遺伝子検査キットカタログ

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(1)PCR／リアルタイム PCR 関連製品. （2018 年 5月改訂）.

(2) タカラバイオの検査システム「試薬キット＋qPCR 装置」＝「検査システム」. ＋ ★ 試薬キット ★. ★ qPCR 装置 ★. ◆厚生労働省通知収載の「検査システム」・腸管出血性大腸菌. 「腸管出血性大腸菌 O26、O103、O111、O121、O145 及び O157 の検査法について」厚労省医薬食品局食品安全部監視安全課長通知食安監発 1120 第1号. ・腸管出血性大腸菌. ・ノロウイルス. ｢ノロウイルスの検出法について｣厚労省医薬食品局食品安全部監視安全課長通知食安監発第1105001号別添最終改正：平成 25 年10月22日付食安監発 1022 第1号. ・ノロウイルス・レジオネラ. ・レジオネラ. 「第 4 版レジオネラ症防止指針」（平成 29 年 8月、公益財団法人日本建築衛生管理教育センター発刊）「循環式浴槽におけるレジオネラ症防止対策マニュアル」の改正について厚労省健康局生活衛生課長通知健衛発 0331第 7号. ・クリプトスポリジウム・ジアルジア. ・クリプトスポリジウム、ジアルジア. 「水道に関するクリプトスポリジウム等の検出のための検査方法の見直し等について」厚労省健康局水道課長通知健水発 0302 第 2～4 号. -1-. ǀ 遺伝子検査キットカタログ.

(3) ・トータルサポート. 1.「システム」ならではの安心サポート！「試薬」と「装置」を提供するタカラバイオは、システムとしての性能を保証します。システムなら、お問合せ窓口も一本で安心です。. 2. 初心者でも楽々かんたん！簡単操作のプレミックス試薬、日本語表記のソフトウェアの組合せで、初心者の方でもスムーズにご利用いただけます。. 3. 装置一台で、様々な検査項目に対応！幅広い項目の検査に対応する試薬キットを準備しています。カタログに無い項目は、カスタムで承ります。. ターゲット. 製品名. 掲載ページ. 試薬と装置が通知法に収載されています。 CycleavePCR® O-157（VT gene）Screening Kit Ver.2.0. 腸管出血性大腸菌. 13. CycleavePCR EHEC（O157/O26）Typing Kit ®. CycleavePCR® EHEC（O111/O121）Typing Kit. 14. CycleavePCR® EHEC（O103/O145）Typing Kit. クリプトスポリジウム. Cycleave RT-PCR Cryptosporidium（18S rRNA）Detection Kit. ジアルジア. Cycleave RT-PCR Giardia（18S rRNA）Detection Kit. 31. 通知法に収載されたプライマー／プローブ配列を採用した試薬です。. ノロウイルス. TaKaRa qPCR Norovirus（GI/GII）Typing Kit . 11. 第 4 版レジオネラ症防止指針に収載されています。. レジオネラ属菌. CycleavePCR® Legionella（16S rRNA）Detection Kit. 30. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. -2-.

(4) タカラバイオ遺伝子検査キットカタログ. 【目次】. 掲載ページ. タカラバイオの検査システム・トータルサポート検便検査. 動物感染症検査 39 ・ウシ白血病ウイルス、サルモネラ血清型. 5 ・ノロウイルス 7 ・腸管系病原細菌. 食中毒検査. 細胞検査 41 ・HIV、HTLV、HCV、HBV、ParvoB19. 11 ・ノロウイルス. ・EBV、CMV、WNV. 12 ・クドアセプテンプンクタータ. 42 ・再生医療等製品のマイコプラズマ否定試験. 13 ・腸管出血性大腸菌（ベロ毒素（VT）遺伝子）. 43 ・マイコプラズマ. 14 ・腸管出血性大腸菌（O 抗原型遺伝子） 15 ・サルモネラ、腸炎ビブリオ、セレウス菌、. 微生物推定解析╱細菌叢解析. ・カンピロバクター、リステリアモノサイトゲネス. 45 ・サンガーシーケンスによる微生物推定解析. ・黄色ブドウ球菌. 47 ・次世代シーケンスによる細菌叢解析. 19 ・QuickPrimer（Real Time）シリーズ 20 ・MORA シリーズ 21 ・特殊細菌 Primer Set、Positive Control シリーズ. カスタム対応 49 ・リアルタイム PCR 検出系のカスタム設計 51 ・カスタムキット製造. 衛生指標菌検査. 核酸抽出. 22 ・一般細菌 23 ・腸内細菌科菌群. 53 ・DNA 簡易抽出 54 ・スピンカラム精製. 品種判別. 装置. 24 ・コメ判別. 58 ・リアルタイム PCR 装置. 25 ・肉種判別. 59 ・サーマルサイクラー. 水質検査 27 ・レジオネラ属菌（生菌検出、生菌死菌検出） 31 ・クリプトスポリジウム属、ジアルジア. 技術紹介 60 ・PCR キャリーオーバー防止 61 ・EMA-PCR 法（グラム陽性菌、グラム陰性菌）. ヒト感染症検査 34 ・呼吸器感染症起因菌・起因ウイルス. 遺伝子検出について. 35 ・B 群溶血性レンサ球菌（GBS）. 63 ・食品・環境検査における各種検査法について. 36 ・サイトメガロウイルス、EB ウイルス. 64 ・遺伝子検出・遺伝子検査の用途. 37 ・ヒトパピローマウイルス. ヒトゲノムタイピング 38 ・ALDH2. ・PCR、qPCR の原理 65 ・蛍光検出法. 付録 66 遺伝子検査を始めるにあたって. ・FLT3/ITD. 68 製品一覧 2018 年 5 月発行. -3-. ǀ 遺伝子検査キットカタログ.

(5) 検便検査検出ターゲット ● ノロウイルス ● 腸管系病原細菌（腸管出血性大腸菌、サルモネラ、赤痢菌）. タカラバイオの検便検査システム試薬キット. ・オールインワンキットですぐに検査可能・内部コントロールにより偽陰性をモニター・チューブの蓋の色分けで取り違いを防止. 判定ツール. ・客観的な判定をサポート・出力ファイルをそのまま読み込み可能・ひと目で判る判定結果. リアルタイムPCR 装置. ・日本語ソフトウェアの搭載で楽々操作・検査用途に適した純正のチューブをご用意. システムならではの安心サポート！. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. -4-.

(6) 検便検査. リアルタイム PCR. 「リアルタイム PCR 法」によるノロウイルス検便検査用キット. TaKaRa ノロウイルス GⅠ/GⅡ検出キットVer.2 「大量調理施設衛生管理マニュアル」に則った検査が可能！. ターゲット遺伝子. リアルタイム PCR 装置の蛍光検出フィルター. GⅠ遺伝子. Cy5. GⅡ遺伝子. ROX. インターナルコントロール（IC）. FAM. 製品コード. 容量. 価格（税別）. RR297A. 100回. ¥128,000. ＜キットの内容＞簡易抽出試薬 ● 1. Lysis Buffer (NV) 5 リアルタイム PCR 試薬. ○ ● ● ●. 2. 3. 4. 5.. PCR Buffer (NV) 6 Enzyme Mix (NV) 6 NV Primer/Probe Mix 6 NV Positive Control DNA 4. ※ ●「リアルタイム PCR 法」で「大量調理施設衛生管理マニュアル 1」に則った検査が可能です。. 厚生労働省通知法. 2 に収載されたプライマー・プローブ配列を採用した検査キットです。. ※. ★大量調理衛生管理マニュアルに記載された「概ね便1g 当たり10 5 オーダーのノロウイルスを検出できる検査法」に対応しています。 1：「大量調理施設衛生管理マニュアル」（平成 9 年 3 月 24 日付け衛食第 85 号別添最終改正：平成 29 年 6 月16 日付け生食発 0616 第1号） ※ 2：｢ノロウイルスの検出法について｣厚生労働省医薬食品局食品安全部監視安全課（平成15 年11月5日付け食安監発第1105001号別添最終改正：平成 25 年10月22日付け食安監発1022 第1号） ※. ●. 反応時間約 47 分※で完了。各種装置で使用可能 ※Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific 社）の場合の反応時間です。Thermal Cycler Dice ® Real Time System III の場合、反応時間は 53 分です。各社機種に対応しております。詳しくはお問合せください。. ●. カラム精製、熱処理は不要！鋳型の調製は簡単な前処理だけで OK Lysis Buffer (NV) 5 に検便検体懸濁液を添加するだけで、鋳型の簡易調製が完了します。. ●. カラムによる精製は不要. PCR 増幅産物のキャリーオーバーによる偽陽性を防止 PCR は非常に高感度な検出方法であるため、以前に行った PCR 増幅産物のキャリーオーバーによる偽陽性が生じる場合がありますが、UNG 処理を追加することで偽陽性を簡単に防止できます。 ★UNG を利用してキャリーオーバーの影響を防止する原理については 60 ページをご覧ください。. ●. 1チューブで GⅠ遺伝子、GⅡ遺伝子、インターナルコントロールを検出判定イメージ GⅠ （Cy5）. -5-. GⅠ（Cy5）、GⅡ（ROX）の増幅曲線を確認します。ともに増幅が無い場合は IC（FAM）の増幅結果を確認し、偽陰性をモニターします。. GⅡ （ROX）. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. IC （FAM）.

