 元 す る と,橙 赤 色 と な り, 558, 480mμ. 示 す 過 程 が み ら れ た.. の 吸 収 曲 線 に 変 る が,速. た.こ. 形成. 反応. 反 応 液 と し て,. を 加 え た 直 後hemochrome. て, 665,. ㎞ochomoの. heroinはchloroformに pyridine. 績. hemo. hemin‑ascorbin酸‑O2系 chloroformを. 極 大 と な つ た.反 実. び. す な わ ち,ascorbin酸. して,赤. 色 粉 末 は 調 製 後 直 ち に 使 用 し た.. 1. hemichrome及. 形 成 す る こ と を た し か め た.. 20%pyridine. に,緑. 後,O.. di でpyri. 緑 色 物 質生 成 過 程 の 分光 学 的 観 察. 480mμ. 減 圧 蒸 溜(室. 加 え て 溶 解 し た.以. びhemin. chloroform中. 色 部 に 新 し い 吸 収 帯 が 出 現 し た.以. す べ て 蒸 発 し た 時, 20%. pyridine水20m1を &. 200 2m1の. 温(15℃)に. chloroformを. chloroformが. Warburg. 2.. hemin及. pyridine. 目に は 緑 色 を帯 び 始 め た.こ. 緑 色 物 質 の 分離 調 製 法. mlに. 配 位 結 合 し,. 加 え,空. 調製法. Negelein8)の. し た. 2.4.. dineと. pyridine. verdohemochromeの. O.. esterは,. 2.1.. の都 度. 補 正 し た. 2.3.. 以 上 の 吸 収 曲 線 か ら, methyl. chromeを. 度 及 び 容 量 は,常 ascorbin酸. 寛. 中 酸 素 と 反 応 さ せ た.. の 際 起 る吸 収 曲 線 の 変 化 を 経 時 的 に 観 察 し,種. の を 用 い,. 隆. 粋 な630mμ. な わ ち,反. 物 質 生 成 反 応 は,反 こ で,実. 応液 の 関 係 で. 験 条 件 特 にpyridine の過 程 が観 察 され. 応 液 を5%pyridine. chloroform. と し て 前 と 同 様 の 実 験(ascorbin酸35.20mg/dl)を 行 う と,図2の. 過 程 を 得 た.こ. の 実 験 と 同様 で あ る が,反. の 場 合,そ. の 過 程 は前. 応 は 極 め て 速 く,反. 目 に は 緑 色 部 吸 収 は す べ て 消 失 し, 630mμ. 応2分. に の み極.
(3) 試 験 管 内 胆 汁 色 素 生 成 過 程 に 関 す る研 究(2). Fig.1. The. Changes. of. Absorption. Curves. to•@ Verdohemochrome Pyridine. The. 3.0mg/dl. the. of. Pyridine. 新 し く535,. こ に 得 ら れ た630mμ. に よ り常 に は 得 ら れ ず,多. of. Pyridine. Acid. with. 35.2mg/dl. the. Hemin. to. 極 大,又. Hemin. and O2. in. 20%. 0.5m1. Absorption. Band. Verdohemochrome. ん ど 純 粋 に近い. heminか. つ て,図2. at. 630mƒÊ.. by. O2. in. 物 質 か らverdohemo. ‐. くの 場 合 残 存 す る558mμ. 下 で あ るこ とが 必. 場 合 最 も 容 易 に 観 察 さ れ た.尚. 物 質 のSOret帯. は,や. は り430mμ. に 吸収 極. 大 を み と め た. 2.3.. ascorbin酸. が不 足 した 場 合. 物 質 か らverdohemochrome生. 還 元 剤 を 必 要 と せ ず,酸. 察時 間. 極 大 が 併 存 し た.尚. 度 は10%以. 2.5〜5%の. 630mμ. ら630mμ. の 吸 収 曲 線 は,観. は 既 に 出 現 し た535mμ. 反 応 液 のpyridine濃. 630mμ. 物 質 の そ れ と 全 く一 致. 目 ま て は,Pyridine 後 は630mμ. 後 に は長. 極 大 が 出 現 し,. 物 質 が 存 在 し た と 考 え ら れ る.従. 成 過 程 で あ る.こ. Pyridine. 要 で,. 察 さ れ た 瞬 間 に は,殆. chrome生. Oxidation. Ascorbic. Acid. 吸 収 曲線 と な つ. し て お り,観. 物 質 生 成 過 程,以. the of. に の み極 大 を示 す 吸 収 曲. で の べ た630mμ. の 反 応2分. Ascorbic. Compound of. れ は1分. 500mμ. 線 は,第1編. 630mμ. during Action. Chloroform. 以 後 の 反 応 でverdohemOchromeの た.こ. the. Oxidation. 大 を 示 す 吸 収 曲 線 が 観 察 さ れ た.こ 波 長 側 に 移 り,又. 3.5mI. Formation. during 5%. the. Chloroform. Hemin. Fig.2. by. 8447. る8) 9).そ. こ で,. し た 場 合 の,こ. 成 に は,. 素 が 必 要 で あ る.と さ れ て い. pyridine. chloroformを. れ ら の 関 係 を 検 討 す る た め,次. な 観 察 を 試 み た.. 反応液 と の よ う.
(4) 8448. 山. す な わ ち20%pyridine し て,実. 験2.1.の. (20.00mg/dl)を. chloroformを. 吹. 反 応液 と. 用 い,同. で 緑 色 部 吸 収 はhemochrome像. 応10分. た.尚. 目ま. を 示 し た が,反 と な つ た.以. 部 はhemichrome像. 色 部 吸 収 は 増 大 して. 大 と な り,更. に 反 応90分. こ の 場 合,反. 通 気 し,流. 応. 12分 目 に は 急 にhemichrome像 の ま ま,赤. て い る.従. 色 部 は 再 びhemochrome像. Ascorbic. Changes. of. the. Acid. Crystals. Acid. (Crtstal). Hemin Ascorbic. 3.5m1. Previous in. Absorption 5%. 応12分. 応 液 に窒 素 ガ ス を. 目 に は, ascorbin. Pyridine 0.03x3.5mg 0.2•`0.5mg. Ascorbic. な つ た こ と を示 し. つ て, Pyridine. the. chloroformを. Complete. Acid. Curves. Oxidation. 20.Omg/dl. (Fig.. 2). し て以 後 に み ら. に 生 成 さ れ て い た630. 物 質 がverdohemochromeと. The Formation of Verdohemochrome after Ascorbic Acid in 20% Pyridine Chloroform. The. 目 に,反. れ た 赤 色 部 極 大 の 増 大 は,既. を 追 加 す る と,緑. Fig.4. 後. 空 気 と 遮 断 し て お く と,赤. 以 上 の 観 察 に よ る と,反. 後 そ の 吸 光 度 に と ど ま つ た.こ こ で 同 量 のascorbin酸. 3.Omg/dl. 応12分. 動paraffinで. 加20分. 吸 収 曲 線 とな つ. 酸 が 消 費 し 尽 さ れ た と 考 え ら れ る.そ. 目 ま で 増 大 し,以. Heroin. 応 を起 し て,追. 色 部 極 大 の 増 大 は み ら れ な か つ た.. 後緑色. mμ. Fig.3. な り,反. に は 完 全 なverdohemochromeの. 様 の 実 験 を 行 う と,図3の. に 示 す よ う に,反. 寛. (558＞527mμ)と. 場 合 よ り 少 量 のascorbin酸. 過 程 が 観 察 さ れ た.図. 665mp極. 隆. in. 4m1. Solution. 5% to. with. Pyridine the as. the. Use. Chloroform. Pyridine the. of. 0.5m1. Chloroform. (Added. 反応液 と. Crystal. Hemin Form). of.
