Ⅰ. 輸血検査（用手法）の基本操作
1. 輸血検査の基本操作 A） 試験管への記名（検体名（検体番号）、試薬名）は、試薬・検体を入れる前に行う。 B） 試薬・検体分注時は、洗浄びんの先端、ピペットの先端を試験管内に入れない。 C） 試薬、検体は、1滴が50μlになるように滴下する。試薬に付属のピペットは、切り口が水平になる ように滴下する。検体分注用ディスポピペットは、約45度に傾けて滴下する。 D） 3～5%赤血球浮遊液の調整は、試験管に生理食塩液を約1～1.5ml分注し、赤血球沈層を1滴滴下す る。 E） 試薬は室温に戻してから使用する。 F） 試験管への滴下は、試薬、検体が内壁に付かないように注意する。滴下後は確実に分注されているか を目視で確認する。 G） 試薬・検体を分注する順番は、色の薄い物を先に滴下する。 ① ABOオモテ検査とＤ抗原検査：抗A、抗B、抗D、Rhコントロール試薬を先に滴下する。 ② ABOウラ検査：被検血清（血漿）を先に滴下する。 ③ 不規則抗体検査：被検血清を先に滴下する。 ④ 赤血球解離試験（DT解離液）・・・パネル血球試薬を先に滴下する（解離液はあと）。 H） 抗ヒトグロブリン抗体を添加後は、直ちに混和し、すみやかに遠心する。間接抗グロブリン試験判定 では再遠心をしない。 I） 血球試薬は、泡立てないようおだやかに転倒混和し、試薬びんのドロッパーで吸い上げ・吐き出しを して均一に赤血球を浮遊させた後に滴下する。 J） 試薬の滴下後は、密栓前に試薬びんのドロッパーの中身を吐き出しておく。 K） 試薬と検体を試験管に滴下したら、直ちに充分混和する。 L） 恒温槽から試験管を取り出す際は、他の試験管に注意しつつタオル等で水滴を拭き取る。 M） 判定結果の記録は、先ず試験管に記名した検体名・試薬名等の確認を行い、判定のつど結果記入欄に 記入する。 N） 遠心条件について ＜溶血の有無・血球の量＞ ① 凝集反応判定時の遠心 遠心力は900～1000G（回転数では3400rpm）、時間は15秒、もしくは、遠心力は100～125 Ｇ（回転数では1000rpm）、時間は60秒で遠心する。 ② 血球洗浄時（用手法）の遠心 遠心力は900～1000Ｇ（回転数では3400rpm）、時間は60秒で遠心する。 2. 反応の見方 A ) 遠心後、直ちに上清の溶血の有無、血球の量を確認する。注１ B ) 試験管をゆっくり傾け、赤血球沈澱塊からほぐれた赤血球の流れ具合を観察 する。注２ ＜凝集反応判定時、手にする試験管本数の目安＞ ① 血液型：｢抗Ａと抗 B｣、｢A1と B｣、｢抗Ｄと Rh コントロール｣の各２本組。 ② 不規則抗体スクリーニング、交差適合試験：2～3 本。 凝集が認められたら、直ちに１本に持ちかえ慎重に観察する。 ③ 不規則抗体同定、被凝集価判定：1 本。 C ) 引き続き、小さな振とうを与え試験管を優しく振り赤血球沈澱塊をほぐす。 D ) 再度試験管を傾け、赤血球の流れ方を観察する。 E ) 赤血球沈澱塊が管底から完全に再浮遊して、赤血球または凝集の一様な浮遊液が できるまでC）、D）を繰り返す。 背景の色調と部分凝集反応の有無にも注意する。 F ) 凝集の有無、反応強度および凝集の状態を観察する。 判定のつど、［表-1］に基づいて結果を記録し、残しておく。注３ <注釈> 注 1 試験管を遠心機から振動を与えないように取り出し、試験管立てに並べる。 溶血があればその程度を記録する。 注 2 白い紙かビューアーの上で行う。天井の蛍光灯を見上げての判定は行わない。 陰性の場合：赤血球が一筋の糸状に流れる。 試験管を傾けた際、 赤 血 球 沈 澱 塊か ら 流れ出した先端が、 試験管長の 2/3 程 度 ま で 流れ る ま で ゆっくり傾け、一旦 その角度で保持。特 に 赤 血 球 沈 殿 塊か ら の 流 れ始 め の 部 分を観察する。 陰 性 は 滑ら か に 流 れ出す。陽性の場合：沈澱塊が流れないか、滞りまたは粗くくずれる。 （ざらざらした感じで流れる） 注 3 部分凝集や部分溶血を認めた場合は、凝集反応も同時に観察されるた め、凝 集の強さの右上に略号を記入する。（例 ２+mf、３+PH） 3. 