(7) 検便検査 ●. リアルタイム PCR. 1ステップリアルタイム RT-PCR の採用により1時間半以内に結果判定！. 即日報告の可能性が広がります。. サンプル＆反応液の調製＋反応時間＋判定を含めても、最短で 1 時間半以内の結果報告が可能となりました。. 検体準備. 簡易抽出. 1ステップリアルタイム RT-PCR 解析. PCR 反応液調製. PCR 反応液を添加する Lysis Buffer を 5 µl ずつ分注採取した便を水等に懸濁. 検便懸濁液（遠心済）. 10,000～15,000rpmで 5 分間遠心分離上清をサンプルとして使用. 検便懸濁液の上清1 µl を分注した Lysis Buffer に添加. カラムによる精製は不要. 熱処理不要. ■検出例：ポジティブコントロールの段階希釈反応 GⅠ （Cy5). GⅡ（ROX). GⅠ/GⅡポジティブコントロールを、1/10 の希釈率で段階希釈したサンプルを調製した。 TaKaRa ノロウイルスGⅠ/GⅡ検出キットVer.2 を用いてリアルタイム PCR 検出を実施した結果、濃度依存的に検出することができた。. ★迅速判定を強力にサポート！判定用ツールを準備しております. 本製品で取得した増幅曲線データから、陰性または陽性 +、陽性 + +、陽性 + + + を判定するツールをご用意しています。本製品をご購入の方に無償でご提供いたします。詳しくはお問合せください。. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. -6-.

(8) 検便検査. PCR. 検便プール検体からの腸管系病原細菌遺伝子の迅速スクリーニング＜遺伝子検査のメリット＞・その日のうちに陰性報告が可能・培養検査における目視判定の手間削減・培地の廃棄コスト削減＜1日目＞. 50 検体プールの検便懸濁液 95℃ 5 分. 約10 分. 8,000～15,000 rpm 5 分間遠心. 2 タイプの製品をご用意！. 約 37 分～ PCR 反応 ( 融解曲線分析╱プローブ法 ). 陰性（プール検体）. 陽性（プール検体）分離培養. 「陰性」報告. 生化学的性状試験＋血清型試験. ＜2日目以降＞. 結果報告. TaKaRa 腸管系病原細菌遺伝子検出キット. TaKaRa 腸管系病原細菌遺伝子検出キット（Probe 検出用）製品コード RR165A. 原理. 融解曲線分析. プローブ法. 反応時間. 約 37 分. 製品コード RR139A. 対応機種. 約 50 分. Thermal Cycler Dice Real Time System III の場合. ・Thermal Cycler Dice Real Time System シリーズ・StepOnePlus Real-Time PCR System （Thermo Fisher Scientific 社）・CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System （Bio-Rad 社）. CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System （Bio-Rad 社）の場合. ・Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System （Thermo Fisher Scientific 社）・CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System （Bio-Rad 社）・LightCycler 96 / 480 システム（Roche Diagnostics 社） ※タカラバイオのリアルタイム PCR 装置では対応しておりません。. ★各ターゲットのシングル検査キットもご用意しています。お問合せください。. -7-. ǀ 遺伝子検査キットカタログ.

(9) 検便検査. PCR／融解曲線分析. PCR／融解曲線分析により最短約 37 分でスクリーニング. TaKaRa 腸管系病原細菌遺伝子検出キット. 製品コード. 容量. 価格（税別）. RR139A. 200回. ¥150,000. 腸管出血性大腸菌、サルモネラ、赤痢菌由来の遺伝子を迅速スクリーニング. 検出対象菌種. ターゲット遺伝子. 腸管出血性大腸菌（EHEC）. VT 遺伝子. サルモネラ属菌. invA 遺伝子. 赤痢菌. ipaH 遺伝子. （PCR 阻害の有無の確認）. インターナルコントロール（IC）. ●. 腸管出血性大腸菌、サルモネラ、赤痢菌の遺伝子を、1チューブでマルチプレックス PCR. ●. PCR 増幅産物を TB Green™による融解曲線分析で検出. 自社開発の高速 PCR 試薬を採用し、反応時間を最速 37 分まで短縮！スクリーニング検査の迅速化を実現しました。. ● ●. DNA 精製不要。鋳型の調製は、熱処理と遠心だけの簡易抽出で OK！検便懸濁液を、95℃ 5 分の熱処理後、8,000～15,000 rpmで 5 分間遠心するだけで完了です。. ●. 便利なオールインワンキット！検便懸濁液さえ準備すれば検査できます。. ■実験例： Thermal Cycler Dice® Real Time System II による検出検出対象遺伝子は、VT 遺伝子（EHEC）、invA 遺伝子（サルモネラ）、ipaH 遺伝子（赤痢菌）の三種類。 PCR 阻害の有無を確認するためのインターナルコントロールも同時に検出します。. 腸管出血性大腸菌インターナルコントロール. サルモネラ. 赤痢菌. 検出対象菌種. Tm 値（※2）. EHEC. 79.5～81.5℃. サルモネラ属菌. 82.8～84.8℃. 赤痢菌. 84.6～86.6℃. インターナルコントロール. 72.1～74.1℃. ※Thermal Cycler Dice Real Time System II で測定した場合の参考値. 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください：L65. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. -8-.

(10) 検便検査. リアルタイム PCR. プローブ法により結果判定が容易に. TaKaRa 腸管系病原細菌遺伝子検出キット（Probe 検出用）検出対象菌種. ターゲット遺伝子. リアルタイム PCR 装置の蛍光検出フィルター. EHEC. VT1/2 遺伝子. HEX. サルモネラ属菌. invA 遺伝子. ROX. 赤痢菌. ipaH 遺伝子. FAM. （PCR 阻害の有無の確認）. インターナルコントロール（IC）. Cy5. ●. 製品コード. 容量. 価格（税別）. RR165A. 200回. ¥150,000. ＜キットの内容＞ ● ● ○ ●. Probe qPCR Mix-UNG Primer/Probe Mix（VT/ipaH/invA） H 2O Positive Control Mix. 腸管出血性大腸菌、サルモネラ、赤痢菌の遺伝子を、1チューブでマルチプレックス PCR プローブ法による結果. ●. プローブ法を採用！判定が容易に特異性の高いプローブ法の採用により、増幅曲線による明瞭な判定が可能となりました。. ●. 4 波長同時検出対応リアルタイム PCR 装置にて検出。反応時間は約 50 分※ ※CFX96 Touch TM Deep Well Real-Time PCR Detection System（Bio-Rad 社）の場合です。 Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific 社）にも対応しています。. 【ご注意】タカラバイオの Thermal Cycler Dice ® Real Time System シリーズには対応しておりません。. ●. DNA 精製不要！鋳型の調製は、熱処理と遠心だけの簡易抽出で OK 検便懸濁液を、95℃ 5 分の熱処理後、8,000～15,000 rpmで 5 分間遠心するだけで完了です。. ●. 便利なオールインワンキット！検便懸濁液さえ準備すれば検査できます. ●. PCR 増幅産物のキャリーオーバーによる偽陽性を防止 PCR は非常に高感度な検出方法であるため、以前に行った PCR 増幅産物のキャリーオーバーによる偽陽性が生じる場合がありますが、UNG 処理を追加することで偽陽性を簡単に防止できます。 ★UNG を利用してキャリーオーバーの影響を防止する原理については 60 ページをご覧ください。. ■実験例： CFX96 TouchTM Deep Well Real-Time PCR Detection System（Bio-Rad 社）による検出例検出対象遺伝子は、VT1/2 遺伝子（EHEC）、invA 遺伝子（サルモネラ）、ipaH 遺伝子（赤痢）で、PCR 阻害の有無を確認するためのインターナルコントロールも同時に検出します。. VT1/2（HEX）. -9-. invA（ROX）. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. ipaH（FAM）. IC（Cy5）.

(11) 食品検査検出ターゲット食中毒. 衛生指標菌. ● ノロウイルス. ● 一般細菌. ● 腸管出血性大腸菌. ● 腸内細菌科菌群. ● カンピロバクター. 品種判別. ● サルモネラ ● 腸炎ビブリオ. ● コメ品種. ● セレウス菌. ● 肉種. ● 黄色ブドウ球菌 ● リステリアモノサイトゲネス ● クドアセプテンプンクタータ ● その他. 検査フローのイメージ. リアルタイム PCR 解析. ・食品・前培養液・コロニーなど. DNA 調製エンドポイント PCR 解析. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. -10-.

(12) 食中毒検査. リアルタイム PCR. 通知法収載のプライマー・プローブ配列によるノロウイルス検出キット. TaKaRa qPCR Norovirus（GⅠ/GⅡ）Typing Kit 通知法に収載されたプライマー・プローブ配列で定量解析！. ●. 製品コード. 容量. RR250A. 50回. 価格（税別）. ¥90,000. RR250B. 250回. ¥360,000. 厚生労働省からの通知法（※）と相関性の高い定量解析が可能公定法で用いられるコントロールプラスミド DNA と同等の定量結果が得られることを確認しています。. ● コンポーネントは使いやすいプレミックス面倒な試薬調製は一切不要、初心者でも簡単に使用できます。. ● 逆転写反応はわずか15 分で完了！独自開発の逆転写酵素の採用により、反応時間の短縮が実現しました。本製品は、群馬県衛生環境研究所との共同研究の成果に基づき製品化しました。 ※厚生労働省医薬食品局食品安全部監視安全課より通知された「ノロウイルスの検出法について」（食安監発第1105001号別添）（最終改正：平成 25 年10 月 22 日付食安監発1022 第1号） . 検体. RNA 調製. 逆転写反応. リアルタイム PCR 解析. （約15 分）. 逆転写～qPCR に要する時間は約100 分！. ■実験例： Positive Control DNAを用いた検量線の作成. ＜キットの内容＞. 【方法】本キットに含まれる GI / GII Positive Control DNA からそれぞれ調製した段階希釈液を用いて検量線を作成した。. GI 検出系. GII 検出系. 増幅曲線. 増幅曲線. 検量線. 検量線 R2：0.998 Eff = 110.5％. 逆転写試薬 1. 5×PrimeScript Buffer（NV） 2. PrimeScript RT Enzyme Mix（NV） 3. Random 6 mers リアルタイム PCR 試薬 4. Premix Ex Taq（NV） 5. GI Primer Mix 6. GII Primer Mix 7. GI Probe Mix 8. GII Probe Mix 9. ROX Reference Dye 10. ROX Reference Dye II 11. RNase Free dH 2O 定量用 Positive Control DNA. 12. GI Positive Control DNA （4×10 6 copies/µl） 13. GII Positive Control DNA （4×10 6 copies/µl） 14. EASY Dilution（for Real Time PCR）. R2：0.999 Eff = 105.1％. （Thermal Cycler Dice Real Time System II 使用）. 【結果】 GI / GII 遺伝子とも、10 copies ～1×10 7 copies の範囲で、精度よく検量線が作成できることを確認しています（25 µl 反応系、n=3）。通知法で求められる定量試験と同等の精度での解析にご利用いただけます。. -11-. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. 【注】検便サンプルからの検出には、5～6 ページ掲載の Ta K a R a ノロウイルス G I /G I I 検出キットVer.2（製品コード RR297A）をご利用ください。. 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください：L56.