(5) 試 験 管 内 胆汁 色 素 生成 過程 に 関 す る研 究(2). し た 場 合 も, 630mμ. 物 質 は. ascorbin酸. 素 に よ つ てverdohemochromeと. 3.. な し に,酸. な る も の と考 え ら. mg/d1:. 2.4.. ascorbin酸. chloroformを. mgのascorbin酸 は,図4の. 反 応 液 と し て, 0.2. pyridine濃. 度 で,あ. を 用 い た 図2の. の 過 程 は,同. はhemichrome像. の ま ま 経 過 し て,. 像 は 殆 ん どみ られ な か つ た.又,そ か ら始 ま り, 630mμ. れ な か つ た.し. か し,最. verdohemochromeが pyridine濃 用 い た 際 に は,こ %pyridine. 部 分 のPyridine. 微 量 で あ り,そ か れ る た め,. 場 合 と 同様. 上 の 場 合,又pyridine水. は, ascorbin酸 ascorbin酸. 時 間 の630mμ. 察 さ れ な か つ た も の と 思 わ れ る.. 場合 で. 場 合 の 過 程 で あ る.こ. 色 部 吸 収 が660mμ こ で,こ. 附 近 よ り始 まつ. れ ら に よ つ て 以下 の 検. 討 を し た. 反 応 速 度 に及 ぼす 影 響. Pyridine. heminか. Pyridine. heminの. ら630mμ. 物 質 生 成 速 度 を,. 分 解 速 度 か ら み る と,こ. の溶媒. 色 部558mμ. 極 大 の 消 長 で 示 さ れ る.図1,2及. 結 晶は. に つ い て,各. 々 そ の 低 下,消. 応各. dine. 5%で. い る.図6は. dine濃. 導. の 明瞭 な吸 収 像 は観. 各558mμ. 及 び5の. は 著 明 に遅 延 して. heminの. 分 解 速 度 は, pyri. 度 の 増 加 に 伴 い 遅 延 す る こ と が 分 る. 成 速 度 は,赤. 色 部. 極 大 の 最 高 値 到 達 時 間 で 示 さ れ る.図1,2 各 々 最 後 の 吸 収 曲 線 は, 665mμ. 値 に 達 し た 時 の も の で あ る.こ. The Formation of Verdohemochrome Pyridine Chloroform Hemin AscorbicAcid. び5. 極 大 の 消 長 を 示 し た も の で,. 次 に, verdohemochrome生 665mμ. れ は緑. 失 時 間 を み る と, pyri. は 著 し く速 く, 60%で. こ れ に よ る と, pyridine. の この よ う 物 質 生 成量 も. の 吸 収 はverdohemochromeの. 赤 色 部 吸 収 に か く さ れ る の で,そ. chloroformの. 同 じ く60%の. て い る の み で あ る.そ. を 5. に 図5は. 場 合,赤. 3.1.. heroinはhemichrome. れ は 速 か にverdohemochromeへ. 630mμ. Fig.5. だ60%の. の赤 色 部 吸 収 も. の 状 態 に あ る と 考 え ら れ る. ascorbin酸 な 作 用 の 仕 方 に よ り,各. び5%のpyridine. れ ら の 間 に は 分 光 学 的 に 本 質 的 相 違 は み ら れ な い.た. 極 大 の 出現 過 程 は 観 察 さ. が 少 い の で,. こ に の べ た 条 件 の,. hemochrome. 極 め て 微 量 ず つ 溶 解 し て 反 応 に あ ず か る た め,反 時 間 で,大. 各 々20%及. び2は,こ. あ る.次. 終 的 に は,図2の. chloroformで. 度 の 影 響 を 検討 し. の 緑 色 部 吸収. の よ うな 相 違 は み ら れ な か つ た.. で あ るpyridine量. 濃 度 のpyridine. 反 応 液 と し た 場 合 の 各 反 応 過 程 を,分. 先 き に の べ た 図1及. 得 ら れ る こ と を み と め た. 度10%以. 一 定 と し,各. 量(35.2. た.. 一. ら か じ め 溶 解 し たascorbin酸. 場 合 と 著 し く異 り,そ. ascorbin酸. 光 学 的 に 観 察 し て, pyridine濃. を 結 晶 の ま ま加 えた 場 合 の 反 応. よ うな 過 程 を 示 し た.そ. 3.5ml),. 0.5ml)を. chlor0formを. を結 晶 の ま ま加 えた 場 合. 5%pyridine. 濃度 の影 響. hemin量(3.Omg/d1:. れ る.. 650mμ. pyrMI蘭. 8449. from. Pyridine. 3.Omg/dl 35.2 ". れ に よ る と, pyridine. Hemine 3.5m1 0.5,". 極 大 が最高. in. 60%.
(6) 8450. 山. 吹. 隆. 寛. 濃 度 が 高 い も の程 遅延 し前 に の べ た と同様 の 傾 向 が み. %pyridine. ら れ た.し. か し 各 々 に つ い て,. 2(I),. ら630mμ. 物 質 生 成 過 程 に 相 当 す る も の を差 引 い て み. る と,大. pyridine. き い 相 違 は み ら れ な い.従. 質 か らverdohem0chrome生 濃 度 に よ つ て,前. heroinか. つ て, 630mμ. 物. 成 速 度 は, pyridine. の 過 程 ほ ど著 しい 影響 は うけ な い も. の と 考 え ら れ る.. chloroformを. 反 応 液 と し て,17.6×. 17.6×6(Ⅱ),. ascorbin酸. 17.6×12mg/dl(Ⅲ)の. を 用 い た 実 験 で,そ. 各. れ ぞ れ 反 応0.5分. の 吸 収 曲 線 で あ る.こ. れ に よ る と,残. は1で. で は 既 に 消 失 し て, 630mμ. 最 も 大 き く,Ⅱ. 存558mμ. の 生 成 は 完 了 し て い る.す. な わ ち, pyridine. の 分 解 速 度 は 皿 〉 Ⅱ ＞Iと. な っ て お り,. 目. 極大 物質. heroin. ascorbin酸. 濃 度 が 増 加 す る と 増 大 す る こ と が 分 る.尚pyridine Fig.6. The. Effect. tion. on. of the. Pyridine. Concentra. Pyridine. Reaction. Velocity. Hemin. Oxidation. Verdohemochrome. 濃 度2.5〜60%の. of. Pyridine. Chloroform The. Fig.7. Vicissitude. Maximum. of at. the. 558mƒÊ.. The. Absorption of. Pyridine. 3.0mg/dl. Ascorbic. Acid. Pyridine. Concentration. 35.2". mμ. び5に. Heroin 5%. つ い て,各. 5%と20%の. 4.. 60". Oxida in. 5%. 17.6. 3.5m1. x 2mg/dl. 0.5m1. 17.6x6 " " 17.6. x 12 ". は著 明 に低 下 し て い. 3.5ml)及. 2.5〜20%. 液 と し た 場 合 のascorbin酸. を 用 い,前. chloroformを. と. 反応. の 影 響 を 検 討 し た.. 速 度 は,実. heminの. 分 解 速度. 極 大 の 消 長 で 示 さ れ る.図7は.5. 物 質 か らverdohemochrome生. 験2.2.で. の べ た 過 程 の,赤. は630mμ. 成 色 部665mμ. 物 質 のSoret帯430mμ. 極. 大 の 推 移 に よ つ て 示 さ れ る.そ. し て,こ. bin酸Iの. 極 大 の 最 高 値 到 達 と,. 430mμ. 場 合 に は,. 665mμ. 極 大 の 消 失 が よ く一 致 し た が,Ⅱ. 合 に は 副 分 解 が 著 明 で,二 し た.副. ascorbin酸. れ はascor. 及 びⅢ. の場. つ の 極 大 の 関 係 は全 く相 反. 分 解 を 無 視 す れ は,こ. Ⅲ ＞ Ⅱ ＞1と,. 反 応 速 度 に及 ぼ す 影 響 pyridine. 次 に, 630mμ. 極 大 の 消 長,又. びpyridine濃. 濃 度 のascorbin酸. 同 様 の 実 験 を 行 つ て, Pyridine. は 緑 色 部558mμ. I •@III. 畳 の影 響. 前 に の べ た よ う に,. Hemin. 3.Omg/dl Acid II. 量 は ほ ぼ 一 定 で,. hemin量(3.Omg/d1:. 4.1.. Pyridine. Verdohemochrome. 20 ". 度 に よ る 相 違 は 殆 ん ど み と め な か つ た.. 度 を 一 定 と し て,各. Con Velo. Chloroform. Ascorbic. 場 合 に は 副 分 解 が 起 る と 考 え られ る. a300rbin酸. Acid Reaction. 場 合,ほ. の 一 定 量 で は, pyridine. の 場 合verdohemochrome収. 60%の. the. 々 最 終 反 応 時 間 の665. ほ 伺 程 度 の 吸 光 度 を 示 し, 60%で. pyridille濃. the. Ascorbic. 量 に及ぼす影響. 極 大 に よ る と, Pyridine. る. 2scorbin酸. to. 0.5". III. 図1,2及. of. tion Pyridine. I. verdohemochrome収. of on. city. 3.5m1. I I. 3.2.. Effect. centration. Hemin Hemin. べ て 同様 の 傾 向 が み られ. た.. to. in. 間 で は,す. の 過 程 の 反 応 速 度 は.. の増 加 とと も に 増 大し. た. 4.2.. verdohemochrome生. 成 に 要 す るascorbin.
