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本研究では、今後の作物生産とって大きな役割を担うであろう農薬に着目し、今後の微生 物農薬の開発に寄与すると考え、環境微生物を用いた微生物農薬の研究について報告した。

第2章では放線菌に着目した。特にStreptomyces属は、多種多様な抗生物質生産を行う

ことから古くから医学分野での研究が行われてきたが、近年、農薬としても強く注目を浴び ており、その研究報告は年々増加傾向にある。本研究では、強い抗真菌活性を有する

Streptomyces sp. KTおよびStreptomyces sp. AR10を単離および同定した。両菌株は、単

離した53 株の放線菌の中でも植物病原菌に対して強い抑制能を有しており、特に KTは、

新 規 だ と 示 唆 さ れ る eurocidin を 単 離 お よ び 同 定 す る こ と が で き た 。AR10 か ら は

albocycline が検出され、この化合物は既知であるものの、両菌株の近縁種において各化合

物の生産は報告されておらず、同時に各化合物を生産するStreptomyces属を用いた微生物 農薬の報告もまだなされていないため、これらの菌を用いた農薬の研究は新規微生物農薬 の開発に貢献すると考えられる。

第3章では、微生物農薬として最も研究が進んでいる細菌である Bacillus 属細菌に着

目した。本研究では、すでに植物病原菌に対して高い防除効果を有するB. subtillis RB14用

いて研究を行い、農業における問題のひとつである農業残渣の有効利用について報告した。

近年、カーボンニュートラルの考え方に基づきBDFの研究および応用は盛んに行われてい

る一方で、油脂生産作物からは多量の農業残渣が排出される。本研究では、油脂生産作物で

あるJ. curcasの種子残渣を培養基質として利用可能か試験した。その結果、RB14は良好な

増殖を示し、抗真菌活性物質であるiturin Aの生産も認められた。さらにこれらの活性は、

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液体振盪培養より固体発酵培養の方が高かった。また、固体発酵培養を行うことで必要最小 限の水しか使わず、振盪する機材も不要であることから微生物農薬の開発にかかるコスト を削減できるのではないかと示唆される。また、キュウリを用いた植物実験では、RB14の 固体発酵培養物は、適切な量で添加すればR. solaniのキュウリへの感染を防除し、植物の 生育も促進することができた。これらのことから、本研究は、Bacillus属細菌と農業残渣を 組合せた新たな微生物農薬の開発に寄与すると考えられる。

第 4 章では、農薬散布の観点から低栄養細菌に着目し、これらの菌が生産する抗菌活性

物質について研究を行った。低栄養細菌は、炭素源が1-15 mg/Lと極端に少ない環境中で

も生育できる微生物を指す。本研究で用いた低栄養細菌KSおよびDEは炭素源が100 µg/L

で増殖することができる。さらにその一方で、一般細菌用の栄養培地であるTSB培地など

でも生育が可能であった。低栄養細菌として、22 株を研究室で保存しており、これらのう

ちKSとDEはR. solaniに対して強い抑制活性を有していた。微生物同定の結果KSは、B.

contaminansと同定され、DEは、P. protegensと同定された。また抗菌活性物質としてKS

はpyrrolnitrinおよび2,4-diacetylphloroglucinol(DAPG)を生産していることが示された。

著者の知る限り、低栄養細菌と微生物農薬を関連付けた研究は行われておらず、これらの細 菌を用いた研究は、植物体上における病害防除の基礎的な知見として本研究は重要となる。

本研究では、微生物農薬の基礎的および応用開発に向けた研究を行い、放線菌、Bacillus 属細菌、低栄養細菌についてその報告を行った。これらの研究では抗植物病原性真菌につい て主に報告したが、日本植物病名データベース(2013)によると菌類病(真菌などによる病 害)の病原数は4662種と報告されており、細菌/放線菌病の189種と比べるとかなり高い割

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合となっている。また、多犯性の植物病原菌としてR. solaniが299種と最も宿主数が多く、