(13) 食中毒検査. リアルタイム PCR. 通知法収載の配列によるクドアセプテンプンクタータ検出キット. Kudoa septempunctata（18S rRNA）qPCR Detection Kit 通知法に収載されたプライマー・プローブ配列で定量解析！. ●. 厚生労働省からの通知法（※）と相関性の高い定量解析が可能. ●. コンポーネントは使いやすいプレミックス. 製品コード. 容量. 価格（税別）. RR260A. 50回. ¥66,000. 面倒な試薬調製は一切不要、初心者でも簡単に使用できます。. ●. キット添付の Positive Control DNAで定量可能 ※厚生労働省医薬・生活衛生局生活衛生・食品安全部監視安全課長通知（平成 28 年 4 月 27 日 ) 「Kudoa septempunctata の検査法について」（生食監発 0427 第 3 号）. 検体. DNA 調製. リアルタイム PCR 解析. ■実験例：Positive Control DNAを用いた検量線作成. ＜キットの内容＞. キット添付の Kudoa Positive Control を EASY Dilution (for Real Time PCR) で段階希釈し、2.5×10 7、2.5×10 5、2.5×10 3、2.5×101 copies/µl の溶液を用いて検量線を作成しました。各反応系での最終コピー数はぞれぞれ1×10 8 、1×10 6 、 1×10 4、1×10 2 です。増幅曲線. 検量線. （Thermal Cycler Dice Real Time System II 使用）. リアルタイム PCR 試薬 1. Premix Ex Taq （Tli RNaseH Plus） 2. Kudoa Primer/Probe Mix 3. dH 2O 4. ROX Reference Dye 5. ROX Reference Dye II 定量用 Positive Control DNA 6. Kudoa Positive Control （2.5×10 7 copies/µl） 7. EASY Dilution （for Real Time PCR）. 検査法フローチャート（通知法より引用） 1）スクリーニング法として、リアルタイム PCR を行う場合（注）. 遺伝子検査法. 顕微鏡検査. 総合判定. 陽性. 陽性. 陽性ヒラメ検体. （Kudoa rDNA コピー数10 7 以上をスクリーニング陽性とする）. 陰性. 陰性. 国立衛生研に送付陰性. 【注】試験法については、「1）スクリーニング検査から行う場合」および「2）顕微鏡検査から行う場合」が併記されています。. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. -12-.

(14) 食中毒検査. リアルタイム PCR. 腸管出血性大腸菌（EHEC）ベロ毒素（VT）遺伝子検出キット. CycleavePCR® O-157（VT gene）Screening Kit Ver.2.0 ●. 厚生労働省より通知の方法に収載本製品は、厚生労働省医薬食品局食品安全部監視安全課長通知（平成 26 年 11 月 20 日）「腸管出血性大腸菌 O26 、O103 、O111 、O121 、O145 及び O157 の検査法について」（食安監発 1120 第 1 号）に収載されました。. ●. 1チューブでインターナルコントロールによる偽陰性チェックが可能反応測定イメージ. ●. IC （ROX）. VT 遺伝子（FAM）. 抽出試薬も含んだオールインワンキット！アルカリ熱抽出試薬も添付。検体さえ準備すれば検査ができます。. ●. FAMとROXを検出できる幅広い装置で使用可能. 通知法収載. 製品コード. 容量. 価格（税別）. CY217A. 50回. ¥52,000. CY217B. 100回. ¥96,000. ＜キットの内容＞リアルタイム PCR 試薬 ● 1. 2×Cycleave Reaction Mixture ● 2. VT Primer/Probe Mix（FAM, ROX） ● 3. dH 2O アルカリ熱抽出試薬 ● 4. NaOH Solution（50 mM） ○ 5. Tris-HCl Buffer pH7.0（1 M） ● 6. dH 2O（for Dilution） Positive Control DNA ● 7. VT1 Positive Control ● 8. VT2 Positive Control. ＜インターナルコントロール（IC）による偽陰性チェック＞ IC （ROX）. VT 遺伝子（FAM）. 培養液. 反応阻害なし. DNA 抽出. VT 陰性. VT 遺伝子検査. IC （ROX）. VT 遺伝子（FAM）. 陰性. 終了. 陰性. 終了. 陽性. 反応阻害あり. Ｏ抗原遺伝子検査. 判定不能陽性. ◆VT 遺伝子検査の DNA 抽出には・・・・アルカリ熱抽出法・カラム精製法. 通知法収載. 分離培養法. 通知法収載. 結果判定. 食品の増菌培養液からの精製に！－ NucleoSpin® Tissue（製品コード 740952.10/.50/.250）通知法収載. 食品衛生検査指針収載＊. 食品衛生検査指針微生物編 2015（2015 年 3 月末発刊）. ＊. ★専用プロトコールをご用意しています。. 「腸管出血性大腸菌 O26、O103、O111、O121、O145 及び O157 の検査法について」厚生労働省医薬食品局食品安全部監視安全課長通知（食安監発 1120 第 1 号）より引用. チョコレートなど、抽出が困難な食品からの精製に！－ NucleoSpin® Food（製品コード 740945.10/.50/.250） NucleoSpin 各種はマッハライ・ナーゲル社の製品です。 -13-. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください：L4.

(15) 食中毒検査. リアルタイム PCR. 腸管出血性大腸菌（EHEC）O 抗原型遺伝子タイピングキット. CycleavePCR® EHEC（O157/O26）Typing Kit CycleavePCR® EHEC（O111/O121）Typing Kit CycleavePCR® EHEC（O103/O145）Typing Kit ●. 厚生労働省より通知の方法に収載本製品は、厚生労働省医薬食品局食品安全部監視安全課長通知（平成 26 年 11月 20 日）「腸管出血性大腸菌 O26、O103、O111、O121、O145 及び O157 の検査法について」（食安監発 1120 第 1 号）に収載されました。. ●. 主要な 6 種をタイピングできる試薬キットをラインナップ 1 チューブで 2 種の O 抗原型遺伝子を判定できます。組み合わせてお使いいただくことで主要な O 抗原型遺伝子のタイピングが可能です。. ●. 通知法収載通知法収載通知法収載. 製品コード. 容量. 価格（税別）. CY237. 20回. ¥28,000. CY238. 20回. ¥28,000. CY239. 20回. ¥28,000. ※ O16 5 を検出する C yc l e a ve P C R ® EHEC（O165）Typing Kit（製品コード CY241：50 回￥69,000）もご用意しています。. FAMとROXを検出できる幅広い装置で使用可能＜キットの内容：製品コード CY237＞. 例）CycleavePCR EHEC（O157/O26）Typing Kit ®. リアルタイム PCR 試薬 ● 1. 2×Cycleave Reaction Mixture ● 2. O157/O26 Primer/Probe Mix ○ 3. dH 2O Positive Control DNA. O26. O157. （ROX）. （FAM）. ● 4. O157 Positive Control ● 5. O26 Positive Control ○ 6. EASY Dilution （for Real Time PCR）. O26. O157. （ROX）. （FAM）. 陽性. 陰性. ◆O 抗原型遺伝子検査の DNA 抽出には・・・・アルカリ熱抽出法・カラム精製法食品の増菌培養液からの精製に！－ NucleoSpin® Tissue（製品コード 740952.10/.50/.250） ★専用プロトコールをご用意しています。. チョコレートなど、抽出が困難な食品からの精製に！－ NucleoSpin® Food（製品コード 740945.10/.50/.250） NucleoSpin 各種はマッハライ・ナーゲル社の製品です。. 製品名. 製品コード. ターゲット遺伝子. 蛍光検出波長. CycleavePCR® EHEC（O157/O26） Typing Kit. CY237. O157. FAM. O26. ROX. CycleavePCR® EHEC（O111/O121） CY238 Typing Kit. O111. FAM. O121. ROX. CycleavePCR® EHEC（O103/O145） CY239 Typing Kit. O103. FAM. O145. ROX. O165. FAM. CycleavePCR® EHEC（O165） Typing Kit. CY241. ベロ毒素遺伝子（VT1/VT2 遺伝子）のタイピングには・・. CycleavePCR® O-157（VT1/VT2）Typing Kit インターナルコントロールによる偽陰性をモニターしながら、VT1/VT2 遺伝子のタイピングが可能です。. 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください：L4. 製品コード. 容量. 価格（税別）. CY222. VT1, VT2 各25回. ¥69,000. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. -14-.