血球洗浄方法；用手法（間接抗グロブリン試験の血球洗浄法） A ) 試験管を強く数回振り、血球を均一に浮遊させる。 B ) 洗浄びんの生理食塩液を噴射させ、試験管長の 80%（4/5 程度）まで生理食塩液を満たす。 ① 試験管口の中央部に生理食塩液を噴射する。 ② 洗浄びんの先端を試験管に入れない。 ③ 飛沫が上がらないように注意する。 ④ 試験管口を指で蓋をしない。 C ) 900～1000G（3400rpm）/１分 遠心する。 Grade Score 凝集像 背景の特徴 4+ 12 1個の大きな塊 透明 3+ 10 数個の大きな凝集塊 透明 2+ 8 中程度の大きさの凝集塊 透明 1+ 5 多数の小さな凝集塊 非凝集の赤血球を認める 1+W 4 ごく小さな凝集 非凝集赤血球で赤く濁る W＋or± 2 肉眼で観察できる非常に小さな凝集 非凝集赤血球で赤く濁る 0 0 凝集も溶血も認めない 赤く濁る mf 部分凝集：凝集と非凝集血球の混在 赤く濁る H 完全溶血 上清赤く透明 PH 部分溶血：一部分の溶血と凝集 上清赤味透明 血球が渦をまいて舞い上 がる程度の勢いで、生理 食塩液を噴射し、血球の 分布を均一にする。
mf: mixed field agglutination
H: Hemolysis PH:Partial Hemolysis D ) 試験管を逆さにして上清を除去する。その後試験管を元に 戻す。 ① 逆さにした状態にして一旦止め、できる限り上清を除去 し、残らないようにする。 ② 感染の可能性のある上清を飛び散らせないため、試験管 を大きく振って上清を除去しない。 ③ 試験管を逆さにしたまま試験管口をペーパータオルに 押しあて、残った上清を除去する。最終洗浄後には必ず 行う。 ④ ペーパータオルを交換するなど、コンタミネーションに 注意する。 ⑤ 途中、試験管を元の位置に戻し、また逆さにすると血球 が流出するので注意する。 ４． 検体の取り扱い A ) 検体の採取 ① プレイン採血管（凝固血液）かEDTA加採血管（抗凝固血液）で5～7ｍl採血する。 赤血球系検査のための患者検体として、凝固血液（血清）あるいはEDTA 血液（血漿）のど ちらも使用できる。血清検体を検査に用いている施設が血漿検体に切り替える場合、EDTA 加 検体では弱反応性を示す臨床的に意義のある抗体が検出できることを確認する。（赤血球型検 査（赤血球系検査）ガイドラインより） ② 検体を採取するタイミングについては、輸血や妊娠など赤血球による免疫応答（1次あるいは2次応 答）の結果、抗体が産生される。しかしながら、輸血あるいは妊娠による免疫から抗体産生までの 期間についてはまったく予測できない。このことを考慮に入れて、不規則抗体スクリーニングや交 差試験用の検体は採血されなければならない。 連日にわたって輸血を受けている患者では、少なく とも3日（72時間）ごとに検査用検体を採血する。また、過去3ヶ月以内に輸血あるいは妊娠歴の 上清をペーパータオ ルで除去する際は、吸水を 同じ所でしない。複数本実 施するときは、試験管口を 接触させない。 （コンタミ防止のため）
ある患者では、輸血予定日に先立つ72時間を目安に患者から検査用検体を採血する。 ③ 検体の取り違いをチェックするために、血液型検査と交差適合試験に用いる検体は異なる時点で採 血した検体を用いて検査をする。（検体のダブルチェック） ④ ＡＢＯ血液型は同一患者から異なる時点で採血された血液で2度検査して確定する。（患者取り違え の防止） ⑤ 検体ラベルの剥がれた検体、ラベルの二重貼り検体等、不審な点のある検体を検査に用いない。 ⑥ 検体は溶血していてはならない。 ⑦ 血清中のフィブリン塊の混入は、偽陽性や非特異反応を引き起こす原因となるので、必ず取り除く。 ⑧ 原則として輸液ラインからの採血は避けるべきであるが、やむをえず輸液ラインから採血する場合 は、ラインを生理食塩液でリンスし、5ml程度（あるいは、ライン容量倍量程度）の血液を廃棄し た後に採血する。 B ) 検体の保存 輸血後の副作用や合併症が生じた場合の原因究明、追跡調査と治療に役立てるため、血液型、不規則 抗体検査、交差適合試験等の残余検体は、血球と血清（血漿）に分離し、血球には生理食塩液、アル セバー液等を加え4℃で1～2週間、血清（血漿）は-20℃以下で2～3ヵ月以上（交差適合試験は6 カ月以上）出来るだけ長期に凍結保存する。