実験の部
1. 試料および溶媒
TB はヘキスト・マリオン・ルセル (株) から恵与されたものを使用した．
CPMは東京化成工業（株）製を使用した． HP-α-CyD（平均置換度: 4.3）， HP-β-CyD（平均置換度4.8）およびHP-γ-CyD（平均置換度4.8）は日本食品 化工（株）製を使用した． DM-α-CyD，DM-β-CyDは和光純薬 (株) 製を使 用した． 溶媒としての水はイオン交換精製水を2回蒸留して使用した． そ の他の試薬ならびに溶媒類はすべて市販特級品を使用した．
2. 水溶液からの結晶化
50 mL のビーカーを用い，リン酸緩衝液 (pH 8.0，I = 0.2) 20 mL に 薬物 (TB：5 mM，CPM：10 mM)，CyDs および 競合包接剤 (p-ヒドロキシ安息香 酸エステル類) を溶解後，0.5 N HCl 約 1 mL を添加した．その溶液をろ過後，
透明なろ液を冷蔵保存 (4ºC) した．
3. 水溶液中における多形転移挙動
3.1 TB 準安定形Form IV：50 mL のビーカーを用い，TB の安定形 Form I の飽和溶液 20 mL (DM-β-CyD 添加系では DM-β-CyD 5 mM を溶解後) に Form IV 15 mg を添加し，冷蔵庫 (4ºC) に静置した．
3.2 CPM 準安定形 Form II：50 mL のビーカーを用い，CPM の安定形 Form A の飽和溶液20 mL (DM-β-CyD 添加系ではDM-β-CyD 5 mM，競合包接剤添 加系では DM-β-CyD 5 mM，EHBA 5 mMを溶解後) にForm II 20 mg を添加 し，冷蔵庫 (4ºC) に静置した．
3.3 CPM 準安定形 Form D：50 mL のビーカーを用い，CPM の安定形 Form A の飽和溶液20 mL (DM-β-CyD 添加系ではDM-β-CyD 5 mM を溶解 後) にForm D 15 mg を添加し，冷蔵庫（4ºC）に静置した．
4. 複合体の調製
CPM（約3 g）とHP-β-CyD（モル比: 1/1）をエタノール/塩化メチレン（1/1
（v/v），約200 mL）に溶解し，噴霧乾燥法により調製した． 噴霧乾燥条件
は以下の通りである． 噴霧乾燥機: ヤマト科学（株）製 GA-32 型，入口温 度: 85°C，出口温度: 55°C，乾燥空気量: 0.40 m3/min，噴霧乾燥空気圧: 1.0
kgf/cm2．なお，CyDs複合体を調製する際の溶媒は水が最も望ましいが，CPM
のような難水溶性薬物は水に溶解しにくいため，エタノール/塩化メチレン
（1/1（v/v），200 mL）を用いた．
5.. 溶解度相図
一定過剰量の TB およびCPM 粉末を1.5 mL バイアルに入れ，種々の濃度 のCyDs水溶液を加えて密栓し，25°Cで5日間振とうした． 遠心分離後，上 澄を綿栓ピペットにより採取し，UV検出器を用いて定量した（実験の部6-2）．
6. 各種スペクトルの測定
6.1 NMR ス ペ ク ト ル ：TB または CPM (5 mM)および β-CyD または HP-β-CyD（2.5~15 mM）を0.1 Mホウ酸ナトリウム/重水溶液に溶かし，日本 電子（株）製JNM-α500核磁気共鳴装置（外部磁場: 500 MHz）を用いて測定 した． 1H化学シフトは D2O（δ: 4.70 ppm）のピークを基準に用いて，テト ラメチルシランからの低磁場シフトをppmで表した（1Hの精度: 約 ± 0.005 ppm）． DM-α-, -β-CyD の帰属は Onda et al 68) および Miyake et al 69) の報告 に従った．
6.2 UVスペクトル：CPMおよびCyDsを水に溶解し，終濃度がCPM 50 µM，
CyD 10 mMとなるように調製し，日立製作所（株）製U-3200型分光光度計
を用いて25℃で測定した． CPM濃度はUV波長 230 nm の吸光度から測定 した．
6.3 CDスペクトル：CPMおよびCyDsを水に溶解し，終濃度がCPM 50 µM，
CyD 10 mMとなるように調製し，日本分光（株）製 J- 720円二色性分散計を
用いて25℃で測定した．
7. 粉末X線回折
粉末 X 線回折は理学電機（株）製 RINT2500VL 型自動 X 線回折装置を使 用し，試料をガラスセルに固定して測定した． 固形試料中の CPM 含量はシ リコン（5 mg）を内部標準物質に用いて測定した． 測定条件は以下の通りで ある．X線源Cu-Kα 線（1.542Å），管電圧: 40 kV，管電流: 40 mA，走査速度: 1°/min，回折角: 5 ~ 30°，スリット: 1º -1º -0.15 mm．
