17：0のピーク有り。ti鵬e 15，89のピークは20：4と確認できた。
A−4で溶媒（クロロホルム：メタノール：アンモニア：水＝90：10：
0．5；0．5）を使用
匝HPLC
17：0のピーク：有り。time 16．043のピークは20：4と確認できた。
※溶：媒（クロロホルム：メタノール：アンモニア：水コ90：10：
0．5：0．5）では、17：0・20：4のピーク共にうまく測れた。
※以下の溶媒で二次元展開を行うことに決定した。
《決定した展開溶媒》
一次元展開……クロロホルム：メタノール：アンモニア：水 ＝＝90：10：0． 5：0． 5
二次元展開……ヘキサン：エーテル：アセトン：酢酸
＝＝25：35：15：1
高速液体クロマトグラフィーで脂肪酸エタノールアミドを分析すると、一次 元展開ではチャート上でアナンダミドの近くに大きな妨害ピークが見られ、微 量のアナンダミドの正確な定量が行えなかったが、二次元展開することにより
この未知の妨害物質も分離できることがわかった。
20：4エタノールアミドのピーク
／
図4−5＝高速液体クロマトグラフィーのチャート
展開溶媒（一次元展開：クロロホルム：メタノール：アンモニア：水 ＝＝90：10：0． 5：0． 5、
二次元展開：ヘキサン：エーテル；アセトン：酢酸
嵩25：35：15：1）
また、一次元展開では、モノアシルグリセロールが脂肪酸エタノールアミド とほぼ同位置に展開され、同じサンプルから両者を定量することができなかっ たが、この方法で行うと、アナンダミドおよびモノアラキドノイルグリセロー ルを同じサンプルから分離定量できることがわかった。
・量・輌
@9
傷◎
¥
働を
2st ＜トー
図4−6＝スタンダードの二次元TLC
1st
↑
il O
晦
段レスー
柱ﾏCl二，肪⊂：フ Q
リン脂質
2st 一
図4−7：17＝0哨G，17＝OEtA添加脳
脂質画分の二次元TLC
1st
↑
薩）ヘプタデカノイルグリセロール（17：0−MG）○アナンダミド温品
○ アナンダミド（20：4EtA） 廷聾診アラキドノイルグリセロール品分
●エイコセノイルエタノールアミド（20：1EtA）（）未知妨害物質画分
○ヘプタデカノイルエタノールアミド（17：0EtA）
4．2．溶出溶媒の検討
高速液体クロマトグラフィーによるアナンダミドの分離条件をよくするた めに、溶出溶媒の検討を行った。
ア アセトニトリル：イソプロパノール：水隷80二3：17
イ アセトニトリル：イソプロパノール：水＝80：3：20 ウ アセトニトリル：イソプロパノール：水＝80：3：23
※ イが妨害物質のピークが一番低くなった。time 13、0のピークが邪魔する場合、溶出溶媒をアセトニトリル：
イソプロパノール：水雛80：3：20でHPLCにかけることに
した。
妨害ピーク
ア
イ
C2034
C17：0
妨害ピーク
C20：4
C17 0
ウ
妨害ピーク
C20：4
図4−8：高速液体クロマトグラフィーのチャート
4．3．ラット腎臓および脳中のアナンダミドおよびその類縁物 質の測定
表4−1は、ラット腎臓の乾燥重量100mg中のアナンダミドおよびその類縁 物質の量である。Aグループのラットにはラード10％食、 BグループにはD HAを含むリン脂質10％食、CグループにはDHAを含むトリグリセリド10％
食、Dグループにはリノール酸を含むトリグリセリド10％食を与えた。
表4一霊＝ラット腎臓中のアナンダミドおよび類縁物質の含有量（μg）
NAMε A−1 A−2 A−3 A−4 A−5 A−6
AVERAGE STDEV
C16：0 α260 0，291 0，337 0，566 0，549 ◎，292 α382 Oj 38
C1810 O，085 0，114 0，102 0コ76 ◎」74 α146 0」33 0，038
C18：霊 α153 Oj 58 0，272 0，146 0，130 0，117 0』63 O，056
C18：2 O，122 0，137 0，154 0，290 O，071 0，122 0，149 0，074
C20＝4 0，029 0，077 0』27 0，022 α015 0ρ24 0，049 0，044
C22：6 0，018 ◎，005 O，012 0，012 0，007
NAME
8−1 B−2 B−3 B−4 B−5 8−6AVERAGE STDEV
C16：0 0，250 α240 0229 0，446 0，212 0，231 0，268 0，088
α8：0 0，071 0，088 0，056 OjO6 0，077 O，080 0，019
C肇8：1 OjO8 0，090 0，112 α084 0，085 0，082 0，094 0，013
C18：2 0」22 α076 0，113 0，葉43 O，051 α107 0，102 0，033
C20＝4 0，022 0，025 0，037 0，008 0，013 0，021 0，021 0，010
C22：6 O，020 0，014 0，030 0，017 0，020 0，007
NAME
C−1 C−2 C−3 C−4 C−5 C−6AVERAGE STDEV
C16：0 0，206 0，156 α144 O，272 0，225 0，183 Oj 98 0，047
C18：0 Oj 17 ◎，062 α036 0，078 O，059 0．1 α075 0，029
C18：1 0，059 α075 0，079 O，048 0，105 α081 0，075 α020
C18：2 0，159 0，070 0，045 0，046 Oj 10 ◎，135 0，094 0，048
C20＝4 0，018 O，021 0，005 0，046 0，017 0，021 0，015
C2216 0，037 0，013 0，011 0，011 0，072 0，007 0，◎25 α◎25
NAMEi D−1 D−2 D−3 D−4 D−5 D−6
AVERAGE STDEV
C16：0 0，229 0，171 O，284 α313 α218 0，209 α237 0，052
C18：0 0，121 0，061 0，095 0，092 0，089 0，099 α093 0，019
C18：1 0」47 0，106 0，145 Oj 73 OjO6 0，127 0，134 0，026
C18：2 α274 O，110 α685？ 0，864 ◎，100 0．18 0，305 0，320
C20：4 0，014 0，047 0．066？ 0，064 O，052 0，017 0，039 0，022
C22：6 0，038 0，072 0，018 0，043 0，027
C22：6
C20：4
C18：2
C18＝1
C18：0
C16：0
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