輸血用血液のセグメントは、4℃で数週間保存しておく ことが望ましい。 また、輸血後肝炎などの感染性輸血副作用発生に備え、輸血前の患者検体を保管する。分離剤の入っ た専用採血管で別採血し、開栓することなく遠心分離して-20℃以下で凍結保存（輸血後2年以上） することが望ましい。輸血前後の感染症検査に関する患者検体の保存については「輸血療法の実施に 関する指針」の Ⅶ実施体制の在り方 ４．患者検体の保存 を参照する。 ５． 使用する主な機器類 A ) 遠心機 ① 検体分離用遠心機 ② 判定用遠心機〔輸血検査専用のものが望ましい〕 ③ 自動血球洗浄遠心機（間接抗グロブリン試験の赤血球洗浄等） B ) 冷蔵庫、冷凍庫 ① 輸血用血液製剤は自記温度記録装置、警報装置を備えた専用の保冷庫、冷凍庫を自家発電装置に接 続し保管しなければならない。 ② 試薬、検体保管用冷蔵庫・冷凍庫に血液製剤を保管してはならない。自記温度記録装置、警報装置 の付いたものが望ましい。 C ) 恒温槽（37～60℃） 抗体感作、解離試験、血清の不活化など。 D ) 判定用光学器具（必要に応じて使用する） ① 凝集反応判定用ビューアー（背景が乳白色で明るさが均一な間接透過光のビューアーが望ましい） ② 拡大判定用光学機器：顕微鏡（×100～200の弱拡大）／拡大鏡（凹面鏡） ６． 機器管理 機器や設備は適正に稼動していることを常にチェックし、保守点検に努める。点検時には点検表に日 時、内容、点検者名を明記するとともに、責任者の確認欄を設け記録し保管する。 A ) 遠心機 ① 判定用遠心機 ② 自動血球洗浄遠心機 B ) 保冷庫、保管庫、冷凍庫 ① 温度管理 ② 警報装置 ③ 放熱盤フィルター ④ 恒温槽 ７． 使用する主な器具類 A ) 小試験管（10×75mmまたは12×75mm） B ) 試験管立て（ステンレス製＜金網型＞）もしくは試験管台（ステンレス製＜打抜き型＞）
C ) 検体分注用ディスポピペット（スポイト＜1滴が約50μl＞） D ) 検体希釈用マイクロピペット（抗体価等検査用） ※ 月1回のピペット検定を実施することが望ましい E ) 洗浄ビン（ポリエチレン製） F ) 載せガラス（スライドガラス） G ) かくはん棒（竹ぐし、爪楊枝など） H ) タイマー ※ 電池切れとなっていないか、正確に作動しているか確認後に使用する。 ８． 使用する主な試薬類 A ) 血液型検査に使用する試薬 ① ABO血液型 (１) オモテ検査 １） 抗A血液型判定用抗体（以下抗A試薬） ２） 抗B血液型判定用抗体（以下抗B試薬） ３） 抗A＆Ｂ血液型判定用抗体（以下抗A＆Ｂ試薬）※ ４） 抗 A1レクチン※ ５） 抗Hレクチン※ （※ 必要に応じて準備・使用する） (２) ウラ検査 １） 約3%A１血球試薬 ２） 約3%Ｂ血球試薬 ３） 約3%O血球試薬※ （※ 必要に応じて準備・使用する） ② Rh０（D）血液型 (１) 抗Ｄ血液型判定用抗体（抗Ｄ試薬） (２) Rhコントロール試薬（使用する抗D試薬とアルブミン濃度が同じもの） B ) 不規則抗体スクリーニングおよび交差適合試験に使用する試薬 ① 抗体スクリーニング用赤血球試薬（Dia抗原陽性の血球を含む） ② 抗体同定用パネル赤血球試薬 ③ 反応増強剤 (１) ウシアルブミン液 (２) ポリエチレングリコール液（PEG） (３) 低イオン強度液（LISS） ④ 抗ヒトグロブリン抗体 (１) 抗IgG (２) 広範囲 (３) 抗補体 ⑤ 酵素液 (１) ブロメリン液 (２) フィシン液 (３) パパイン液 ⑥ IgG感作赤血球試薬（クームスコントロール赤血球） 抗グロブリン試験実施時には、抗ヒトグロブリン抗体判定後陰性の場合、IgG感作赤血球試薬を 加え、2＋～3＋の凝集があることを確認する。もし凝集が認められない時は、抗グロブリン試 験は無効となるため、再検査を行う。 ⑦ 酵素コントロール（必要に応じて準備することが望ましい） C ) 生理食塩液（0.9%塩化ナトリウム液） ① 塩化ナトリウム9.0gを蒸留水に溶解し1000mlとする。 ② 生理食塩液の最適ｐＨは、6.5～7.5（7.2）である。 不適正なｐＨ（ｐＨ8.0以上・ｐＨ6.0以下）では、抗体の解離や反応減弱などが起こり得る。 ③ 生理食塩液は作り置きをしない。継ぎ足しはせずこまめに作りなおす。 生理食塩液単独では緩衝作用がないため、空気中の炭酸ガスが溶け込みｐＨが酸性側に傾く。生理
