験 材 料 及 び実 験 方 法
8
0
0
全文
(2) 2462. 藤. 第1図. gluconateを. 基 質 と し たO2消. 曲 線(1)Sh.. 菌 液(湿 3.0mlと. flexneri. 菌 量20mg)2.0ml基 す る.. 本. 37℃. 平. 費. 第3図. 1a. gluconatを. 量. .. 菌 液(湿. flexneri. 菌 量20mg)2.0ml,基. 3.0mlと. す る.. 37℃. 1.. pepton. (100ƒÁ/cc). 1.. pepton. (100ƒÁ/cc). glucose. (M/3000). 2.. glucose. (M/3000). 3.. gluconate. 3.. gluconate. 4.. gluconate+pepton. 4.. gluconate+pepton. 5.. gluconate+glucose. 5.. gluconate+glucose. (M/100). gluconateを. 基 質 と し たO2消. 曲 線(2)Sh.. flexneri. 間 時 に 添 加 し た 場 合 のO2. 消 費 に 対 す る10‑3SM(streptomycine)の. 2a. 第4図. gluconateを. 基 質 と し たO2消. に 対 す るSMの. 菌 液(湿 3.0mlと. 菌 量20mg)2.0ml,基 す る . pH7.2, pepton. (100ƒÁ/cc). 2.. glucose. (M/3000). 3.. gluconate gluconate+pepton. 5.. gluconate+glucose. 質 各0.3ml,全. 影 費. 影響. Sh.. flexneri 1a. Sh.. flexneri. Sh.. flexneri 3a. 量. 37℃.. 1.. 4.. 量. .. (M/100). 及 び 更 にpeptonを. 費. 費. 3a. 質 各0.3ml,全. pH7.2,. 2.. 第2図. 基 質 と し たO2消. 曲 線(3)Sh.. 質 各0.3ml,全. pH7.2,. 剛. 2a. (M/100). 目頃 よ り殆 ん ど 消 費 は 停 止 す る. gluconate, peptonを. 同 時 に添 加 した 場 合 に には, gluconate. 単 独 添 加 に 比 しO2消 で は1.5時. 費 は 大 で あ り,. 1a菌. 間 目 頃 よ り著 明 な る 立 上 りを 示 し,. 他 の 菌 に 於 て も2〜3時. 間 目 頃 よ り徐 々 にO2. 消 費 曲 線 の 立 上 りが 認 め ら れ た.而 の 如 きpeptonの. 効 果 はglucoseで. してか く は 見 られ 菌 液(湿. ず, pepton,. glucoseを. 周 時 にgluconateと. 共 に 添 加 し た 場 合 に も, pepton添. ml,全. 加の場合 と. げ. 殆 ん ど 変 りな か つ た. 以 上 の 如 きgluconateを. 基 質 と し たO2消. 費,. 菌 量20mg)2.0ml,基 量3.0mlと. す る .. 1.. gluconate. 1•L.. gluconate+SM. 2.. gluconate+glucose. 2•L.. gluconate+glucose+SM. 質0.3ml, pH. 7.2,. (M/100) (10-3M) (M/100). 37℃.. SM0.3.