次いでBotrytis cinerea(灰色かび病)が222種、Sclerotium rolfsii(白絹病)が207種と続

いている。このように本研究で試験したR. solaniは日本のみならず世界中で多犯性の植物 病原菌として知られており、本植物病原菌の防除は、今後の作物生産における重要な課題の ひとつと考えられる。今回報告した細菌は、いずれもR. solaniに対して抑制活性が認めら れており、いくつかはラボスケールではあるものの植物を用いた感染防除にも成功してい る。今後の課題としては、これらの微生物を微生物農薬として開発するため、より多くの植 物種や病原菌に対する効果を調査し、より一般圃場に近い環境条件下での試験を行う必要 があると考えている。

現在のところ、環境土壌中には1g当たり 107-109 程度の微生物が存在しているとされ

ており、2011年から行われているEarth Microbiome Project (EMP)においてもその総数は、

未だに解明されていない。これらの中には、まだ発見されていない微生物農薬の候補となる 有用な微生物が含まれているかもしれない。今後の人口増加に伴う食料生産に対して、農薬 は必要不可欠であることは明確であり、今回報告した植物病原性真菌に対して強い抑制効 果を示す微生物の単離および抗真菌活性物質の研究は、これから世界が直面する問題の解 決に大きく貢献するのではないかと考えている。

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参考文献

Agricultural Development Economics Division Food and Agriculture Organization of the

United Nations (2012), World agriculture towards 2030/2050: the 2012 revision.

Agrios, N., G. (2005). Plant pathology 5th Edition, Elsevier.

Al-Askar, A., and Rashad, Y. (2010). Efficasy of some plant extracts against Rhizoctonia solani

on pea. Journal of plant protection research, 50(3), 239–243.

Banville, J. G., (1989). Yield losses and damage to potato plants caused by Rhizoctonia solani

Kuhn. American Potato Journal, 66(12), 821-834.

Bartz, E., F., Glassbrook, J., N., Danehower, A., D., and Cubeta, A., M., (2013). Modulation of

the phenyl acetic acid metabolic complex by quinic acid alters the disease-causing activity of

Rhizoctonia solani on tomato. Phytochemistry, 89,47–52.

Blumberg, M., P., (1988). Protein kinase C as the receptor for the phorbol ester tumor

promoters: sixth Rhoads memorial award lecture. Cancer Reserch, 48, 1-8.

100

Burkhead, D., K., Schisler, A., D., and Slininger, J., P., (1994). Pyrrolnitrin Production by

Biological Control Agent Pseudomonas cepacia B37w in Culture and in Colonized Wounds

of Potatoes. Applied and Environmental Microbiology, 60(6), 2031-2039.

Cartwright, K., D., Chilton, S., W., and Benson, M., D., (1995). Pyrrolnitrin and phenazine

production by Pseudomonas cepacia, strain 5.5B, a biocontrol agent of Rhizoctonia solani.

Applied Microbiology and Biotechnology, 43(2), 211-216.

Chandler, D., Bailey, S., A., Tatchell, M., G., Davidson, G., Greaves, J., and Grant, P., W.,

(2011). The development, regulation and use of bio pesticides for integrated pest

management. Philosophical Transactions of the Royal Society B, 366, 1987-1998.

Chater, F., K., (2006). Streptomyces inside-out: a new perspective on the bacteria that provide

us with antibiotics. Philosophical Transactions of the Royal Society B, 361, 761–768.

Chen, H., and Jiang, J., G., (2011). Toxic effects of chemical pesticides (trichlorfon and

dimehypo) on Dunaliellas alina. Chemosphere, 84, 664–670.

101

Deepa, S., L., Gowthami K., and Kumar, S., K., (2011). In vivo screening of antimicrobial

activity of soil Actinomycetes against human pathogens. World journal of agricultural sciences,

7, 624-628.

Cronin, D., Moenne-Loccoz, Y., Fenton, A., Dunne, C., Dowling, N., D., and O'gara, F., (1997).

