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られた. これらの値はコハク酸化されていないウシ皮膚コラーゲン(CSC)についての 実測値( 九=41 .6+0.7 oC， ムH =31 .2+0.8Jg-1) (図4・2 b) および報告されている
値(Komsa-Penkovaetαl. 1996) に近いことから， コハク酸による修飾の影響は小さい と考えられる. ま た， 根津らはポリアクリノレ酸との相互作用においてCSCと SCSC の問に本質的な差のないことを示し， コハク酸修飾の影響が深刻でないことを述べて し\る(Nezu& Winník 2000) .
一方， HEMAが共存すると， その濃度が増加するにつれてピーク位置， ピーク面積 はともに濃度に依存して変化した. HEMA濃度が低い領域では， SCSCの変性温度九 は4 0.3士0.8 oCから濃度とともに単調に低下してい った. 20 0/0で最低温度 36.9 +
0.5 oCに達した後， 九は増加に転じ ， HEMA濃度80 0/0では九は67.7+1.2 oCに達し た(図4 - 3 a) . 変性エンタルピ一変化ムHも九と同様な濃度依存性を示し3 極小が HEMA濃度20 0/0 に現れた. しかし依存の仕方は九に比べて非常に急峻で、あり， はじ
め40.3 +0.8 J g-lであった値が ， HEMA濃度200/0では3.2 +0. 7 J g-1に低下し， 800/0で は39 .9 + 0.6 J g-1まで回復した(図4-3 b) .
SCSC変性挙動のHEMA濃度依存性は，第3章で示されたBDC，BTC変性のHEMA 濃度依存性とよく対応するものであり， 水溶性コラーゲンであってもHEMA との相 互作用は不溶性コラーゲン と本質的に同じであるといえる. つま り3 熱分析から HEMA-コラーゲン 相互作用を考察する場合には3水溶性コラーゲンであるSCSCを象 牙質コラーゲンのモデルとして扱うことに大きな問題はないと考えられる. BDC，
BTCについて考察したのと同様に， SCSC についても上記の変性挙動のHEMA 濃度 依存性には， コラーゲン高次構造の不安定化と安定化の措抗する作用が関与している とみられる.
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a •
4-3-2ゲ、ル滅過クロマトグラフィー
GPCの検出器として紫外検出器と示唆屈折計を用いたが，前者の方がベースライン の安定性と感度および再現性に優れていた. 以下は紫外検出器を用いて得られた クロ マトグラムについての分析結果 である. 示唆屈折計による モニターは紫外検出器の結 果に異常がなし1か確認する程度の用途にとどめている.
残基 モル濃度がlmMのSCSCについては， GPCのクロマトグラムに3つの明瞭な バンドが現れた(図4-4 ). 第1ピーク(図4-4， Pl)の溶出体積に=4.0 mlはカラ ムの空保持体積Voに相当することから，その成分は SCSCの高度凝集体に対応したも のであると思われるが， 会合数についての情報は得られない. また， に= 6.3 mlに現 れる第2ピーク(図4-4， P2)は幅が広く， 二つもしくはそれ以上の成分から 成っ ていると考えられる. に = 6.9 mlに位置する幅の狭い第3のバンド(図4-4， P3) は， 3つの成分の中で 溶出が最も遅いことから， この試料中で 検出される最もサイズ の小さい 成分 で， 単量体のSCSC 分子に対応すると考えられる .
H.EMAが共存する場合には， SCSC の溶出パターンはH.EMA 濃度に依存して変化 する. HEMA 濃度の増加につれて Plのピーク強度が 小さくなっていき， 0.020/0以上 で消失した(図4-5 a ) . このH.EMA濃度は， H.EMA/SCSC残基のモル比rに換算す ると約r=2に相当し， 前節のDSC測定実験で20 % HEMAを作用させた状態に対応 する. さらにH.EMA濃度が増すと， P3が主ピークとなるとともに， その溶出位置が 6. 9 mlから7.6 mlまでシフトした(図4-5 b). これに対してP2のには， HEMA濃 度0.05 0/0まで変わらなかった. HEMA濃度が 0.01 0/0を越えると， 第4のピーク(P4) が現れ， これはHEMA濃度が 増加するにつれて 明瞭になってきた. P4の溶出位置は
HEMA濃度にほとんど依らずには約7 ml でほぼ一定であった(図4-5 b).
P1 P2
a
P3
eb
f
C
o 2 4 6 8 10 0 2 4 6 8 10
九(ml) 九(ml)
図4 -4 SCSCのゲ、ノレろ過クロマトグラム. Cscsc
==1 mM，
溶離液;蒸留水(中性pH)， 0.5 ml min-1•
ピーク強度に関しては， P3， P4はHEMA濃度0.02 0/0を除いて， P2， P4は0.03 %を 除いて， 単純な濃度依存性を示している(図4-5a). 異常点である0.02"-'0.03 %の 濃度領域(r = 2"-'3)は， コラーゲンの変性温度， 変性エンタルピ一変化が極小をと る領域と一致している.
4-3 - 3 HEMAの作用によるコラーゲン構造への影響
GPCにおいてHEMA濃度の増加に伴い， SCSCの凝集体に相当すると考えられる Plのピーク強度が減少し， それに対応して SCSC単量体と考えられるP3ピーク強度
が増大するのは， HEMAの作用により凝集体の解離が進むことを示唆している.
また， P3の溶出体積がHEMA濃度の増加とともに大きくなっていくのは， 見かけ の体積が 小さくなっていることに対応し3 これはHEMAが SCSC の本来の三重らせ ん構造に影響を与えていることを意味する. 未変性のコラーゲン分子の三重らせん体 は主軸方向に伸張した剛直な構造で3 同ーの分子量を持つ他の形態に比べると回転半 径が非常に大きく， 等価球体の体積が大きくなる. 一方， この実験では溶出速度を0.5 ml min-1と， 比較的遅い 流速に設定しているので， 棒状の溶出物が流速方向に配向す るとは考えにくく，重心周りに回転して等価の球体として運動しているとみなした.
HEMAの作用によってその等価球体のサイズが小さくなったことは，構造の末端間距 離が減少したこと， すなわち， 分子の剛直性が失われるような構造変化がSCSCに生 じたか HEMAの脱水作用によって収縮し，軸および径方向の寸法が減少した可能性 が高い(図4 -5). しなしながら， 三重らせん構造が完全に 失われるまでの構造変化 は起こっていないと考えてよい. なぜならば， 前節で示したように， 広範な範囲にわ たってHEMA濃度を変化させて行ったDSC測定では九やムHの低下はあってもp
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