(16) 食中毒検査. リアルタイム PCR. サルモネラを検出. CycleavePCR® Salmonella Detection Kit Ver.2.0. ほとんどすべてのサルモネラ菌が保有している侵入性因子関連遺伝子 invA をターゲットとして、リアルタイム PCR で検出します。. 製品コード. 容量. 価格（税別）. CY205. 50回. ¥69,000. 製品コード. 容量. 価格（税別）. CY220. 50回. ¥69,000. 腸炎ビブリオを検出. CycleavePCR® Vibrio（tdh gene）Detection Kit. 腸炎ビブリオの耐熱性溶血毒遺伝子（tdh 遺伝子）をターゲットとして、リアルタイム PCR で検出します。. セレウリド産生性セレウス菌を検出. CycleavePCR® Bacillus cereus（CRS gene）Detection Kit. 分離培養培地から得られたセレウス菌のセレウリド合成酵素（CRS）遺伝子をターゲットとして、リアルタイム PCR で迅速かつ確実に検出します。. 製品コード. 容量. 価格（税別）. CY221. 50回. ¥69,000. カンピロバクタージェジュニ／コリをタイピング. CycleavePCR® Campylobacter（jejuni/coli）Typing Kit. カンピロバクター属菌の Cytolethal distending toxin 遺伝子（cdt genes）の C サブユニット遺伝子（cdtC gene）をターゲットとして、C. jejuni、C. coli の 2 菌種の検出および同定を行います。. 製品コード. CY225. 容量. C. jejuni, c. coli 各25回. 価格（税別）. ¥69,000. リステリアモノサイトゲネスを検出. CycleavePCR® Listeria monocytogenes（inlA gene） Detection Kit Listeria monocytogenes が細胞内に侵入する際に関与する分子 Internalin A（inlA）をコードする遺伝子配列領域をターゲットとして、リアルタイム PCR で検出を行います。. 製品コード. 容量. 価格（税別）. CY223. 50回. ¥69,000. 黄色ブドウ球菌を検出. CycleavePCR® Staphylococcus aureus（DnaJ gene） Detection Kit. ハウスキーピング遺伝子の1つであり、菌種間でも多様性を持つ DnaJ 遺伝子をターゲットとして、黄色ブドウ球菌をリアルタイム PCR で検出します。. 容量. 価格（税別）. CY228. 50回. ¥69,000. ●. 食中毒検査用 CycleavePCR® シリーズはすべて同じ反応条件なので、複数の項目を一度に検査可能！. ●. インターナルコントロールで自動的に偽陰性をチェック！ FAM. ROX. ターゲット. ●. -15-. 製品コード. インターナルコントロール. プレミックス試薬なので、初心者でもかんたん！. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. ・2×CycleavePCR Reaction Mix ・dH2O ・各 Primer/Probe Mix（5×）・Positive Control DNA. 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください： L4、L34（CY221のみ）、L42（CY225 のみ）.

(17) 食中毒検査. リアルタイム PCR. 便利なオールインワン検査キットシリーズ. CycleavePCR® Kit シリーズ. リアルタイム PCR 検査に必要なコンポーネントがすべて含まれたオールインワンキットです。通知法収載の腸管出血性大腸菌シリーズをはじめ、多数のラインナップを取り揃えています。. ●. プレミックス試薬なので面倒な試薬調製は一切不要。初心者でも簡単に使用できます！. ●. 品質保証されたキットなので、すぐに検査ができます。キットとして性能保証されており、試薬管理の手間が省けます。. ●. インターナルコントロールで自動的に偽陰性をチェック！ターゲット遺伝子とは無関係な配列を有する DNA を同時に増幅し、PCR 阻害の有無をチェックできます。 FAM. ROX. ターゲット. ●. インターナルコントロール. FAMとROXを検出できる幅広い装置で使用可能 Thermal Cycler Dice ® Real Time System シリーズ（タカラバイオ）、Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific 社）などの幅広いリアルタイム PCR 装置で使用できます。. ●. 反応時間はわずか 90 分！食中毒菌シリーズはすべて同じ反応条件なので、複数のキットで一度に検査することができます。. 検体. DNA 調製. 検出対象. ベロ毒素遺伝子腸管出血性大腸菌（EHEC）. リアルタイム PCR 解析. 製品名. CycleavePCR® O-157（VT gene）Screening Kit Ver.2.0 ★. 製品コード. 容量. 価格（税別）. CY217A. 50回. ¥52,000. CY217B. 100回. ¥96,000. CycleavePCR® O-157（VT1/VT2）Typing Kit. CY222. 50回＊1. ¥69,000. CycleavePCR EHEC（O157/O26）Typing Kit ★. CY237. 20回. ¥28,000. CycleavePCR® EHEC（O111/O121）Typing Kit ★. CY238. 20回. ¥28,000. CycleavePCR EHEC（O103/O145）Typing Kit ★. CY239. 20回. ¥28,000. CycleavePCR® EHEC（O165）Typing Kit. CY241. 50回. ¥69,000. サルモネラ. CycleavePCR Salmonella Detection Kit Ver.2.0. CY205. 50回. ¥69,000. 腸炎ビブリオ. CycleavePCR® Vibrio（tdh gene）Detection Kit. CY220. 50回. ¥69,000. セレウス. CycleavePCR Bacillus cereus（CRS gene）Detection Kit. CY221. 50回. ¥69,000. カンピロバクター. CycleavePCR Campylobacter（jejuni／coli）Typing Kit. CY225. 50回. ¥69,000. リステリアモノサイトゲネス. CycleavePCR Listeria monocytogenes（inlA gene） Detection Kit. CY223. 50回. ¥69,000. 黄色ブドウ球菌. CycleavePCR® Staphylococcus aureus（DnaJ gene） Detection Kit. CY228. 50回. ¥69,000. ®. O 抗原型遺伝子. ®. ®. ®. ® ®. ＊2. 掲載ページ. 13 14. 14. 15. ★：通知法収載＊1 VT1、VT2 各 25 回＊2 C. jejuni、C. coli 各 25 回本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください： L4、L34（CY221のみ）、L42（CY225 のみ）. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. -16-.

(18) 食中毒検査. PCR. 腸管出血性大腸菌（EHEC）ベロ毒素（VT）遺伝子検出キット ※各製品の価格、容量については 71ページ（裏表紙）の製品一覧をご確認ください。. One Shot PCR Kit シリーズ. 腸管出血性大腸菌（EHEC）ベロ毒素遺伝子の検出とタイピングを簡便かつ迅速に行うための One Shot PCR キットです。 PCR に必要な試薬全てが 0.2 ml PCR tube に分注されており、サンプル DNA を加えるだけで PCR を行うことができます。製品に含まれるプライマー. 製品名. 特長. O-157（ベロ毒素遺伝子） One Shot PCR Screening Kit Ver.2. サンプルを加えるだけの Ready-to-Useタイプ. （別売り製品コード）. 検出できる遺伝子ベロ毒素ベロ毒素 1型 2型遺伝子遺伝子. EVC-1/2 （S008）. VT1. VT2. ターゲット DNA 増幅サイズ. ベロ毒素 2 型の変異型遺伝子. VT2vha VT2vhb VT2vp1. 171 bp. （製品コード RR102A）. O-157（ベロ毒素 1型、 2 型遺伝子）One Shot. PCR Typing Kit Ver.2. 1型 2 型の判別が可能な VT1/VT2 用 Ready-to-Useタイププライマー. VT1. 349 bp VT2. （製品コード RR106A）. VT2vha VT2vhb VT2vp1 VT2vp2. 112 bp. PCR Kit シリーズ. One Shot PCR Kit 以外にも PCR 法を用いた迅速なベロ毒素遺伝子検出キットを用意しています。. 特長. 通知法収載. 製品名. EHEC（VT gene）PCR Screening Set. インターナルコントロールを ★ 含んだキット. O-157（ベロ毒素 1 型、2 型遺伝子）PCR Typing Set. 毒素の1型、 2 型の判別を安価に. O-157（ベロ毒素 1 型、2 型遺伝子）PCR Typing Set Plus. 検出できる変異型遺伝子が増えてさらに便利. （製品コード RR120A）. （製品コード RR105A）. （製品コード RR122A）. ★. 製品に含まれるプライマー. （別売り製品コード）. 検出できる遺伝子ベロ毒素ベロ毒素 1型 2型遺伝子遺伝子. EVC-1/2 （S008）. VT1. EVT-1/2 （S006）. VT1. EVS-1/2 （S007） EVT-1/2 （S006） EVS-1/ EVC-2. VT2. ベロ毒素 2 型の変異型遺伝子. VT2vha VT2vhb VT2vp1. VT2. 404 bp 349 bp. VT1 VT2. VT2vha VT2vhb VT2vp1 VT2vp2. 112 bp. 製品コード. 容量. 価格（税別）. RR133A. 50回. ¥77,000. 主要な 7 種の O 抗原型遺伝子をマルチプレックス PCR でタイピング 1チューブで O157、O26、O111、O121、O103、O145、O165 をタイピング. ● ベロ毒素1型、ベロ毒素 2 型、eae 遺伝子も同時に検出 ※ 本キットの開発には、宮崎大学農学部畜産草地科学科衛生微生物学分野井口純先生にご協力いただききました。. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. 171 bp. VT2vha VT2vhb VT2vp1. EHEC（O antigens）PCR Typing Kit. -17-. ターゲット DNA 増幅サイズ. 349 bp. 腸管出血性大腸菌（EHEC）O 抗原型遺伝子検出キット. ●. O-157 由来遺伝子. O165 O103. O111 O157 O26 O121 O145.