Role of 2,4-Diacetylphloroglucinol in the Interactions of the Biocontrol Pseudomonad Strain

F113 with the Potato Cyst Nematode Globodera rostochiensis. Applied and Environmental

Microbiology, 63(4), 1357-1361.

Elander, P., R., Mabe, A., J., Hamill, H., R., and Gorman, M., (1968). Metabolism of

Tryptophans by Pseudomonas aureofaciens. Applied and Environmental Microbiology, 16(5),

753-758.

Freeman, S., Minz, D., Kolesnik, I., Barbul, O., Zveibil, A., Maymon, M., Nitzani, Y., Kirshner,

B., Rav-David, D., Bilu, A., Dag, A., Shafir1and, S., and Elad, Y., (2004). Trichoderma

biocontrol of Colletotrichum acutatum and Botrytis cinerea and survival in strawberry.

European Journal of Plant Pathology, 110, 361-370.

Gordee, S., R., and Matthews, R., T., (1969). Systemic Antifungal Activity of Pyrrolnitrin.

Applied Microbiology and Biotechnology, 17(5), 690-694.

102

Gu, G., Smith, L., Wang, N., Wang, H., and Lu, S., (2009). Biosynthesis of an antifungal

oligopeptide in Burkholderia contaminans strain MS14. Biochemical and Biophysical

Research Communications, 380(2), 328-332.

Gusakov, V., A., (2011). Alternatives to Trichoderma reesei in biofuel production. Trend in

Biotechnology, 29(9), 419-425.

Haeder, S., Wirth, R., Herz H., and Spiteller, D., (2009). Candicidin-producing Streptomyces

support leaf-cutting ants to protect their fungus garden against the pathogenic fungus

Escovopsis. Proceedings of the National Academy of Sciences, 106, 4742-4746.

Harada, K., Nishida, F., Takagi, H., Suzuki, M., & Iwashita, T., (1984). Studies on an antibiotic,

albocycline. The Journal of Antibiotics, 37, 1187-1197.

Hattori, R., and Hattori, T., (1980). Sensitivity to salts and organic compounds of soil bacteria

isolated on diluted media. The Journal of General and Applied Microbiology, 26, 1-14.

Howell, R., C., (2003). Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological

Control of Plant Diseases: The History and Evolution of Current Concepts. plant disease,

87(1), 4-10.

103

Huan, Y., Xu, L., Xue, L., Huimin, Y., and Zhongyao, S., (2015). Identification of lipopeptide

isoforms by MALDI-TOF-MS/MSbased on the simultaneous purification of iturin, fengycin,

and surfactin by RP-HPLC. Analytical and Bioanalytical Chemistry, 9, 2529-2542.

Huang, X., Chen, L., Ran, W., Shen, Q., and Yang, X., (2011). Trichoderma harzianum strain

SQR-T37 and its bio-organic fertilizer could control Rhizoctonia solani damping-off disease

in cucumber seedlings mainly by the mycoparasitism. Microbiological biotechnology,

91,741-755.

Hyakumachi, M., Takahashi, H., Matsubara, Y., Someya, N., Shimizu, M., Kobayashi, and

Nishiguchi, M., (2014). Recent studies on biological control of plant diseases in Japan.

Japanese journal of phytopathology, 80, 179-187.

Jayaprakashvel, M., Selvakumar, M., Srinivasan, K., Ramesh, S., and Mathivanan, N., (2010).

Control of sheath blight disease in rice by thermostable secondary metabolites of

Trichothecium roseum MML 003. European Journal of Plant Pathology, 126(2), 229-239.

Jog, R., Nareshkumar, G., and Rajkumar, S., (2012). Plant growth promoting potential and soil

enzyme production of the most abundant Streptomyces spp. from wheat rhizosphere. Journal

of Applied Microbiology, 113, 1154-1164.