食塩液に緩衝液等を加え最適域内にｐＨを調整することが望ましい。 ９． 試薬管理 A ) 各試薬の添付文書は必ず熟読し、正しく使用する。 B ) 各試薬のロット番号、有効期限など記録し管理する。 C ) 用いる試薬（抗血清や赤血球試薬）は被凝集価及び凝集力を定期的に測定し、記録しておく。 D ) 試薬は室温に戻してから使用する。長時間放置すると、力価や特異性を失う可能性があるので使用時 以外は、冷蔵保存する。 E ) 試薬の細菌などの汚染に注意する。ピペットの先端を直接手でさわらない。 F ) 試薬に濁り、変色、溶血を認めた場合は使用しない。 10．精度管理 A ) 内部精度管理を実施する。 精度管理実施の記録を残しておく。 精度管理実施前には、試薬の浮遊物や溶血の有無など目視確認をする。 B ) 外部精度管理、実技講習会に積極的に参加し手技の確認や技術の向上に努める
1
新人サポート研修会
輸血検査の基本テクニック
～輸血検査の標準化に向けて～
藤田保健衛生大学
長谷川 勝俊
輸血検査研究班
血液型検査
輸血検査
ABO血液型の検査は、抗Ａおよび抗B試薬を用いて、
患者血球のＡおよびＢ抗原の有無を調べるオモテ検査
と、既知のA
1およびＢ血球試薬を用いて、患者血清中
の抗Ａおよび抗Ｂ抗体の有無を調べるウラ検査を行わ
なければならない。
オモテ検査とウラ検査の結果が、一致している場合に
血液型を確定することができる。一致しない場合にはそ
の原因を精査する必要がある。
Rho（D）抗原の検査は、抗Ｄ試薬を用いてRho（D）抗
原の有無を検査する。
血液型検査
血液型検査；試験管法
操作
1. 検体を遠心し、血清（血漿）を分離する。
2. 1検体あたり7本試験管を準備する。
3. 試験管に検体名（検体番号）、各試薬名を記名する。
4. 赤血球浮遊液用試験管に生理食塩液を1～1.5ml分注し、①の
検体より赤血球沈層を1滴滴下し3～5%赤血球浮遊液を調整する。
5. 抗Ａ､抗Ｂ､抗Ｄ､Rhコントロール試薬を対応する試験管に各1滴
滴下する。
6. 検査用試験管A
1、Ｂに被検血清を各２滴滴下する。
7. ④で調整した3～5%赤血球浮遊液を⑤の試験管に各1滴滴下す
る。
8. A1、Ｂ血球試薬を転倒混和し、赤血球を均一に浮遊させた後、
⑥の試験管に各1滴滴下する。
9. よく混和後、900～1000G（3400rpm）/15秒遠心する。
10. 溶血・凝集の有無を観察し、判定結果を記録する。
11. 血液型を判定する。
同一患者の2重チェック
同一患者から、異なる時点での2検体で血液型
検査を実施する。
同一検体の2重チェック
同一検体で、異なる二人の検査者がそれぞれ
独立に血液型検査を実施し、照合確認する。
乳児の検査
ABH抗原は未発達であるが存在する。血清中
の抗Ａ、抗Ｂ抗体は、生後4カ月未満では検出
できず、オモテ・ウラ不一致となる。
乳児の判定は、オモテ検査のみとなるため、慎
重に行う。
〈血液型検査；試験管法の注意点〉
Ａ
Ｂ
Ｏ
ＡＢ
（－）
（＋）
（＋）
（－）
（＋）
（＋）
（－）
（－）
（＋）
（－）
（－）
（＋）
（－）
（－）
（＋）
（＋）
A1血球
B血球
抗A
抗B
血液型
ウラ検査（血清側）
オモテ検査（赤血球側）
〈ABO血液型の判定基準（試験管法）〉
（＋）は凝集、（－）は非凝集を示す。• 試験管法のオモテ検査で凝集の強さが4＋以外は、
精査を行う。
• オモテ検査で部分凝集（mf）を疑う場合は、スライド
法を実施する。
• ウラ検査の凝集の強さは患者により異なる。1＋以
下の場合は、精査を行う。
• 判定はオモテ検査、ウラ検査が一致していることを
原則とする。
• オモテ検査、ウラ検査との結果に矛盾があれば、結
果はそのまま記録として残し、不一致の原因が解決
されるまでＡＢＯ血液型の判定は保留とする。
