アトピ-性皮膚炎患者皮膚表皮の最終分化産物の異常について
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(2) 博 士 学 位 論 文. ア トピー性 皮 膚 炎患 者皮 膚 表 皮 の最 終 分化 産 物 の 異 常 につ いて. 平 成5年11月. 近 畿 大学大 学 院 医学 研 究 科 内科学系専攻(指 導:手 塚. 瀬. 口. 得. 正 教授). 二.
(3) ア ト ピ ー性 皮 膚 炎 患 者 皮 膚 表 皮 の 最 終 分 化 産 物 の異 常 にっ い て. 近畿大学医学部皮膚科学教室 瀬. 口. 得. (指導:手 塚. Abnormalities. in. in. skin. epidermal. from. 正. School. of. differentiation. with. Tokuji of. 教授). terminal. patients. Department. 二. atopic. dermatitis. Kinki. University. Seguchi. Dermatology,. Medicine,. (Director. products. Osaka,. : Prof.. Japan. i Tezuka). Tadash. ABSTRACT Filaggrin, terminal. cystatin. A and. differentiation.. corneum.. However. the. is always. dry. easily. and. involucrin. They. are required. surface. of the. becomes. formation.. This. study. investigated. in patients. with atopic. dermatitis.. skin. obtained. human and. the. from. filaggrin, amounts. 27 patients anti-human of. are. reaction. the. for normal. skin. itchy, the. principal. of patients. indicating. cause. atopic. cystatin products. with. abnormal. dermatitis. were. determined. corneum. of the skin. were. stratum. dermatitis. stratum. sections. anti-human. of the atopic. of the dryness. A and. of epidermal. formation. Paraffin-embedded with. products. surface. of specimens labelled. involucrin using. with. of anti-. antibodies, a chromato-.
(4) scanning. meter.. The amount contrast,. of filaggrin. there. of filaggrin dermatitis. was 4.89±0.36 fig (n=12). were respectively. in lesional patients.. skin (AD-L). (n=4). significant. ±0.57 jig (n=10) There. significant.. in NS, 3.14±0.54gg. were no statistically. (n=4). that. a decrease. emollient the causes. factor. (free. amino. acids). atopic. dermatitis,. quantitative. analysis.. (n=4). of atopic. and between. t-test).. skin (NS). NS. The amount. and 3.95± 0.14 Atg. The difference. between. The amount. of involucrin. was 3.31. in AD-NL,. 2.36±0.36µg. differences. of involucrin.. of filaggrin,. of dry skin in patients. Key word: chemistry,. in the amount. (AD-NL). In. in AD-L,. significant. and AD-L or NS and AD-NL in amount. skin. NS and AD-L. in control. skin (NS).. and 2.91±0.40µg. (p<0.001,student. but 2.13±0.22 ,ag (n=16). NS and AD-L was statistically. AD-L.. between. A was 4.23±0.37 itg (n=9). in AD-NL,. (n=12). and non-lesional. The differences. and AD-NL were statistically of cystatin. 2.40±0.37µg. in control. between. These. corneum,. either. findings. which is the precursor. in the stratum. (n=16). in NS. suggest. protein. for. may be one of. with atopic dermatitis.. filaggrin,. cystatin. A, involucrin,. immunohisto-.