8. 熱分析
示差走査熱量測定にはPerkin-Elmer社製DSC-7熱分析測定装置を使用し，
冷却にはPerkin-Elmer社製JSCイントラクーラーを使用した．較正標準物質
としてインジウム（純度: 99.999 %，融点: 156.4 °C，∆H: 28.47 J/g）を使用し た． 試料5 mgをアルミニウムパンに封入し，パージガスに窒素を用い，昇 温速度10 °C /minで測定した（精度: ±0.1°C）．
9. 走査型電子顕微鏡による形態観察
EIKO 製 IB-3 型イオンコーターで試料を金イオンコーティングした後，
日立－明石製走査型電子顕微鏡 S-510 型を用いて観察した．
10. 分子動力学シュミレーション
分 子 動 力 学 は CCG 社 (Chemical Computing Group Inc.) 製 MOE (Molecular Operating Environment, version 2002.03) ソフトウェア70)を用いて計
算した．DM-CyDs および TB の初期構造は Chem3D ソフトウェアを用いて
設定した． 種々の可能な配向（約 1000 種類）を ASDock プログラムを用 いて発生させてエネルギー極小化を行い，その中から安定構造を抽出した．
CPM/DM-CyDs の包接構造は，NMR 測定結果を参考にして推定した．
11. 安定性試験
試料3～5 gを硬質バイアルに充填し，種々の塩飽和溶液71,72) で調湿（20%
R.H.（CH3COOK），30% R.H.（MgBr2），45% R.H.（Mg(NO3)2），75% R.H.（NaCl）） したデシケータ内に保存した．デシケータは25°C，40°C，60°Cに設定した乾
燥器（ADVANTEC 送風定温乾燥機 FC-410）中に静置し，経時的に試料を採
取した．
12. 打錠
打錠にはIR 用打錠機（RIKEN）を用い，試料 100 mg を各時間および各回 数打錠後，乳鉢中で錠剤を崩して篩過（＜100 mesh）し，その80 mgをサン プルとした．
13. 溶出試験
粉末法を用いて測定した．59) すなわち，37ºCの循環水を通じたジャケッ トビーカ－（内径3 cm，50 mL）に日局XIV崩壊試験用の第1液 (pH1.2) ま たは第2液（pH 6.8）50 mLをいれ，100 rpmでパドルを回転させ，粉末試料 を加えた． 経時的に綿栓付きピペットで試料溶液 1 mLを採取し，UV 検出 器を用いて定量した（実験の部6-2）．
14. in vivo 吸収実験
14.1 ビーグル犬への経口投与：投与前24時間絶食した雄性ビーグル犬（9 ~ 11
kg）に試料粉末（CPMとして50 mg/body）をゼラチンカプセルに充填して水
50 mL とともに経口投与した． 採血は経時的にヘパリンナトリウム注射液
（ノボ・ノルディスク A/S製ノボ・ヘパリン注1000）処理注射筒を用いて前 肢静脈より2 mL採血後，遠心分離（1000 g，10 min，4°C）して血漿を分析 した．
14.2 血漿中CPM濃度の定量：血漿0.2 mLに内部標準物質（トルブタミド 0.1
mg/mL）0.5 mLを加えて30分攪拌後，エーテル5 mLを加えて抽出した． 遠
心分離（2000 rpm，5 min）後，有機溶媒4 mLを採取し，減圧下で溶媒を留
去後，残渣をアセトニトリル100 µLに溶解し，HPLCにより定量した． ポ ンプ: 日立製作所（株）製L-6000型，UV検出器: 日立製作所（株）製635-A 型波長可変UVモニター，カラム: ワイエムシー製AM-312ODSカラム（5 µL， 6.0 mm i.d.，150 mm），移動相: アセトニトリル/0.05 Mリン酸二水素ナトリウ ム二水和物（30/70（v/v））混液，流速: 1.3 mL/min，検出波長: 230 nm．
14.3 血漿中グルコース濃度の測定：和光純薬（株）製Glucose-CII-Test Wako
により測定した． 血漿0.02 mLに測定キット溶液3.0 mLを加えて攪拌し，
37°Cで5分間加温後，UV検出器を用いて定量した（検出波長: 505 nm）．
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