判定のポイント
2
D陽性
判定保留
※1
判定保留
※2
（－）
（－）
（＋）
（＋）
（－）
（＋）
判定
Rhコントロール
抗D
〈Rho（D）血液型の判定基準〉
※1 再度検査を行い、同じ結果ならば、引き続きD陰性確認試験を 行う。ただし、受血者の場合はD陰性として扱う。 ※2 手技の再確認、偽陽性の可能性があるため精査を行う。ＡＢＯ血液型判定を誤判する原因
事務的なミス
検体の取り違い
台帳への記入ミスや入力ミス
口頭での依頼や報告
被検者、医師、看護師、担当技師の記憶違い
技術的なミス
検体の保管不備
ウラ検査の不履行
遠心機などの精度管理の不履行
判定時の弱い反応の見逃し
血球濃度の調整ミス
検体に誤判を引き起こす原因がある場合
Ｄ陰性確認試験 操作 1. 1検体あたり、3本試験管を準備する。 2. 試験管に検体名（検体番号）と抗Ｄ、Ｒｈコントロ－ルと記名する。 3. 赤血球浮遊液用試験管に生理食塩液を約1～1.5ml分注し、赤血球沈層を1滴滴下し3 ～5%赤血球浮遊液を調整する。 4. ③を生理食塩液で1回以上洗浄する。 5. 洗浄後、3～5%赤血球浮遊液に調整する。 6. 抗Ｄ､Ｒｈコントロール試薬を対応する試験管に各1滴滴下する。 7. ⑤で調整した3～5%被検赤血球浮遊液を⑥の試験管に各1滴滴下する。 8. よく混和後、900～1000G（3400rpm）/15秒遠心する。 9. 溶血・凝集の有無を観察する。 10. 凝集が認められなければ、再度よく混和後37℃ 30～60分加温する。 11. 900～1000G（3400rpm）/15秒遠心し、溶血・凝集の有無を観察する。 12. 凝集を認めれば、Ｄ陽性とし、認められなければさらに生理食塩液にて3～4回洗浄する。 13. 洗浄した各試験管の赤血球沈渣に抗ヒトグロブリン抗体を各2滴滴下する。 14. よく混和後、900～1000G（3400rpm）/15秒遠心する。 15. 溶血・凝集の有無を観察する。 16. 凝集を認めれば、partial Ｄもしくはweak Ｄが疑われ精査が必要、認められなければＤ 陰性。 17. 陰性結果の試験管に、IgG感作赤血球試薬を各1滴滴下後、よく混和して900～1000G （3400rpm）/15秒遠心し、凝集することを確認する。＜Ｄ陰性確認試験の注意点＞
Ｄ陰性確認試験を実施した上で、Ｄ陰性を確定する。
必ず、Ｒｈコントロ－ルも同時に実施し、陰性である
ことを確認する。
Ｒｈコントロ－ルが陽性となる原因
直接抗グロブリン試験陽性
寒冷凝集素
連銭形成
汎凝集反応
オモテ･ウラ検査不一致の対処例 （再検査をする前の確認事項）
検体・試薬の滴下ミスはないか
検体（血球・血清）の取り違えはないか（採血間違い、検査時
の検体取り違い）
検体に問題はないか（溶血、フィブリン塊、細菌汚染など）
器具の汚染はないか
試薬、生理食塩液の劣化、汚染はないか
不適切な判定法でなかったか、記入ミスはないか
検体濃度の調整は適正であったか
反応温度、時間は適正であったか
遠心条件は適正であったか
ウラ検査の溶血反応の見逃しはないか
記録、判定の誤りはないか
以上を再度確認し、再検査を実施する。
<再検査時の注意点>
① 検体は採血管から再調整する。
② 被検血球は生理食塩液にて洗浄後再調整する。
③ 試薬の期限、異常の有無を再点検する。
④ 確実に検体・試薬等を滴下する。
⑤ ウラ検査にＯ型血球試薬を追加して実施する。
⑥ 滴下量を確認する。（ロット番号の異なる血球試薬を用いて
再検査する。）
⑦ 検体を採り直す。
3
① 低温反応性の不規則抗体を保有する場合・抗Ｍ、抗Ｎ、抗Lea、抗Leb、抗I 等
