タンパク質の教材化 : 卵白タンパク質の結晶化と変性

全文

(1)題目. タンパク質の教材化一卵白タンパク質の結晶化と変性一. 専攻・コース. 教科領域教育専攻・自然系コース. 学籍番号 M 8 3 2 8 8 氏名住友正誼.

(2) 目次. g S. 序論. 1 2 3 4. g. 章111. 第 1. はじめに教育課程におけるタンパク質の取り扱い身近な生体高分子としてのタンパク質の再認識の提言. g. 第 2. 1. 卵のタンパク質. 卵白タンパク質の結晶化. 章. ワ耐999臼9一. 8ご§§§. 卵自アルブミンとリゾチーム. 卵白アルブミンの結晶化. リゾチームの結晶化. ポリアクリルアミドゲル電気泳動. −占 2 3 . 3§§§§. 第. 卵に含まれるタンパク質. ポリアクリルアミドゲル電気泳動の実際. 4. 精製・卵タンパク質の純度決定. 身近なタンパク質の分析手段. SDS一ポリアクリルアミドゲル電気泳動の実際.

(3) 第4童卵タンパク質のi変性 § 4−1 タンパク質の変性 § 4−2 卵タンパク質の熱変性 § 4−3 ポリアクリルアミドゲル電気泳動による変性の研究 § 4−3一一 1 樋．常法による測定. § 4−3…2 SDS存在下での測定 § 4−3−3 変性と消化されやすさ. g g. g. 第 6. タンパク質の教材化. 1 2 3 4轟. g. 章 5 5 5 5 章. 第 5. タンパク質の実験卵白タンパク質の結晶化卵自タンパク質の熱変性. 教材化の課題. 結論. ・おわりに. ・謝辞・文献・資料.

(4) 第／章序論 §1−1 はじめに理轍角のねらし・の一つ鳳身近な物質1ぐっし、ての練遂的意理解茎夕果める（：とtrある。動彪1，櫨物，微生物慈と∼すべての生物の治動のiC，と：になる細胞の. 野聖1ぐ矯能編1麗論㌶質誇樗知いゆξ働きぎみこζ1い，生’命客ささえる物質tさえいえる。鳶；か現在，ノ1＼誉狡∼ゲ・ら1高辱蓼絞「理科1」. の段階にろ、し、てσ，「タ〉パク婆」の敢リ4Kし、か少喬いのがw硯ン犬で1ある。. ぐの身」色で大切《1物質である夕♪ハ7ク簑客，：理糾数角にみし・て汐つど取りよげる’べきであると老えてし、る。理斜数肴の中で、タンノぐク賓玄とシの嫁う1ぐ取り扱うの1・・適当であるゴ・客撫記し，薮肴課猛への組みミみ客づ奪えるの1・・、本・研爽。の自幼である。. 1.

(5) シパク質の. 」教育課オ量にゐ・ける夕. g 1 −2. 玖り扱いの変遷 cあ・昭禾］52，旧版巻習指善甦／領理科で｛訂，ホ学校1. ，でんぷ. んdvtし、 Eノ〃つ. ぐ1ヨ光♂・檀物の・禁1. 腱るハ、房. 、ワれン・う. ドさタ’∂. 7収ぼ絞. 纏酸・脂肪酸’ ヘ. が吸で学. 場し， 2タト「肖イヒど一眠収」の単ノ・ミク質ぼ菰われて. 参高尋蓉校「理科工」. ン／、ξク彦翁のフ多く、り、扱し、‘ゴ. てのタ. ぶの・う質いや着の. 中学絞でぼ. ん物とクみり高、、で檀亥︸パにクρ。. る。. ると. ロ. 8。と﹀元’るひてとこタ単酸い召しこる・の肪ていそるきン﹂脂って. 当k. 。れで7。収・扱れ. どいう老1蒙…‘9出て成長の養・idN t. るわオン吸酸リわく使んデど／玖菰. ててポ，川化ミ左ぼ. 出しんぼ消アど質. なとでてr ．こク. い。し・て，タンパ7墳ば双、り上げられてし、Clt 「養h」. えさせてい・脂肪zfv’L，；lptS. ては，それら. リンどして. 高薯誉族「理糾］b のぱうに，ノ1・. の段階ぎで，激材ヒ．し. ，かきり較eのか硯状. である，学習指導要領でみる「タンパク質」の取り扱い. 表／. 小学校 22. 中学校. 22 7年何をどれだけ食べたらよいか。口牛乳より成分を分ける。. 8年からだはどんなに働いているか。［〕食物をとる意味〔］消化と吸収. 27 5年. @ 食べ物や食べ方の健康に対する影響を理解し、 @ 食生活を合理的にしょうとする。. 26 われわれが健康を保ち進めるには、どのような @ 飲食物や衣服を必要とするか。. @ 一難茜舗離塁できてい・か・. ロ健康を保持するには、何をどれだけ食べたら @よいか。たんぱく質. 33 4年. @ たんぱく質の牲質を調べる。 @ ロ卵・肉・牛乳・だいずなどに含まれているこ @ とを知る。ロ焼くと特臭を出して変化する。. 33 食物と栄養 @ ［］タンパク質は、炭索、水索のほかに窒素などを含む化合物であること、およびタンパク質の簡単な検出法を知る。. ロ熱した：り、酢を加えたりすると固まる。. 43 4年. でんぶん、あぶらなどの性質を理解させる。. 口たねには、でんぷんのほかあぶらたんぱく. 43 動物の物質交代消化器のつくりとはたらき口動物は栄養分を食物として取り入れ、消化し吸収していることタンパク質の消化と合成. 質多く含むものがあること。 52. 52生物の体の仕組み多紬胞生物の体の仕組みロ生物の体には、養分を取り入れる仕組みがあり、動物の消化には、酵素が重要なはた：らきをしている。. 2.

(6) 戦後の導習指尊蓼頗理糾‘〈 6・ける「タンパク質」の双り画し、の麦蓬を示したのZ・・表1である。. ・1啓校にろ・し、て，22参倣に夕〉バク質ぱ表われ. ず，27み版で食生透の関下、で蓼召され尺，それ9 て生造単元誉閣ピー；般1ぐし、われてし・ki；”のオ・33耳. 嚴で1；3系rd 23著といわれる6のに麦わっていフ於。. 33匁廠でぼ，タ〉パク衡の荏寸劇調べる奥験ガw1詳しく行愈われ良。43与版でぼ，やや・扱いZ・・少9〈愈っF．．524Mでぼ消えてし、っr〈。中細校にみし・ては、戦後ずつどタンパク後は取り扱われてきた：。し」・し、改彦アの都夜，扱い言にちtiVl. し、かみられる。22耳放・26み版な、戦後のせ相 9反臆して，生治ミどに食亭どの関徐‘細し・Z2tY za. きAk、それか33前前で紅生透単元琢著か・断片. 的愈知識の紹得に陥り11一ぢであったの客改め、示統的き理解速得られるまうtr寄ることてあっfc 1）2分. 野制か徐用された．よってタンペク後の誉習‘凱改. 畜の懲旨の箆り、臭験観察、1綾：落Z置き行遣われ於．. 戦後Rみいて最∂群しくタ〉ペク質か誉懸れ喬．. 数，科・者ユ｝の一｛創客示セニtgir“，タン／N9ク綾1の、存在左調べる. 巣験として，ごウしツト瓦1愈・lc7キサントフ・肛〕テイン. 反施ゴ・ある．夕〉ぺ慨の面分客鋼べる突験ヒして，、. 卵2加塾して黒くきること，卵白にノK酸イZナトリウム洛液客加えて速し，輿初・・、鳶つ，リトマス紙の i変ノZ．客みること，農塩酸E近．つ・C7て塩4ヒア〉モニニニウ. ムの倉煙笈み3こピ、ぐどまり，タ〉パフ後か炭素，. 魚鳥燈隠事吻であるこど鰍リ扱ってしN r，．卿み恢で‘ゴ，保究の4Z言過秘し氏理糾の自橡細雨・示さ. れrミi）夕♪パσク後の踊り潔いぼ，消41乙の→乙でのみ旨扱. われた。さsl［r52み坂でt9・，蓼愚案」導一毛の表側オ・らタ〉パク後ど・・う蜜素か消えてし・っr〈，. 嵩忠心獄「理科工」に‘￠，夕〉パフ唆ia出てミきい．参老旨して，高吟内寸「イ謄」，「生物」に関. する扱いぼ資料／1興し友、 3.

