Q. ゴーストピークが出る。
A. 1. バッファーの脱気不十分が原因です。
2. フローセルが汚れていると気泡がトラップされやすくなります。UV曲線が徐々に上がり、突
然ベースラインまで落ちる場合にはこのケースが考えられます。3. 汚染物質がシステムやカラムに蓄積されていることがあります。1 M NaOHでシステム洗浄
してください（詳しくはÄKTAprime User Manual 「7.2 システム洗浄」を参照）。Q. ベースラインが安定しない。
A. システムポンプを使用してサンプルを添加した場合、ポンプおよびチュービング内に付着した汚
れが少しずつ溶出することがあります。1 M NaOHでシステム洗浄してください。Q. メソッドを使用しないでマニュアル操作で使いたい。
A. メソッドやテンプレートを使わないで、マニュアル操作だけで運転する場合には、
「3.5 マニュアル操作で設定できるパラメータ」をご参照ください。
Q. メモリーに保存される最大サイズは？
A. 最大8,000ポイントまで、4ポイント /
秒でクロマトグラムを記録します。16分ごとにデータを圧縮するので解像度は下がりますが、時間制限はありません。
8.3 フラクションコレクター
Q. 分取中に試験管を飛ばしてしまう。
A. 1. チューブセンサーが濡れている場合には拭いてください。
2. アーム付属のバネの張力が弱い場合に起こります。低温室で使用する場合は「2.2 フラクショ
ンコレクターの設定」を参照ください。3. それでも改善されない場合は、センサーの交換が必要です。
Q. 途中で分画サイズを変更したい。
A. メソッド実行中でも、マニュアル操作中でも同じ操作で変更できます。
「5.8 運転中に可能な操作」を参照ください。
Q. 1本目の試験管だけ液量が多い。
A. ディレイボリュームの分だけ多く分画されるためです。
Q. 一定流速で一定量ずつ分取しているのに液面の高さが異なる。
A. ポンプにエアがかんでいると起こるトラブルです。
「4.3 マニュアルパージ法」でエア抜きをしてください。
Q. 途中で試験管が不足してエラーが表示された。
A. 試験管を追加して pause / cont
ボタンを押してメソッドを再開してください。Q. メソッドを実行すると エラー62が出ます。
A. 試験管とチューブセンサーの接触位置が正しくないためです。運転前には必ず FEED
ボタンを押して試験管とチューブセンサーの位置を正しくセットしてください。
Q.
素通り画分もフラクションコレクターで回収したい。A. メソッド作成のときに、フラクションサイズを指定すれば分取できます。Method Template で
作成する際には、素通り画分の分取サイズはゼロになっています。一度、実行可能なメソッドを 保存したあと、Edit機能で分取サイズを変更してください。8.4 カラム
Q. カラムに気泡を入れてしまった。
A. ゲルに亀裂が入っていなければ、十分に脱気した溶媒を送液することで回復します。標準サン
プル、過去に分析したことのあるサンプルなどでカラム性能を確認してください。Q. 急にカラム圧が高くなった。
A. 1. 溶液、サンプルをフィルターろ過して微粒子を除去してください。
2. サンプル溶液と溶離液の組成が異なるために、精製中にタンパク質の溶解度が低下してカラ
ム内で沈殿を生じることがあります。サンプルが界面活性剤を含む場合には、溶出液にも界 面活性剤を添加してください。3. システム内をバッファーまたは水のまま放置しておくと、溶液が腐敗してカラムの目詰まり
トラブルがよく起こります。必ず、20%エタノールに置換してから保管してください。4. 長期間使用しないときは、1 M NaOHによるシステム洗浄を実施してください。
Q. イオン交換カラムでサンプルが素通りしてしまう。
A. 1. サンプルの塩濃度が高いと素通りすることがあります。脱塩カラムの使用、または希釈によ
って塩濃度を下げてください。2. カラムの平衡化が不十分（pHの安定、塩濃度など）でも素通りすることがあります。
Q. 逆相カラムを使いたい。
A. ポンプ部品がアセトニトリルに耐性がないため使用できません。
8.5 PrimeView / PrimeView Evaluation
Q. 1台のコンピューターに複数のÄKTAprimeを同時に接続することはできますか？
A. 接続は1台のみです。
Q. マニュアル操作のデータはいくつまで保存できますか？
A. Manual Runs (prime) フォルダに直近のデータが10ファイルまで保存されます。古いデータは
自動的に削除されますので、保存が必要なデータは他のフォルダに移動してください。Q. クロマトグラムの右側にY軸を追加したい。
A. PrimeView EvaluationのReport 機能の中で、軸の追加を行います。詳しくは本書「6.4 レ
ポート出力」をご参照ください。Q. 実際にサンプルを流す前にメソッドのグラジエント（%B）を確認できますか？
A. コンピューターへメソッドだけを転送することはできませんので、事前のグラジエント確認はで
きません。サンプルなしでメソッドを実行していただければ、PrimeView Evaluation で実験結 果としてクロマトグラムを表示し、その中でグラジエント（%B）を確認できます。Sample inject by InjV Pump
9. 付録
9.1 Menuマップ
Templates
Run Stored Method
Manual Run
Program Method
Copy Method
Set Parameters
Check
Application template Method template
Desalting HiTrap Desalting
Desalting HiPrep Desalting
His-tag Purification HiTrap Chelating
GST-tag Purification GSTrap
Mab Purification Gradient Elution
Refolding HiTrap Chelating
IgM Purification HiTrap IgM Purification
Mab Purification Step Elution
Albumin Removal HiTrap Blue
Anion Exchange HiTrap Q
Cation Exchange HiTrap SP
Select Buffer V. Pos B,A:-,-,-,-,-,-,- OK
Press OK to Start RUN
Method Ready?