② 抗A、抗B抗体価の減弱（欠損） ・低（無）γグロブリン血症、新生児、 高齢 者 ③ 寒冷凝集素 ④ 連銭形成（骨髄腫、肝硬変等） ⑤ 母親由来の抗A、抗B抗体 ・新生児 ⑥ 異型造血幹細胞移植後 ⑦ 高分子血漿増量剤、静注用造影剤の影響 ⑧ 型物質の異常増加による抗A、抗Ｂ試薬 の中和 ・卵巣嚢腫、胃癌（印環細胞癌）等 ① 被検血球の濃度調整の不良 ② 抗体によって血球が感作されている時 ・新生児溶血性疾患（母親由来の抗体） ・自己免疫性溶血性疾患（温式、冷式自 己抗体） ③ 異型輸血によるもの ④ 異型造血幹細胞移植後 ⑤ 後天性の抗原異常 ・MDS、白血病、Hodgkin病による抗原減 弱 ⑥ 赤血球膜の変性 ・細菌、ウイルス感染症等によりＴ抗原 が露出し、すべてのヒト血清で凝集する （汎凝集反応） ⑦ ＡＢＯ抗原の減弱（欠如） ・亜型 ⑧ キメラ、モザイク 血清側の原因 赤血球側の原因 〈オモテ検査、ウラ検査不一致の原因〉 ※ オモテ検査、ウラ検査が不一致であった場合、その原因を考慮の上適切な追加 検査を実施する。
キメラとモザイク、血液型不適合輸血や血液
型不適合造血幹細胞移植などにおいては、
ABO血液型検査のオモテ検査やRho（D）血液
型検査等で凝集赤血球と非凝集赤血球が混じ
て観察されることがある。
部分凝集（mf：mixed field agglutination）
原因
① 輸血事故、異型適合血（O型血などの使用）などの
異型輸血
② 疾患等による血液型抗原減弱
③ 亜型（A3、B3、cisA2B3等）、キメラ・モザイク等
④ ＡＢＯ不一致での造血幹細胞移植後の生着過程
ＡＢＯオモテ検査における部分凝集
対処 ① 患者情報を確認する。 ・輸血歴のある場合は、輸血用血液製剤の血液型と輸血量、輸血施行日時を 確認する。 ・転送患者の場合は前医にも問い合わせる。 ・輸血歴や造血幹細胞移植の無い場合は、各種亜型検査（抗原減弱の否定は できない）を行う。 ② 再度新たに採血した検体を用いてＡＢＯオモテ・ウラ検査を再検査する。 ③ 不適合輸血の疑いがあれば、溶血の程度を調べる。 ・血清検体の場合は溶血が認められることがある。 ・さらに輸血した血液バッグ、患者保存検体のABO血液型を再検査する。 ④ 必要に応じて、各社試薬との反応性比較、レクチンとの反応性、被凝集価測定、 転移酵素活性測定、型物質測定、他の血液型判定、ABO混合血球の分離、フ ローサイトメトリー、家系調査、遺伝子検査等を実施後、その情報より適合する 血液を選択する。ＡＢＯオモテ検査における部分凝集
原因
① 異型輸血、輸血事故（Ｄ陰性患者にＤ陽性血を輸血）
② やむを得ずＤ陽性血を輸血していることもあるので考
慮する。
③ Ｄ不一致での造血幹細胞移植後の生着過程
Rho（Ｄ）抗原検査における部分凝集
対処
① 患者情報を確認する。
・輸血歴のある場合は、輸血用血液製剤の血液型と輸血量、
輸血施行日時を確認する。
・転送患者の場合は前医にも問い合わせる。
・輸血歴や造血幹細胞移植の無い場合は、各種亜型検査
（抗原減弱の否定はできない）を行う。
② 再度新たに採血した検体を用いてＤ抗原検査を再検査する。
③ 不適合輸血の疑いがあれば、溶血の程度を調べる。
・血清検体の場合は溶血が認められることがある。
・さらに輸血した血液バッグ、患者保存検体のＤ抗原を再検
査する。
④ 必要に応じて、各社試薬との反応性比較、被凝集価測定、他
の血液型判定、混合血球の分離、フローサイトメトリー、家系
調査、遺伝子検査等を実施する。
Ｒｈo（Ｄ）抗原検査における部分凝集
4
赤血球上に何らかの抗体が感作してい る状態では正しい結果が得られないた め、抗体の感作状態を調べる。 直接抗グロブリン試験 抗Aまたは抗Bに対して凝集を認めない か、反応の非常に弱いAm、Ax、Bmおよ びBel等を疑う場合にAまたはB抗原の 有無を証明する。 抗A、抗Bの吸着解離試験 抗A、抗Bの吸収試験 抗Aまたは抗Bに対して明らかな凝集反 応を認めるA2、A3、para-Bombayおよび異型輸血を疑う場合に行う。 抗A、抗Bに対する被凝集価測定 H抗原の有無を調べ、Bombayまたは para-Bombayでないかを確認する。 抗Hレクチンとの反応 A1型とそれ以外のA亜型を鑑別する。 抗A1レクチンとの反応 目 的 種 類 <血球側の検査〉
追加検査の種類と目的
※ 検査の実施に際しては、試薬の添付文書に従う。血液型検査；スライド法
スライド法の特徴はmf（部分凝集）がわかりや
すいところにある。試験管法やカラム凝集法な
どで部分凝集が疑われる場合に有用となる。ス
ライド法にて特に背景色調を観察する。
背景：清澄（非凝集血球なし）、濁り（非凝集血球あり：mf）