(19) 食中毒検査. PCR. セレウリド産生性セレウス菌の検出キット. Bacillus cereus（CRS gene）PCR Detection Kit 分離培養培地から得られたセレウス菌およびその類似菌（例： Bacillus thuringiensis、 B. anthracis など）とセレウリド産生性セレウス菌を迅速かつ確実に検出するための PCR キットです。. ●. ●. 製品コード. 容量. 価格（税別）. RR132A. 50回. ¥88,000. ターゲット遺伝子. 増幅サイズ. 偽陰性チェックが可能. セレウリド合成酵素遺伝子（CRS）. 426 bp. インターナルコントロールを含んだマルチプレックス検出系. レシチナーゼ遺伝子（LE）. 227 bp. インターナルコントロール遺伝子（IC）. 134 bp. コンポーネントはプレミックス PCR が初めてでもスムーズに使用できます。. ■検出例 M. 1. 2. 3. 4. 1 : Bacillus subtilis 2 : Bacillus thuringiensis 3 : 嘔吐毒素（セレウリド）非産生性 Bacillus cereus 4 : 嘔吐毒素（セレウリド）産生性 Bacillus cereus M : 100 bp Ladder Marker. ←426 bp ←227 bp ←134 bp. 低分子分析用アガロースを使用. ＜キットの内容＞ 1. 5×PCR Premix 2. CRS Primer Mixture （セレウリド合成酵素遺伝子検出用） 3. LE Primer Mixture （レシチナーゼ遺伝子検出用） 4. I.C. Primer Mixture （インターナルコントコール検出用） 5. CRS Positive Control Template 6. LE Positive Control Template ※本キットの開発には、名古屋市衛生研究所安形則雄先生にご協力いただきました。. カンピロバクターの迅速な検出・同定キット. Campylobacter（cdt gene）PCR Detection and Typing Kit カンピロバクター属菌が保有する Cytolethal distending toxin 遺伝子（cdt genes）の B サブユニット遺伝子（cdtB gene）または C サブユニット遺伝子（cdtC gene）をターゲットとして、PCR によりC. jejuni、C. coli、C. fetus のタイピングを行うためのキットです。. ●. 世界初、C. jejuni, C. coli, C. fetus をタイピング！. ●. コンポーネントはプレミックス PCR が初めてでもスムーズに使用できます。. ■検出例 cdt B M. 1. 2. 3. 1. 2. 3. 容量. 価格（税別）. RR134A. 50検体. ¥88,000. ＜キットの内容＞ 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.. Premix Ex Taq HS cdtB Primer Mix cdtC Primer Mix dH 2O C. jejuni Positive Control C. coli Positive Control C. fetus Positive Control. ※本キットの製品化には、大阪府立大学生命環境科学研究科獣. cdt C M. 製品コード. 医国際防疫学研究室山崎伸二先生および扶桑薬品工業株式会 M. 鋳型：ゲノム DNA（5 pg） 1 : C. jejuni 2 : C. fetus 3 : C. coli M : 100 bp ラダー. 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください： L34（RR132A）、L42（RR134A）. 社のご協力をいただきました。. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. -18-.

(20) 食中毒検査. リアルタイム PCR. Tm 解析による食中毒菌関連遺伝子のスクリーニング用プライマー. QuickPrimer（Real Time）シリーズ. 主な食中毒病原菌および下痢性病原菌を、TB Green TM を用いたインターカレーター法によるリアルタイム PCR で検出するためのプライマーシリーズです。各プライマーは、特定の菌または病原因子の遺伝子の極めて特異的な配列部分に相補するよう設計されています。. ●. Ct 値と Tm 値に基づいて結果を判定. 検体. サンプルの増幅曲線より得られた Ct 値、ならびに融解曲線のパターンおよび Tm 値が、判定基準に一致するかどうかで目的遺伝子検出の判定を行います。. ●. TB Green™ Premix Ex Taq™（Tli RNaseH Plus）. （製品コード RR420A）と組合せて使用専用試薬との組合せで至適化されています。. ●. DNA 抽出. 豊富なラインナップから自由に組合せて使用可能反応条件は全て同一なので、自由な組合せで使用できます。. ●. 反応時間はわずか約 90 分. ●. 1 反応あたり約 260 円なので、安価なスクリーニング検出に好適. リアルタイム PCR （融解曲線分析）. サンプルの増幅曲線より得られた Ct 値、融解曲線のパターンおよび Tm 値が、判定基準に一致するかどうかで目的遺伝子検出の判定を行う。. Thermal Cycler Dice Real Time Systemでの解析例 A：陽性コントロール DNA B：陰性コントロール. ■病原因子遺伝子検出用製品名. 製品コード. QuickPrimer InvE 遺伝子 QuickPrimer IpaB 遺伝子 QuickPrimer IpaH 遺伝子 QuickPrimer Shiga I 遺伝子 QuickPrimer Shiga II 遺伝子 QuickPrimer LT 遺伝子 QuickPrimer STI 遺伝子 QuickPrimer Tdh 遺伝子 QuickPrimer CdtA 遺伝子 QuickPrimer InvA 遺伝子 QuickPrimer Enterotoxin （Clostridium perfringens）遺伝子 QuickPrimer Nhe 遺伝子. MR101. 細胞侵入性因子 InvE 遺伝子. 検出対象遺伝子. MR401. MR102. 細胞侵入性因子 IpaB 遺伝子. MR402. MR103. 細胞侵入性因子 IpaH 遺伝子. MR401. MR104. 志賀毒素（ベロ毒素）I 型 Shiga I 遺伝子. MR403. MR105. 志賀毒素（ベロ毒素）II 型 Shiga II 遺伝子. MR404. MR106. 易熱性毒素 LT 遺伝子. MR405. MR107 MR109. ヒト耐熱性毒素 STI 遺伝子（STh 遺伝子） MR406 MR407 耐熱性溶血毒 Tdh 遺伝子. MR110. 細胞膨張化致死毒素 CdtA 遺伝子. MR408. MR111. 細胞侵入性因子 InvA 遺伝子. MR409. MR112. 腸管毒 Enterotoxin 遺伝子. MR410. MR113. 非溶血性腸管毒 Nhe 遺伝子. MR415. 陽性コントロール. ■病原菌遺伝子検出用製品名. QuickPrimer Escherichia／Shigella group（16S rDNA） QuickPrimer Staphylococcus spp.（16S rDNA） QuickPrimer Clostridium perfringens（16S rDNA） QuickPrimer Yersinia spp.（16S rDNA） QuickPrimer Campylobacter spp.（16S rDNA） QuickPrimer Listeria spp.（16S rDNA） QuickPrimer Bacillus cereus group（16S rDNA）. 製品コード. 検出対象遺伝子. 陽性コントロール. MR201. 16S rDNA 遺伝子. MR405. MR202. 16S rDNA 遺伝子. MR411. MR203. 16S rDNA 遺伝子. MR410. MR204. 16S rDNA 遺伝子. MR412. MR205. 16S rDNA 遺伝子. MR408. MR207. 16S rDNA 遺伝子. MR414. MR208. 16S rDNA 遺伝子. MR415. ※本製品は、岐阜大学大学院医学系研究科病原体制御学分野教授江崎孝行先生のご協力のもとに開発いたしました。. . -19-. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. プライマーシリーズ製品コード MR101～MR208 各100 回各 ¥15,000. コントロール DNA 製品コード MR401～MR415 各 30 回各 ¥12,500. ★専用解析ツール便利な Tm 値自動判定ツール「QuickPrimer 結果判定用エクセルシート」をウェブカタログの製品ページでダウンロードできます。 ★Tm 値判定用ポジティブコントロール DNA 各 QuickPrimer にそれぞれ専用のポジティブコントロール DNA（製品コード MR401～ MR415）を用意しています。.

(21) 食中毒検査. PCR. 下痢性病原菌遺伝子スクリーニング用プライマーセット. MORA-Primer Diarrheal Pathogens. 8 連チューブの各ウェル（1～8）に充填されたプライマーセットで PCR を行い、主要な病原菌を網羅的に検出します。病原菌名. ウェル. 1 2 3 4 5 6 7 8. 和名. 検出対象. 増幅サイズ. InvE（virB）. 127 bp. Enteroinvasive E. coli/Shigella. 腸管侵入性大腸菌 / 赤痢菌. Enterotoxigenic E. coli. 腸管毒素原性大腸菌（ETEC）. Enterohemorrhagic E. coli／Shigella. 腸管出血性大腸菌（EHEC）. Enteroinvasive E. coli／Shigella. 腸管侵入性大腸菌 / 赤痢菌. Enterohemorrhagic E. coli. 腸管出血性大腸菌（EHEC）. Vibrio parahaemolyticus. 腸炎ビブリオ菌. Escherichia coli. 腸管毒素原性大腸菌（ETEC）. Vibrio cholerae. コレラ菌. Yersinia group. エルシニア属菌群. 16S rDNA. 316 bp. Campylobacter jejuni. キャンピロバクター・ジェジュニ. cdtA. 107 bp. Enteroinvasive E. coli／Shigella. 腸管侵入性大腸菌 / 赤痢菌. ipaH. 117bp. Salmonella spp.. サルモネラ属菌. invA. 422 bp. Enteroaggregative E. coli. 腸管凝集性大腸菌. EAST1. 173 bp. LT. 297 bp. Shiga 1（stx-1）. 376 bp. ipaB. 137 bp. Shiga 2（stx-2）. 272 bp. tdh. 368 bp. ST1. 171 bp. CT（ctxA）. 494 bp. 製品名. 製品コード. 容量. 価格（税別）. MORA-Primer Diarrheal Pathogens. 76311. 各192 pmol（24 回分）. ¥37,500. MORA-DNA Diarrheal Pathogens. 76511. 10 回分. ¥26,000. 食品病原菌遺伝子スクリーニング用プライマーセット. MORA-Primer Food Pathogens. 8 連チューブの各ウェル（1～8）に充填されたプライマーセットで PCR を行い、主要な病原菌を網羅的に検出します。ウェル. 1 2 3 4 5 6 7 8. 病原菌名. 和名. Staphylococcus spp.. ブドウ球菌群. Clostridium perfringens. ウェルシュ菌. Vibrio parahaemolyticus. 腸炎ビブリオ菌（溶血毒）. Clostridium perfringens Campylobactor jejuni Vibrio cholerae Clostridium botulinum AB（F）group. 検出対象. 増幅サイズ. 16S rDNA. 414 bp. 16S rDNA. 257 bp. Hemolysin (tdh). 368 bp. ウェルシュ菌 ( 腸管毒 ). Enterotoxin. 230 bp. キャンピロバクター. 16S rDNA. 107 bp. コレラ菌（下痢毒素）. CT (ctxA). 494 bp. ボツリヌス菌群 AB(F) 型. 16S rRNA. 390 bp. Listeria monocytogenes. リステリア菌. 16S rRNA. 411 bp. Bacillus cereus. セレウス菌（非溶血性腸管毒）. NHENT. 152 bp. Salmonella spp.. サルモネラ菌（侵入因子）. invA. 422 bp. Bacillus cereus group. セレウス菌群. 16S rDNA. 143 bp. Escherichia／Shigella group. 大腸菌／赤痢菌群. 16S rDNA. 413 bp. Bacterial universal. 細菌一般. 16S rDNA. 510 bp. Fungal universal. カビ一般. 18S rDNA. 380 bp. 製品名. . 製品コード. 容量. 価格（税別）. MORA-Primer Food Pathogens. 76313. 各192 pmol（24 回分）. ¥37,500. MORA-DNA Food Pathogens. 76512. 10 回分. ¥26,000. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. -20-.