(7) 試 験 管 内 胆汁 色 素 生成 過程 に 関 す る研 究(2) heminを,完. 酸量 図8の. 実 験 は,. 20%pyridine. chloroformを. 反. ま,図. に 示 す 各 濃 度 のascorbin酸 れ ぞ れ665mμ. つ て,こ. を 用 い た 実 験 で, 極大が最高値 を示. hemin. の 肩 吸 収 が み ら れ るが,Ⅱ. では. 吸 収 曲 線 と なつ てい. の 実 験 条 件 で は,0.030×3.5mgの. Fig.8. を要 す. ascorbin酸. pyridine水 で は,. 線)の. そ れ ぞ れ のverdohemochrome収. 量 は,Ⅱ,す. 少 必 要 量 のascorbin酸. の 場 合,そ. 濃 度2.5〜20%の. pyridine濃. に 高 濃 度 のascor‑. の 低 下 は 著 明 で あ る.尚,pyridine 間 で は,こ. chloroformの. なわ. を 用 い た 場 合 最 高 で,. 以 下 両 側 に 向 つ て 低 下 し て い る.特 bin酸. 極 大 は,. 量 を 示 し て い る.. 図 で み る とverdohemochrome収 ち,最. 各665mμ. 場 合 と,ほ 度60%で. こ に の べ た20%pyridine ぼ 一 致 す る 成 績 を 得 た.. は,収. 量 は す べ て 低下 す るが こ. こ に の べ た 傾 向 は 同 様 で あ つ た. 次 に,図8に る と, pyridine い る が,. よ つ て,. chloroformで. pyridine水. pyridine濃. で はV〜'Ⅶ. 対. 度2.5〜60%の. 所要 間 で同. 線 で 示 し た 吸 収 曲 線 は,. 2O%. を 反 応 液 と し た 場 合 の も の で あ る.後. pyridine. chlorofOrmの. 者. 場 合 の 約3倍. る, 18.9Molのascorbin酸. に当. を 要 す る 計 算 と な り,. Acid for the Complete Oxidation in 20%Pyridine Chloroform. of Pyri. Water) V VI. 17.6x6mg/dl 17.6 x 12" 17.6x24 " ". 5. Pyrldlne. 0.5m1. pyridine. 図9は,. の 場 合 と比 較 す. chloroformを. 反応液 と. 17.6×2mg/dl(I)と17.6×12mg/d1(Ⅱ)の を 用 い た 実 験 で,各. 以 後 の 過 程 をSoret帯 図 中10分. 々630mμ. 物質生成. と と も に 示 し た も の で あ る,. 目の 破 線 及 び60分. 目の 実 線 は,各. 々 Ⅱ と1の. 665mμ 極 大 が 最 高 値 を 示 し た 時 の も の で あ る. 物 質 生 成 直 後,両. し て お り, ascorbin酸. は階 段 的 に低 下 し て. な い か ら, pyridine. の 間 で,そ. ら れ な い.次. の収量 は. 反 応液 と した 場 合 の 反 応. の よ うに 観 察 さ れ た. 5%Pyridine. ascorbin酸. 場 合,. 用 い た場 合 の 副 分 解. chloroformを. 副 分 解 は,次. し て,. chloroformを. こ れ に よ る と, 630mμ. pyridine水. Mo1に. 一 定 で あつ た .. 量 に及ぼす影響. 前 の 実 験 で の べ た 図8(実. l. 割 に な つ た.尚. 両 反 応 液 の 間 に 著 明 な 相 違 が み ら れ た.. The Required Dosis of Ascorbic dine Hemin to Verdohemochrome. verdohemochrOme収. heroin. Mo1の. 量 は,. (Broken Line: in the Case of 20% Pyridine Hemin 3.Omg/dl 3.5ml Ascorbic Acid I 17.6x1.5mg/dl 0.5m1 II 17.6 x 2 " " " III 17.6x3" "VII IV 17.6 x 5 " ". 4.3.. れ は 計 算 上,. 一 で あ つ た .図 中,破. 完 全 なverdohemochromeの る.従. に 示 す,0.352×0.5mgのascorbin酸. る こ と に な る.こ. 緑 色 部 に は,尚Pyridine. の 残 存 に よ る558mμ. す る に. し てascorbin酸6.3. し た 時 の 吸 収 曲 線 で あ る. こ れ に よ る と.Iの. 全 にverdohemochromeと. 定の ま. 応 液 と し て,hemin量(3.Omg/d1:3.5ml)一. 各 反 応 液 に つ き,そ. は,Ⅱ. 8451. にIで. 者 殆 ん ど一 致. 量 の 相 違 に よ る 影 響 は み られ heminの は,. 異 常 分 解 は 殆 ん ど考 え. 665mμ 極 大 が 経 時 的 に 増 大 し.