Press OK Save Method
(yes) yes no
Free Methods 25 Sel. Method (used)09
Clear Method 09
(yes) yes no
Press OK to Start RUN
Sample Appl. Volume
(0.0 ml) 0.0
Gel filtration / Buffer Exchange
Ion Exchange Gradient elution
HIC
Gradient elution Affinity Step Gradient
Set Pressure Limit (1.00 MPa) 1.00
Set Flow Rate
(01.0 ml/min) 1.0 Set Fraction Size
(0.0 ml) 0.0
Set Equilibr. Volume
(0.0 ml) 0.0
Set Sample Inj. Vol.
(0.0 ml) 0.0
Set Wash 1 Volume
(0.0 ml) 0.0
Set Elution Volume
(0.0 ml) 0.0
Set Wash 2 Volume
(0.0 ml) 0.0
To RUN data displays and Print-out menus
1. Does not apply to
Gel filtration/Buffer exchange
TO RUN data displays and Print-out menus 1.
1.
Menu overview
System Wash Method
Check Check communication PC App. Connected!
Menu overview (cont.) 2
Run Stored Method
Manual Run
Run Stored Method From System No. 14
Set Method Base (ml)
Set Concentration %B (20 %B)
Set Gradient (off)
Set Flow Rate (3,0 ml/min)
Set Fraction Base (ml)
Set Fraction Size (00.0 ml)
Set Pressure Limit (1.00 MPa)
Set Buffer Valve Pos (Pos 1)
Set Injection Valve Pos (Load)
Start run
Press OK to start run
Check Autozero
AZ 0.0000AU
Check Lamp Run time Hg00000h Zn00000h
Check Lamp intensity
R 5.5 S 5.7 mV
Check Pump Run time 123456h
Check Pumped Volume 123456789 ml
Check Tube Shifts 123456
Telephone Service:
012345678901234567 Contract Number:
012345678901 Serial Number:
01234567 YM012345 ÄKTA prime
Vx.xx.xx Set Length
(0.00 ml) 0.0
Set Target
(00 %B) 0
TO RUN data displays and Print-out menus
To RUN data displays and Print-out menus
Press OK to start run Run Stored Method
From System PC
Program Method
Free Methods 25 Sel. Method (Used) 09
Set Method Base (ml)
Set Fraction Base (ml)
Set Pressure Limit (1.00 MPa)
Edit Breakpoint Set Alarm at (No alarm)
Show %B on Rec out 2
(no) yes no
End Method Save Method
(yes) yes no
Method Occupied (edit) edit clear
Clear Method 09
(yes) yes no
Edit Breakpoint ml 5.0 Set Concentration %B (20.0 %B)
Set Flow Rate (2.0 ml/min)
Set Fraction Size (0.00 ml)
Set Buffer Valve Pos (Pos 1)
Set Inject Valve Pos (LOAD)
Set Peak Collect (no)
Autozero (no)
Event Mark (no)
Edit time/volume (0.0 ml)
Save Breakpoint (0.00 ml)
Delete Breakpoint (0.00 ml)
Edit time/volume Change Replace New time/volume
(5.0 ml) 5.0
2 RUN 7.8 min
22.6 ml/min 1.00MPa 0.00002AU pH 8.50 20%B 22.90 ms/cm
Method Complete Press OK to complete
Memory Print Out?