(7) −中て. の状﹂視. 工が科の理るドい. 赦マ挙っ蕃な高く多輕かナ. 赦い誉扱ホの ’後. にフ. うパト臥﹀. のタ. ぐゑ. 覧あ. 4.

(8) §・ 3身迩な生体筒分5どしての. 夕〉ハeク質の角誕鐡の堤マ茎タンパフ質どし・えぱ，魚，肉，卵きt’‘ミ含まれる栄ノ凌奏ミ粛学いう∼プ・ぺkり，ゴ≠毛，髪二の毛、生系の詮. うrK bの9連想する人6あるだうう。・私遠の身体客. 構忘している主体ぼ2kど夕〉ノぐフ須である。・骨’や歯. にん，＆た血液窓と吻〃ト液の中t〈 brcくさんの夕〉バク菌か存在する，さらに細1抱のヰにiQ、生／命硯．象. そのうの2tgっマし、るたくさんの鯵豪か珍ξれてV るか，酵素はすべて夕♪ペク質である。酵素作用左調節するタ〉バク質オ、！L芒ンや，外敵から身左守る ftめの扶体電ど，種々様勿夕♪バク後が・些墨客卜えろ大切ζ3考と劇客画しているどいえる。. 遺イ云8左構放しているDNAすきわちデオキシリボ篭核酸差・、タ）／・8ク倭どど∼…シに些と／命・にピっマうくくミ. とのでき9し・二大蓉素の一ってある。ぐaタ〉バク輿の設計図どしてのDNAの靖報うし、つたんタンパク質にi変え．られたのち‘ぐ初♂うて≦と命現象1ぐ♂！・わるこどかいで・きる。3）. 動吻だけで慧〈，植物b微些物b4と物である挙上．その生命可聴の糎い豹コタ．〉 APり質である。ぐのS うに生命との関係にろ・し、て，教ゐ名猛てあるのか夕〉. パク質である。にうかかわらす，ホ蝋画1・ら高零書意ア理桝工」＆での間に学誓する内熔1でタンパク輿オあまり出てし、ξし、のオ碗状である．. 理科教角て，身迩看物質につし、て理解客深めるQ と1ゴ重蓉でうる。最：b身．｝！！tξタ．ンパク贅語学習する. ミと左玉吟する。タン／N・ 7衡之盈体高分5の奏本的物蘭どとらえ、蘇酵素イ鯛と・、う玄，での新し・碗寺，でのタ．ン／マク質三窃ヒ材4しすること19激脅幻に有づ年. 三Zfgzる。 5.

(9) §. 1. 4. 卵のタンパ慣取卵祀7ム較こ純で倥験客取き王気て戸う晶ル一比る単の変鳴動左証雁なつ．客氷5論りに追. ’玄ヰ‘総勢ら鹸較きると気様教ぱ素塞愈の飛卵ワれ掻比殊れ蔓電の．に要葦て宛う法げいつ、＼をに蒋わるル犯尺特許. らで7？腐ういどあ取量用っ結の衷つ負ミ後と犯で. 夕〉ノxgフ輿玄、含む｛うのぼ，教汐く．呑在．する、（れ. のうちzf・ら、教1材ヒ：、して取りよ’ナ’るにぼイ可ziSl・適老与 . あろう：ゴ・とフi参え1ミ。身．近コミあって，汐様意夕♪ハご. ｲ膳肱鐙勲親藩緩難解. 質客倉むba‘鴻卵かある。卵の夕〉ノN9ク傾との @ きあし・ ta，王・各搬ゆで卵， k■ f・ va，丼物，卵亘，ハムエッグ，ケーキ辱数限りtsくSyい，ミのぜ @ に身近1懸る金創教材tしてSZ． t」上ゆてし、きた. 鶏卵e素材Xしマ激材4とま脅うtき、. d・う取り狽む3咳調え1ミ。いうし、うどで、卵角タ〉パク彦の纏島化ど変’隈左結晶イ頓でフし、てQ ，卵倉ヰで＝最6／含痴ア／し，フ・ミン（。valbumin ）と繭糸づ仁. チーム（ly・・zy・・）のえ穫類で行は比較的結晶面オ写容易な6ので，その. 寸るこどぼ，タ．〉パり笏か／食塩・や！砂纏. 画意辞意物菌の延ン長」ピRあるbので．動Z・ 8し尺とtで気つづ也るのκ狡：互．劃塗についてitr ，日常生下旬戸f＝a！・・客i掻験で知っマいる。irJ’Tx9りアりリ！しア. 氷駿行うこと‘cSり，卵白タン／＼’フ. 5ざ提言茎窮して明雁1ψ♂・ら酔う. 材イど2，hご・・すとき，その物の啓在や変. り団平できるこどQ，i理解左塚める上．. 1［なる．. 追って，甜善しk肉爆乞PtLJah一する。. 6.

(10) 第2章・卵白タ．ンパク質の紀…晶イ乙. §2一・卵‘て倉昔れるタ〉バク質. 卵に含翻るレ吉でし、つてb、. 吻可客大きく’分・け. 薫購魁卸鵬蟹惣甜どξる肖 ll嵩1膜｝卵黄部一麟一鴨鞠. 一 t. _、. s. ノ ’： i；〈gisg．？. s. s ／ s. ノ o・’. ）・t’T．．）. i・1）ssssi ＝yi：，. 二Sご・1. ︽・. S ；：s＞. 一. ＼＼こ・、. 、、k鴨、. ’；・ X＞・〈1．. ｝’‘；1. ，嚇●一．．一一’. 部殻卵. 卵殻外卵殻膜. 内卵殻膜気塞. 図 1. 写真 1. 4）. 鶏卵の構i造. 鶏卵の構造 7. カラザ. カラザ状卵白層内zk様卵白. 濃厚卵白外zk様卵白. 卵白部.

(11) 卵殻部ざ除く卵内各物の一搬組放慮表21〈お）. 卵司食部／00g中の成分. 表 2. 黄卵. 臼卵. 卵全. 誓含隙％をを36蓄部の卵殻卵痴卵全. 網倉除傷をを64自部の卵殻卵酪全. − 脚．仁 − ．． I I I. 考. 3 7. 18. ％響・㎎留㎎四. 率︻分質質質維分ルン力臣脱ンCD. ギク一チンンシンン棄ルパ a eaノ効ミミァミミ. ネン CPF，㌔タタイタタ廃エ水目脂糖繊灰レカAビビナビビ. 備. 示、L氏。. …. 卵白タンパク質．の種i類とその性質. 54 12 11 1．5. 等電点・. 分子量. 霧墾跣）. 4．5. 45，000. 3. 6．05. 76，600. 2. 4・1．．. 28，000. 22. 5．1. 49，000. 6. 12，700. 0. 撫躍蕎雛漿・. ∼5．1 ‘. オボムシン. 3．5. 4．5∼5，0. リゾチーム. 3．4. Iポグリ．コプロテインフラポプロテイン. P．0. R．9. Q4，400. 0．8. 4．0. 32，000. P6 14. オポマクログロブリン. 0．5. 4．5. （198；888. 9. アビジン. 0．5. 68，30・、. 8. オポグロプリンG2. 4．0. 5．5. オポグロブリンG3. 4．0. 5．8. 14，307. 36，000∼. @45，000. 同上. 8. ？. 10. ？. 0．05. トリプシン阻害活性トリプシン，キモトリプシン. フイシンインヒビター. 10．7. 生物学的性質. 0. j害活性. パパイン，フイシン阻害活性インフルエンザウイルスによ. 髏ﾔ血球の凝集を阻止. 鍵辮グラム陽舗の細胞リポフラビンを結合ビオチンを結合. の解ど. ン連類シは纏ムにの. ホ葡平心般ク. の︷パ. 生 ’、〆. 溶て夕. 思い禽に除卵. 太之. 4）. 組成（％）. オポアルプミンオポトランスフェリンオボムコイドオポインヒビター. りぱ淘る’ 後フい寸. クパマ示パンしん. 、！タ在3. タき存表. の異でぼ. 中特熊後白き状性誓うたの印しそ. 表 3.