(8) 8452 て,反. 山. 吹. 応60分 目に 最 高 値 に達 す る と共 に, 630mμ 物質. のSoret帯430mμ. 極 大 が 消 失 して い る.一 方,Ⅱ の. 場 合 に は, 665mμ 極 大 が 最 高 値 に 達 した 反 応10分 に,尚430mμ. 目. 隆. で,更. に そ れ は,. と,一. 度verdohemochromeに. 630mμ 物 質 が 異 常 分 解 を う け た 場 合 なつ てか ら分 解 した. 場 合 の 両 者 が 考 え ら れ る.. 極 大 が 存在 し, 630μ 物 質 の 残 存 を示. し て い る.し か し,こ の430mμ. 寛. 5.1.. 630mμ. 630mμ. 極 大 が 消 失 す る反応. 物質の異常分解. 物 質 の 異 常 分 解 に よ り, 610mμ. 20分 目に は, 665mμ 極 大 は む し ろ低 下 して い る.尚 こ. 帯 を 生 じ る こ と は 第1編. の 場 合 は1に 比 べ 吸光 度 が 著 し く低 く,更. た Ⅱ の 過 程 を 更 に 検 討 す る と,図10の. に610mμ. の 部 に別 の吸 収 帯 が み られ る.従 つ て,こ の 間 に 過 剰. た.す. のascorbin酸. 部 に 吸 収 帯 を 生 じ,こ. Fig.9. に よ る異 常 分解 を生 じた こ とは 明 らか. 630mμ. 物 質 生 成 後,速. The. Absorption. Hemin. to. Band. 17.6x2mg/dl 17.6 x 12 ". 610mƒÊ.. observed. during. Verdohemochrome. Hemin Ascorbic. at. Acid. 3.0 Acid. 17.6. mg/dl x. 12 ". 3.5m1 0.5 ". こ で,上. か に610mμ. Formation. 0.5m1 0.5 ". the. Oxidation. of. にのべ. 過 程 が み られ. れ が そ の ま まverdohemo. The Effect of Excessive Ascorbic Acid on the Verdohemochrome from Pyridine Hemin in 5% Pyridine Chloroform I: Solid Line Ascorbic II: Broken Line " ". Fig.10. な わ ち,. で の ぺ た.そ. の部に吸収. Pyridine. の.
(9) 試 験管 内 胆 汁 色 素 生 成 過 程 に 関 す る研 究(2) chromeの dine は,. 吸 収 曲 線 に 併 存 し て い る.従. chloroformの. 場 合 も, 630mμ. pyridine水. 必 要 量 のascorbin酸(O.176×0.5mg)を. つ て, pyri. 物質 の 異 常 分 解. の 場 合 と 同 様 の 形 で 起 る と考 え ら れ. る.. 験 で, verdollemochromeの. verdohemochromeの. 20%pyridine. Fig.11. 反 応 液 と し て,最. The Further Oxidation Pyridine Chloroform. よ う な 変 化 を 示 し て,黄. 少. こ の 過 程 は,第l編. of Verdohemochrome. with. Added 1 mg Ascorbic Acid to the Verdohemochrome in 20% Pyridine. 反 応 液 と し た 場 合 に,同. verdohemochromeのH202に. る分 解 過 程 と,極. め て 類 似 し て い る.し. chloroformの. よ か し,こ. 場 合,. は, pyridine水. 関 係 す る と推. 定 さ れ る.又verdohemochromeはa8corbin酸 対 し て, pyridine水. に. chloroformを. と し た 場 合 も, ascorbin酸. 生 成 は 困 難 で あ つ た.. ohlorofo㎜. を 友 応 液 と した 場 合 の 緑. 色 物 質 の性 状 chloroformを. 反 応 液 と し て, Pyridine 反 応 に よ り 得 た緑 色 物 質. を 粉 末 と し て 分 離 し,こ Negelein8)の. れ と,O.. Warburg. &. E.. 方 法 で 調 製 し たverdohemochrome. の 粉 末 に つ い て,そ. れ ぞ れ 比 較 検 討 し た.. 両 老 の 吸 収 曲 線 は 全 く 一 致 し て,次. 20%pyridine水:. 反応液. に よ る 異 常 分 解 は,. mμ 物 質 と, verdohemochromeの. 630. 両者 よ り起 ると. 考 え ら れ る.. の吸収極 大を示. 657,. 533,. 498,. Soret帯398. mp,. 20%pyridine. chloroform:. 665, 535, 500,. Soret. 帯398mμ.. pyridine. chloroformの. は, pyridine濃. 度2.5〜20%の. 度 と 関 係 な く, agcorbin酸 pyridine. Acid in 20%. し た.. 以 上 の 観 察 か ら, pyridine. 尚,. pyridine. の場 合 よ り一 層 不 安 定 で あ る と. 考 え ら れ る.. を. Solution of Chloroform. pyridine. 分解 に. H20が. Ascorbic. hemin‑ascorbin酸‑O2系. つ て. pyridine. verdohemochromeの. の 際 と 同 様,. 6.. の場. の 際 よ り著 し く速 く, H2O2の. 場 合 に 近 い 短 時 間 で 分 解 し た.従. 色 物 質 に 分 解 す るの が. で の べ た, 6O%pyridine水. verdohemochromeの. 様 の 実 験 で み ら れ た 過 程,及. ぴ そ の 際 行 つ た,. は, 60%pyridine水. を 結 晶 の ま ま 迫 加 す る と,. み られ た.. 分解. chloroformを. 用いた実. 生 成 が 宗 了 し た 時,更. に1.Omgのascorbin酸 図11の. 5.2.. 8453. chloroformで. 場合 に 起 る 副 分解 間 で は,. pyridine濃. 量 の み に 関 係 し た. は,. ascorbin酸. 60%. の 僅かな. 増 量 で も,著. 明 な 副 分 解 を 起 し,又pyridine. か ら630mμ. 物 質 生 成 過 程 が 遅 延 す る た め,純. hemin 粋 な. こ れ ら の20%Pyridine水 え た 場 合 の,可 化 は,第1編. 溶 液 にNagS2O4を. 加. 逆 還 元 性 及 び そ の 際 起 る吸 収 曲 線 の 変 に の べ た 成 績 に 一 致 し,両. 者 に 相 違 をみ. な か つ た. こ れ らの ア ル カ リ及 び 有 機 溶 媒 に 対 す る溶 解 性 は, 両 者 全 く一 致 し,第1編. に の べ た 通 り で あ つ た..