(3) Sh.. 響 を 見 る と第4図. に 示 す 如 く,各. 単 独 の 場 合 に はO2消. びgluconate,. 共 にO2消. よ り殆 ん ど. gluconate単. pepton同. 属 す る 菌 のglucose代. 菌 共pepont. 費 はSMに. 影 響 さ れ な い に 拘 ら ず, 合,及. flexneriに. 独 の場. 時 添 加 の場 合. 費 は 著 明 に 抑 制 さ れ,. SM無. 添加. の 際 に 見 ら れ たO2消. 費 曲 線 の 立 上 りは 全 く. 認 め られ な か つ た.次. にglucoseに. 菌 体 がgluconateに. 適 感 して い るか 否 か につ. い て 実 験 を 行 つ た.即 そ の 一 部 に はM/30. ち 菌 浮 游 液 を2分 glucoseを. に1回. し た.結. 遠 沈 洗 條して 再 び緩 衝. 基 質 とせ るO2消. 果 は 第1表. glucoseを. 部は. 間振 盪 後 遠. 液 に 浮 游 せ し め る 前 処 理 を 施 し,そ のgluconateを. し,. 加 え,一. 対 照 と し て 基 質 無 添 加 の ま ま2時 沈 し て 集 菌,更. 馴 ら した. 2.. riboseを. 2463. 基 質 と し たO2消. とせ るO2消 pepton添. 費 量,及. び これ に 対 す るglucose,. 加 の 影 響 を 見 た と こ ろ,第5〜. 7図 の 如 く,各. 菌 共ribose単. O2消 費 量 は 少 な く, O2消 1aの. 第. 独 の 場 合 には. 費 量‑時. 間曲線 は. 場 合 の み 僅 か に 立 上 つ て い る に す ぎ ず,. riboseに. 加 え てpeptonを. 合 に もribose単. 同 時 に 添 加 した 場. 独 の場 合 と殆 ん ど差 異は 認. め ら れ な か つ た が, glucose(M/3000)の 加 に よ つ て は,反 第5図. 応 開 始 当 初 か らO2消. riboseを. 基 質 と し たO2消. 添 費量 費. 曲 線(1)Sh.. 費 量 を測 定. flexneri. 1a. に於 て は. 費 が 極 め て大 とな る こ と. つ て 前 処 理 し た 菌 体 は,基. 菌 で もglucoseを. とな るが,た. ゞ1a菌. 以. 質 を添 加 せず して. 前 処 理 した も の に 比 しgluconate酸. 化能が大. の そ れ に 比 較 す る と幾. 分 程 度 は お と つ て い た.. 菌 液(湿 3.0mlと. glucose処. 理 菌 体 のgluconate酸. 化 能. 菌 量20mg)2.0ml,基 す る .. 質 各0.3ml,全. pH7.2,. 1.. pepton. 2.. glucose. 3.. ribose. 4.. ribose+pepton. 5.. ribose+glucose. 第6図. 菌 液(湿. (100ƒÁ/cc) (M/3000) (M/100). riboseを. 基 質 と し たO2消. 菌 量20mg)2.0ml,. 10‑2M)0.3ml,全 1hr.. 量3.0mlと. glucose(終 す る,. 濃 度 pH7.2,. flexneri. 菌 量20mg)2.0ml,基. 3.0mlと. す る.. 量. 37℃.. 曲 線(2)Sh.. 37℃,. 基 質. の 各菌 体. の 如 く, 1a菌. が 認 め られ た. 2a, 3a両. 菌 液(湿. 費. 各 普 通 寒 天 培 養 供 試 菌 体 のriboseを. 以 つ て 前 処 理 した 菌 体 はgluconate. を 基 質 とせ るO2消. 第1表. 謝. pH7.2,. 1.. pepton. 2.. glucose. (100ƒÁ/cc). 3.. ribose. 4.. ribose+pptone. 5.. ribose+glucose. (M/3000) (M/100). 2a. 質 各0.3ml,全 37℃.. 費. 量.
(4) 2464. 藤. 第7図. riboseを. 基 質 と し たO2消. 曲 線(3)Sh.. flexneri. 本. 剛. 平. は 明 ら か に 増 大 し た.他. 費. 菌2a,. a3に. ついて. も ほ ぼ 同 様 の 成 績 で あ つ た.. 3a. 以 上 の 如 きriboseを 及 び 更 にglucoseを. 基 質 と し たO2消. 費,. 添 加 し た 場 合 のO2消. に 対 す るSM(10‑3M)の. 費. 影 響 を み る と第8図. に 示 す 如 く各 菌 共ribose単. 独,及. びglucose. と 共 に 添 加 し た 場 合 の 何 れ に 於 て もSM添 に よ りO2消. は む し ろ 促 進 さ れ る 傾 向 が 見 ら れ た.こ は 前 述 のgluconateの 菌 液(湿. 菌 量20mg)2.0ml,基. 3.0ml,. pH7.2,. 37℃. 1.. pepton. (100ƒÁ/cc). 2.. glucose. 3.. ribose. 4.. ribose+pepton. 5.. ribose+glucose. 第8図. 質 各0.3ml,全. (M/3000) (M/100). 菌 液(湿. 基 質 と し たO2消. flexneri 1a. Sh.. flexneri. 2a. Sh.. flexneri. 3a. 菌 量20mg)2.0ml,基. 1.. ribose. 1•L.. ribose+SM. 2.. ribose+glucose. びgluconateに. 馴 ら. し,そ. れ ら の 菌 体 のribose酸. た.即. ち 各 普 通寒 天培 養 菌 体 の浮 游 液 を調 製. 化能 を検 討 し. glucose,. gluconate処. ribose酸. 化能. 理 菌体 の. 費 曲線. 影響. Sh.. 量3.0ml. あ つ た.. 第2表. riboseを. の点. 場 合 と相 異 る ところ で. 次 に 各 菌 をglucose及. に 対 す るSMの. 0.3ml,全. 量. .. 加. 費 は 殆 ん ど 影 響 さ れ な い か,或. 質 各0.3ml,. SM. .. (M/100). •L g20ribose+lucose+SM. (10-3M) (M/3000). 菌 液(湿. 菌 量20mg)2.0ml,. (終 濃 度10‑2M)0.3ml,全 7.2,. 37℃,. 1hr.. glucose, 量3.0mlと. gluconate す る,. pH.