(5) 緒. 言 ア ト ピ ー 性 皮 膚 炎 は 近 年 患 者 数 の 増 加 が 指 摘 さ れ,特. 様 に 思 わ れ,一 る と3群. 大 国 民 病 と な っ て い る.こ. に 分 け る こ と が 出 来 る.即. >10,0001U/認. し か し な が ら,皮 膚 は 乾 燥 し,掻 る.更. れ ら の 患 者 を 血 清IgE値. ちIgE値. 以 上 の 群 で あ り 血 清IgE値. 面 で 異 常 が あ る と 予 想 さ れ,そ. の 点 か らみ. が 正 常 な 群,1000∼50001U/㎡. の 群 と,. の 点 か ら一 様 で な い が 免 疫 防 御 機 能 の. の 方 面 の 研 究 は 活 発 に 行 わ れ て い る.. 膚 機 能 の 点 か ら み る と,昔. 痒 閾 値 が 低 く,ア. に 皮 脂 分 泌 量1-3,発. に 成 人 例 の 増 加 は確 実 の. か ら ア トピ ー性 皮 膚 炎 の 患 者 の 皮. ル カ リ中 和 能 が 低 下 して い る こ と が 知 られ て い. 汗 量4-6の. 低 下 も 知 ら れ て お り,角. 層 の性状 の変化. に 加 え て 皮 膚 付 属 器 の 機 能 低 下 が 示 唆 さ れ て い る.角. 層 のバ リア ー機 能 を示 す マ ー. カ ー の 一 つ に 経 表 皮 水 分 蒸 散 度(TEWL)が. の値 は ア トピ ー性 皮 膚 炎 患. あ り,こ. 者 の 皮 疹 部 ば か り で な く 無 疹 部 で も 有 意 に 増 加 し て い る3・7・8.又,角 バ リ ア ー 機 能 と し て 感 染 防 御 機 能 が あ る が,正. 層 の他 の. 常 皮 膚 表 面 か ら ほ と ん ど黄 色 ブ ド. ウ 球 菌 が 培 養 検 出 さ れ な い の に 較 べ て ア ト ピ ー 性 皮 膚 炎 患 者 皮 膚 表 面 か ら ほ ぼ86 %の. 割 合 で 培 養 検 出 さ れ る9.又,正. 常小 児 に比 べ て ア トピー性 皮 膚 炎 罹 患 児 は. 圧 倒 的 に 伝 染 性 軟 属 腫 や 伝 染 性 膿 痂 疹 に 罹 り 易 い1°な ど ア ト ピ ー 性 皮 膚 炎 患 者 皮 膚 の 感 染 防 御 機 能 も 明 ら か に 阻 害 さ れ 低 下 し て い る.こ の た め に ダ ニ の 酵 素 タ ン パ ク(シ. ス テ イ ン プ ロ テ ア ー ぜ1)や. ア レ ル ゲ ン が 経 皮 膚 的 に 体 内 に 入 り,生 し て い る と 予 想 さ れ,治. の よ うな角 層 の機 能 低 下. 体 を 感 作 し,又,ア. 療 上 の 大 き な 問 題 点 と な っ て い る.今. 他 の種 々の細菌性 レル ギ ー炎症 を惹 起 回,ア. ト ピー 性 皮. 膚 炎 患 者 の 角 層 機 能 を 角 層 構 成 タ ン パ ク の 主 成 分 で あ るfilaggrin,cystatinA とinvolucrinの. 生 成 量 を パ ラ メ ー タ ー と し て 測 定 検 討 し た.即. 防 い で い る 保 湿 因 子 の 前 駆 体 で あ るfilaggrin12-15に 重 要 と 考 え ら れ て い るcystatinA16-19に 重 合 し 膜 を 強 化 す るinvolucrin'°2'に. ち,角. 対 す る 抗 体,感. 層 の乾燥 を 染 防御機能 に. 対 す る 抗 体 と 更 にcornifiedenvelopeに 対 す る抗 体 を 用 い て 免 疫 組 織 学 的 に ア トピ ー. 性 皮 膚 炎 患 者 表 皮 で の こ れ ら の 因 子 の 合 成 能 を 検 討 し た.. 一3一.
(6) 材 料 と方 法 1.被. 検 材料. 対 象 は1982年 よ り1991年 の 間 に 近 畿 大 学 附 属 病 院 を 訪 れ た ア ト ピ ー 性 皮 膚 炎 患 者27例 で あ る(臨 床 型 の 詳 細 はTable1に 膚 炎 の な い 患 者 よ り手 術(良 膚 を も ち い た.そ し,4μmの. 性 腫 瘍,主. 示 す).ま. た 対 照 と して ア ト ピ ー 性 皮. と して 色 素 性 母 斑)の. れ ぞ れ の 生 検 組 織 を10%ホ. 際 得 られ た正 常 皮. ル マ リ ン液 で 固 定 後 パ ラ フ ィ ン包 埋. 薄 切 標 本 を キ シ レ ンお よ び エ タ ノ ー ル で 脱 パ ラ フ ィ ン後,酵. 組 織 化 学 法 に よ り染 色 を 行 っ た.. 素免 疫.