(10) 8454. 山. 胆 汁 色 素 に 関 す る 定 性 諸 反 応 は,す. 吹. べ て陰 性 で あ つ. た. 7.. bilivelnの. 生成. 方 法 に よ り, biliverdinの. 8.. 緑 色 と な つ た.こ. の 際,反. に 伴 う 吸 収 曲 線 の 経 時 的 変 化 を 観 察 し,そ. の 過 程 は分. 移. れ の 吸 収 曲 線 は665mμ. に極. 一 致 し た.. dirrtethylesterた. 以 上 の 諸 実 験 を, hemill. dimethyl. つ て,両. に 対 す る 溶 解 性 の 相 違 は,殆. esterに. つい 質的相. 者 のchloroform. dimethyl. 緑 色 物 質,す. verdohemocllromeは,第1. & E. Negelein8)の. 方 法 で 調 製 し たverdo. の 性 状 が 全 く 一 致 し,更. か らbiliverdinを. 抽 出 し て,そ. esterか. ら得 られ た. 次 に,第1編. あ るこ と を 確 認 し. で の べ た よ う に,. hemochrome生. とみ とめ ら. れ た.. ascorbin酸. 共 存 下,. れ は, pyridine. H2O2を. し, hemichrome,. hemochr0meを. れ と配 位 結 合 形 成 す る こ とは. 古 くか ら 知 ら れ て い る.又W．Kiisterlhは,hemin dimethyl. esterをchloroform又. 溶 か し,こ. れ にhydrazine又. dimethyl. 用 い る 反 応 は 困 難 な た め,純. 粋 の630mμ. は で き な か つ た.し. 者 は 反 応 液 のpyridine. か し,著. し て,そ. 反 応 と 共 に,. し て,こ. 確 か め た.従. 吸収像 を呈す る. 者 は,hemin及. びhemin. chloroformに. 形 成 し,こ. で 還 元 す る と, hemochromeと の 際,. chromeの. 5%pyridine. 溶 か. れ をascorbin酸. こ と を み と め た.こ 親 和 性 が,配. 位 鉄3価. chloroformで. は11emi れ を還 元 し. 全 なhemochrome像. を呈 す る. れ はheminとpyridineの. 結合. の 場 合 に 乏 し く,. 2価 と な る と. 増 強 さ れ る こ と を 示 す も の で137,そ dine水. の 性 状 はpyri. の 場 合 と 同 様 で あ る と 考 え ら れ る.そ. 曲 線 も, pyridine水. の 吸収. の場 合 と 相 違 はみ られな か つ. 反応液. heroin→630mμ. 来,本. よ うに 進 行 す るこ と を. 反 応 が 中 間 物 質 を 経 る2段. 酸‑H2O2系. し,こ. pyridine. 反 応+O2の2つ. ら630mμ. hemin‑ascorbin酸 階 反 応 の過 程 を 観 察. こ の よ う な 過 程 は, pyridine. 物 質 生 成 速 度 が 極 め て 大 きい よ. う な 条 件 で 観 察 さ れ,こ に,低. の 実 験 に よ りな さ れ て い. 型 的 な2段. れ を 実 証 し た.尚. heminか. hemin‑ascorbin. 者 は,直 接pyridine. 反 応 に よ り,典. 階 反応. の 目的 に は,後. 濃 度 のpyridine. chloroformが. で の べ るよ う 適す ることを. み と め た. 次 に, 630mp物 過 程 に は,還. 質 か らverdohemochrome生. 元 剤 は 不 要 で,酸. が8) 9)． 著 者 は, 2. 3.に chloroformの. 成. 素 が 必 要 と され てい る. の べ た 実 験 で, pyridine. 場 合 も 同様 の 関 係 に あ る こ と を確 か め. た.. た. 本 編 に の べ た 実 験 は,す formを. れ が その ま ま. chloroformを. 反 応 は, pyridine. で あ る こ と の 確 認 は,. O2系. な る こ と をた しか め. 吸 収 曲 線 は 不 完 全 で あ る が,こ. て 得 ら れ る も の は,完. に のみ. 吸 収 曲線 に移 行. す る 過 程 を 観 察 し, pyridine. た8) 9).著. た.こ. 物 質の 生成. の 過 程 を 観 察 し, 630mμ. verdohemochromeの. と し た 場 合 も,本. はpyridineとhydra. esterをpyridine. す と, hemichromeを. H2O2を. はBenzeneに. 加 え る と, hemochromeの. こ と を 報 告 し て い る.著. 粋 に. pyridine. 反 応 液 と し た こ の 実 験 で は,. 物 質 →verdohemochromeの zineを. heminに,. 作 用 さ せ る と,純. 極 大 を 示 す 吸 収 曲 線 を 得 た.そ に 溶 解 し て,そ. らverdo.. に 吸収 極 大 を 示. 得 ら れ る こ と が 知 ら れ て い る8) 9) 18).. 濃 度 を5%と. 総 括 並 び に 考 按. heminか. 成 過 程 に は, 630mμ. chloroformを. 編 に の べ た と 同 様 の 性 状 を 示 し, ester型. heminはpyridine水. にこれ. の 直 接 前 駆 物 質,す. verdohemochromeで. す 中 間 物 質 が 存 在 し,そ. ん ど 影 響 し な い も の と考. え ら れ る.尚hemin. の 場 合 と全 く同様 で あ る. た.. 場 合 と 同 様 で,本. 違 は 認 め ら れ な か つ た.従. 応. こ に 得 ら れ た 緑 色 物 質 は,O.. hemochromeと,そ. な わ ち,. 実験. て 行 つ た 成 績 は, heminの. な わ ち,. Warburg. 素 は0.5%HC1に. 酸biliverdinに. hemin. し て 緑 色 物 質 を 生 じ る こ と を み と め た.そ. こ と を 認 め た.又,こ. 抽 出 を 試 み る と,第1編. に の べ た と 同 様 の 過 程 を 経 て,色. 大 を 示 し,塩. 寛. 光 学 的 に, 20%pyridine水. 前 の 実 験 で 得 た 緑 色 物 質 か ら, R.Lemberg10)の. り,青. 隆. 反 応 液 と し て,こ. べ て,. pyridine. chloro. の 中 で 形 成 さ れ たpyridine. hemichrome(hemochrome)にascorbin酸. と酸. 素 と を 作 用 さ せ た 反 応 を 中 心 に,種. 々の 検 討 を加 えた. 2. 3. の 実 験 か ら 次 の こ と が 考 え ら れ る.す. ち,ascorbin酸 chromeの. heroinの20%pyridine. chloroform溶. と 酸 素 を 作 用 さ せ る と,最. 液 に. 終反応産物 と. ascorbic酸 たpyridine. なわ. を 加 え た 直 後 に み ら れ るhemo‑. 吸 収 極 大 は,そ. の 不 足 量 で も,十. い た 場 合 と 同 じ程 度 で あ る が,尚 chrome像. も の で あ る.. ascorbin酸. 尚,. と な つ て い る.従. 途 中 か らhemi. つ て,反. 応 の 開 始時. に よ り還 元 さ れ てhemocllromeと heminは,そ. 分 量 を用. の ま ま630mμ. なつ 物 質への.