(22) 食中毒検査. PCR. ラインナップ豊富なプライマーシリーズ . 特殊細菌検出用 Primer Set. TaKaRa Taq™（製品コード R001A）、TaKaRa Taq™ Hot Start Version（製品コード R007A）と組合わせて使用いただけます。製品名. 製品コード. 容量. 価格（税別）. 各 1,000 pmol. 各￥33,000. 各 1,000 pmol. 各￥33,000. 各 1,000 pmol. 各￥33,000. 各 1,000 pmol. 各￥33,000. S014. 1,000 pmol. ￥33,000. S016. 各 1,000 pmol. 各￥33,000. S019. 各 1,000 pmol. 各￥33,000. 毒素遺伝子検出用 Primer Set CPE-1&2. S020. 1,000 pmol. ￥33,000. A 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BAS-1&2. S021. B 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BBS-1&2. S022. C 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BCS-1&2. S023. D 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BDS-1&2. S024. E 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BES-1&2. S025. 各 1,000 pmol. 各￥34,000. F 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BFS-1&2. S026. G 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BGS-1&2. S027. 耐熱性溶血毒遺伝子検出用 Primer Set VPD-1&2. S001. 耐熱性溶血毒類似毒素遺伝子（trh1）検出用 Primer Set VPS-1&2. S002. 耐熱性溶血毒類似毒素遺伝子（trh1&2）検出用 Primer Set VPR-1&2. S028 . LT 遺伝子検出用 Primer Set ELT-1&2. S003. STh 遺伝子検出用 Primer Set ESH-1&2. S004. STp 遺伝子検出用 Primer Set ESP-1&2. S005. VT1遺伝子検出用 Primer Set EVT-1&2. S006. VT2 遺伝子検出用 Primer Set EVS-1&2. S007. VT 遺伝子検出用 Primer Set EVC-1&2. S008. エンテロトキシンA 遺伝子検出用 Primer Set SEA-1&2. S009. エンテロトキシン B 遺伝子検出用 Primer Set SEB-1&2. S010. エンテロトキシン C 遺伝子検出用 Primer Set SEZ-1&2. S011. エンテロトキシン D 遺伝子検出用 Primer Set SED-1&2. S012. エンテロトキシン E 遺伝子検出用 Primer Set SEE-1&2. S013. 毒素性ショック症候群毒素遺伝子検出用 Primer Set TST-1&2. S015. コレラ. 毒素遺伝子検出用 Primer Set VCT-1&2. 赤痢菌および腸管侵入性大腸菌（EIEC）. invE 遺伝子検出用 Primer Set INV-1&2 ipaH 遺伝子検出用 Primer Set IPA-1&2. S017. invA 遺伝子検出用 Primer Set SIN-1&2. S018. エンテロトキシン遺伝子検出用 Primer Set STN-1&2. 腸炎ビブリオ. 毒素原生大腸菌. 腸管出血性大腸菌（EHEC）. 黄色ブドウ球菌. サルモネラ菌ウェルシュ菌. ボツリヌス. ※S001～S020, S028 は（株）島津製作所で製造されたものです。. 製品内容：. ウェブカタログに下記の参考データ集を掲載しています。ご参照ください。 ★ UNG 処理によるキャリーオーバーコンタミネーションの防止. ・10×PCR Buffer 600 µl ・Primer F/R（19 pmol/µl）各1,000 pmol. 専用ポジティブコントロール. 特殊細菌検出用 Positive Control Template 製品コード. 製品名. S031. VP1. S046. VP2. S032. EC1. S033. EC2. S034. EC3. -21-. 対応する Primer Set （製品コード）. VPD（S001） VPS（S002） VPR（S028） ELT（S003） ESH（S004） ESP（S005） EVT（S006） EVS（S007） EVC（S008）. 増幅 DNA (bp). 688 688 666 690 691 689 686 686 685. 製品コード. 製品名. S035. SE1. S036. SE2. S037. ST. S038. SS. S039. VC. S040. SN. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. 対応する Primer Set （製品コード）. SEA（S009） SEB（S010） SEZ（S011） SED（S012） SEE（S013） TST（S015） INV（S016） IPA（S017） VCT（S014） SIN（S018） STN（S019）. 増幅 DNA (bp). 製品コード. 製品名. 695 694 697 695 695 694 691 689 670 689 690. S041. CP. S042. BS1. S043. BS2. S044. BS3. S045. BS4. 対応する Primer Set （製品コード）. CPE（S020） BAS（S021） BBS（S022） BCS（S023） BDS（S024） BES（S025） BFS（S026） BGS（S027）. 増幅 DNA （bp）. 667 691 691 690 690 691 691 668. 容量：各 50 µl（100 pg/µl）価格：各￥12,000（税別）.

(23) 衛生指標菌検査. リアルタイム PCR. 「一般細菌数」の定量をその日のうちに. Bacteria（tuf gene）Quantitative PCR Kit. 細菌を対象とした PCR 検出系では16S rRNA 遺伝子を利用したものが知られていますが、菌種間でコピー数が異なるため、細菌数の正確な定量には適していません。本キットでは、菌種間での保存性が高く、染色体上に低コピー（1または 2 コピー）で存在しているタンパク質伸長因子 Tu（tuf）遺伝子を検出対象としているため、広範囲な菌種を偏りなく測定することができます。. 容量. 価格（税別）. RR240A. 100回. ¥65,000. ＜キットの内容＞リアルタイム PCR 試薬 1. TB Green Premix Ex Taq GC 2. TUF Primer Mix 3. dH 2O 4. ROX Reference Dye 5. ROX Reference Dye II Positive Control DNA. 本キットの開発には、東京海洋大学木村凡先生、高橋肇先生、ならびに東洋水産株式会社田中悠一郎氏にご協力いただきました。. ●. 製品コード. 6. TUF Positive Control 7. EASY Dilution（for Real Time PCR）. その日のうちに結果判定培養法では判定に 2～4 日を要しますが、遺伝子検査はその日のうちに判定できます。消費期限が短い「生鮮食品」においても「出荷前判定」が可能になります。. DNA 抽出（約 30 分）. キット添付のポジコンによる定量. リアルタイム PCR 解析（約 90 分）. NucleoSpin Tissue （54 ページ）. 食材懸濁液 ●. 試料液の調製. その日のうちに結果判定！標準寒天培地にて培養（48 時間～）. コロニーの計数 3 日目. 広範囲に検出できる遺伝子検査で自主検査の効率アップ. 検体によって含まれる菌種は異なり、従来法では培地組成や培養温度を工夫する必要がありますが、菌種間での保存性が高い「タンパク質伸長因子 Tu（tuf）遺伝子＊」を対象とした遺伝子検査なら、一度に広範囲な細菌種を検出することができます。＊参考文献 Design of a new universal real-time PCR system targeting the tuf gene for the enumeration of bacterial counts in food. J. Food Prot. 2010 Apr;73（4）: 670-679.. ●. 遺伝子検査なら、食材の細菌汚染履歴も調査できます例えば、加熱食品を対象とした細菌汚染履歴の調査にも活用できます。培養検査では不検出となる検体についても、過去に細菌汚染があった場合には、遺伝子検査で検出することが可能です。. ■実験例：コピー数と菌数の相関について. 【結果】 TSA 塗沫培養の結果（菌数； CFU/g）を横軸に、リアルタイム PCR の結果（コピー数； copies/g）を縦軸にプロットしたところ、TSA 塗沫培養とリアルタイム PCR の結果はよく相関していました。なお、リアルタイム PCR では検体に含まれる死菌や培養で増殖しにくい菌種も検出している可能性があるため、リアルタイム PCR によるコピー数の方が、TSA 塗沫培養による菌数よりも1～2 オーダー高めに算出される傾向にあったと考えられます。. 10 Real Time PCR (log copies/g). 【方法】野菜類 9 種、サラダ類（カット野菜含む）6 種、肉類 8 種について 10% 懸濁液を調製し、TSA 塗沫培養（30℃、48 時間）による菌数測定と本製品によるリアルタイム PCR 解析を実施した。. 8 6 野菜. 4. サラダ類肉類. 2 0. 標準線 0. 2. 4. 6. 8. 10. TSA (log cfu/g). ǀ 遺伝子検査キットカタログ. -22-.