(7) Table. No. 1 Profile. Age. of. the. atopic. Lesion. dermatitis. Type. 1. 2. back. papular. 2. 5. back. erythematous. 3. 6. Ieg. 4. 7. chest. 5. 7. abdominal. 6. non-lesional. skin. papular non-lesional. 8. arm. 7. 9. abdominal. 8. 11. back. 9. 11. arm. erythematous. 10. 13. back. papular. 11. 13. face. erythematous. 12. 14. back. papular. 13. 15. chest. 14. 16. back. erythematous. 15. 16. back. papular. 16. 17. arm. 17. 17. chest. erythematous. 18. 19. arm. erythematous. 19. 24. arm. erythematous. 20. 27. chest. 21. 30. back. erythematous. 22. 34. back. papular. 23. 37. arm. erythematous. skin. papular papular papular. papular. papular. non-lesional. 38. arm. 25. 43. chest. erythematous. 26. 48. back. erythematous. 27. 48. chest. erythematous. 24. cases. non-lesional. — 5 —. skin. skin.
(8) 2.使. 用 し た 抗 体. 抗involucrin抗. 体;BiomedicalTechnologiesInc.社(U.S.A.)のinvolucrin. immuno-kitのanti-involucrinpolyclonalantibody.抗filaggrin抗 TechnologiesInc.社. のanti-humanfilaggrinmonoclonalantibodユAnti-human. cystatinApolyclonalantibodyは (宝 酒 蔵,京. 3.方. 体;Biomedical. 都)で. リ コ ン ビ ナ ン ト ・ シ ス タ チ ンA(r-cystatinA). 家 兎 を 免 疫 し て 作 成 し た 抗 体 を 用 い た.. 法. 3.1.免. 疫 組 織 化 学 染色. 免 疫 組 織 化 学 染 色 はlabelledstreptavidinbiotin(LSAB)法 フ ィ ン 切 片 を3%H,O,加 た 後,5%正. 間 室 温 で イ ン キ ュ ベ ー ト し,一. anti-involucrinpolyclonalantibody(原 希 釈)を. 次 抗 体 と して. 液),anti-humancystatinApolyclonal. そ れ ぞ れ20℃. filaggrinmonoclonalantibody(1:200倍. で20分. 間 反 応 さ せ た.Anti-human. 希 釈)は1m4を,使. 用 前 に 予 あ1μ9の. 牛 肝 グ リ コ ー ゲ ンTypeIX(SigmaChemicalCampany,U.S.A.)で4℃ 晩 反 応 さ せ た 後21,15,000rpm×10分 た.二. で一. 間 遠 心 し た 後 使 用 し,20℃. で60分. 間反応 させ. 次 抗 体 に は ビ オ チ ン化 抗 ウ サ ギ お よ び マ ウ スIgG(DAKO社,U.S,A.)を. 用 い 室 温 で10分 間 反 応 さ せ た.さ を20℃. パ ラ. メ タ ノ ールで 内 因 性 ペ ル オ キ シ ダ ー ゼ 活 性 を 阻 止 し. 常 ヤ ギ 血 清 と5分. antibody(1:1000倍. で 行 っ た.脱. ら にHRP標. 識 ス ト レ プ ト ァ ピ ジ ン(DAKO社). で10分 間 反 応 さ せ,3-amino-9-ethylcarbazole(AEC)(DAKO社)に. 発 色 さ せ た.測. 定 に 用 い た 標 本 の 年 齢,採. 取 部 位,皮. て. 膚 炎 の 程 度 な ど はTable1. に 一 括 し て 掲 げ た. 3.2.抗. 体 反 応 量 の 測定. 免 疫 組 織 化 学 染 色 し た 標 本 を ネ オ パ ンFフ. ィ ル ム(FUJIASA32,Tokyo)を. い 同 一 条 件 下 に 緑 色 フ ィ ル タ ー 下 で 白 黒 写 真 撮 影 し 無 作 為 に 抽 出 し た3ヵ 皮 部 位 をChromato-Scanningmeter(島. 津 製 作 所,京. 一6一. 都)を. 用 所 の表. 用 いて 発 色 量 を 測 定.
