C22：6
C22：5 n−3
C22：5 n一・6
C22：4
C20：5
C20：4
C20：1
C20：0
C1812
C18：1
C18：0
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田A：ラーード1096
表4弓7は、各グループごとに平均した値を表にした。
表4−17：ラット脳中のリン脂質量（μg）
脂肪酸
A B C D
C16：0 23，703 24，583 23，032 23，797 C18＝0 20，646 2α588 20，610 2α623 C18：1 25，300 24，915 26，147 24」34
C18：2 0，671 1，015 0，538 t561
C20：0 Oj 92 0，17肇 α200 0，176
C20：1 t896 1，674 1，927 t627
C20：4 10521 9，474 9，497 10，872
C2◎：5 Oj86 0，257 0，266 0，191
C22：4 2，932 2，486 2，648 3，090
C22：5 n−6 0，283 0，209 0，232 0，239
C22：5 n−3 0289 0，399 0，401 0473
G22＝6 13．3で4 14，172 14，438 13」39
表448は、T検定により各グループ問での有意差を調べた。
表4−18：TTEST（P値）
脂肪酸 A−B A一一C A−D B−C C−D
C16：0 0．30683 0．30615 0．92262 0．11336 O．46846
C18：0 0．83766 0．88969 0．95302 0．8883◎ 0．96832
C18」 0．65163 α37641 0．20979 0．27563 0．0976◎
C18：2 0．45534 O．00006 ＊＊＊ 0．31057 0．30685 024773
C20：0 0．32335 0．65678 0．38698 0．22011 0．25646
C20＝1 0．39673 0．88733 0．32480 0．39152 0．32608
C20＝4 0．00682 ＊＊ 0．00543 ＊＊ 0．36092 0．94218 0．00437 ＊＊
C20二5 0．00191 ＊＊ 0．000穏 ＊＊＊ 0．81533 0．54780 0．00255 ＊＊
C22；1 α75294 0．81248 α75186 α60093 0．6霊476
C22：4 0．00753 ＊＊ 0．04◎20 ＊ 0．23764 ◎．25315 0．00562 ＊＊
C2215 n−6 0，00587 ＊＊ O．0肇016 ＊＊ 0．03688 ＊＊ 0．26551 0．63872 C22：5 n−3 0．00◎01＊＊＊ O，00001＊＊＊ 0．00000＊＊＊ 0．00581 ＊＊ 0．00594 ＊＊
C22：6 0．06891 α10518 0．67499 0．02286 ＊ 0．05808
（ ＊， p＜0． 05 ＊＊， p〈0． 01 ＊＊＊ ，p＜0。001）
DH：A添加食は20：5、22：5a・3、を増加させ、18：2、．20：4、
22：4、22：5n・6を減少させた。
リノール酸添加食は22：5n・3を；増加させ、22：5n・6を減少させた。
5．考察
（1）分離条件の検討
一次元T：LCでは、脂肪酸エタノールアミドとモノアシルグリセロールはほ ぼ同位置に展開され、同じサンプルから同時に分離できなかった。その上、脂 肪酸エタノールアミドを分離定量する際、高速液体クロマトグラフィーの分析 結果（チャート）において、アナンダミドの近くに大きな妨害ピークがみられ・
微量のアナンダミドの正確な定量が行えなかった。
そこで、いくつかの展開溶媒を検討したところ、一次元展開溶媒としてクロ ロホルム：メタノール：水＝90：10：0．5：0．5、二次元展開溶媒とし
てヘキサン：エーテル：アセトン：酢酸＝25：35：15：1により、最も
よい分離結果が得られ、同じサンプルから脂肪酸エタノールアミドとモノアシ ルグリセロールが分離できることが明らかとなった。TLCにて展開し、プレムリンを噴霧して溶出位置を確認する際、量的に微 量なアナンダミドは見えない。そこで、同位置に展開される脂肪酸エタノール アミド（17：0、動物細胞中に存在しない脂肪酸）を添加することにより、
その画分を正確にかきとることができた。
妨害ピークができるだけ影響しないようにするため、高速液体クロマトグラ フィーでの溶出溶媒も検討した。その結果、妨害ピークが大きい時には、アセ
トニトリル：イソプロパノール：水コ80：3：20を用いた方が分離定量し やすかったが、90分もかかり能率が非常に悪かった。その後、：二次元TI，C
により妨害ピークがなくなってからは、アセトニトリル：イソプロパノール：
水＝80：3：17で行うことにし、60分以内で分析可能となった。
以上の条件で、ラット臓器（腎臓・脳）中の脂肪酸エタノールアミド（特に、
アナンダミド）とモノアシルグリセロール（特に、モノアラキドノイルグリセ ロール）を分離し、それぞれ高速液体クロマトグラフィーおよびガスクロマト グラフィーで測定した。
このように、二次元TLCで同時に分離できる方法および高速液体クロマト
グラフィーにおける流出溶媒を決定したことにより、分離定量が容易になり効 率もよくなった。
（2）アナンダミドの測定
ラット腎臓の乾燥重量100mgには、アナンダミドが約0，005μg
（0．05ρmo1／霧組織）、脳には、約0．010μg（0．07pmol／g組織）含まれて いた。なお、杉浦らの論文の報告によると、脳のアナンダミド量は、4．3pmoyg 組織である2）。他のいくつかのグループの分析結果の報告でも、0〜30pm◎1／g 組織と低いレベルでの存在となっている。
（3）モノアラキドノイルグリセロールの測定
ラット腎臓の乾燥重量100mgには、モノアラキドノイルグリセロールが約 1．595μg（1．27pmol／g組織）、脳には、約1．628μg（1．02p瓢01／g組織）
含まれていた。他の報告によるとラットの脳にはアナンダミドの約800倍存 在しているとあり、量が多いことは一致していたが、今回の実験結果では15 倍であった。
カンナビノイド受容体は脳で多量に発現しており、モノアラキドノイルグリ セロールがアナンダミドより多量に存在する物質であるということは、真の内 在性リガンドとしてよりふさわしいと考えられる。
（4）脂肪酸エタノールアミド量
DH：A添加食とリノール酸添加食では、脂肪酸エタノールアミドを変化さ せる力がどのように違うかを調べるため、腎臓と脳の脂肪酸エタノールアミド 量を分析した。
表5−1＝DHAおよびリノール酸投与によるラット腎臓・脳の脂肪酸エタノー ルアミド量の変化
飼料 Y加脂質
旨肪酸
ﾌ増減