イオン交換（カラムへのサンプル直接添加）

10. メソッドの保存 File ↓ Save as 

Method Name ファイル名を入力します

Technique 手法を選択します

メソッドは、この画面で選択したディレクトリに保存されます。

以上を選択し、Next>ボタンをクリックします。

注：メソッドを実行すると、メソッド名の後に 01 から始まる番号が付いたものが、

Resultファイル名になります。

11. 作成したメソッドの確認

UNICORN  Main  Menu画面のMethodsウィンドウに、保存されたメソッド名が表示さ れます。

4. サンプル添加方法の設定

Injection technique Sample Pump Direct Loading

（P-950を使った、カラムへの自動直接サン プル添加）

Injection Volume 100 ml

Sample Inlet S1

注：S-8  Rinse  Sample  Flowpath（20  ml）は、ラインS8に準備したライン 洗浄液（開始バッファー）での、サンプルループ間の共通ラインの洗浄のための 項目です。初期設定ではOFFになっていますが、複数サンプルのスカウティング を行う場合のみ、チェックしてください。

注：Flush Sample up to Injection Valveは、サンプルインレットチューブか らインジェクションバルブまでの流路の、サンプルでの置換のための項目です。

初期設定ではOFFになっています。ONにする（チェックをいれる）と、10mlの サンプルを使ってライン置換をするため、上で入力したInjection  Volumeの正確 性が向上します。

以上を選択し、Next>ボタンをクリックします。

5. Fracのセッティングと素通り画分回収の設定

＜Frac-950の場合＞

Frac-950 Rack 18&30mm Tubes

Flowthrough FractionationFrac-950

Fraction Volume 50 ml

Tube Type 30 mm 

Start at First tube

＜Frac-900の場合＞

Flowthrough FractionationFrac-900

Fraction Volume 5 ml 以上を選択し、Next>ボタンをクリックします。

6. Elution Fractionation（溶出液の回収）に関する設定

＜Frac-950の場合＞

Fixed Volume Fractionation（定量分画設定）

Frac-950

Fraction Volume 1 ml

Tube Type 18 mm

Start at First Tube（分取開始試験管を指定）

＜Frac-900の場合＞

7. 溶出液のPeak Fractionationの設定

Peak Fractionation OFF（ピーク分取しない）

以上を選択し、Next>ボタンをクリックします。

8. Elution（溶出方法）の設定

Elution Technique Segmented Gradient Number of Segments 3

Wash  Out  Unbound  Sample（非吸着物質の洗浄）、Clean  after Elution  at  100%B（グラジエント溶出終了後のConcB100%でのカラム洗 浄）は、それぞれ2CV,5CVが初期選択されています。変更を行う場合は Variables画面にて行います（後述、9項参照）。

Reequilibration  after  Elution（5CV）（カラム再平衡化）が必要な場 合、ボックスにチェックを入れてください。ボリュームの変更はVariables画 面にて行います（後述、9項参照）。

以上を選択し、Next>ボタンをクリックします。

8-1. Elution Segment1（3）（グラジエント）の設定1 Target Concentration B 50

Length of Gradient 10

Fraction Volume   1 ml

どのような形のグラジエントを描いたか、右図のUpdateボタンを押すことで確認 できます。

以上を選択し、Next>ボタンをクリックします。

8-2. Elution Segment 2（3）（グラジエント）の設定2 Target Concentration B 100

Length of Gradient 0

Fraction Volume   1 ml 以上を選択し、Next>ボタンをクリックします。

8-3. Elution Segment 3（3）（グラジエント）の設定3 Target Concentration B 100

Length of Gradient 3

Fraction Volume   1 ml 以上を選択し、Finishボタンをクリックします。

9. Variables画面での入力項目

・Wizardで設定してきた数値は、このようなVariables画面で一覧になります。

・Wavelength  UV2、 UV3（第2、第3波長）や、その他変更したい値があれば、

Valueセルをクリックし、値を変更します。ON,OFFの変更はマウス右クリック、

選択肢からの選択はプルダウンメニューから選択、数値の変更はダブルクリック→

数値入力→Enterで行います。

＜Variables画面での主な変更・チェック項目＞

・Wavelength（第2、第3波長の設定）

・Wash Out Unbound Sample（非吸着画分の洗浄）の体積^※

・Clean after Elution at 100 %B（溶出後のカラム洗浄）の体積^※

・Reequilibration（カラムの再平衡化）の体積^※

・PeakFrac  Parameters（Slope方式でピークフラクションを設定した場合の Slope値）

※これらの項目は、Variables画面下方のShow  detailsボックスにチェックを入れると 表示されます。

（Frac-950の場合のみ）

・次にVariables画面と並んで表示される画面の中から、「Frac-950」を選択します。

Rack Wi z ard で設定し た ラック（= 18 &3 0 mm Tubes）と一致しているか確認

Fraction order Serpentine row（縦横計4種の中から選択）

10. メソッドの保存 File ↓ Save as 

Method Name ファイル名を入力します

Technique 手法を選択します

メソッドは、この画面で選択したディレクトリに保存されます。

注：メソッドを実行すると、メソッド名の後に 01 から始まる番号が付いたもの が、Resultファイル名になります。

以上を選択し、OKをクリックします。

11. 作成したメソッドの確認

UNICORN  Main  Menu画面のMethodsウィンドウに、保存されたメソッド名が表示さ れます。