(12) bA上．報告され賛級文かうみてき益ナ，卵Q，夕〉パ・7質を多く合む食昂∼で乃り，此蕨的長く保存できる綺「徴芝≡ ∼≦ノつてし、るe. 9.

(13) g 2−2. 卵白ア／乙アミンLリゾチーム. §2 2 1 卵1白ア！しフ；‘ミン. Oj13白→2の夕〉バク質の約s4％（w／w）左壱…・わ，の三. 白夕♪パク筋客べ表するタンパク顔である，卵白ア 1しフ・ミン爵t 電気i来置上の’険1籔1…わ’ずオ・’マ異意る3. 族分〈A・・A・とA・）の昆合麹でhtノ， A、，A。・A、♂・み. sそ85・／2・3の劇合で含ま継てし、る1㌦‘9・2モ IL， A・t9／モIしのりン酸塾二合んでし、るか、 A・にはりン酸基が・、詰まれてし、きし、、且・ろ甘ぴ・A・9ホスファ. ターゼで処理するZ，リ〉酸乞含＆きし・の5に変花する．これらのリ〉酸菱ぱし、ずれbeリンの・K酸萎ど結／合・している。4）. 卵倉アノしフ“ミンは，単一のホ1りペフ・チド！繊であり、. ／か多当り／本の話芸左有している。・求蜘あせが・末端ぱ、それぞれアz4！乙ク・りシンるぽびフ・oリ. ンど雨垂されてし・る．会構．｝｛ ig，既に嘉島されてし、. る・アミノ酸配ヲ‘腐乱21ぐ示した亀ノ，マ1寄る．禰卵「白ア／しフ‘’ミンぼ／／DXS一につき／’個のSS結！会ヒ．4個. のsH菱左有してし、る，そdi 4個のsH茎のうち3 個矛よ…陶鉛犬憩ミろ…てsH羨門下弓し、反応陛客汐フているオい，変柏とするど4個しb反施’1生、に畠ん1≒” sHジ茎tζ実る。？）. 卵徊自ア1乙フ”ミンtQタンパク質の／研甕ナ始急つた府期にお・し・て，寸で‘。結晶として得づれてし、t〈。しdl し，x線結晶解祈Rぜる；構造来臨ぼい惹tc・（ぐさ沢ていξい。その理由どしてぼ、）欠の寸うζ1〈ヒZ…心え．られる。＝①、ろまりに身近．でノ控味ζよタ〉パク震で1あフ. て，しか6符定の生理三家ll生baし、ので人目9ひ♂ 召い。；②非常t：結晶し易し、か，結晶解析1ぐ適当ξ. 紀…晶ヒる：るど調i整：∂（・オ亟．〆うて困難である。. 卵白アILフ・ミ〉の・麺玄， pH 4・6∼4・8である．幽，酸，ア／LZ＞リ、工．タノー／乙，＆素，クアニジン，サ. 10.

(14) 高. ls︶. ！し酸，界面治性制，菓外線，x線，民β、8. ■±，振トウや撹髄と・‘〈Sる刻裟章け．やすし・、。。、、，一Ser．！、。．、、議。．A、。，S。。．M。t．。、。．駅。一Cy。．P、。一．、。p．V講。．、y。一、、し。、，9，ig、．H、s．H、s．、、s一、Sfi．：lu一、。、、t．，h。．，y，一lg。一. 」s ao ’ 4s se ” sS 6D. ヤ・一・エ・一A・・一・・erMet−Se・一Alti−L・y一…一・・一TyT一・・y−G’・一…一Lys−A・P−Ser一了h’TAr・一Th’一G’”’”e一鰍・8曽V“”Ye1−A「9’Pbe一一．AFp一. 一・. ｲ・1魂轟一牢謡：寵1；昌1；；・1；；爵幽一畔. ．』 95 ，DO り05 1犯り15 t20 −Th・鱒しys’P「o”‘Asn’Asp−Ye”Ty「一Se「’Phe−Ser−teu−A’8−S A・9一しeu一丁y「’”’r−C’”’G’“’A”g雪τy「一P . 撃戟F＝i；：；1：．；ll二；1：；し：1；G；；］Cys−. 125 I」O 1］5 laO 145 1’SD. −Val一一Ly3一・Cユu甲しeu藺Tyr−Arg＿〔；iy，〔；1yrLeu＿Glu−Pro−1工e−Asn，Fhe“【；1n−Thr傅Aユa噛A18−Asp−Gln−Ale−Arg一【；lu曜Leu−1ユe＿Asn＿Ser−Trp＿Va1噂【；lu一. 一ser−6in−Thr−Asn−liSy5−ne．iie−Arg−Asn−eg？一Leu−Gin−plo．ser−g22−vei−Asp−ser−cin−pl］9−Aia−Met−vei−Leu−1：r−Asn−uAie−iiE−vtii−1：g−. 185 figo 19S 200 70S 210 −Lys−Cly一一LetJ一一Trp一【三工u一しys−Ala，PherLys−A3ρ一Giu−Asp−Thr一〔；ln−Ale．”et，Pro−Phe−Arg−Vsl一Thr−61u一〔；ln−Clu−Se：一しyg−Pto−Val璽Cln−Met一. ．M。，・，，一、1。．。。．乙！1一、eu．Ph。．A，g−V，1一員il．、、，一，。、．Al。．Se，一lil．し，。一Me、．、。．。。．1：1．G、u一、。u．P。．一Ph。一気ll一，。r．G、，L，，，．H。，．SZI？. 2a5 2so 255 260’ 26s ’270 −M・t一しeu−V・1−L・・一し。v−pr・一A・p−G1・一V・1−S・・一Cl・一し・・一C1・一a1・一L・・一Gユu・・S・・一lle−ll・一Asn−Ph・一。1u一し・・一. 一Asn，V。’. ueu−Tht−6ユu−T・p−Th「一be「；Se「’. A．M。，．C三1．：；二．A，g．Ly，．。e一し，、．i：9一，y，。、eu一，，．一A，蒜L，，．he、、＿u−1；1．，y，．餓こeu一，。，．ζ：1−V。、．Leu．H，t一一、、。一kOE一. ．G，y．1、。．＋hr一、。p．e2r−Ph。．S，，．S。，．Ser−l12．f｛ill一しeu＿G1，．l19．S。，．s。r．軸．9S？．L，．一ご1，ま、」、。1．9i二＿，＿§、、、鳶1一. 岬u一：ユ7−kS−ci．旧識巳・一・勲一G−y一・・トX：g−Aie．ltia−ser−va・一薫L・一・曽縄，65 ．」フO Jフ5 380 ｝85. −ksp−FHis−P ?潤￨Pbe−LeurPhe−Cyb−Ue−Lys−His−lle−Ala−lhr−Agn−Ala−Va．1−Lev−Phe．Phe−Cly．Arg−tys−Vel−Ser−PFo ⑫：リン酸基 CHO：糖鎖 −. 図2 即白アルブミンの全一次構造？，’ 9）. ／. 1. 線， o.