(9) し た.そ. の 際,フ. ィ ラ グ リ ン は 角 層 外1/3の. 部 分 の 吸 光 度,イ. ンボ ル ク リ ン と シ. ス タ チ ンAは 表 皮 有 棘 層 の 吸 光 度 に 対 す る 相 対 的 吸 光 度 と し て 記 録 し た.尚,ア ト ピ ー 性 皮 膚 炎 患 者 標 本 で は し ば し ば 有 棘 層 細 胞 に も 弱 陽 性 反 応 が 認 め ら れ た が, 今 回 の 検 討 で は 角 層 下3層 3.3反. の 細 胞 の み を 穎 粒 層 細 胞 と し て 検 討 し た.. 応量の定量化. 反 応 量 の 定 量 化 試 験 に はcystatinAを. 用 い た.0.1μg∼0.6μgの. ン ト ・ シ ス タ チ ンA(rCystatinA)を2-mercaptoethano1で に し,sodiumdodecylsulfate(SDS)一 PAGE)を. 行 っ た.次. 処 理 して還 元 状 態. ポ リ ア ク リ ド ア ミ ド ゲ ル 電 気 泳 動(SDS-. にSDS-PAGE終. (MILLIPORE,U.S.A.)に. 了 後 の タ ン パ ク を 転 写 膜Immobilon. 転 写 し,1000倍. polyclonalantibodyを4℃. リコ ン ビナ. 希 釈 し たanti-humancystatinA. で 一 晩 反 応 さ せ た 後,1000倍. 抗 ラ ビ ッ トlgG(CAPPEL,US.A.)で20℃,90分. 希 釈peroxidaseラ. 間 反 応 さ せ た.Peroxidaseの. 発 色 は0.05%diaminobenzidine(DAB),0.01%過. 酸 化 水 素 水 で 行 っ た.得. られ た. 津 製 作 所)を. 用 いそ. プ ロ ッ トを 白 黒 写 真 撮 影 後Chromato-Scanningmeter(島 れ ぞ れ の 発 色 量 を 測 定 し た.得. ベ ル. られ た値 よ り 発 色 量 に対 す る タ ンパ ク の 相 対 量 の. 検 量 線 を 求 め た.こ の 検 量 線 を 標 準 曲 線 と し て 各 組 織 の 発 色 量 を タ ン パ ク 量 と し て 示 し 比 較 検 討 し た.. 結. 果. 1.抗filaggrin抗. 体 に よ る検 討. 正 常 表 皮 で はfilaggrinは た.穎. 穎 粒 層 と 角 層 の一 部(最. 粒 層 は ほ ぼ 均 一 に 強 陽 性 を 示 した が,角. あ っ た(Fig.1A).一. 方,ア. 限 局 して 認 め られ. 層 最 内層 部 は弱 陽 性 を示 す の み で. ト ピ ー性 皮 膚 炎 患 者 皮 疹 部 皮 膚 で は 穎 粒 層 部 分 に. 染 色 陽 性 部 分 が 認 め られ た が,そ れ た.陽. 内 層)に. の 染 色 は 不 均 一 で,染. 色 さ れ な い 部 分 も認 め ら. 性 の 程 度 は 正 常 表 皮 に 較 べ 弱 く個 々 の 細 胞 の 染 色 性 も一 様 で な く濃 淡 が. 一7一.
(10) 認 め ら れ た(Fig.1B).無. 疹 部 皮 膚 で も 染 色 陽 性 細 胞 は 一 層 で あ り,染. 色 に濃. 淡 が 認 め られ た.. 2.抗cystatinA抗. 体 に よ る検 討. 正 常 表 皮 で はcystatinAは め られ た.穎. 粒 層 で は ほ ぼ 均 一 に強 陽 性 を し め し,有 棘 層 上 層 は 弱 陽 性 を 示 し た. (Fig.1c).一. 方,ア. トピー性 皮膚 炎 皮 疹 部 表 皮 で は穎 粒 層 の 染 色 性 は正 常 対 照. の そ れ よ り も弱 く又,穎 しか も,個. 有 棘 層 上 層 か ら穎 粒 層 に か け て 陽 性 染 色 部 分 が 認. 粒 層 以 外 に 有 棘 層 中 層 も弱 陽 性 を 示 す こ と が 多 か っ た.. 々 の 細 胞 の 染 色 性 は不 均 一 で あ っ た(Fig.1D).し. か し,無. 疹部皮. 膚 で は 染 色 性 は 正 常 人 皮 膚 表 皮 と ほ ぼ 同 等 で あ っ た.. 3.抗involucrin抗. 体 に よ る検 討. 正 常 表 皮 で はinvolucrinは (Fig.1E).ア. 穎粒層 にほぼ 均一 に染 色 陽性 部 分 が認 め られ た. ト ピ ー 性 皮 膚 炎 皮 疹 部 表 皮 で は 穎 粒 層 に 陽 性 反 応 が 認 あ ら れ た が,. 有 棘 層 中 層 に ま で 弱 陽 性 反 応 が 認 め ら れ る こ と が あ っ た.し め て 弱 か っ た.又,個. か しその 程 度 は き わ. 々 の 細 胞 の 染 色 性 も 不 均 一 で あ っ た(Fig.1F).一. 無 疹 部 表 皮 で は 正 常 表 皮 と 同 等 の 陽 性 染 色 反 応 が 認 あ ら れ た.. 方,.