(yes) yes no
Set Rec Out 1 (UV) UV pH Cond %B Tmp Pr Set Rec Out 2 (%B) UV pH Cond %B Tmp Pr Set Rec Out 3 (Cond) UV pH Cond %B Tmp Pr Autoscaling (no)
Press OK to start Printing
Printing Please wait...
End run?
(no) yes no
Cond 78.8%Tc 22.4°C Tube:01 Frac 5.0 ml
Waste V:(waste) BV(1) IV:(waste)
Set Concentration %B (20.0 %B)
Set Gradient Set Flow Rate (2.0 ml/min)
Set Fraction Size (0.00 ml)
Set Buffer Valve Pos (Pos 1)
Set Inject Valve Pos (LOAD)
Set Peak Collect (no)
Autozero (no)
Event Mark (no)
Run data displays
Print-out menus
Run finished
1. Applies to Manual Run ONLY.
2. Does NOT apply to Manual Run.
3. Does NOT apply to Application Template.
1.
2.
2.
3.
Menu overview (cont.) 3
Set Slope
(0.00 mAU / min) 0.00
Set Parameters
Lamp (on)
Set Drop Sync Active (yes)
Memory Print out Setup Analogue Out
Setup and Calibration
Set Rec Out 1 (UV) UV pH Cond %B Tmp Pr
Set Rec Out 2 (%B) UV pH Cond %B Tmp Pr Set Rec Out 3 (Cond) UV pH Cond %B Tmp Pr
Set Rec Out 1 (UV) UV pH Cond %B Tmp Pr
Set Rec Out 2 (%B) UV pH Cond %B Tmp Pr Set Rec Out 3 (Cond) UV pH Cond %B Tmp Pr Set UV Analogue Out (0.0005AUFS 10.0%)
Set Cond Analog. Out (00.00-50.00 mS/cm)
Set pH Analog Out (pH 12.00-3.00)
Set Press. Analog. Out (1.00 MPa)
Set UV Zero Level (10.0%)
Set UV Range (0.0005AUFS)
Set Cond Zero Level (0.00 mS/cm)
Set Cond Full Scale (50.00 mS/cm) Set pH Zero Level (pH0.00)
Set pH Full Scale (pH 13.00)
Calibrate pH (7.00-10.00)
Calibr pH Buffer 1 Calibr pH Buffer 2
Calibrated Electrode Slope 100.0% 12.5 mV Set pH Temp Comp
(off) Set Show pH (on)
Set Cond Temp Comp (0.0%)
Set Cond Ref Temp (25.0°C)
Set Adjust Cond (83.56 mS/cm)
Set Adj Cell Const (83.56 cm-1)
Set Show Cod (on)
Set Averaging (1.3 s)
Set Lamp Rum Time Hg (2000 h)
Set Show UV (on)
Set Adjust Temp (25.0°C) Setup pH
Setup Cond Setup UV
Setup Temp Start Pump Calibr.
(683 Pulses) Change Press Offset (1005 mV)
Autoscal UV (no) Press OK to start
Printing Printing
Please wait...
Print out to
Recorder Computer
Printing Out?
Method Loggdata
Menu overview (cont.) 4
Set Delay UV to Frac.
(380 µL)
Set Mixer Chamber Vol.