(15) g 2−2. リソ“チーム. 留ミ㍍無謬物三階鯉岩・で議塑牌鳳卵飢窮地桓遡の癒杓出ぐ凄まれてし、る．りゾチームの名ば細歯細舵客兆・解する作用からゑ付. けられゴミ，ク“ラム陽イ生菌の細月乞、垂客構銭するアミ／. 糖左含む汐纏類の5落差碗として侍恵雨加の蘇乙，ま良ある縫のク‘’ラム陰・4裟菌（大腸菌、サ！乙モーネラ菌）. 総評響多鮒執禦ち鶴；台繕言知チド鎖／本から《まり，倉3・内に4個の一s−s一結合. 客／会み，アミ／酸配列の兜凄に駅定された’嚇タンパりてある。D．・．Philhp・B（1965）か正言晶系結. 晶の2．8分解能のx線結晶解巡歴フカし酵素ヒしマ初めて3次た立体構造ガ・弗加ミされた．／舎5. 中1ぐ，原3約／95・個窯含み，大きさ45×3・×3・肋回転楕円体の様、rs形憂し薦か多で，一面に裂臼歯ルフている。ぐdi裂け目か差質ど反施哀，起ぐす諺貫種で乃ることt：3一 e酵系ど阻毒創どの複合体の縮瞳解粧‘慧フて雲竜ti・1ぐ？れ，立体構造葡譜面ガ・づ酪素作用の本質. 解明かζされ，酵素洗茎後ど纏合するこuにぜフて酉多素の配座か変4ピ．するこどか・示♪れた♂のりゾチーム. の＿攻構造玄図3尺示す1り卵t・’生の夕〉ノN・ 9 es tして比蔽的長蒔間保存かできる理由の一つ19、り・ノ”t／一ムの存在であるとじわれる、. 鉤む医桑品の中tc 1＞りソ・千一ムの塩酸塩の形て・画τノξ〉・；芽れている。. 12.

(16) 40 AsN 1’ltE. nSH 1・川1. SEH. Ci．N t，G. Cl．U PllFi. 1111t. 1，rs. AtAJ N lvALLriw T附・Aしん＾LA しA AHCI）J t lo. ASR. en α5 へSN. 臨転榔. 川彌’. ’c．. CYs C『宋卿 τ剛. 1巨．v. 邑．ys. Ase. f；LYJ ’C 61．ゼ. CLY. tsH） rtY｝；1 ，， Ox 一〇 TII龍. 脚邑29 1．ltU. Asド. sp. s卵. lOl幽 SEFt ん1慌邑20 Vへ■．. LV”」〉一“〈 ACvsh，．， c・V. @；”N 咄楡・熈. VAI，. fLE. AしA 鵬 ’c冒5 Cl．ピ. 邑，YS. AllC J N．一．tSH［ tLll. 20. 1’川’ a田 1・tlE 1’Yll l．1川 VAL As煙 Au. i， 1 LVS 乱へ硲f量. 昌0 Aい. 岡一米蝋. 1」三u レ1『「／＼. ll U C；LT r Y XLYS l匹LS I罵. 3. リ. 図. ゾチームの一次構造. 13.

(17) §2−3卵白ア！しフ・ミンの結晶イL 卵心止内寸るタンパクUt tし、う意・家でアノ乙アミン蜜蝋りよげ，その取り：扱い：iils一巳して．、結晶4と左結晶イZ左論りよけ”於。〔原理〕. 卵白ア／し71・ミ＞1“塩類‘rSって塩害さ淑て，鍛するので，句戸臼の2K溢奥に／硫痩唆ア〉乏．ニウム客力ρえマ塩析沈殿・さぜマ単離するe ’2）〔δ落〕. 卵白客桑の薯量の飽和蕨酸ア〉丑ニウム姦疲玄加，えて，生ずるクt・0フ・リ〉類の沈／穀客除〈。上澄iみ液、. iq，更に1飽和欲酸ア〉｛ニウム洛爽客混濁する慧て・加え，ミれに・・2N漁堅牢加えてpH 4・7どしマかき. 混ぜ続けると針状晶鳳る．再縮晶を孫りtaして三三する．. 匝〕. 飽和硫酸アンモニウム濾過. 等；量. 上ずみ液. 沈’去. 飽和硫酸アンモニウム. 0・2N 硫酸 pH 4 ． 7. 埋結晶. 図4 卵白アルブミンの結晶化〔準備均〕. 郷戸，・・2二面，茄藪7ンZ．ニウムノP・計 3・・meじ一重ー（・），撹銘鉾，オ㌧む，覇9. 14.

(18) 〔契験〕. 新鮮き鶏卵／個93・・meのピーかヰに脅抑謝. り，卵黄客取り除し、て町角のみ客残す．tuるべく室気踊畝「sし・・li’う継つqgから，かきまぜて縁旗. zeカしか一下左籍し磁鼠する。ぐの卵白之一. 様にかき書ゼ〕・きナら，o．2N！疏酸茎徐をt〈加え，その. 欝欝る㌔霜’冨瀞濃鑑1議血重臣漁5庭ガ」不透明愈ら‘な“， ∼iレう一度ヒタ・・イす躍毫紙客用いて. 麗過∫する，遊明断疲ナ得られた趣らぱ，ぐれ1て／飽和万灸点ア〉七ニウム2k疹丘上加え，液！会4奉ナ、貌酸ア♪ モ』ニウムで／飽弟9されているように寸る，ミ. 欝腸雛潔卸ぞ縫鷲樽∼，1凌翻綴アン丑ニウム水剛臆客年光か♂なり明瞭に誕あ今覚るようにrgる母で加え渥後に，連々∼丞き＆也意から，劣置，あるいば変藏参学（・一5℃）1ぐ約5日闘保って. み鉱陥競欝欝藩繍鞭・の熊. は！飽和石組アン七ニウムノK尭卜液で／画）先う。この結晶左洛解さ也ろの尺瓠｝う5・！￠21 fsだけの義留フK‘ぐ. 洛♂・した後，鹿過し透明る洛灘得る。・・2N菰酸で・・4・8−4・9ピし飽和威霊ア〉毛ニウム氷蕩液客. 主し、春光か望めら回る救う1ミ惹る惹で加え1こ後’ぐ，. さら1ミ固体の痴酸アンモニウム玄加えて濃竣客／飽和させ．る。ぐれ左課り」丞レして精製一する。. し績農繁静轡幣論結菱撫実嗜結翻吻蜘無用船装琶ぼ資糾2に示した．（老母〕. 徒縷魏谷詔雛晶諺野菊欝蜘洗の；辮に互父りあげ・られたく：ヒニか㌧ろる。t3）（竃馬3づ参劇. 生徒農験ヒし■，粗紬晶の存在客示寸爽験て・あれば. 15.

(19) 時聞釣にb，技術葡に飼能τ乃るピ恩う．pH計の 1・わりにpH辣衡劾使用て行うこt Zl一できる。紀…島イヒしたφ耳「1白ア！しフ’1ミン1客，顕微鏡で撮ったの. 1・學負2である。拶郷‘〈つレ・τ‘讃料4R示し夜。 ’，ひ．／ノ： ’ ・・．. おのダ. ・，∵ξ蕎ξど報羅iF 閉海、．．. で. ぞミ ’ ヲニ”し. L ノ ■ ・，. @ ，、孟、. つコ. タ・． lge 1．／乙メ ‘ ，ル，‘. ．ly. 牲’. ・癖. だノ. 蘭．E／i野、. e“ f”’. 写真2 卵白アルブミンの結晶（ ×／／O ）. 16.

(20) §2 4 リソ疹一ムの結晶lle りソ㌧チームはタ＞A’フ質ピしてぱ非常に結晶しやすい汐のの一フである。最初絶，土の一檀のぺ〉トナ，イトk一凄るロ賭三法‘Rまつ了績製がいヂア・ンナフれ一てし、た、が、・・／. ／946．年卵白から直捲にリゾチーム窪結晶に分維する直椿結晶珍か報告2淑r〈．t4）ぐれに↓フて，リゾチームの分艇精製ぼ換わて緬単‘でされるsう’？9つた．〔さ法〕. 卵白に1／1・程庚の2K客加え，建く撹伴して均一1。し，オうサ●愈ヒ遠zi・一セで除く、ミれに5％‘ミなる. よう食塩9加え，三つK鹸イZナAりウム液でpH客／o. 醸轡三三｝甕墾鶴力脇晶ぼ難鷺結晶玄泉わ，希酢酸にヒ批、不二物客除ま後ノ前. 綱様1篤噛結する。4−5回再結を回りvaす。［ Eitl ＝＝M. 、O・1容：水. 馬梓・濾過食：塩（05％まで） zk酸化ナトリウム pll 1 O. ’冷蔵庫. 図 5 リゾチームの結晶化. 俸型物〕. 直隠羅鍮／雑嚢ナ轟ム憐潅撹搾捧，盗薪膜）東結乾謝竣オ㌧ゼ・漏斗. 17.