操作 1. 赤血球浮遊液用試験管に、検体名（検体番号）を記名する。 2. スライド（凝集検査板）に、検体名（検体番号）、各試薬名を記名する。 3. 下記のように、赤血球浮遊液の濃度を調整する。 約40%赤血球浮遊液は生理食塩液3滴＋赤血球沈層2滴 約10%赤血球浮遊液は生理食塩液9滴＋赤血球沈層1滴 4. 抗Ａ、抗Ｂ試薬をそれぞれホールの端に各1滴滴下する。 5. ④に触れないよう、逆のホール端に③の赤血球浮遊液を各1滴滴下する。 6. タイマーを予め2分にセットする。 7. 攪拌棒で抗Ａ試薬と赤血球浮遊液、抗Ｂ試薬と赤血球浮遊液を同時に混 和し、直ちにタイマーをスタートする。 8. 引き続き、スライドを手に取り揺り動かしながらホール内の試薬と血球の 混和を続ける。 9. 2分後にスライドを回転させながら判定し、記録する。 通常、15秒以内に凝集が始まる。亜型の精査に用いる場合は凝集時間を記録する。血液型検査；スライド法
ペーパ－法は、紙の吸収により混和不十分となり、赤
血球と血清の比率が不適切のため推奨できない。
冷房等の風が吹き出している直下で行わない。
全血法では偽陽性、偽陰性を示すことがある。
亜型など抗原量の少ない場合は、凝集開始時間が遅
くなり凝集塊を作りにくくなる。
＜スライド法の注意点＞
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不規則抗体検査
愛臨技 新人サポート研修会 2009.6.14 名古屋第二赤十字病院 高原 幸恵不規則抗体とは
ABO血液型の抗A、抗B抗体以外の血液型抗原
に対する抗体
免疫抗体－輸血や妊娠などの同種免疫を
受けることで産生される
自然抗体－同種免疫によらず産生される
不規則抗体検査の目的
臨床的に意義のある抗体を事前に検出し、輸血
の安全性や適合血を確保する
母児血液型不適合妊娠による新生児溶血性疾
患の予測と対応に重要な意義を持つ
不規則抗体の血液型特異性と輸血用血液の選択
赤血球型検査ガイドライン 特異性、症例により臨床的意義 の異なる抗体 その他の高頻度抗原または低頻度抗原 に対する抗体 臨床的意義のない抗体 Leb（LebH） Xga JMH Knops Cost Chid/Rodgers まれに臨床的意義のある抗体 A1 P1 M N Lea Leab Leｂ（一部） 臨床的に意義のある抗体 Rh Duffy Kidd Diego S、s Kell M（37℃で反応） 抗原陰性血を 選択 輸血認定医、 輸血認定技師 または専門機関に 相談 抗原陰性血 選択の必要なし 抗グロブリン法による 交差適合試験臨床的に意義のある不規則抗体
輸血による溶血性副作用や、母児血液型不適合妊娠 による新生児溶血性疾患などの原因となる抗体 多くは37℃・間接抗グロブリン法で陽性となる スクリーニング検査において間接抗グロブリン法は必須！
不規則抗体スクリーニング 不規則抗体同定 抗体の特異性を明らかにする 臨床的意義を考慮し適合血選択の判断 陽性になったら不規則抗体検査の流れ
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不規則抗体検査
不規則抗体スクリーニング 抗体スクリーニング血球試薬（主要な血液型抗原を含むO型ヒト赤血球2～4本 が組み合わされている）と被検血清（血漿）を反応させ、血清（血漿）中の不規則 抗体の有無を調べる ＊自己対照を含める必要はない（赤血球型検査ガイドライン） 不規則抗体同定検査 同定用パネル血球試薬（10～20本1組）と被検血清（血漿）を反応させ、反応性 の違いから不規則抗体を同定し特異性を明らかにする ＊自己対照を立てる不規則抗体検査に用いる血球試薬
主な赤血球抗原が陽性
C、c、D、E、e、Di
a、Di
b、Fy
a、Fy
b、Jk
a、Jk
b、
S、s、M、N、P
1、Le
a、Le
bなど
量的効果を認める抗原がホモ接合
Rh、Kidd、Duffy、MNSsなど
Ｄｉ
ａを含む血球を使用する
不規則抗体 主な検査方法
試験管法
生理食塩液法 酵素法 （一段法、 二段法） 酵素：ブロメリン、フィシン、パパインなど 間接抗グロブリン法 反応促進剤：ウシアルブミン液 ポリエチレングリコール（PEG） 低イオン強度溶液（LISS）など カラム凝集法（ゲル、ガラスビーズ）