(11) 試 験 管 内 胆 汁 色 素 生 成 過 程 に関 す る研 究(2) pyridine水. 分 解 に 進 む と は 考 え られ な い.こ. れ は 当 然R.. berg14)が. の 一 部 が 分 解 を うけ. い つ て い る よ う に,そ. て630mμ. 物 質 と な り,残. か え り,こ. れ を く り返 し な が ら630mμ. の で,そ. の た め,初. Lem.. りは 再 びhernichromeに 物 質 とな る も. 期 の 還 元 に は 十 分 で も,途. 中 で不. 以 上 の 実 験 及 び 観 察 か ら,本 cllloroformの. 反 応 は, pyridine. 場 合 も, pyridine水. の 場 合 と同 様 の. 収 は11emochrome像. の緑色部吸. と し て 観 察 さ れ る が, 2. 4の 実. 験 で の べ た よ う に, ascorbin酸. を極 め て微 量 ず つ 反. 応 液 に 与 え る よ う な 条 件 で は, hemochrome像 跡 程 度 で,殆. ん どhemichrome像. と を み と め た.分. は痕. と し.(経 過 す る こ. 室 形 見15)の,硫. 酸hydrazineを. で 観 察 さ れ て い る が.こ. は. 様 の過. 用 い た実 験. の 場 合 はascorbin酸. との還. 元 性 の 相 違 に よ る も の で あ る. hemin及. びそ の 誘 導 体 か ら 緑 色 物 質 生 成 実. らpyridineが. 用 い ら れ て い る が,そ. の濃. 度 に つ い て は 余 り 多 く の 関 心 が は ら わ れ て い な い. R. Lemberg8)はhematinとascorbin酸 つ い て, pyridine つ て い る.教 て,本. 5〜20%の. 間 で は 影 響 が な い とい. 反 応 の 至 適pyridine濃. 量 か らみ. 度 は10%で.反. 応速度. 度 が 高 い 程 大 き い と の べ て い る.木. 原5)はheminと. が 最 適 と し て い る.彼. で, pyridine濃. 度 が 高 い 程,反. み と め て い る(未 発 表).著 の 場 合,特. は 別 に,同. 応 が 遅延す ることを. 者 は 第1編 にascorbin酸. 量 との 関 係 に. pyridine水. と こ ろ で, pyridine. chloroformを. 反 応 液 と した. 度 の 影 響 は,反. に 著 明 で あ つ た.す 630mμ. pyridine濃. ほ ぼ 規 則 的 に 低 下 し, 60%の た.又verdohernochrorne収 一 定 の 場 合 , pyridine. heminか. ら. 度の 増 加 に 伴 い. 場 合 に は著 し く 遅 延 し 量 は,. 2.5〜20%の. ascorbin酸. 量. 間 では ほ ぼ 一 定. は 著 明 に 低 下 す る こ と を み と め た.. こ れ をpyridine水 bergの. 応 速 度 に 対 し て特. な わ ち, pyridine. 物 質 生 成 速 度 は,. で, 60%で. とpyridine. の 場 合 と 比 較 す る に,. 成 績 と は 明 ら か に 異 る.著. R. Lem.. 者 は 第1編. で,. 度20%で. chloroformの. は,. 場 合.反 つ て,本. 反 応 の 反 応 速 度,特. 分解 速 度. にpyridine. 及 びchloroformに. P yridine濃. heminの. 関 係 な く, pyridine自. heroin及. 産 物 の 酸 化 還 元 電 位 が 影 響 さ れ て,そ. Cuイ. オ ン のascorbin酸. で,添. 加pyridine量. れ らの 触媒 と し. Feの. 場 合 に も類 似 し た こ と が考. Lemberg14)に. ら630mμ. よ る と,. heme. 生 じるこ. れ に よ る と,高. で は,Fe〈Pyr.Pyr . +H2O2=FeくPyr.. 濃 度 HBO2. 右 側 へ の 反 応 が 起 り 難 い こ と も 考 え ら れ,. 又 こ れ が630mμ. 物 質 生 成 に 向 わ ず, はcatalatic)に. heroinの pyridine. chloroformを. 反 応 液 と し た場 合. 量 と の 関 係 に つ い て み る と, pyri. 度2.5〜60%で pyridine. べ た よ うに,. H2O2がper. 処 理 さ れ る と, pyri. 分 解 は 遅 延 す る こ と に な る.. のascorbin酸. な わ ち,. he. ずferrous. compoundが. と に 始 ま る と さ れ て い る.こ. dine. pyridine. 物 質 へ の 分 解 は,先. peroxide. +Pyr.で. 応 が 遅 延 し,. 用 が 増 強 す る こ と をみ と め て. れ はheme. llydrogen. 村16)は. 酸 化 触媒 作 用 に 関 す る実 験 の 増 加 に 伴 い,反. 又Cuのperoxidase作. え ら れ る. R.. の. びそ の 分 解. て の 性 状 が 変 化 す る た め と 考 え ら れ る.富. minか. 身. 度 の こ の よ う な 影 響 に つ い て は,そ. 濃 度 の 相 違 に よ り, pyridine. dine濃 場 合 のpyridine濃. 場 合 と同様. 応 時 間 は ほ ぼ 同 様 で あ る こ と を み と め た.従. 次 に,. つ い て 著 し い 相 違 が あ る こ と を の べ た.. pyridine濃. chloroformの. の 傾 向 を.み と め た.又pyridine濃. oaidatic(又 で. 20%と60%. 成 前の条件. 量 か ら 推 定 す る こ とに は 難 点 が あ. 上 で, pyridine. pyridine V中. じ実験. 出法 に問 題 が. 者 が 対 照 と し て 行 つ た 実 験 で は.. 度10%以. 酵 母 に よ る 同 様 の 実 験 で, 60%. pyridine水. pyridine水. を. biliverdin収. い る.こ. の酸化に. 室 の 倉 恒4)はbiliverdin収. はpyridine濃. のbiliverdin抽. れ はascorbin酸. 量 に よ る もの で,. の 一定 量 を 用 い. verdohemochrome生. に 直 接 関 係 す る と 考 え ら れ る.. そ の 中 間 型 の 種 々 の 像 を 呈 す る こ と に な る.同. 験 に は,専. 恒 の 成 績 は,そ. つ て,. 上 の 点 を考 慮 す る必 要 が あ. は,水. 一 定 量 以 下 で は そ の 量 に 応 じ て ,両 者 ど ち らか,又. 従 来,. ascorbin酸. 光 学 的 に は極 め て 特 異 な 過程 と して. 観 察 さ れ る が,こ. 程 が,教. 成 績 は.. の 場 合,. 5%pyri.. 溶 解 性 は 低 下 す る.従. た も の と 解 さ れ る の で,以. る.著. を 用 い た 本 反 応 で は,そ. 度 に よ つ て 所 要. 量 は 異 る こ と を 指 摘 し た.又,. Lembergの. あ り,こ. 反 応 構 造 か ら な つ て い る と 考 え ら れ る. 尚ascorbin酸. R.. pyridine濃. で はheminの. る.倉. 足 し て き た も の と 考 え られ る.. の 場 合,. ascorbin酸 dine水. 8455. ほ ぼ 同 一 の 傾 向 を み と め た.す heminの. pyridine濃. 同 一pyridine濃. 分 解 速 度 は,先. きに の. 度 に よ つ て 影 響 さ れ る が,. 度 で は, ascorbin酸. 量 に対 応 し て. 増 減 し た.又ascorbin酸. の 最 少 必 要 量 は, pyridine. 濃 度 に 関 係 な く, hemin. l. Molに. 対 し て6.3. の 割 と な つ た.そ. し て, verdollemochrome収. こ のascorbin酸. 量 で 最 高 を 示 し,こ. Mol 量 は,. れ を過 ぎ る とそ. の 量 に 応 じて ほ ぼ 規 則 的 に低 下 す るこ と をみ とめ た こ の 成 績 は60%pyridine水. の 場 合 と極 め て 類 似 して.