(5) Sh.. し,こ れ を3分 gluconateを. flexneriに. し,夫 々M/30glucose,. 加 え た もの,及. 属 す る 菌 のglucose代. M/30. 第4表. 謝. 2465. ribose酸. 化 酵 素 系 の 時 間 的 安定 度. び 基 質 を 加 えな. い もの を2時. 間 振 盪 した 後,遠. 体 を 集 め,更. に. 沈 して夫 々菌. 回 緩 衝 液 で 洗 滌 後,同. 一菌. 濃 度 とな る様 緩 衝 液 に 再 浮 游 し た も の を 用 い てriboseを. 基 質 と し たO2消. 結 果 は 第2表 gluconateを. 費 量 を 測 定 し た.. の 通 り, 1a菌. で はglucose,. 以 つ て 前 処 理 し た 菌 体 は,基. 無 添 加 で 前 処 理 した も の に 比 しriboseを と したO2消. 費 量 は や や 大 とな り2a,. 3a菌. に 於 て も 同 様 の傾 向 が 見 られ た が,そ は1a菌 3.. 質 基質. の程 度. よ りは お と る 様 で あ っ た, gluconate及. びribose酸. 化 に関 す る酵. 素 の安定 度 gluconate,. 次 に 各 供 試 菌 をgluconate及. riboseを. 夫 々C源. とす る培 地 に. 発 育 した 菌 体 を 用 い, gluconate及. びribose. の 酸 化 に 関 与 す る 酵 素 系 の 安 定 度 を し らべ た . 先 づgluconate及. びriboseに. 体 を 集 菌 後 緩 衝 液 を 以 て3回 緩 衝 液 に 浮 游 せ し め,基 間,. 2時 間,. 菌 液(湿 菌 量20ml)ribose(終 濃 度10‑2M)0.3 ml,全 量3.0mlと す る, pH7.2, 37℃, 1hr.. 適 応 した 菌. 充分 洗 滌 した後. 質 を 加 え な い で1時. 3時 間 及 び5時. 間, 37℃. で振. 培 地 継 代 数 とgluconate或. びriboseの はriboseの. 各 酸 化. 能 の 関 係 を 検 討 し た. 先 づ,普 し,各. 通 寒 天 よ りgluconate培. 代 の 菌 体 のgluconate酸. 費 量 よ り 見 る と 第5表. 2代. 化 能 をO2消. の 通 り.各. 継 代 に よ り す で にgluconate酸. 地 え継 代. 菌 共1代. の. 化 能 を 獲 得 し,. 以 下 は 大 差 な か つ た.. 盪 した 後 夫 々 を 遠 沈 し 菌 体 を 再 浮 游 し た も の に つ き, gluconate又 O2消 費 量(1時 3表,第4表. はriboseを. 間 値)を. 基質 とし. 測 定 し た .結. 第5表. gluconate酸. 化 酵 素 系 の 活性. と継 代. 数 の関 係. 果は第. に 見 ら れ る如 く,振 盪 時 間 と 共. にgluconate酸. 化 酵 素 系, ribose酸 化 酵 素 系. の活性 は 多少 低 下 す るが これ は 菌体 の 全酵 素 系 の 活 性 の 低 下 に よ る もの と考 え ら れ る程 度 の もので あつ た. 第3表. gluconate酸. 化 酵 素 の 時 間 的安 定 度. 菌 液(湿 菌 量20mg)2.0ml, 10‑2M)0.3ml,全 量3.0mlと ,. のribose酸. 10‑2M)0.3ml,全 37℃,. 1hr.. 量3.0mlと. gluconate(終 す る,. 濃 度 pH7.2. ,. 大 と な り, ribose酸 にgluconateの わ れ た.. 地 え継 代 した 場 合. 化 能 を 同 様 に 測 定 す る と 第6表. の 通 り 各 菌 共3〜4代 菌 量20mg)2.0ml,. 濃度 37℃. 1hr.. 又 普 通 寒 天 よ りribose培. 菌 液(湿. gluconate(終 す る, pH7.2,. 頃 よ りribose酸. 化能 が. 化 能 の獲 得 は 各 菌 共 一 般. そ れ よ り も困 難 で あ る 様 に 思.