(24) 衛生指標菌検査. リアルタイム PCR. 「腸内細菌科菌群」の検出・定量をその日のうちに. Enterobacteriaceae（rplP gene）Quantitative PCR Kit. 本キットでは、リアルタイム PCR により、rplP（50S ribosomal protein L16）遺伝子を検出対象として、腸内細菌科菌群を検出および定量します。従来法では判定に 6 日間ほどを要しますが、リアルタイム PCR ならその日のうちに結果判定が可能なため、自主検査の効率アップに有効です。. 製品コード. 容量. 価格（税別）. RR241A. 100回. ¥65,000. ＜キットの内容＞. 腸内細菌科菌群は、サルモネラ、赤痢菌、エルシニアのような腸管系食中毒菌も含み、大腸菌群よりも広い腸管系食中毒菌をカバーしています。従来、食品衛生における衛生指標菌としては、大腸菌群や糞便大腸菌群が対象とされてきましたが、欧州連合（EU）の食品微生物基準では、大腸菌群に代わる衛生指標菌として腸内細菌科菌群が汎用されています。. リアルタイム PCR 試薬 1. TB Green Premix Ex Taq GC 2. rplP Primer Mix 3. dH 2O 4. ROX Reference Dye 5. ROX Reference Dye II Positive Control DNA. 本キットの開発には、東京海洋大学木村凡先生、高橋肇先生にご協力いただきました。. 6. rplP Positive Control 7. EASY Dilution（for Real Time PCR）. ●. その日のうちに結果判定培養法では判定に 6 日ほどを要しますが、遺伝子検査はその日のうちに判定できます。消費期限が短い「生鮮食品」においても「出荷前判定」が可能になります。. DNA 抽出（約 30 分）. キット添付のポジコンによる定量. リアルタイム PCR 解析（約 90 分）. NucleoSpin Tissue （54 ページ）. 食材懸濁液. 試料液の調製. その日のうちに結果判定！標準寒天培地にて培養（48 時間～）. コロニーの計数 6 日目. ■実験例：コピー数と菌数の相関について. 【結果】 VRBG 混釈培養の結果（菌数； CFU/g）を横軸に、リアルタイム PCR の結果（コピー数； copies/g）を縦軸にプロットしたところ、 VRBG 混釈培養とリアルタイム PCR の結果はよく相関していました。VRBG は胆汁末などの選択剤を含む培地であるため、殺菌工程などで損傷を受けた細菌がうまく培養されない可能性があり、その結果、リアルタイム PCR によるコピー数の方が、VRBG 混釈培養による菌数よりも1～2 オーダー高めに算出される傾向にあったと考えられます。そこで、10% 懸濁液調製の際に、生理食塩水の代わりに BPW を用いることにより損傷回復を試みたところ（図中では→で示す）、 VRBG 混釈培養とリアルタイム PCR の結果がほぼ一致しました。. -23-. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. 10 Real Time PCR（log copies/g）. 【方法】肉類 6 種、野菜類 5 種、サラダ類 5 種について、生理食塩水または BPW を用いて10% 懸濁液を調製し、VRBG 混釈培養（37℃、48 ～96 時間）による菌数測定と本製品によるリアルタイム PCR 解析を実施した。. 8. ← ←. 6. →. 4. ←. 標準線. ←. 精肉野菜. 2. サラダ 0. 0. 2. 4. 6. 8. 10. VRBG（log CFU/g）. 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください：L60.

(25) 品種判別. PCR. 特徴的なバンドパターンやバンドが検出されないことでコシヒカリ* を判別. コメ判別用 PCR Kit I ／コメ判別用 PCR Kit II. 4 種類のプライマー対を用いるマルチプレックス PCR を行い、コシヒカリを判別します。コメ判別用 PCR Kit （製品コード I RR211A）ではコシヒカリと他の 60 品種について、 Kit II（製品コード RR213A）ではコシヒカリと他の 48 種について確認済みです。本キットにより、遺伝子レベルでの種籾の管理や精米・米飯の品質管理が可能となります。. ●. 製品コード. 容量. 価格（税別）. RR211A. 100回. ¥57,000. RR213A. 100回. ¥57,000. マルチプレックス PCR のバンドパターンでコシヒカリ＊を判別 Kit I：他の品種とは異なる特徴的なバンド出現パターンで判別 Kit II：識別バンドが検出されないことで判別. ●. コシヒカリ＊と他の 60 品種（Ｉ）、48 品種（ＩＩ）について確認済 Kit I ではコシヒカリ以外の 60 品種（下表）について、コシヒカリとは異なるパターンになることを確認しています。 Kit II の確認済みの 48 品種についてはウェブカタログをご覧ください。＊コシヒカリBL を除く. コメ判別用 PCR Kit Iで確認済みのコシヒカリ以外の 60 品種 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15. ひとめぼれヒノヒカリあきたこまちきらら３９７キヌヒカリほしのゆめはえぬきむつほまれ日本晴ササニシキつがるロマンハナエチゼン夢つくしハツシモ朝の光. 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30. 月の光あいちのかおり祭り晴あきほゆきまるむつかおりまなむすめかけはしキヨニシキどまんなか越路早生ゆきの精ほほほの穂ゆめあかり能登ひかり. 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45. アキツホアケボノ朝日ヤマホウシヤマヒカリ黄金錦コガネマサリレイホウミネアサヒふさおとめかりの舞どんとこいアキニシキながのほまれフクヒカリ. コメ検体. 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60. ゴロピカリ初星中生新千本森のくまさんゆめさんさ加賀ひかりきらり宮崎ゆめみのりたかねみのりあさひの夢ニシホマレチヨニシキヒヨクモチヒメノモチはくちょうもち. DNA 抽出. 【注】全国 33 都道府県のコシヒカリ原種について、同一パターンであることを確認していますが、遺伝的変異のために異なる結果が出る可能性があります。また、コシヒカリ以外の 6 0 品種（左表）につき、コシヒカリとは異なるパターンになることを確認していますが、これらの品種においても遺伝的変異により、コシヒカリと同じパターンを示す可能性があります。（左表に記載のない品種については、確認しておりません。）なお、コシヒカリBL については前記コシヒカリと異なる結果を示す場合があります。. PCR＋電気泳動. コメ DNA 抽出キット（精米・玄米1粒スケール） ●. 未加熱の精米または玄米1粒からDNAサンプルを調製. ●. 磁性粒子にDNAを吸着させて精製. 製品コード. 容量. 価格（税別）. 9197. 96×3回分. ¥63,000. 製品コード. 容量. 価格（税別）. 9103. 50回. ¥26,400. コメ DNA 抽出キット（精米 20 粒スケール） ●. 未加熱の精米 20 粒からDNAサンプルを調製. ●. スピンカラムによる遠心分離操作で精製. 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください： L26（RR211A）、L27（RR213A）. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. -24-.

(26) 品種判別. リアルタイム PCR. ウシ、ブタ、ニワトリなどの 6 肉種を判別 . CycleavePCR® 肉種判別キット（6 種）. 製品コード. 容量. 価格（税別）. CY218. 20サンプル分. ¥79,000. リアルタイム PCR により、原料肉のウシ、ブタ、ニワトリ、ウマ、ヒツジ、ウサギの 6 種の種判別を行うためのキットです。ミトコンドリア DNA 上にある cytochrome c oxidase subunit I (cox I) 遺伝子領域の動物種間の多型をもとに、cox I 領域においてそれぞれの動物種を特異的に増幅するようにプライマーを設計し、さらにそれぞれの動物種の増幅産物に特異的にハイブリダイズするプローブを用いて検出を行います。. ＜キットの内容＞ ●. ●. 6 種の肉種判定が可能 Tube. FAM. ROX. Tube 1. ウシ. インターナルコントロール. Tube 2. ブタ. インターナルコントロール. Tube 3. ニワトリ. インターナルコントロール. Tube 4. ウサギ. インターナルコントロール. Tube 5. ウマ. インターナルコントロール. Tube 6. ヒツジ. インターナルコントロール. インターナルコントロールによる偽陰性チェックが可能. リアルタイム PCR 試薬 1. 2×CycleavePCR Reaction Mix 2. Primer・Probe Mix-1 (for beef) 3. Primer・Probe Mix-2 (for pork) 4. Primer・Probe Mix-3 (for chicken) 5. Primer・Probe Mix-4 (for rabbit) 6. Primer・Probe Mix-5 (for horse meat) 7. Primer・Probe Mix-6 (for mutton) 8. dH 2O Positive Contorol DNA 9. 10. 11. 12. 13. 14.. Control Control Control Control Control Control. DNA DNA DNA DNA DNA DNA. for for for for for for. beef pork chicken rabbit horse meat mutton. ■実験例：ドライソーセージサンプルの肉種判別【方法】パッケージの表示に「畜肉（豚肉、マトン、牛肉）、鶏肉」と記載されているドライソーセージ 10 mg から、24.4 ng/µl の濃度で DNA サンプルを得た。これを 2 ng/µl 濃度に調整し、CycleavePCR 肉種判別キット（6 種）の反応に 5 µl を使用し（10 ng/ 反応）、肉種判別を行った。. FAM （ターゲット）. pork. ROX （IC 遺伝子）. mutton beef. chicken. horse meat. rabbit. 左図：増幅曲線（FAM）： 4 種類の肉種について検出された。右図：増幅曲線（ROX）：インターナルコントロール遺伝子はすべて検出された。（PCR 反応阻害は無し）. 【結果】今回の実験では 4 種類の肉種のシグナルが確認されました。これらはドライソーセージ製品に食肉原材料として記載があった豚肉、マトン、牛肉、鶏肉と一致していました。. -25-. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください：L4.