(21) で実験〕. 劇卵してできる鮒新錨郷嘩／・個準備し，卵角だけ乞取り出す，その卵角客オきまぜ痺瑛左こわ. 繍謡磐辮し留翻脚錨再墨読にオ目当7する！食：塩弾力〔｝えて，撹才半’する。. ／N水、厳4とLナトリウ∠へ2K洛液9カ0：えてpH 9・5に・する。わずかの箸覆潮りソ，・4 一一ム結晶9hOえて，）令蔵庫（o∼5℃）オ♪K∼Kk）z（アイスホごツクス中）に置きノ！11ヨ 5∼6. 回撹4半する。2∼4iEl嫉肉にりゾチームナ無慮結晶イZ する。. 縮晶を倉む重肴逡1麟に初，3，…職で2・分. 間遠ノUし，茨殿を分離する。琉殿物に2K速加え，希酢酸でpH 4・5どしZ，）ajit＆ aN氷・Kヰに数臼毯く．望. じた細殿仏誕把磯にti・ oて徐き，2二ずみ爽左取り出藍、. ぐの上すみ液左、鼠壁の操イ職事回繰り畑賀連. 繋年蔑墾構宴籍k難鑛讐‘ミ李撮魏. 乾燥した。. 結晶4猷寒し、た後陣ぽ墳料2に示しft。〔考象〕. リソ呼一ムは，比藪幼結晶花しや妬し、b”であるこ巳を褒験直癒しπ体験二し於。リソtt ・1）”’一ムの寿融、 4寸it’て・結晶（とし， pH 4・5 イ寸一よtて・Eオ1しh人タトの：i翅乙ン黎と客除. く操イ＃の繰り返ンし一て“縮製されてし、く様≡チか杷握て・：き. る．生碇の炎．鹸どQると撚蒔周の留】約か・あ5のマ、自由！研爽に蟻巻っ・りるこど：iifいできる。. 績製したりゾEF 一ムの結晶のvame4S4 ‘S k 3 に示した．電槽撮彩につし、マ‘a過料4に示した。. 18.

(22) i. 写真 3. リゾチームの結晶（ ×／／0 ）. 19.

(23) 第3章ポりアクリノしアミドケツ乙霞：気泳i劾. §3一・身近なタンパク質の分紡牛段．数個電場llろ・し、て，千倉中‘協在する．t綾の夕〉パク質黙視撹，t〈，，Sって示し磁‘鳳嘱し・まうである，. そミで，上宕乙の目幼に適一したタンパク震の褒在左示せる：さ：法1卜しマイ可；か適一当r．か客；考えてみ・益。. 曝気轡跨埋樋蕊諺灘畿参晶タ分照校術が飛躍的に角上した。愈かでb、支特・体ピしてオξリアクリノ乙アミドケ“ノし左用いる電気泳動》i去は）. 轡1“雨脚涙π者塵諾適蚕輪麸設忽て．分離能，再」SZ・1生 Q tvの面i〈1みし、了俊曾てし、る夜. h，すでに広範を厨宛か勤誘いて，主乱し了タンパフ瀦の職事客分紡するたあの最愛代表逸気’手風どなつマいるノs）. 数脅節煙t11・．S．リ入れるの傷最知疲ししTcタンノ、．ク. 須の分栃法ししマ、ポリアフワ！しアミドケ『ノし電気永動を旅用した、その理由ピして次のぜう惹：毫矛㍉ろげ’ られる。 ◎手，軽であり、1嫁ご置：な4客イ唖であるぱ11∼プ・りで《ヨ＜，自 4“F♂v’可能であり，その遇縫♂・；教角筆であり得・る。 ◎｛蘇か美しいぺ夕一．ンで‘あり，羨し覚ノでうフ尺える. 夷ケ果がい大である、. ◎庖電・aノマーの毒性客除し、了ぼた険庚4・低し、。 ◎：ホぐりマーの蜜／会・客体4昇できる．. 讃驚震鱒熱響繕轟轟繕誓鴬）本・研爽では，ホごりアクリ！しアミドケ’tノし麺L気1永勿. 落客係平し卵白0／N9ターン客雁記しqから’タンノNVク後の彦在．と．愛」些の様ζ5一客危面、していっ費。. 20.

(24) §3−2 ポりアクり！しアミドゲ／乙堪：気泳動. の爽際. §3−2−1 顯ポりアクワノしアミドゲノL；皇4り心する電気ジK動t〈］‘訂．原壬里の異なる教づ綾の言法か存，在乙，ホ8りアクリ！乙アミドケツし回気泳動法（猷下．単｛r ケワし麺し気旧く動法と. 略す）の。る称ぼ，ぐれらのオ法の綻称ピして使用2. 欝1獲織贔四脚門蕩1三蓋1 るさシ去左ケツレ覆二気泳勃シ去どUチ∠3ぐ．趨二」気泳動の系8ぐ，. 槍イオ〉”塗ノ浮面活性孝司の一綾である8DS （ドデシル碗雇後サト・リウム）客添加配る乞「3亥之SDS一ケツし電気. 泳動法ど呼よ，分多飾作用9刹用せず，単1で女持体ししてぐのケノ感侠用寸る三論k麟玄UCして，ゲル. 冬霞蔚電気泳動法どゲノ乙券速電気永動落かあ部6）. ポりアクリ！しアミドデ1しぼ、アク’ノ！しアミドと適．. 汽鰺鋼鋭轟轟鵡％瑞纂ク惹アミlx“. 野｛診「㍗→ 慌評1讐副寺（iii・？”’・. アクリルアミド llH 騨 9＝o ？＝o ロぬコほへじセロヒセをセぴじけ 6＝o と＝o と＝lo BiS l I l NH2 NH2 NH2 （N，Nノーメチレンビス. アクリルアミド）ポリアクリルアミドケ肱のr都. 図 6 アクリルアミドとBisの重合反応. 21.

(25) ゴい魏iし、〈のラジZ／しlvアクリ！しアミト｝t. 法＝光の躍射tlまってりポフラビンか遊離ラジカノL1“’アクリノLアミドの重合き. り／ムアミドケルナ示寸機織的強度、透明 9. イ心用tsと∼の物ヌ望熱性璃なアク’ノノLアミ：ド’. b. X 100. c＝ co十b ×100 トリるむ十 m. 濃度（T％）お強か両右の劇合（C％）∬赦．. 使うの e かい〇二ら開・及ヒて. れ’ノつで〃絢疹κ比ア. ξるり代明ρマ動にル. 絵油絵被銚二心. 中数如くは与り電ドア 4ムぼ痛で客心みミを. ⋮㌶凝鱒拶揮. の巳．％う ’るりκる爽. 反，いξノささくアノん. 施るノ。にぐ々クケあば . ’・橘ぐしき短きぼめと. 22. コユ. れかオか下し入6大で友、＼. そよ，細腕の最ぼ肥いすれ声’かぼ目オ径ゲ砥示 . そドぼ自度︸網掻孔のがで. h輪講襟. ヒ . あア4蔭てる％く用てド・る。まれあ5高侠ペミ. ぜクハ・かデでマ非9Bだ. ひワ定δル昔ゲ5るBけ. 温伽. むトの’る光ジ. ．TE脚のイFM tR Sって過欲酸塩から酸崇、. しせラさ・・離. N，，N，N∼Nノ・テトうメチノL．Z．チレ♪ジアミ〉（TEMED）9. 漸落鮭. 壷合法；壷ノ合礎L進肩りとして」働灸酸ア〉モ. @肇か鍵認脇礁鮎﹂ . 合閣4台に’ゴ次のZ種のさ玄がよく侠用されマ. 望翫絵勢絵鑑細訟綬T. 重合反施な，ラジオノし夙施尺詮って進行する .

