48 （8） 氏名（生年月日） 本 籍
学位の種類
学位授与の番号 学位授与の日付 学位授与の要件学位論文題目
論文審査委員
コオリ カズ ヒロ郡和宏（昭和35
博士（医学） 甲乙239号平成6年2月18日
学位規則第4条第1項該当（医学研究科専攻，博：士課程修了者） Cloning and structural determination of human peptide YY cDNA andgene
（ヒトpeptide YYのcDNAおよび遺伝子のクローニングと構造決定）
（主査）教授 金野 公郎 （副査）教授 相川 英三，新田 澄郎論文 内 容 の 要 旨
目的 Peptide YY（PYY）はカルボキシル末端にチロシン アミド構造を有する36アミノ酸からなる生理活性ペプ チドで，主に下部消化管に存在し，膵臓，胃の外分泌 や消化管運動の調節作用を有している．ヒトPYYの 前駆体構造，遺伝子構造，発現調節に重要な遺伝子領域を解明することを目的に，ヒトPYYのcDNAおよ
び遺伝子のクローニングを行った． 実験方法ヒト結腸粘膜RNAより作成したcDNAライブラ
リーを，合成オリゴヌクレオチドをプローブに用いて ブラークハイブリダイゼーション法によりスクリーニ ングした．2種3個のcDNAクローンを単離し，ダイ デオキシ法により核酸塩基配列を決定した．次にcDNAをプローブに用い，ヒト食道癌DNAより作成
したヒトゲノムフルライブラリーをスクリーニングし た．PYY遺伝子全長を含む2つの陽性クローンのイ ンサートをサブクローニングし，核酸塩基配列を決定 した．転写開始点はプライマー伸長法により決定した．2種類のcDNAに対応するmRNAの発現をノザン
プロット分析とreverse transcriptase－polymerase chain reaction法により検討した． 結果 ヒトPYY遺伝子は全長約1．2kilobase pairであ り，4つのエクソンと3つのイントロンから構成されていた．第1エクソンはPYY前駆体mRNAの5’非翻
訳領域を，第2エクソンはシグナルペプチドとPYY
の大部分を，第3エクソンはPYYの残りの部分と前
駆体のプロセシング部位，カルボキシル端（C端）領域 の前半部分を，第4エクソンはC端領域の残りの部分 と3ノ非翻訳領域をコードしていた．またalternative splicingにより第3イントロン部分の配列が残存しているmRNAの存在が明らかとなった．この第3イン
トロンの配列を有するmRNAがコードする前駆体は C端領域のアミノ酸数が7アミノ酸短いがシグナルペ プチドとPYYの構造に相違はなかった． 考察ヒトPYY遺伝子はラットPYY遺伝子と同様の遺
伝子構造を有している．第3イントロンのalternative splicingは生理活性が不明な前駆体のC端領域をコードする部分に生じている．ヒトPYY遺伝子のプロ
モーター領域（一111～一2）とラットのプロモーター 領域とは81％の同一性を示し，この中にAP2結合部 位と考えられる配列が3カ所認められる．この領域が PYY遺伝子の発現調節に重要と考えられる． 結論ヒトPYYのcDNAおよび遺伝子を単離し，その塩
基配列を決定した．ヒトPYY前駆体の構造，遺伝子構 造，alternative splicingにより作られる．2種類の mRNAの存在，遺伝子発現調鰍こ重要な領域が明ら かとなった． 一654一49