(12) 8456. 山. い る が,. 20%pyridine水. な わ ち.後. の 場 合 と は 著 し く 異 る.す. 者 で は.. hemin. Mo1のascorbin酸 量 ま で,殆. l. Molに. を 要 し(約3倍). 得 ら れ る .従. ascorbin酸. 量 は,全. chloroform)か 反 応 液 で は,水. れ の 約4倍. が 少 い(60%. が 多 い(20%. 較 的 少 量 で あ る こ と が 分 る.こ. の 際 水 を含 まな い場 合. はPyridine濃. 度 に よ る 相 違 が な い か ら,必. 水 の 有 無 又 は そ の 量 に よ つ て 定 ま り,. pyridineと は,. 要ascor. ascorbin酸. が 水 とpyridineに. 者. 溶 解 し, chloro. 先 き に の べ た, pyridine. 還 元 電 位 や 触 媒 能 に つ い て も,同 少 に よ る 影 響 が 考 え ら れ る.菊 つ て, pyridine. hemin等. 時 に,水 地17)は. の酸化. の 存 否,多. 結合が種々に影. 響 さ れ る と 考 え て い る. 本 反 応 液 の 場 合 に み ら れ た 副 分 解 の は げ し さ も,以. で の べ た,. く類 似 し.更. methyl. の 場 合 と全. に そ れ よ り著 明 で あ つ た.. 以 上 の 諸 実 験 に つ い て, esterの. chloroformに. hemin. hemin. di. 間 に は 有 意 の 差 は み ら れ な か つ た. 対 す る 溶 解 性 の 相 違 は,殆. ん ど影 響 な. い も の と 考 え ら れ る.. hoI, benzene等. の 各 混 液 で 行 つ て も,. 場 合 と 同 様,緑. 色 物 質 の 生 成 を み と め た.. 以 上 の 考 察 か ら,本 と, pyridine pyridine. 一〇2系. 一 の 過 程 を 経 て, biliverdinの. 一H2O2+O2の2っ. 時 に,明. 度pyridine. 反 応 は,. 光化学的 に 同. 直接前駆 物質 であ る. 粋な. の 反 応.. ら か に 観 察 で き る.こ. chloroform中. で は,. 物 質 生 成 が,殆. れ は.低. Pyridine. 濃. hemin. ん ど 瞬 間 的 な 速 度 で 進 行'. す る た め で あ る. 3.. 本 反 応 液 で 得 ら れ るverdohemochromeは. を 反 応 液 と し て 得 ら れ る も の と,そ. 状 は 全 く一 致 し,こ. れ か らHC1に. の性. よ りbiliverdin. が 得 ら れ る. Pyridine. heminか. ら630mμ. で は 極 め て 速 く.pyridine濃 し.高. 濃 度pyridineで. 物 質 生 成速 度 濃 度Pyridine. 度の 増 加 に 伴 い 低下. は 著 し く遅 延 す る ・ こ れ は 反 関 係 な く, pyridine自. 身 に 直 接 関 係 す る. 一 方,pyridine濃 ascorbin酸. 度 が 一 定 の 場 合,そ. 本 反 応 液 の 場 合,. 要 す るascorbin酸. 6. 20%以. の 速 度 は'. 量 に 対 応 す る.. く, hemin. 反 応 液 と し た 場 合 も, pyri. の 場 合 と 同 様 の 反 応 構 造 で,分. hemin‑ascorbin酸. dine水. 編 に の べ た 実 験 結 果 を総 括 す る. chloroformを. dine水. alco. chloroformの. llemin‑ascorbin酸. 物質を中間、. 物 質 の み と 考 え ら れ る 時 期 が 観 察 さ れ, pyri. 過 程 が,同. 5. methyl. の反応構造. 下 の 反 応 液 で は,純. 応 液 の 水 又 はchloroformに. と. 又 本 反 応 をPyridineとacetone,. 度10%以. は. asρorbinム 酸 量 が 一 定 の 場 合,低. の場合の副分. 60%pridine水. pyridine濃. 630mμ. 4.. 上 の 考 え か ら説 明 さ れ る と 思 わ れ る.こ 解 も,第1編. 2.. pyridine水. 水の存 否によ. heminとH2O2の. 生 じ る.そ. の 場 合 と 同 様 で, 630mμ. か ら630mμ. 溶 けな い こ とが 何 等 か の 形 で関 係 して い る と. 考 え る.又. 終 的 にverdohemochromeを. dine. は 直 接 関 係 な い も の と 考 え ら れ る.著. formに. 反 応 液 と し た 場 合 も, pyri. 反 応 産 物 と し て 進 行 す る.. 合 よ り比. bin酸. 量 は,. 反 応 は,. の 場 合 と 分 光 学 的 に 同 様 の 過 程 を 示 し て,最. はPyridine水. Pyridine水). の 結 果 を得 た 一. hemin‑ascQrbin酸‑O2系. chloroformを. dine水. 反 応 の必 要. pyridine水)場. Pyridine. Pyridine. く 水 を 含 ま な い(pyridine. 又 は,水. 寛. 1.. 量 的 にverdo.. つ て,本. 隆. 合 と 対 比 し て 分 光 化 学 的 に 検 討 し,次. 対 し て18.9. ,こ. ん ど 副 分 解 を 伴 わ ず,定. hemochromeが. 吹. verdohemochrome生. 量 は, Pyridine濃. l Molに. 成 に 度 に 関 係 な. 対 し て6.3Mo1で,. 20%pyri. の 場 合 の 弱 と な る. verdohemochrome収 下 で は,そ. 量 のascorbin酸. 量 は, Pyridine濃. れ に 関 係 な く,上 で 最 も よ く,こ. に 低 下 す る. pyridine濃. 度60%で. 度. に記 し た 最 少 必 要. れ を過 ぎ る と規 則 的 は著 し く低 下 す. る. verdohemochromeを. 生 じ る こ と を み と め た.従. つ. て,本. 反 応 に は 特 に 水 の 存 在 は 必 要 で な い と 考 え られ. る.反. 応 速 度 及 びverdohemochrome収. て,本. 反 応 液 を 用 い た 場 合 の 至 適 条 件 は, pyridine. 濃 度2.5〜5%, 酸6.3Mo1で. hemin. 対 し てascorbin. 本 反 応 の 反 応 速 度 はpyridille濃. verdohemochrome収. 論 反 応 液 と し て,. 8.. pyridine. 成 過 程 を, pyridine水. を反 応 液 と し た 場. 量 はascorbin酸. 本 反 応 でverdohernochrome生. ascorbin酸. 量 は,反. 量 か ら影響. 成 に 要 す る. 応 液 の 水 の 存 否 及 び その 量 に関. が 少 い 程 少 量 と な り, pyridineと. 係 し な い.又,. 反 応 に よ るverdohemo. 度 に よ り,又. さ れ 易 い.. 係 し,水. 結. chloroformを. hernia‑ascorbin酸‑O2系 chrome生. Molに. あ る. V. pyridine. l. 量 か らみ. 7.. pyridine. verdohemochromeの 著 明 な 影 響 を う け,水. hemin,. は 直接 関. 630mμ. 触 媒 作 用 も,前. 物 質 及 び. 者 と関 係 して. が 少 い 程 増 強 さ れ る.本. み ら れ る副 分 解 も こ れ と 同 様 の 関 係 に あ る.. 反 応に.
(13) 試 験 管 内 胆 汁 色 素 生 成過 程 に 関 す る研 究(2) 9.. 本 反 応 液 を 用 い た 場 合 の 副 分 解 も, pyridine. 水 の 場 合 と 同 様, chromeの. 630mμ. heminの. 異 常 分 解 に 起 因 す る.. 13,. hol. Pyridine. 11. 本 反 応 液 を 用 い た 場 合 の 至 適 条 件 は 反 応 速 度 及. dine. 度2.5〜5%,. hemin. l. Molに. &. esterを. 用 い た 場 合 も,. L.. Brann,. Klemperer,. S.. G.,. 3). J.. Lemberg,. R.,. Z.. Biochem.. J.,. R.. BioL B.. 32,. physiol.. H.. de. Chem.,. 112,. Cortis‑Jones, 149,. &. 1938;. ibid... 倉 恒:. 医 学 研 究,. 24,. 1849.. 1954.. 5). 木 原:. 医 学 研 究,. 29,. 1102,. 1959.. 6). Fischer,. H.. Libowitzky, 7). Kench, son,. 8). J.. C.. Biochem.,. Warburg, Chem.. E.,. & 63,. 265,. Gardikas, 47.. O. Ges.,. ibid.,. 129.. 255, 191, &. F.. 1935.. M.. Norrie, 171,. Z.. ibid., H.,. &. 625,. 32,. Libowitzky,. Chem.,251,198,1938;. methyl. alco‑. を 反 応 液 と し て も, pyri‑. 場 合 と 同 様verdohemochrome. 209,. 1938.. physiol.. 菊 地:. 生 化 学,. F.. Negelein,. 1816,. 1930.. Ber.. 139,. 11). R., W.. Kiister.. W.,. 137,. 13). 菊 地:. 生 化 学,. 14). Lemberg,. 形 見,日. 16). 富 村:. Dtsch.. 17). 1950;. 菊 地&富. Loclcwood,. 363,. 村ibid.,. 94,. Chem.,. J. physiol.,. 23, &. and. 44,. J. W.. Bile. 生 化 学,. t51,. 98. 1926.. 1951. Legge,. New. York,. 本 血 液 学 会 雑 誌, 生 化 学,. 菊 地:. Legge,. t47.404,1946;. 24,. 24,. 29,. 112, 23,. Hematin. Pigments,. Inc.,. ibid.,. J. W.. 1942.. R.. 1952;. &. 1941.. physiol.. Am.. ibid.,. 15). H.. Z.. J. E.,. Publishers, Wilkin‑. 214,. J.. 35.. 12)Davis,. ound. 22,. 1952,. Lemberg, Biochem.. 1938;. 1950.. E.. 10). 1940. J.. 日 本 血 液 学 会 総 会 及 び 日本 生. 献 9). Chem.,. Meio,. 4). H.&. benzene等. chloroformの. 24, E.. pyridine. 化 学 会 中 国 四 国 地 方 会 で 発 表 し た). 68.27,1927. Barron,. acetone,. 対 し てascorbin酸. 文 R.. 対す る両者の. ん ど 関 係 し な い.. (本 論 文 要 旨 は 第20回. dimethyl. Kuhn,. cbloroformに. が 得 ら れ る.. 量 か ら 見 て, pyridine濃. 場 合 で あ る.. 12. hemin. ２). pyridine. 10. 本 反 応 に は 水 の 存 在 を 特 に 必 要 と し な い.. 6.3Molの. 1). 際 と 同 様 で,. 溶 解 性 の 相 違 は,殆. 物 質 及 びverdohemo. びverdohemochrome収. 8457. 38,. 21, 1952;. 1952. 1951.. Comp‑. Interscience 1949. 520.. 1958.. ibid.,. 24,. 33,.