(6) 2466. 藤. 第6表. ribose酸. 本. 剛. 化 酵 素 の 活 性 と継 代 数. 平. 第8表. ribose適. の関 係. 菌 液(湿 菌 量20mg)2.0ml, 0.3ml,全 量3.0mlと す る, 次 にgluconate培 gluconateに. ribose(終 濃 度10‑2M) pH7.2, 37℃, 1hr.. 地 に5代. 以 上 継 代. 地. 化能の消失. 菌 液(湿 菌 量20mg)2.0ml, ribose(終 濃 度10‑2M) 0.3ml,全 量3.0mlと す る, pH7.2, 37℃, 1hr.. し て. 適 応 せ し め た 菌 をglucose培. に 移 し て 継 代 し,そ. 応 菌 のgluconate培. 継 代 に よ るribose酸. 第9表. 地. ribose適. 応 菌 のglucose培. 代 に よ るribose酸. 地 継. 化 能 の消 失. の 各 代 の 菌 体 のgluconate. 酸 化 能 を 見 た と こ ろ 第7表. の 通 り各 菌 共 に2. 〜3代. 化能 は急 激 に 低 下. 目 よ りgluconate酸. し て し ま う の が 認 め ら れ た. 第7表. gluconate適. 応 菌 のglucose培. に よ るgluconate酸. 地継 代. 化 能 の消 失. 菌液(湿 菌 量20mg)2.0ml, ribose(終 濃度10‑2M) 0.3ml,全 量3.0mlと す る, pH7.2, 37℃, 1hr.. IV.総 Sh. flexnerに 及 びriboseを 菌 液(湿. 菌 量20mg)2.0ml,. 10‑2M)0.3ml全. gluconate(終. 量3.0mlと. す る,. pH7.2,. 濃 度 37℃,. り,そ. 地 に5代. nate培. 以 上 継 代 し てribose. 地 に 継 代 しribose酸. た と こ ろ,第8表,第9表 地,各. 菌 共2〜3代. 下 し,普. 通 寒 天 よ りglucose培. 1a,. 2a,. 酸 化 に 関 与 す る酵 素 の 生 成,消. 化 能 の低 下 を 見. 目 よ りribose酸. flexner. 体を. 各教室 riboseの. 失 及 び これ ら. の 酵 素 が い わ ゆ る 適 応 酵 素 で あ るか,構. 培. 成酵. 素 と見 做 さ れ る も の か に つ い て の 検 討 を 行 つ. 化能は低. た.. 地 或 はgluco. nate培 地 に 継 代 した も の と 差 異 が な く な つ た. 3aの. 保 存 株 を 供 試 菌 と し てgluconate,. 地 及 びgluco. に 示 す 通 り,各. 酸 化 し難 い の で あ る が,菌. れ ら の 酸 化 能 を 獲 得 す る よ うに な る.. 本 編 で はSh.. 又ribose培. 属 す る 菌 は 一 般 にgluconate. 長時 間 これ ら の基 質 と接触 せ しめ る こ とに よ. 1hr.. に 適 応 せ し め た 菌 をglucose培. 括 及び 考 案. 普 通寒 天培 養 の 菌体 を洗 滌 後 緩 衝 液 に浮 游 .. しgluconate又. はriboseと2時. 間 振 盪 す る と,.