(11) Fig.. 1. Immunohistochemial. reactions. to various. antibodies. ( x 150) A and B show reactions antibody.. to anti-filaggrin. C and D show anti-cystatinA. body. E and F show anti-involucrin A,C and E were normal were lesional. skin from. —9—. polyclonal. poly-clonal. skin sections atopic. monoclonal. and. dermatitis. anti-. antibody. B,D and F. patients..
(12) 4.抗. 体 反 応 量 の 測 定 に よ る検 討. 4.1.吸. 光 度 に よ る比較. 白 黒 写 真 撮 影 し た 各 染 色 標 本 をChromato-Scanningmeterを 測 定 し 比 較 検 討 を 行 っ た.Filaggrinは. 正 常 表 皮 で95.80±8.93(n=7),ア. 性 皮 膚 炎 皮 疹 部 で29.65±8.79(n=12),無 部,無. 用い て発 色量 を トピ ー. 疹 部 で45.09±11.19(n=4)で,皮. 疹. 疹 部 と も に 正 常 表 皮 と の 間 に 統 計 学 的 に 有 意 差(p〈0加1)が. (Fig.2).次. 認 め られ た. に,cystatinAは,正. 常 表 皮 で77.90±9.14(n=9),ア. トピ ー性 皮 膚. 炎 皮 疹 部 で22.90±3.90(n=16),無. 疹 部 で71.20±9.14(n=4)で,皮. 疹 部 と正 常 表. 皮 と の 間 に の み に 統 計 学 的 に 有 意 差(p〈0.001)が crinは 正 常 表 皮 で53.14±15。12(n=10),ア (n=15),無. 疹 部 で50.02±13.89(n=4)で,皮. 認 め ら れ た(Fig,3).Involu. ト ピ ー 性 皮 膚 炎 皮 疹 部 で28.80±4.56 疹部 の値 は正 常表 皮の そ れ よ り も. か な り 低 値 を 示 し た が 統 計 学 的 に 有 意 差 は 認 め ら れ な か っ た(Fig.4).さ ア ト ピ ー 性 皮 膚 炎 患 者 の 皮 疹 部 皮 膚 に お い て 成 人 例(16歳 び 臨 床 症 状(毛. 孔 性 丘 疹 部 と 紅 斑 部)の. 有 意 差 は 認 め ら れ な か っ た(F三gs.5,6).. 以 上)と. 小 児 例,お. らに よ. 違 い によ る差 の比 較 検 討 を行 った が 共 に.
(13) Fig.. 2. Comparison. of the amounts. normal. skin (NS),. lesional. skin (AD-L). The symbol. Data. the non-lesional from atopic. ( * ) indicates. the two columns. of filaggrin. (AD-NL) dermatitis. that the difference. was statistically. are expressed. between. significant. as the mean ± SD.. the. and the patients between (p<0.001)..
(14) Fig.. 3. Comparison. of the amounts. of cystatin. A between. NS, AD-NL and AD-L The symbol. ( * ) indicates. that the difference. the two columns was statistically Data. are expressed. significant (p<0.001).. as the mean ± SD.. — 12 —. between.
(15) Fig.. 4. Comparison AD-NL These three. and were columns.. of. the. amount. of. involucrin. between. NS,. AD-L no. statistical. differences. Data. expressed. are. between as. the. these mean±SD..
(16) Fig.. 5. Comparison and. of. involucrin. the. amounts. between. child. of and. filaggrin, adult. atopic. cystatin. A. dermatitis. patients There sed. were as. the. no. statistical. mean-±. SD.. —14—. differences.. Data. are. expres-.
(17) gij. Fig.. 6. Ii"0. Comparison and. 0. of. involucrin. the. amounts. between. of. filaggrin,. papular. and. cystatin. A. erythematous. lesions There sed. were as. the. no. statistical. mean±SD.. differences.. Data. are. expres-.