(14) 8458. 山. Studies Part. 2. on. the. Studies tion. on. 吹. Formation. 寛. Process. the Influence. Process. 隆. of Bile. Pigment. of the Reaction. of Verdohemochrome. in Vitro. Solution. from. to the. Hemin. Forma. Derivatives. By Takahiro The First Department. of Internal. YAMABUKI. Medicine, Okayama University,. (Director:. Medical School. Prof. K. Kosaka). Conclusions The of cally as. formation. ascorbic. of. the. in. use. verdohemochrome. of. pyridine. comparison. from. chloroform. with. that. on. pyridine. as. the. the. use. of. hemin. reaction. by O2. in. solution. pyridine. the. was. water.. And. presence. spectrochemi. the. results. were. follows. 1.. The. of. ascorbic. formation. metrically was. pyridine. finally and. was. 2.. On. reaction. found. the. at. The. the. low. 3.. property. The. when. the. was. had. in. solution. pyridine. at. that. same. and. to. at. the. that. 630mƒÊ.,. prese. spectrophoto. water. verdohemo. on as. concentration. pure. compound. formation. 630mƒÊ.. the. pyridine. the. use. of. a intermediate. and. were. of. with. momentary. of. clearly. compound. the. the. %. in. the. the. of. same. with. the. from. the. reaction. at. pyridine. the. maxi. maximum. use. as. absorption. verdohemochrome. absorption. on. 10. compound. observed the. speed. below with. process. hemin. from. 630mƒÊ.. chloroform. Mol.. to. it's. acid. was kept. pyridine in. chloro. pyridine. water. kept. not. the. low. of to. And. pyridine. water. or to. it. 630mƒÊ. (2.5-5. decreased. it. decreased. chloroform. in. the. at. concentration. constant.. proportional. ascorbic. hemin. in. maximum. with remarka. the. concentration. reaction. of. ascorbic. constant. acid. chloroform of. in. hemin. absorption. pyridine. was. and. velocity was. Mol.. of. the. concentration. itself,. of. hemin. pyridine. with. use. higher. pyridine. pyridine 1. the. ascorbic at. hand,. in. compound on. concentration. heroin 6.3. rapid. pyridine. from. HC1.. the. concentration. necessary. by. of. from. obtained. it. very. to. other. obtained. verdohemochrome. of. relation. the. pyridine. pyridine. of was. only the. pyridine. with. concentration;. pyridine. The. was. by. concentration. On when. it. of. from. velocity. pyridine. solution.. and. by O2. reaction. maximum. the. have. both. maximum. obtained. hemin. This. from. with to. And. formed. of. formation. increasing. 5.. use. absorption. verdohemochrome. that. was. pyridine. acid,. the. thought. caused. of. with. biliverdin. bly.. the. construction. chloroform. absorption. was. on. reaction. 630mƒÊ.. were. that. hemin. the. concentration.. The. 4.. with. as. reaction.. at. the. pyridine. chloroform. with. stadium. hemin. agreed. from. this. from. pyridine. compound. observed.. results. pyridine. form. The. pyridine. was. with. above. from. produced.. maximum. compound. of. process. the. 630mƒÊ.. absorption. %),. of. verdohemochrome. use. same. in. use. of. the. the. solution,. mum. on the. water. product,. and. process. acid. showed. chrome. was and. it. for not. the. related. formation. was. equivalent. related. to. to. of. the to. verdohemochrome. pyridine 1/3. on. concentration, the. use. of. 20. water.. 6.. The. yield. concentration the. on. observed,. nce. in. process. acid. above,. of of. but. verdohemohcrome. 20%, it. became. and. it less. was. was. the. regularly. best. not with. with. smallest increasing. the amount. ascorbic. pyridine of acid. concentration ascorbic concentration. up acid. to. discribed over. the. a.
(15) 試 験 管 内 胆 汁 色 素 生 成 過 程 に関 す る研 究(2). above.. It 7.. •@the. became. The. yield 8.. of. relation. less. water. dine.. The. the. In. 11.. The. the 13.. pyridine. On. the on. Mol.. of. use. difference. hemin their. alcohol chloroform.. and. of. pyridine. in. the. had. to. the. acid.. and. relation. the. of. ascorbic. solution,. direct. relation. and. verdohemochrome. reaction no. decrease. pyridine. of. hemin,. had. with. of. formation. it. the. concentration. with. compound. the. with. former. water.. the pyri. and. The. the it. was. secondary. above.. chloroform maximum. at. was. due. 630mƒÊ.. and. to. the. abnormal. verdohemochrome. water. water. pyridine. acid. to. was. not. necessary.. chloroform 1. Mol.. was. of. hemin,. in on. 2.5-5•“ the. of view. pyridine point. concen of. reaction. yield. dimethyl solubility. Verdohemochrome. pyridine. of. of of. ascorbic. of of. pyridine. use. water. pyridine. concentration. the. of. absorption. existence. the. verdohemochrome the. use the. the. the. acid. relation. the. with of. for. with. same. on. use. reaction,. 6.3. methyl of. the. acid. verdohemochrome reinforced. had. compound. on. ascorbic action. and. by by. quantity. the. was. reaction the. optimum. and. 12. and. that this. and. velocity. use. as. 10.. tration. reaction. secondary of. it. ascorbic. catalytic. 630mƒÊ. and. influenced. influenced. it's. was. the. at. above. decomposition same. hand,. influenced, of. easily. and. less. chloroform.. easily. of. presence the. maximum. reaction. as. the. other. remarkably. pyridine was. concentration. with. the. 60%. reaction was. necessary. absorption. in. th. decreased,. On. 9,. less of. verdohemochrome. The. had. much. velocity. 8459. was and. obtained pyridine. ester, to. similar. chloroform from. benzene. results almost. pyridine etc.. hemin as. the. were had. obtained no. on reaction. to. that. of. hemin. relation. the. use solution. of. pyridine as. acetone, same. as. the.
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