(26) 禰炎の本四り離れ試とlz （ts（るd・，アタリ／しアミド’YBi・左壷、合：きせるミヒに歳り，オミりアつリ！しアミド’ケ”1乙か・でき3。ぐのモ，ノマー，1＞りオk9りマー. への変イ三三庖できる教材どしマの4凋ゴ考えられる．. 硯代あとノ祭ぼ，フ・ラス4ック客なじあfyくの合放高分∂肥合物のxi・ tZうず汐れてし、るとさえいえ3．ぐ. の反回ぼ、その導圏素材ヒして庖切であるtし、える。 ◎壷合の様δ速見るこどψできる． ◎自由rs w2 i：藏型できξ1。. ＠透明愚物質ξのて碗用面か広し、。寮｝用の’一丁ししてホ：’りアクリルアミドケソし’のレ♪・. フぐ亥作り、平行光線客通一し応4実験客取り太げ1驚。. ①アクリル樹脂板で. ④コ・イド溶液のはいった矯に入れる。. 菌. レンズ状のワクをつくる。. 光をあて・スリ・トを通過した光線をみる。. ＼. 一. ワクの中に流し込む. q. ＼＼. 、ヒ撫撚輪. ト＼／. ②重合液をつくり. 消＼. 5 写真4のようにみえる。. ③重合させる。. 図 7 ポリアクリルアミドゲルの教材化への一例. 23.

(27) 写真 4. ポリアクリルアミドゲルの利用例. 24.

(28) §322 実験凌置ケワレ亀気シk劒装猛．どしてtゲノ乙ディスク用ピケツしスラフst用かあるd・s・，；本，御壌しでQケワしスうフt用左侠用. した。その停徴の薯約‘7）きあげてみる。 D肱スラフ電琳雛が・ゲ！L7イスク鮪絢謝リ協齢ξ輔：（i）1椥ケ7乙スラフit上で，緻勧タ♪！韻嚇教茎勅ぼ綱超3ぐ泌でき5〃て・果惹る撫の夕♪ハ8ク贅像；E，ま9正ノaSl：2±級でき3．（のケ7三途切断しζ1ぐてb そn着まて・m嚇？せvフ恥乙ム巳して保参す3こZナできξ1，. ㈹襯4伽轟耽ム。歴，テ・〉シ解夕一麟マ、Sリ醜召4滋働えうれ5. 疾回しr・装置は図8L写宴5 i〈示しlt訴細な責料5に示した。. 試績液添颯溝. m. Q枚のガラス板. 重含した濃絡ゲル. 上部電毬液. ヤ．. ﾙ涯’ 3Pr・ ’」・烹．．7. ・．. 重含しに分離ゲル. ^. スペ一サ一. ！. ゲルを保持する. 、ト. 怺u嚢刷←「」ヒ都電毯. ，／、馳. 匠〕［至〕。. 下都電極液. 図 8. Oo 僻都電亟. ゲルスラブ電気泳動装置. 25. 髪矧乙冠電師. ﾞ源葬置.

(29) ’i！｝bii）e. 腰嚇1. 写真 5. 一e. ゲルスラブ電気泳動装置. 26.

(30) §3 2 3 臭験につし、て裏験客実施寸るにあたり，次のぜう《1’採：作寿遠，行う。. ○裏験材料. 6）P1白，結晶4とし1ミC）IY白ア！しフttミ．ン，リy，，．チーム. ○褒験が玄. 1分離ゲノL，濃縮ゲ！L，試料，電極用. 緩衝爽の！，ki. ・電気泳動の褒施・ゲノ幽双り旗，k色，保参（乾燥）実験9袈施す51？あkリ， if？ρ tsアノLフミ〉とリソit t／一ムの琴電：毒1；3それそ・れ 4・5 ど／o・クなので，電. 気泳動》去客2箆ク準回した。pH 9・5−7％用（tlK下，処言Ax称す）と・・4・3一／5％9”！乙用1嫉下，忽さBど. 称す）9＃esした．分薩ケ！レ，叢縮ケ！ら電極用後衝旋〃忽伽訂表4 に示す。. 27.

(31) 表 4. 分離ゲル、濃縮ゲル、電極用緩衝液の処方婁9♪. 轟8）処方み（pH9．5−7％ゲル用）. ?@方 8 （pl｛4．3−15％ゲル周） pH. 液記号. 液記. 水溶液／007π4当りの組成. 氷溶液／00祝4当りの組成. iN −H C 4 24ηL4. A. gリス 18・1σ. 8．9. IN −K O H 24η④4. P. X酢酸 8．6η認. s E M E D O．12卯z4. gリス 5。98σ. 4．3. s E M E D 2．0？π4. 1N H C 4 48？η4. B. PH. 1N K O H 48椛4. 6．7. Q. X酢酉菱 2。87ηz4T E 擢 E D O．46？π4. 6．8”. sε M E D O．46γ配4. アクリルアミド 28．Og. C. C’. a 量 s O．735 σ. D. アクリルアミド 60gBis O・4 σ. アクリルアミド 20・0σB is 5・0 9. ￡. リボフラビン 4魏σ. F. ショ糖 409. G. 過硫酸アンモニウム 0．14g. G’. 過硫酸アンモニウム 0．28σ. 電極用緩衝液. 電極用緩衝液. k 石一アラニン 31．2g 氷酢酸 8．Om 4 氷を加えて 14. @ 〔トリス 6・Og グリシン 28．8σ zkを加えて 14 使屠聖水で／0倍希釈. 8．3. 4．5. 電場の方向1 陽極下 @ 陰極一と. 電場の方向：陽礪上. ゲル溶液の混合比濃縮ゲル用分離ゲル用. ゲル溶液の混合比分離ゲル用濃縮ゲル用. `液．里容. o液 1 容 b’ t i 容G’液 2 容. b液 1容 f液 2容. @：. @B液 1容 @D液 i容 @E液 1容. @ 陰極下. @水 1容. p液 1容 c液 1容 d液 1容 ?@ 1容F液 4容. @F液 4容. 濃縮時： pH： 8・9. 濃縮時 P 葺｛＝ 590. 分離時 pH： 9・5. 分離時 pH ＝4．3. 28.

(32) 泳勤プレート. ん一’垂 ’へ泳動プレート押え. ／. N．．. ’し時σに. しクフのく上. ににるし戸. 付鶏、ハ鶏サ. 側らえんべ外さ押熊用ので状瓶一一乱卜浸特. サねッれ保6 一壷ナよ客換. 29. へ保徽用ベーース泳動プレート保持板. ス. 上. ぺ客蝶つ離写スト’し哉・. 客一しわ作9 7したオル図. 卜ゆ一7〃フケー一くユ動本︸蔭。. ωしう＾シ直. ゲル作成器. 図 9. シールチューブ. ／. 7，. 一. ン. ペ呪㎜. 2 に. 板. し置チ泳ユしるア乞尾のをチトて動ト一枚えしツ立永τ ン ’ 押一包に. §3−2−4実験の操作手唄.

(33) 一一. G1二＝山『tt. 写真 6 ゲル作成器. （盆計潜鰹ζ：日舞著拶禦薯食卜え分に混合し，つぎにミ昆合爽之，真室鐘に入れて瑛空ポンフ・で・5・分軍戸え気する。. 写真7 真空鐘中での脱気. 30.

(34) 脱気し陸合液にTEMED見えて欝オ沢撹祥しrc後，用陣し食かラス噛すの中1て気彪下作らζ1いまうに憂し込．む。分離ゲ1乙の上に重属する農事ケ” ／し 4？スA9一ス. 9とって，分艦ケノム童合竣怠／3・・一／3・5cm di rs ？. まてえ遷する．注身憐左用し、了，よ参無尽合爽の上. に3−5鰯高訓（水耳蝉回る．針先之オつス板. の内塵に捲舷させ、壷合液の表面遠乱さ9し，Sうに脅か1：，しzf’・b，できるだけ短1符「間でノκのま入乞完尽して、直ち’ぐ壷・優し慈けれ1守なうなし、。. 写真 8 分離ゲルの作成 2Kの壷ノ爵’な室気Kiizの酸素t：まるアクワ！しアミト・の. 重合久苑の阻壱鰯広するとtb tc，形放寸る’7…t Iしの上端客平坦1くする．壷合旋のa，填後／・一3・分で，. 蜜倉・液と蜜属した＊、の界面の下2∼4職の部かにゲ！しの房：面オ・／bli）鼓：される。重，合・客売311！せるた老）t？，. さsに3・分罵倒放置した後，つぎの操作1ミうつる．. 壷，合鹸か高すぎる，あろし、’e低すぎるeg Aa t r t9. 重／合財ヰの透し石洗酸アンモニウム裏度左 o．5∼2倦！フヨ吃囲て変え．る♂，‘ろるし、ぱオ“ラス板．左浸．寸水槽の：鼠. 夜之／・一3・℃の髭囲で変えること‘rSって，羽合速. 31.