(18) 4.2.抗. 体 反 応 量 の 定 量 化 に よ る検 討. CystatinAを 7に. 用 い て 作 成 し た 発 色 量 に 対 す る タ ンパ ク 量 値 の 検 量 線 をFigure. 示 す.こ. れ を 用 い て 各 組 織 の1ス. を 定 量 し比 較 検 討 を 行 っ た.Figure8に ±0,36μg(n=12),ア. (n=9),ア. あ た り の タ ンパ ク 量. 示 す ご と くfilaggrinは. 疹 部,無 認 め ら れ た.次. 疹部. 疹 部 と もに正 常 表 皮 との 間 に統 計 学 的 に にcystatinAは. 正 常 表 皮 で4.23±0.37μg. ト ピ ー 性 皮 膚 炎 皮 疹 部 で2.13±0.22μg(n=16),無. μg(n=4)で,皮. 正 常 表 皮 で4.89. ト ピ ー 性 皮 膚 炎 皮 疹 部 で2.40±0.37μg(nニ12),無. で2.91±0.40μg(n幕4)で,皮 有 意 差(p<0.001)が. リ ッ ト(2×0.5mm)幅. 疹 部 で3.95±0.14. 疹 部 と 正 常 表 皮 と の 間 に の み 統 計 学 的 に 有 意 差(p<0.001). が 認 め ら れ た.Involucrinで. は,正. 皮 膚 炎 皮 疹 部 で2.36±0,36μg(n=15),無. 常 表 皮 で3.31±0.57μg(n=10),ア 疹 部 で3.14±0.54μg(n=4)で,皮. 部 の 値 は 正 常 表 皮 の そ れ よ り も か な り低 値(71%)を. トピ ー性 疹. 示 した が 統 計 学 的 に 有 意 差. は 認 め ら な か っ た. ま た,成. 人 例 と 小 児 例,お. ら れ な か っ た(Figs.9,10).. よ び 臨 床 症 状 の 違 い で の タ ンパ ク量 に 有 意 差 は 認 め.
(19) Fig.. 7. Correlation the There two.. between. amount was The. of. extent. of. absorbance. and. protein. a linear, Rf. the. value. positive was. 0.953.. correlation. between. the.
(20) Fig.. 8. Comparison and involucrin. of the amounts proteins. between. The symbol ( * ) indicates two column Data. is statistically. are expressed. of filaggrin,. that. cystatin. A. NS, AD-NL and AD-L the difference. significant. as the mean± SD.. between. (p<0.001)..
(21) Fig. 9. Comparison and. involucrin. dermatitis There are. of the. amounts. proteins. of filaggrin,. between. child and. cystatin adult. A atopic. patients. were expressed. no. statistical as. the. difference. mean ± SD.. observed.. Data.
(22) Fig.10. Comparison and. involucrin. atous. lesions. There. were. are. of. expressed. the. amounts. proteins. no. between. statistical as. the. of. papular. difference. mean±. ___€)11. filaggrin,. _. SD.. cystatin. A. and. erythem-. observed.. Data.
(23) 考. 察 表 皮 細 胞 の 分 化 に 伴 っ て 表 皮 細 胞 で 生 合 成 さ れ,角. 層 細胞 の機 能 に何 等 か の 役 割. を は た し て い る 物 質 と し て 現 在 ま で にinvolucrin筑21,epidermaltransglutaminase (TGase)23,filaggrin12-15,cystatinα/A16 . 19,loricrin24,carbonicanhydlase.. likeprotein2臥26,solublecystatine-richprotein27,sphingomyelirase(SMase)28, SMaseの. 活 性 化 酵 素 で あ るsaposinD29な. Gaseはcornifiedenvelopeの. ど が 挙 げ ら れ て い る.InvolucrinとT. 形 成 に,filaggrinは. 角 層 の 保 水 因 子 で あ る ア ミノ. 酸 や ウ ロ カ ニ ン 酸3° の 前 駆 物 質 と し て,cystatinα/Aは 制 に,SMaseは. 角 層 細 胞 間 物 質 の50%を. 働 い て い る.一. 方,ア. 度(TEWL)値. が 充 進 し て お り&32角. 