(7) Sh.. flexneriに. 属 す る 菌 のglucose代. 極 め て 徐 々 に し か これ ら の 酸 化 能 を 獲 得 し な い が, gluconateと 程 度)riboseと. と共 に 振 盪 す る と 夫 々gluconate, 化 能 が 著 明 に 増 大 す る.而 glucoseとpeptonを. V.結. ribose酸. し てgluconateと. 時 間 添 加 して振 盪 した の. 酸 化 能 獲 得 の機 序 が. 有 下 に 対 す るgluconate酸. 化 能 の 獲 得 は 各 菌 共SM(10‑3M)添 完 全 に 抑 制 さ れ るが(第4,. 加に よ り. 5, 6図),. 添 加 に よ り促 進 され たribose酸. こ れ ら の 事 実 よ りgluconate酸 酵 素 系 はgluconate,. peptonの. glucose. 化 能 はSMに. よ つ て は 全 く影 響 され な い(第10,. 2a,. 供 試 菌 と し てgluconate,. 3aの. 獲 得,消. 11, 12図).. の か,或. は い わ ゆ る構 成 酵 素 と 見 做 さ れ る も. 1.. gluconateの. 酸 化 に 関 与 す る 酵 素 は,. 菌 体 をgluconateと2時. 間 以 上接 触 せ しめ る. こ と に よ り 徐 々 に 生 成 さ れ,こ peptonを SMは. riboseの. の 酵 素 系 は適 応 的 に 生 成 され. 酸 化 能 は 菌 体 をriboseと. か 獲 得 し な い が,こ. く と著 明 に 獲 得 し, SMは 接触せ し. か 否 か を 各 菌 に つ い て 見 る に1a菌. は, M/30. にgluconate酸. 間 振 盪 す る こ と に よ り明 ら か 化 能 を 獲 得 し2a,. 3a菌. で も. 従 つ てribose酸. れ にglucoseを. 加 え て置. そ れ を 阻 害 し な い.. 化 酵 素 系は も と も と菌体 内に 一. 存 在 す る も の と考 え ら れ る. 3.一. 旦 獲 得 し たgluconate,. 能 は,菌. ribose酸. 放 置 し て 置 い て も 尖 わ れ な い が,そ. れ ら の基. よ りは 小 で あ る が 同 様 の こ. 質 を 含 ま な い 培 地 に 継 代 す る と1〜3代. とが 見 ら れ る.又. 菌 体 をglucose或. て す で に 失 わ れ る.. nateに あ らか じ め 接 触gluconate,或 をC源 れ らC源. はribose. とした培 地に 各 菌 を継 代 した場 合 の こ え の 適 応 乃 至 は 「馴 れ 」 の 現 象 を 見. る と 何 れ も継 代1代 或 はribose酸. 目 よ りか な りのglnconate. 化 能 を 獲 得 し,. 高 度 の 活 性 を 示 し,. 2代 で す で に. 3代 以 後 は 殆 ん ど 変 化 な. くこれ らの適 応 は 比 較 的容 易 に起 る もの と推. 4.. gluconate酸. 3a菌. で は 著 明 に,. で は 僅 か に 得 られ る.又ribose酸. 化 能 は 菌 体 をglucose又. はgluconateと. 振 盪 す る こ と に よ り, 1a菌 3a菌. にし. 化 能 は 菌 体 をglucoseと. 共 に 振 盪 す る こ と に よ り1a菌 2a,. 化. 体 が それ らの 基 質 を 除 去 して長 時 間. そ の 程 度 は1a菌. はgluco. 長. 時 間 接 触 せ し め る こ と に よ り極 め て 徐 々 に し. え ら れ る14).. の適 応 が起 る もの. して. 化 酵 素 系 の生. 存 在 下 に適 応. 2.. れ に更 に. 加 え る と著 明 に 生 成 さ れ る.而. こ の よ うなgluconate酸. る も の で あ る こ と が 推 定 さ れ る.. 次 に 菌 体 を あ ら か じ めglucoseに. 酸 化 能 の. こ れ ら基 質 の. 酸 化 に 関 与 す る酵 素 系 が 適 応 的 に 生 成 す る も. に 保 有 さ れ た い わ ゆ る構 成 酵 素 で あ ろ う と考. glucoseと2時. riboseの. 失 に つ い て 検 討 し,又. 成 を 阻 害 し,こ. 化 に 関 与 す る酵 素 は も と も と 菌 体 内. め た 場 合 に もgluconateえ. 各教室保存株を. 化 に関 与 す る. 的 に 生 成 さ れ る もの と推 定 さ れ るに 対 し ribose酸. St. flexneri 1a,. の か に つ い て の 実 験 を 行 い 次 の 結 果 を 得 た.. 相 異 る こ とを 示 す も の と考 え ら れ る. 而 してpepton共. 言. 度). で は 無 効 で あ つ た こ と は 注 目 す べ き 点 で, びriboseの. 2467. 定 さ れ る.. 微 量 のpeptoa(100γ/cc. 微 量 のglucose(M/3000程. gluconate及. 謝. 共に. で は 著 明 に, 2a,. で は 僅 か に 得 ら れ る. (参考 文 献 は第3編 の末 尾に 記 載).