104

Kirner1, S., Hammer, E., P., Hill, S., D., Altmann, A., Fischer, I., Weislo, J., L., Lanahan, M.,

Pée, K., H., and Ligon, M., J., (1998). Functions Encoded by Pyrrolnitrin Biosynthetic Genes from Pseudomonas fluorescens. Journal of Bacteriology, 180(7), 1939-1943.

Kozo, T., (2013). Basic technologies of pesticide formulations and their future prospects.

Japanese Journal of Pesticide Science, 38(2), 205-212.

Kuznetsov, I., S., Dubinina, A., G., and Lapteva, A., N., (1979). Biology of oligotrophoic

bacteria. Annual Reviews, 33, 377-387.

Lee, F. N., and Rush, C. M., (1983). Rice Sheath Blight: A Major Rice Disease. Plant Disease,

67(7), 829-832.

Lewis, A. and J., Papavizas, C. G., (1980). Integrated control of Rhizoctonia fruit rot of

cucumber. Phytopathology Journal, 70(2), 85-89.

Liang, Y., Siddaramu, T., Yesuf, J., and Sarkany, N., (2010). Fermentable sugar release from

Jatropha seed cakes following lime pretreatment and enzymatic hydrolysis. Bioresource

Technology, 101(16), 6417–6424.

105

Makkar, H., P., S., Becker, K., Sporer, F., Wink, M., (1997). Studies on nutritive potential and

toxic constituents of different provenances of Jatropha curcas. Journal of Agricultural and

Food Chemistry, 45, (8) 3152–3157.

Marchand, A., P., Weller, M., D., and Bonsall, F., R., (2000). Convenient Synthesis of

2,4-Diacetylphloroglucinol, a Natural Antibiotic Involved in the Control of Take-All Disease of

Wheat. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 48(5), 1882-1887.

Marchetti, A. M., and Bollich, C. N., (1991). Quantification of the relationship between sheath

blight severity and yield loss in rice. Plant Disease, 75(8), 773-775.

Matsumoto, K., Sato, H., Ota, C., Seta, S., Yamakawa, T., Suzuki, H., and Nakayama, Y., (2016).

A new method for evaluating field resistance to brown spot in rice. Breeding Research, 18(3),

103-111.

Mizumoto, S., Hirai, M., and Shoda, M., (2006). Production of lipopeptide antibiotic iturin A

using soybean curd residue cultivated with Bacillus subtilisin solid-state fermentation.

Microbiological Biotechnology, 72, 869-875.

106

Mukherjee, K., P., Horwitz, A., B., and Kenerley, M., C., (2012). Secondary metabolism in

Trichoderma – a genomic perspective. Micriobiology, 158(1), 35-45.

Munesue, Y., Masui, T., (2009). Variation Factors of Global Cropland Requirements from

the IPCC Special Report on Emissions Scenarios (SRES). Environmental science, 22(2), 7.-90.

Nakagomi, K., Takeuchi, M., Tanaka, H., Tomizuka, N., and Nakajima, T., (1990). Study on

inhibitors of rat mast cell degranulation produced by microorganisms. The Journal of

antibiotics, 43(5), 462-469.

Oliveira, A., V., Martins, P., L., Gonçalves, C., R., Benício, F., P., L., Costa, L., D., and Ludwig,

J., (2013). Use of seed treatment with fungicide in control of Colletotrichum truncatum and

physiological quality of soybean seeds Glycine max. Journal of Biotechnology and Biodiversity,

4(2), 98-106.

Ongena, M., Jourdan, E., Adam, A., Paquot, M., Brans, A., Joris, B., Arpigny, J., B., and Thonart,

P., (2007). Surfactin and fengycin lipopeptides of Bacillus subtilis as elicitors of induced

systemic resistance in plants. Environmental Microbiology, 9(4), 1084-1090.

107

Pandey, C., R., and Rinheart, L., K., (1977). Polyene Antibiotics. Ⅸ, An Improved Method

for the Preparation of Methyl Esters of Polyene Antibiotics. The Journal of Antibiotics, 30(2),

158-162.