酵素法 間接抗グロブリン法 マイクロプレート法（赤血球膜固相法）
間接抗グロブリン法不規則抗体スクリーニング検査法の選択
臨床的に意義のある抗体をできるだけ多く検出する
37℃：間接抗グロブリン法（必須）
酵素法
臨床的に意義のない抗体をできるだけ検出しない
室温：生理食塩液法を実施しない
酵素法
酵素により血球表面からシアル酸を除去し、赤血球の ゼータ電位を低下させる→血球が互いに近づき凝集し やすくなり一部の不規則抗体の検出感度を上げる 酵素：ブロメリン フィシン パパインなど 一段法と二段法がある 酵素処理血球で反応性が増強される抗体 抗Rh、抗Lea、抗Leb、抗P １、抗Kidd、抗 Ｉ抗体など酵素法の留意点
酵素処理によって破壊または減弱される抗原がある Ｍ、Ｎ、Ｓ、ｓ、Ｆｙａ、Ｆｙｂ、Ｘｇａ など 一段法の場合、血清中の蛋白分解酵素阻害物質の多い 検体では酵素が失活し、偽陰性または反応が弱くなるこ とがある 不規則抗体スクリーニングに用いる際は、単独ではなく 間接抗グロブリン法と組み合わせて使用する3
間接抗グロブリン法
臨床的意義のある不規則抗体を検出する上で、もっとも信頼 できる方法とされている 不規則抗体スクリーニング検査には間接抗グロブリンを含め る 反応促進剤を使用することで反応時間を短縮することができ る 反応促進剤を使用しない場合は45分以上（45分～90分）の 反応時間が必要である間接抗グロブリン法
被検血清＋血球試薬 遠心 判定 ＊結果・陰性の場合 クームスコントロール血球（IgG感作血球）を加え遠心判定→凝集を確認 生理食塩水で洗浄（３～４回） 反応促進剤 なし アルブミン LISS（低イオン強度溶液） PEG（ポリエチレングリコール）など 使用方法は添付文書に従う 抗グロブリン試薬 ３７℃ 加温間接クームス法の留意点
反応増強剤は試薬の添付文書に従って使用する 再度の遠心判定はしない 陰性の場合はクームスコントロール血球（IgG感作 血球）を使用し、特に血球の洗浄効果を必ず確認 する PEG（ポリエチレングリコール）を使用する場合は 用いる抗グロブリン試薬は抗IgGが望ましい抗原表の見方
不規則抗体検査に使用する血球試薬の血液型抗原を記載してある表 〈 一例 〉 ＋： 抗原陽性（存在） 0： 抗原陰性（欠如） 網掛け部分 蛋白分解酵素によって抗原性 が破壊または減弱する抗原 低頻度抗原陽性また は高頻度抗原陰性な ど特別な抗原を示す 検査結果記録欄 まず検査方法名を 記入してから、 判定ごとに記録抗原表の留意点
抗原の強弱（「＋S」または「＋W」）が記載されていなくても、 抗原性に個体差があるため反応性に差が出ることがある （P１、I、Bgなど） 性別（M、F）を表記してある意味は Xga陽性（ XgaはX染色体にある）では M 男性：Xg
a/Y
F 女性：Xg
a/Xg
あるいはXg
a/Xg
a となるため反応性に差が出る抗原表の留意点
抗原名が記載されていなくても ・すべての血球が陽性の抗原 （高頻度抗原： Dib、 Jra、JMHなど） ・すべての血球が陰性の抗原 （低頻度抗原：Wraなど）がある 経時的に抗原性が減弱しやすい抗原があり、有効期限内で あっても反応性が低下し、陰性となる場合がある （ P１、Lewis、Duffyなど）4
消去法
すべての方法で陽性反応が認められない場合、その 血球が持っている抗原に対する抗体は持っていない と考え、抗原表上の陽性抗原を消去していく 量的効果に留意する量的効果(ｄｏｓａｇｅ ｅｆｆｅｃｔ)
量的効果を持つ抗原に対する抗体ではホモ接合血球と強 く反応し、ヘテロ接合血球と弱く反応するもしくは反応しな いことがある。 量的効果が見られる抗体 Rh系抗体、抗Kidd、抗Duffy、抗MNSs抗体など量的効果(ｄｏｓａｇｅ ｅｆｆｅｃｔ)
Kidd血液型の場合 ホモ接合 ヘテロ接合 ホモ接合 ａ ａJk（a＋b－） Jk（a＋b＋） Jk（a－b＋）
ａ ｂ ｂ ｂ ａ ａ ａ ａ ａ ａ ａ ａ ｂ ｂ ｂ ｂ ｂ ｂ ｂ ｂ ａ ａ ａ ａ ｂ ｂ ｂ ｂ Jka抗原量 Jkb抗原量