検 出 さ れ9,又,カ が 生 じ 易 い.し. ウイ ル ス の 接 着 増 殖 抑. 占 め る31セ. ラ ミ ド の 合 成 酵 素28と. ト ピ ー 性 皮 膚 炎 患 者 の 皮 膚 表 面 は 乾 燥 し,経. して. 表皮 水 分 蒸 散. 層 表 面 か ら極 め て 多 くの 黄 色 ブ ド ウ球 菌 が. ポ ジ 水 痘 様 発 疹 症 に み ら れ る よ う に ヘ ル ペ ス の 重 症 感 染 症'° か し な が ら,こ. は 非 常 に 少 な い.TEWLに. の 様 に 異 常 な 角 層 機 能 を 生 化 学 的 に 検 討 した 報 告. 関 係 し た 角 層 細 胞 間 の セ ラ ミ ド を 抽 出 し,正. 常 対 照. と 比 較 検 討 し た と こ ろ ア ト ピ ー 皮 膚 炎 患 者 の セ ラ ミ ド の 含 量 は 低 下 し て い た が, 脂 質 の 構 成 比 は 正 常 と か わ り が な か っ た と の 報 告33の 合 成 に 関 係 し た 酵 素 と し てSMaseが 状 態 で は 低 下 し て お り28,上 又,黄. あ り,こ. み で あ る.こ. の セ ラ ミ ドの. の酵 素 は加 齢 に基 い た 皮 膚 の 乾 燥. 記 の 報 告 と よ く一 致 し て い る.. 色 ブ ドウ球 菌 や ウ イ ル ス が 角 層 に接 着 し増 殖 す る の を 抑 制 す る 因 子 と し. て セ ラ ミ ド の 代 謝 産 物 ま た は 前 駆 物 質 で も あ る ス フ ィ ン ゴ シ ン 餌 とcystatinA が あ り,或 cystatinAに. は カ ン ジ タ の 発 育 を 抑 制 す る 因 子 と し てH1ピ は 抗 ウ イ ル ス 作 用 が あ り18,表. ス ト ン35が 挙 げ ら れ る.. 皮 細 胞 の 分 化 に伴 っ て 形 成 さ れ る ケ. ラ ト ピ ア リ ン穎 粒 の 成 分 と し て 生 合 成 さ れ る. 今 回 の 検 討 結 果 か ら,ア Aの2者. ト ピ ー 性 皮 膚 炎 患 者 皮 疹 部 表 皮 で はfilaggrin,cystatin. の み が 低 形 成 で あ っ た.Involucrinは. 細 胞 で も 形 成 さ れ る が,filaggrinとcystatinAは. 一21一. 表 皮 細 胞 の分 化 が 完 全 で な い 培 養 形 成 さ れ な い こ と を 考 え る と,.
(24) この結 果 は表 皮 細 胞 の 分 化 が 不十 分 で正 常 の角層 が 形 成 され て い な い こ とを 示 し て い る.こ. れ は皮 疹 部 に 生 じ た 炎 症 に 続 発 し た 変 化 で あ る か も し れ な い.し. な が ら,正. 常 に角 層 形 成 機 序 が 働 い て い る 無 疹 部 皮 膚 で もfilaggrinの. 意 に 低 下 し て い た.Filaggrinと るcystatinAの. か し. 形 成が有. 共 に ケ ラ ト ピア リン穎 粒 の成 分 と して 形 成 さ れ. 量 は低 下 して い な か っ た こ と か ら,ア. トピ ー体 質 の 人 の 表 皮 で. は ケ ラ ト ピ ア リ ン穎 粒 の 低 形 成 と い う よ り も 特 異 的 にfilaggrinの. 形 成 のみが 低. 下 して い る と 考 え た ほ う が 正 し い と 思 わ れ る.今. 形 成 低下 とい. 回 のfilaggrinの. う事 実 と セ ラ ミ ドの 角 層 間 含 量 低 下 と い う報 告 銘か ら,ア 細 胞 はfilaggrinと. ト ピ ー体 質 の 人 の 表 皮. セ ラ ミ ドの 生 合 成 が 何 等 か の 原 因 で 抑 制 さ れ て い る と 考 え ら. れ る.結 果 と して 角 層 表 面 は 乾 燥 し易 く,刺 激 物 質 が 透 過 し易 い の で 掻 痒 閾 値 が 高 く な る と考 え られ る.. ま. と め 生 検 又 は 手 術 時 に 採 取 し た 正 常 皮 膚,ア. トピ ー性 皮 膚 炎 患 者 皮 疹 部 及 び 無 疹 部. 皮 膚 の パ ラ フ ィ ン切 片 を 用 い てfilaggrin,cystatinA,involucrin量 学 法 で 定 量 し た.吸. を免疫組織化. 光 度 はcystatinAをSDS-PAGEしimmunoblottingし. た タ ン. パ ク バ ン ド の 吸 光 度 を 基 に し た 標 準 曲 線 よ り 定 量 し た .ア. ト ピ ー性 皮 膚 炎 皮 疹 部. で はfilaggrin,cystatinAが. 共 に 低 下 し て い た.一. の み 低 下 し て い た が,filaggrinと るcystatinAは. 疹 部 皮 膚 で はfilaggrin. 同 じ ケ ラ ト ピ ア リ ン穎 粒 成 分 と し て 形 成 さ れ. 低 下 し て い な か っ た.従. じ て い な く て もfilaggrinの. 方,無. って ア トピー体 質 の 人 の 皮 膚 は 炎 症 が 生. 形成 が低 下 した保 水 因 子 の 少 な い乾 燥 し易 い皮 膚 で. あ る と い え る.. 一22一.