(35) 轡嶽轡警藷激蝶三三蟹. 度客調盤する．ls）. ル・沢授ンコ分・ウ八灯当に嘱. ゲ合調サめ都コか光左う玄皇儲左脳7。み尾泡い光ど合. 刀`. 初踊認め腿旧記刃派但綾し永／つ切サ端しご酸ド祀ど爽．戚の’下属ラ際ミル水飼る量対た0童つのア. ゲの重すの板設ム客ポ埼尾ナ上用彪液ス．ウ水リ・りの、沢ルル重合つるコに’bク2．合ヶヶに重力す尾上ぱ生アる kκ。にア。表之ナい. か嚢ゲむ鉱度ンるぐン尾て. ωか過す7。ウかムらのて生始. 壷」. ツト. プル・コウムゲル. ゲル. 図9. ゲル作成図. （・）亀郷縄帳覆の稀陀極樹で苅働用心衝疲（電童、合したゲ’1し客，’保涛しftかつス搬）左入れる。. オ双対からサ．ン7・ノLコウムどシーノ0・チューブt’客取り除. S，試料満‘磯ってし、る鄭除去する．ぐ凝電気泳動：装置にセットする。ケ▽しの下部’ミ気追かあれぼ. 32.

(36) 除く。上部電極槽と濃縮ゲめの試料液添加薪1ミ泳動. 用後御継航し込む，（・）マイクLlシリンジの針究客緩衝爽中1敏し込んで，訊料豊夜客意＊黒鳥1添｝加3鋳の中tミ添方n一する。試料タ〉バ・. ク質の添加コ量t9，試料の絶Z隻と寒く重オ後のタ〉ノ・eク質. の検出さ弦客考博して厳，する。マーか色素であ. る7“・一ムフェノーIL・7”ノし7（BPB）1ゴ試料疲1瀬. 加する1・わりに，上部覆極沢に添オ。してbSし、（・・吻. BP．B液，2−3滴上記一連の操イ負事でき5だり慎重にしか6迅遮に行の索ければξらきし、． eS）（6）震．気泳動装：置に蓋客す5。上．」部．下・部．全払極端（チ. 1淀亀流覆蘇装猛の電極之接綾する．愈かpHg・5− 7％ゲ〆し用のと：きば，上、fes5に陰L極，下部に陽極，必. きBpH4・3一／5％ゲ／朗のtきは、上部ir陽極，. 下部に陰極客棲嚇する。BPB のライ｝かiir” 1しの下端3・ら約／。mの馬長に達しし炎どき，鼠電量停止一寸乙。しか乙，／分解能￡痛める1ミカにぼ，タユお五であ. れば衡角アノしフtlミ〉が組題にく33で泳動すること誹望ましし、，. （・）颪電磁停止したどき、宴全のlt h，直ち1ぐ亀原♂ ら4委続コード9なすす。：かラス板対「之互又りはず寸。. 総懸組醜. tのかラス板届き，2K客満し農ベットの中lc入れ，色宝尽ン柔うセい柔／周バと該るパ爵語る看. ぜv色ク惹しに5柔パく充た μ9ン古補し ∵・寸書な玄用囲5かて竣爽使. 一の姦し色色て. 光水髪無茶し. フう尺のい屹. ア氷ζ．う，繭り一に倉行で用り尾傷・茎の侠. フ一53覚る図. ゆ. マメに／定弱奈一之爽で固かし. 醐鍵製罐. 暴騰繕毎. ケ！しスうつ速かラス板対か弓遊艇さゼる。.

(37) （9）ケ％の脱色：柔色か終っ尺ゲノ乙ぱ軽く水洗した後脱：色爽1怠って過剥の色素客除く，脱色竣’ξ7彩扉酸一s％メタ／一！し爽客用し沃．ケ・1乙4、う扱σ出た. 縫白白簸山山白白勉当山叢も諜1；乱これbの装置一ぼ嵌庭の台所用あ乞用し液。. ポリ. } 脱ン . 糠. 一一一一一一一” ゲルローター. ペリスタ. マグネチックスターラーポンプ. 図 10. 写真 9. 脱色装置．. 脱色装置. 34. 活性炭槽. “覗. ノ. 7鳳噂. 一. 茜. @ 一一 1. ㌔亀4AAA−OA＿NA僑晶AA．、i“轟」“ノ.

(38) 響. ・支持ストレナー板. アスピレーター. 35. 才ラ・溢沽久し←ラあ上のハ順↑かけ乾 ρ. iF一一．一．一一．セ・ハン. κ入水茎伸持のの紙Oのる結い. ｝tS’一一ゲル. ゲ陀・〆紙客く孜7・ノセミし京鹸 ’ゲリ・！わ深／うハの’浸か. 丁∼加 ‘一ト 1 セmハン. なで乏ハし意うス0側客加お方. Ψ・蝶ナ・・. κ、沢リロ丸注わ払セ上枠でしく. 吸引板. 務卿諾墾㌶巌離穿. ←忍. こ三. ＝1〕←一一げカバー枠. 1. ｝. 乾燥台 ee＝！（. つノ3也︶下屠勢獄−うす訟多7 終夕にら板のに・ノス意よ℃読ン. かメら湿脂7上ハル留み40惹ポ色％さで樹うの。をにト．し空. 冷”殊三瀬勢論茄海鹿. ゲル乾燥の手順. 11. 図. 燥尺すム多ゲハせどい︸止でL 乾あ浄か一た0多の並べで’ヒのた洗ら板しセ蕨ぐらカジタ7 7く問あ一轡ので4入’ネーツラ・除詩Q⊥フ統遮水・つがに ’Lう. 入客／すレ。上のみ吃上ねど・卜. 尾酸約麦トくbろ気の壷ス宜. が酢玄に入レ敏げか客R紙にア議ﾌ7、沢持て上今部間ン序ら爆 f・.

(39) 障嚇菱博鍾. nKN. 写真 10. ゲルスラブの乾燥. 36.

(40) −∵1一二1”［r 5遍常玄一尺ろけ畜卸孟「ゐ輿鹸‘d）卵白裳後篇爽（pH 8・3）で希者尺してノ. 瀬さ且（pHg・5一. 7％ナ“ノし用）でe；角 pken ？ t lt．. 〔実験糸粥処さA（pH 9・5−7％ゲ／乙用）. 卵白／励遠後衝液（pH 8・3）89mq〈加える，. 亀流24翻（実纏野. 9、. 9. ●●、一. が. 3. 2 1. 泳動パターン. 図 12. 自作デンシトメーターによる図. 処方Aにおける卵白の実験（pH 9．5−7％ゲル）. 〔考察〕. ぐの流血糸件と少し勲るd・，卵e3・・vi層sの 7・5％f‘・・しで奥験し於面接誹一蹴 B tZ s一つマ. ／98／昇に行われてし・る．20その論文学の・・g・1 簾悪したのゴ・咽・3である．. 37.

(41) 2. 9. 3. ‘As，6 ii〈 q 10. 1. （一）. （＋）. ．顕嚢∴掴■劇■繭隆灘●．；. 図13 MATSUDAらの実験例その論丈中の倉卵白夕〉ペク質の名称客，実験結累に対’応させkのか図・4であ5。図・2の自作デンシトメータ一一iilっし、ては資料6に示し於。. 38.

(42) S一．. @s 一. 一 O G Ovomacroglobul in. ，ソくコセガアロ. ｝一・1 。。。i。hibit。r − G GIobulins AI and A2 ヨむロオけヨヘ. トー・・r ．●◆. 三｝｝堕… 一F F正avoprotein. 図 1 4. パターンにあらわれたタンパク質. 以上の詮うζ1卵白の電気泳、動ぺ夕凪ンにせり、卵倉中に各種のタンノマつ蔑か在在寸るミと♂・視覚‘吋り！確認できる。ミのぐどt9，夕）パク婆左蓼看寸る上て一t効県餉ζ1・凌糾ピきる。. 39.