(8) 2468. 藤. Glucose Metabolism. 本. 剛. of Bacteria. 平. Belonging to Sh. flexneri. Part 2. Adaptation. to Glucose and Ribose By Gohei Fujimoto. Departmentof Microbiology OkayamaUniversity MediclaSchool (Director: Prof. SakaeMurakaml) After studying the gain or loss of oxidizability of glucose or ribose by each of standard strain bacteria such as Sh. flexneri 1a, 2a and 3a, the following results were obtained. 1. Oxidizability of gluconate gradually takes place if bacteria are kept in contact with gluconate for more than 2 hours, but when pepton is loaded in addition oxidizability is en hanced markedly. Since streptomycine has been found to inhibit the production of enzyme oxidizing gluconate, it appears that enzyme is being produced adaptibly. 2. Oxidizability of ribose can be gradually realized by keeping bacteria in contact with ribose for a long period of time, and with addition of glucose it is enhanced strikingly. Moreover, as it is not inhibited by streptomycine, it seems reasonable to assume that ribose oxidizing enzyme existed in bacteria themselvesfrom the first. 3. Oxidizability of gluconate is attained in various degrees by shaking bacteria with glucose; and in the case of Sh. flexneri 1a it is pronounced while in the cases of 2a and 3a it is attained but slightly. As for the oxidizability of ribose, when ribose is shaken either with glucose or gluconate, in the case of Sh. flexneri 1a it is marked while in the cases of 2a and 3a it is attained only slightly. 4. Oxidizability of gluconate or ribose already obtained can last for a quite long time even when the bacteria are stripped of these substrates, however, when bacteria are succes sively cultured on the medium not containing such substrates the oxidizability is lost imme diately..
(9)
関連したドキュメント
The results of this study showed that long post core teeth had higher fracture resistance than short post core teeth in endodontically treated teeth. Key words :
( iii ) Some information was obtained for the reaction temperature dependance of mean mole cular weight of self-condensation products and bemyl phenols having
鉄筋コンクリート構造物の耐久性は，劣化因子がコ
乳酸を多量につくり,しかも耐熱性の胞子をつくる菌については,乳酸菌(1)あるいは有胞子
植物性食品は,保存しておくと,まずくなる。このひとつの原因としてhemicelluloseが分
入間丹毒臨床例4入墨就キ丹毒ニヨリテ生ゼシ水ヲ苞内容液自ロチ皮膚炎症時二於をル滲出液中イ中性嗜好
板の最終圧延方向を RD 方向とした． 圧延は直 径 150mm の 2 段ロール圧延機を使用し，ロー ル周速 100mm/sec，ロールを加熱せずに常温
摩擦撹拌接合(Friction stir welding : FSW)は従来の溶接法と比べ低入熱化および