(2.0 ml)
ディレイボリューム
9.2 ÄKTAprime 推奨カラム一覧
製 品 用途 包装 コード番号
アフィニティークロマトグラフィー
群特異性アフィニティーカラム：抗体精製HiTrap rProtein A FF ポリクローナル IgG 抗体、モノクローナル IgG 抗体 5×1 ml / 2×1 ml 17-5079-01 / 17-5079-02
1×5 ml 17-5080-01
HiTrap Protein A HP ポリクローナル IgG 抗体、モノクローナル IgG 抗体 5×1 ml / 2×1 ml 17-0402-01 / 17-0402-03
1×5 ml 17-0403-01
HiTrap Protein G HP Protein Aに親和性の弱いポリクローナル IgG 抗体や 5×1 ml / 2×1 ml 17-0404-01 / 17-0404-03
モノクローナル IgG 抗体 1×5 ml 17-0405-01
HiTrap IgM Purification HP IgM のワンステップ精製 5×1 ml 17-5110-01
HiTrap IgY Purification HP 卵黄からの IgY のワンステップ精製 1×5 ml 17-5111-01
群特異性アフィニティーカラム：その他
HiTrap Blue HP アルブミン、インターフェロン、NAD＋、NADP＋依存酵素など 5×1 ml / 1×5 ml 17-0412-01 / 17-0413-01
HiTrap Benzamidine FF（high sub） セリンプロテアーゼ 5×1 ml / 2×1 ml 17-5143-01 / 17-5143-02
1×5 ml 17-5144-01
HiTrap Streptavidin HP ビオチン、ビオチン標識分子 5×1 ml 17-5112-01
HiTrap Heparin HP 成長因子、血液凝固因子、リポタンパク質など 5×1 ml / 1×5 ml 17-0406-01 / 17-0407-01
His-tagタンパク質などの精製に
HiTrap Chelating HP 金属イオン親和性タンパク質など 5×1 ml / 1×5 ml 17-0408-01 / 17-0409-01
GST融合タンパク質の精製に
GSTrap FF GST融合タンパク質 5×1 ml / 2×1 ml 17-5130-01 / 17-5130-02
1×5 ml 17-5131-01
リガンド固定化用アフィニティーカラム
HiTrap NHS-activated HP アミノ基のカップリング（タンパク質や抗体、核酸など）5×1 ml / 1×5 ml 17-0716-01 / 17-0717-01
イオン交換クロマトグラフィー
HiTrap IEX Selection Kit 最適なゲルの選択にイオン交換 下記7種のHiTrap 1 ml Fast Flow カラムキット 17-6002-33
クロマトグラフィー用は1 ml FFカラムキット リガンド：Q XL / Q / ANX / DEAE / SP XL / SP / CM HiTrap Fast Flow IEX Selection Kit JP 最適なゲルの選択にイオン交換 下記5種のHiTrap 5 ml Fast Flow カラムキット 90-1002-00
クロマトグラフィー用は5 ml FFカラムキット リガンド：SP / CM / Q / DEAE / HiTrap Desaltin
HiTrap SP XL 強陽イオン交換体 5×1 ml / 5×5 ml 17-5160-01 / 17-5161-01
・結合容量 SP XL＞SP FF, SP HP
・分離能 SP HP＞SP XL, SP FF
HiTrap SP FF 強陽イオン交換体 5×1 ml / 5×5 ml 17-5054-01 / 17-5157-01
HiTrap SP HP 強陽イオン交換体 5×1 ml / 5×5 ml 17-1151-01 / 17-1152-01
HiTrap CM FF 弱陽イオン交換体 5×1 ml / 5×5 ml 17-5056-01 / 17-5155-01
HiTrap Q XL 強陰イオン交換体 5×1 ml / 5×5 ml 17-5158-01 / 17-5159-01
・結合容量 Q XL＞Q FF, Q HP
・分離能 Q HP＞Q XL, Q FF
HiTrap Q FF 強陰イオン交換体 5×1 ml / 5×5 ml 17-5053-01 / 17-5156-01
HiTrap Q HP 強陰イオン交換体 5×1 ml / 5×5 ml 17-1153-01 / 17-1154-01
HiTrap ANX FF（High sub） 弱陰イオン交換体 5×1 ml / 5×5 ml 17-5162-01 / 17-5163-01
HiTrap DEAE FF 弱陰イオン交換体 5×1 ml / 5×5 ml 17-5055-01 / 17-5154-01
疎水性相互作用クロマトグラフィー
HiTrap HIC Selection Kit 最適なゲルの選択に疎水性相互作用 下記5種のHiTrap 1 ml カラムキット 17-1349-01
クロマトグラフィー用の1mlカラムセット リガンド：Butyl / Octyl / Phenyl（low sub,high sub）/ Phenyl HP
HiTrap Phenyl FF（high sub） 5×1 ml / 5×5 ml 17-1355-01 / 17-5193-01
HiTrap Phenyl FF（low sub） 5×1 ml / 5×5 ml 17-1353-01 / 17-5194-01
HiTrap Phenyl HP 5×1 ml / 5×5 ml 17-1351-01 / 17-5195-01
HiTrap Octyl FF 5×1 ml / 5×5 ml 17-1359-01 / 17-5196-01
HiTrap Butyl FF 5×1 ml / 5×5 ml 17-1357-01 / 17-5197-01
ゲルろ過クロマトグラフィー
HiTrap Desalting 脱塩、バッファー交換 5×5 ml 17-1408-01