(27) 水質検査検出ターゲットレジオネラ属菌 ● 生菌検出法（LC. EMA-qPCR 法╱EMA-qPCR 法）. ● 生菌死菌検出法（qPCR 法）. クリプトスポリジウム属、ジアルジア. 検査フローのイメージレジオネラ属菌 . ※第 4 版レジオネラ症防止指針収載. ● 生菌検出法. 検査開始. LC EMA-qPCR 法. 検体濃縮. 液体培養（LC）（18 時間）. 検体濃縮. EMA-qPCR 法. EMA 処理（約 30 分）. DNA 抽出. （約 30 分）. DNA 抽出. ● 生菌死菌検出法検体濃縮. qPCR 法. クリプトスポリジウム属、ジアルジア. 環境水 10 L. 10 ml に濃縮. オーシスト、シスト. リアルタイム PCR （約 50 分～）検査開始. EMA 処理. 1日目. リアルタイム PCR. 検査開始. DNA 抽出. 2 日目. 1日目. リアルタイム PCR. ※厚生労働省通知法収載. 核酸抽出. リアルタイム RT-PCR 解析. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. -26-.

(28) 水質検査. LC EMA-qPCR. 18時間. 濃縮. 液体培養. 酸処理. （Liquid Culture）. レジオネラ属菌生菌検出法（LC EMA-qPCR 法）採水翌日に、確実な生菌選択的検出が可能 LC EMA-qPCR 法は、「液体培養による生菌の選択的増殖」と「EMA 処理による死菌由来 DNA からの PCR 増幅の抑制」を組み合わせた生菌遺伝子検査法です。2 つの技術の組合せにより、確実かつ高感度に生菌選択的な検出を行うことができ、浴槽水を対象とした場合に、培養法と高い相関性を示します。. 液体培養. 液体培養に使用する培地のベース. Legionella LC Medium Base ●. 製品コード. 容量. 価格（税別）. 9016. 90 ml. ¥16,500. より確実な生菌の選択的検出に MWY 液体培地で 36℃18 時間培養することで生菌のみが増殖し、相対的に生菌の選択性が向上します。 ★定量性を保った状態で増菌させ、定量的な解析を行うために、一定時間（18 時間）の培養を行います。注： Legionella LC Medium Base を使用する際には下記のサプリメントが必要です。・レジオネラ BCYEα 発育サプリメント（関東化学（Oxoid）；Code SR110）・レジオネラ MWY 選択サプリメント（関東化学（Oxoid）；Code SR118）. EMA処理. EMA 試薬キット. Viable Legionella Selection Kit for LC EMA-qPCR LC EMA-qPCR 法に至適化された専用の EMA 試薬です。. 光照射装置. LED Crosslinker 12. EMA 処理検体（1.5 ml チューブ）12 本を一度に光照射できます。. ●. 死菌由来の PCR 増幅を抑制し、生菌由来 DNA を選択的に検出. 製品コード. 容量. 価格（税別）. 7730S. 25回. ¥18,000. 7730. 50回. ¥33,000. 製品コード. 容量. 価格（税別）. EM200. 一式. ¥107,800. EMA で修飾された死菌 DNA が PCR 増幅できない状態となることを利用して、生菌 DNA を選択的に検出します。（EMA 処理の詳細は p61～62 を参照）. DNA抽出. レジオネラ属菌専用の DNA 抽出試薬. Lysis Buffer for Legionella. 製品コード. 容量. 価格（税別）. 9181. 50回. ¥11,000. 試薬を加えて 95℃10 分間加熱後、4℃で遠心分離し、さらに 5 分間氷冷するだけです。 ●. 簡便な操作で DNA 抽出界面活性剤と PCR 阻害物質吸着樹脂からなり、遠心後は吸着樹脂の上にゲル層が形成される仕組みで、初心者でも簡便に DNA 溶液の回収が可能です。. -27-. ǀ 遺伝子検査キットカタログ.

(29) 30分. EMA 処理. 30分. 50分～. DNA 抽出. リアルタイム PCR. リアルタイム PCR. レジオネラ属菌検出キット. CycleavePCR® Legionella（16S rRNA）Detection Kit ● ●. 広範囲なレジオネラ属菌を検出可能. 製品コード. 容量. 価格（税別）. L. londiniensis を含む 48 菌種 74 株で増幅を確認しています。. CY240S. 25回. ¥31,000. インターナルコントロールによる偽陰性チェックが可能. CY240. 50回. ¥57,000. レジオネラ16S rRNA 遺伝子. FAM. インターナルコントロール（IC）遺伝子. ROX. 検出結果の判断基準について「厚生労働科学研究費補助金（健康安全・危機管理対策総合研究事業）公衆浴場等におけるレジオネラ属菌対策を含めた総合的衛生管理手法に関する研究平成 24 年度分担研究報告書」より引用 ■ LC EMA-qPCR 法におけるレジオネラ1 CFU あたりの 16S Positive Control コピー数の決定. 35. Ct 値. アメーバ培養レジオネラ属菌の10 倍希釈系列を用い、それぞれ 2 連で LC EMA-qPCR を行い、検量線を作成した。この回帰式の切片と、16S Positive Control の回帰式の切片の差から、レジオネラ属菌1 CFU 当りの16S Positive Control コピー数が以下の通り算出された。. 40. 0h （EMA-） y = -3.274 x + 36.431 R² = 0.999 18h （EMA-）y = -3.391 x + 31.929 R² = 0.992 18h （EMA+）y = -3.379 x + 33.276 R² = 0.993 y = -3.174 x + 44.248 死菌（EMA+） R² = 0.990 プラスミド y = -3.036 x + 39.984. 30 25 20. 18 時間培養 EMA 処理後のコピー数（レジオネラ属菌1 CFU 当り） 2（39.984－33.276） = 104.5 ≒ 100 コピー. 15. -1. 0. 1 2 3 4 5 log CFU/5 µl （log copies/5 µl）. 6. アメーバ培養レジオネラ属菌の LC EMA-qPCR 検量線. 「厚生労働科学研究費補助金（健康安全・危機管理対策総合研究事業）レジオネラ検査の標準化及び消毒等に係る公衆浴場等における衛生管理手法に関する研究平成 25～27 年度分担研究報告書」より引用 ■ LC EMA-qPCR による浴槽水等における検査結果全国 6 か所の地方衛生研究所において、平成 26～27 年度に浴用施設から採取された 518 検体の試料について、平板培養法と LC EMA-qPCR 法の比較を行った。平板培養法では140/518 検体（27.0%）から10 CFU/100 ml 以上のレジオネラ属菌が検出された。一方、LC EMA-qPCR 法では、カットオフ値を1 CFU/100 ml 相当とした場合、207/518 検体（40.0%）の検体からレジオネラ属菌の遺伝子が検出された。LC EMA-qPCR 法の平板培養法に対する感度は 8 9 . 3 %（ 12 5 /14 0 検体）、特異度は 7 8 . 3 % （296/378 検体）であり、高い相関を示した。. LC EMA-qPCR 法のカットオフ値 1 CFU/100 ml 相当平板培養法 LC EMA qPCR 法計. ≧10. ＜10. 計. ≧1. 125. 82. 207. ＜1. 15. 296. 311. 140. 378. 518. 感度 89.3％、特異度 78.3％. 平板培養法と LC EMA-qPCR 法との比較. 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください：L4（CY240S、CY240）. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. -28-.

(30) 水質検査. EMA-qPCR. レジオネラ属菌生菌検出法（EMA-qPCR 法）採水当日に、迅速な生菌検出が可能 EMA-qPCR 法は、液体培養を行わず、ろ過濃縮検体をそのまま EMA 処理し、リアルタイム PCR により検出します。 LC EMA-qPCR 法に比べ、18 時間の液体培養が必要ないためより迅速であることがメリットです。（採水当日に判定可能）. 30分. 濃縮. EMA 処理. 30分. DNA 抽出. 50分～. リアルタイム PCR. < 検出結果の判断基準について（EMA-qPCR 法）> Viable Legionella Selection Kit for PCR Ver.2.0（製品コード 7714）の取扱説明書において、厚生労働科学研究費補助金（健康安全・危機管理対策総合研究事業）公衆浴場等施設の衛生管理におけるレジオネラ症対策に関する研究（平成 28、29 年度分担研究報告書）からの引用を参考情報としてご紹介しています。. EMA処理. EMA 試薬キット. Viable Legionella Selection Kit for PCR Ver.2.0 EMA-qPCR 法に至適化された専用の EMA 試薬です。. 光照射装置. LED Crosslinker 12. 製品コード. 容量. 価格（税別）. 7714. 50回. ¥55,000. 製品コード. 容量. 価格（税別）. EM200. 一式. ¥107,800. 製品コード. 容量. 価格（税別）. DNA抽出. 簡易抽出法. 9181. Lysis Buffer for Legionella or カラム精製法. 製品コード. NucleoSpin Tissue XS ®. ●. 容量. ¥11,000. 価格（税別）. 740901.10. 10回. ¥7,900. 740901.50. 50回. ¥30,000. 250回. ¥135,000. 740901.250. 簡易抽出法、カラム精製法から選択可能. 50回. 簡易抽出法は、操作が簡便で抽出効率も高いことから、塩素消毒が施された循環式浴槽水など汚染の少ない検体に適しており、泉質による PCR 反応阻害が予想される検体にはカラム精製法が適しています。. リアルタイム PCR. レジオネラ属菌検出キット. CycleavePCR® Legionella（16S rRNA）Detection Kit FAM. ROX. レジオネラ属菌 16S rRNA 遺伝子. -29-. インターナルコントロール（IC）遺伝子. ǀ 遺伝子検査キットカタログ. 製品コード. 容量. 価格（税別）. CY240S. 25回. ¥31,000. CY240. 50回. ¥57,000. 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください： L4（CY240S、CY240）.