(25) 謝. 辞 稿 を 終 え る に あ た り,御 指 導 な ら び に 御 校 閲 を賜 り ま し た手 塚 正 教 授 に 深 謝 い. た し ま す,ま た 本 研 究 を 遂 行 す る に あ た り,終 だ き ま し た 吉 田 正 己 講 師,ラ し上 げ ま す.さ. 始 懇 切 な る 御 指 導,御. 助 言 をい た. イ フ サ イ エ ン ス 研 究 所 高 橋 昌 江 助 手 に 心 か ら感 謝 申. らに 本 研 究 に 御 協 力 い た だ き ま し た愛 須 き ぬ よ 研 究 助 手 を は じめ. 皮 膚 科 学 教 室 員 各 位 に 感 謝 致 し ま す..
(26) 文 献. 1 ●. AbeT,OhkidoM,YamamotoK.StudiesonskinsurfacebarierfunctionsSkinsurfacelipidsandtransepidermalwaterlessinatopicskinduring childhood.JDermato11978;5:223-229.. 2.. MustakellioKK,K百salaU,PihaHJ,NieminenF.Epidermallipidsin Besniers'sprurigo(atopiceczema).AnnmedexpFenn1967;45:323-325.. 3.. 安 部. 隆.皮. 表 脂 質 とtransepidermalwaterlossと. の 相 関 性 に 関 す る 研 究.. 日 皮 会 誌1976;86:815-823. 4.. ProsePH,SedlisE.Molphologicandhistochemicalstudiesofatopic eczemaininfantsandchildren.JInvestDermatol1960;34:149.165. 児 乾 燥 型 湿 疹 の 研 究.日. ●. 藤 田 益 子,青. 木 敏 之.ア. 戻U. ●. 民り. 笹 川 正 二.小. 皮 会 誌1967;77:62-87.. ト ピ ー 性 皮 膚 炎 と 小 児 乾 燥 型 湿 疹 に お け る 発 汗 抑 制.. 日 皮 会 誌1975;85:291-294. 7.. 田 上 八 郎,吉. 国 好 道,井. 上 邦 雄,山. の 水 分 保 持 機 能 の 解 析.日. 8.. 田 瑞 穂,岩. 瀬 優 子.生. 体 に お け る表 皮 角 層. 皮 会 誌1982;92:1363-1367,. YamamuraT,MasakiH,SakonK,SuzukiK,TezukaT.Simplemonoch. romaticrefractometerfortransepidermalwaterloss.JDermatolSci 1990;1:201_206.. 9.. 弓 立 達 夫,山. 田 秀 和,手. 塚 正.ア. ト ピ ー 性 皮 膚 炎 と 黄 色 ブ ド ウ 球 菌 感 染 症.(1). 黄 色 ブ ド ウ 球 菌 検 出 頻 度 に っ い て.日. 10.. 皮 ア 会 誌1993印. 今 村 貞 夫,ア. ト ピ ー 性 皮 膚 炎 と 皮 膚 感 染 症.今. MOOK1.東. 京:金. 村 貞 夫,小. 原 出 版,1985;158-162.. 11.ThompsonPJ,StewartGA.Allergens.In:HolgateST,ChurchMK,eds. Allergyallergens.London:GowerMedicalPablishing,1993;11. 12.DaleBA.Filaggrin:Akeratin-filaggrinassosiatedprotein.AnnNYAcad Sci1985;455:330-342.. 一24一. 刷 中. 川 秀 興 編.皮. 膚 科.
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図
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