Rakshit, D., K., Darukeshwara, J., Rathina, R., Narasimhamurthy, K., Saibaba, P., and Bhagya,

S., (2008). Toxicity studies of detoxified Jatropha meal (Jatropha curcas) in rats. Food and

Chemical Toxicology, 46(12), 3621–3625.

Ramette, A., Frapollia, M., Fischer-LeSaux, M., Gruffaz, C., Meyer, J. Défago, G., Sutra, L.,

and Moënne-Loccoz, Y., (2011). Pseudomonas protegens sp. nov., widespread

plant-protecting bacteria producing the biocontrol compounds 2,4-diacetylphloroglucinol and

pyoluteorin. Systematic and Applied Microbiology, 34(3), 180-188.

Saetae, D., and Suntornsuk, W., (2011). Toxic Compound, Anti-Nutritional Factors and

Functional Properties of Protein Isolated from Detoxified Jatropha curcas Seed Cake.

International Journal of Molecular Sciences, 12(1), 66-77.

Savary, S., Teng, S., P., Willpcquet, L., and Nutter, F., W., (2006). Quantification and

modeling of crop losses: A review of purposes. Annual Review of Phytopathology, 44, 89-112.

108

Savary, S., Willocquet, L., Elazegui, F. A., Castilla, N. P., and Teng, P. S., (2000). Rice pest

constraints in tropical Asia: quantification of yield losses due to rice pests in a range of

production situations. Plant Disease, 84(3), 357–369.

Segarra, S., G., Ent, D., V., Trillas, I., and Pieters, C. M. J., (2008). MYB72, a node of

convergence in induced systemic resistance triggered by a fungal and a bacterial beneficial

microbe. Plant biology, 11, 90-96.

Singh, P., S., and Gaur, R., (2016). Evaluation of antagonistic and plant growth promoting

activities of chitinolytic endophytic actinomycetes associated with medicinal plants against

Sclerotium rolfsii in chickpea. Journal of Applied Microbiology, 121(2), 506-518.

Slechta, L., Cialdella, J., and Hoeksema, H., (1978). Biomodification of albocycline by

Streptomyces venezuelae. The Journal of Antibiotics, 31, 319-323.

Sotolongol, A., J., Beatón, P., Díaz, A., Ocal, M., S., Vallel, y., Pavónl, G., S., and Zanzi, R., (2007). Jatropha curcas L. as a source for the production of biodiesel: a Cuban experience.

15th European Biomass Conference & Exhibition–proceedings, 2631-2633.

109

Summerell, A., B., Leslie, F., J., Liew, C., Y., E., Laurence, H., M., Bullock, S., Petrovie, T.,

Bentley, R., B., Howard, G., C., Peterson, A., S., Walsh, L., J., and Burgess, W., L. (2011).

Fusarium species associated with plants in Australia. Fungal diversity, 46(1), 1-27.

Tripathi, K., R., and Gottlieb, D., (1969). Mechanism of Action of the Antifungal Antibiotic

Pyrrolnitrin. Journal of Bacteriology, 100(1), 310-318.

Velusamy, P., Immanuel, E., J., Gnanamanickam, S., S., and Thomashow, L., (2006). Biological

control of rice bacterial blight by plant-associated bacteria producing

2,4-diacetylphloroglucinol. Canadian Journal of Microbiology, 52(1), 56-65.

Vemmer, M., and Patel, V., A., (2013). Review of encapsulation methods suitable for microbial

biological control agents. Biological control, 67, 380–389.

Wainwright, M., (1991). Streptomycin: Discovery and Resultant Controversy. History and

Philosophy of the Life Sciences, 13(1), 97-124.

Waksman, S., A., Katz, E., and Vining, L., C., (1958). Nomenclature of the actinomycins,

Nomenclature of the Actinomycins”. Proceedings of the National Academy of Sciences, 44(6),

602-612.

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