(43) §3−2−6 ．通．常法にAけるψ戸白の実．験（2）り・ノ1’∠ヂー．一．一ムの薯電存，が“／0．7《3ので・処乏∫五（pH 9．5−. 7％ゲtlL用）でぼ泳動してb上部凌種：槽へ動く。よって処方・（pH4・3一／5％ケlt！L用）必用L）て，マイナス極オ「ア司t：泳動させ．る，よ’うtrした。. 〔興二半件」処言B （pH 4．3一／5％ゲ7C用）. 〔実謬羅評雌籔詳’5）7 に蝋（＋）. 一e蒔・・ ①. （一）. 泳動パターン. 図 1 5. 自作デンシトメーター. による図. 処方B における卵白の実験（pH 4．3−15％ゲル）. 40.

(44) 孝、ゴ. の一今ムタソ一パりチの’ ψ・＼てノ f 9 る讐まノむ. ばあにた一で艶し肱法結定ゲ方の伺％たム茎. 5っ一と／行チこ＝・ゾる. 6か1 1 あイ Hた販てゆる窃ド. ︺Bぺ’・／. 察言調ぼバ考処客①の. ︹動のム. 41. つ.

(45) ￨りアタリ／乙アミドゲ／L. sDs一電気氷動の炎際. g3 一一 3. 顯. g3一 3−1. ドデシ！し痂t酸ナトりウム（・・dium d・．decyl sulfate あるし、（9 . sodium lauryl sulfate／. h人下SDSと疫隆’す）〔0・π・（CH・）・・80ポ●2＞α＋）（af 一SO・一左. 親水差ヒして，9t？CH3（CH2）ゴ左疎水塾・、C一してL. っ絵イオ三生の界面半年創でSる。 sDSrポ’りアクリ！乙アミA”ケ▽乙電気派動三尉SDS. 赫≧停循参舞錨袈蜘無謬か際嚢蓼三分5量の差回‘けに畝回して，分離される．Sっマタンパク質の測定チ段どして利1劉できる，. の∂量ど相対移動廉の中延客図16に示す。司一‘. 分. Phosphoryiase b Albu皿in. 子. ＼・。。1b聰i皿. 量 ●. （ ×lo一 j 4. Carbonic Anhydrase. 2 1. . ＼∵llll：1：iln. O．2 O．4 O．6 O；s. 相対移動度図. 16. 分子量：と相対移動度の関係. SDS序在下でポリアクりノしアミドゲ！し電気承動客行うと：．タ〉ノx9ク後の珍’≡3量の推裁乙t：4実用てきる. こ巳か指摘さ淑た．ぐの射勾￠、試料か・ケ9くてすみ，1・つ射幻簡便安価てありなオら，／0×画勧の. 42.

(46) 高し吻机分∂量縫僻段㍑て人躯集わ， kfと導茎xi2’じヒし奈広疑q分野の研尻看に髪用されてし、る。. 43.

(47) §332 集験につし、了 SDS一ポりアクり／乙アミドケ1し糊気＊、両法のこど. 客夙下，処方σ（sDS存在下）と称す3ミどにする。. 華府，遅し幣シ玄のii）一tiノし豊気氷動♪玄と二・異愈るとミ3・つみ. 魚影べるミヒにする。. 命離ゲ1し，電気氷動用後衝爽。処方22）〔保＝彦液〕. ①アタリ／しアミドフK洛漁：アタリ／しアミド22。29 N・Nニメチレンと｝tスアクリ／しアミド覧（Bi，）0。6 gL？K／OOme. l縫く撹t4して疹解する．断章後，褐色ご・ンに入事て冷蔵庫中に’保参する。. ②緩衝夜五：o．2％sDs o・2M9♪酸ナヘリウム毒麦衝心（pH 7．2）一／e. ③緩衝液・e2％SDS，5・％クリセO一／ら・．・2Mリン1酸ナAリウム後獲ア：液（pH 7．．2）・…50me. ミれ‘訂獄衝竣且4・Sme，8Ds／9 ，クつ乞θ一／し. 20me（259），水／9m2一両合して調鍛するどよし、。. 〔分離ゲ／し〕. アクワ／乙アミトu＊、西之／9・8m2 と級衝竣．A 22．Ome. 客夏合し，真室金座‘ミ八耽5か間脱気す5。こね訂兆麹酸素1慧る重合の阻馨，6“かゲノCdL・の際の発熱にま3発3乞客受（・たあである，虫合液に／・5彩過祓酸ア〉モ．ニウム2k洛庭2・2 m2 て毎回新τミに調第と. する），っし、でTE・ED 66μ嬉添力nしマ， P2Zたて9. いよう3主薫しなから齢する、この混合液客オ・ラス板対の間に注ぎ，上1で水速静 A・ilr 3一縫産璽慰す3．｛してサ♪フ0／しコウ∠xを. ぞ講藤灘アる・. 後獲ア液五昏迷量の2Kで希痢くして用いる。. 44.

(48) 法得端氷ン劒かあ客タ. 珠・！ん後た. 気一ぱクせ粥乱. 族. ”∴. 蔭. 癒瀬一ン醸自作農漁酵一ターマーカー. 電夕ちパヶ㌧. ，. 頓；. ・果. 白. 卵ロロし. ルパー﹀動ゲ ξ 夕泳ドうヰの ’. ミま図知りアのの既よ. フロ . 一. ○㊨○○○・・○. （sDs存在下）. 雫. 拶．渇、. 図 17 処方0における卵白の実験. る. あに. 回∵ つ液D9. S O4. 囲玄認. 民営. 仏・下量にるり図在5れきク底分、＼でアろ s な．足り、＼D・ノる椎. ポとs一あか. 潅劉で量. ノ祝 ’ 3 0︺つふ0パの多︺︵、行必たθ分件σ／、液／県. 玄﹁を。し葎の赤さ白料湘糾妊箱. 白∵験良わせ質験必卵譲験. ﹂卵巣れ−表さク・袈実. てらに動パτ ︹. 45. 下. 在. §. D. 隔. 験の. り D 8 S 3 「. 3 一. 3.

(49) マーカーと＝診乙述の‘6つ後の夕〉ノN9ク筒ヒィ分・5屋ぼ♪欠の」菌．．りである。. ①②③④⑤⑥. LMW Calibration Kit （PharmaciaFine Ch皿icals製） Q（一La c t a l bumi n. 14，400 20，100 30，000 43，000 67，000 94，000. Trypsin lnhibitor Carbonic Anhydrase Ovalbumin Albu rn in. Phosphorylase b て考察〕. ポ，1ノァクリ！乙，アミト’ゲ！乙，亀：気勇く動♪去1・一タ．ン. ／ヂク質の分∈タ量客堆：定でき5その4与徴左望ξ1・して，. 先の表3ど図・7にある夕＞Agク竣額ナ施さ琶る∠ 図18 の，ように「uる。. O O 4 7 . oo. 3 O. 0 0 . 0 0 ヨ . 0 4 0 0 1 . . ［﹁［. 4. Ovo皿acroglobulin のむむヘアコむむ. OvosE1966e「・i11. 盾潤. @oo. 一一﹁. 図 1 8. ⑥⑤④ ③②①. ・tt’s. 一. 分子皿から推定のタンパク駕. 一子. 一の. マ. 力分. 一職. ﹁謡. 力ぞ. 「ン. マ箏. パ. タ. 動働. 泳. 00. 0v Q11呂δ8ito「 Ov Q9？6巴ムn Gi 唐WYもも8∼45，。。。 F1 ?ﾅ？86stein. Ov bδ8δd. Ly. 圏痘^. パターンに対応するタンパク質. 46.

(50) このよ’うに身ぐ宛し11irにとど：’＆らす’，卵倉ア／し7”ミ. ンしりゾチームにっし・て純命茎永動させたヒぐ5，それそ1れの氷、動’位糧ヒー敏し夜．. 47.