20mM sodium 1−heptanesulfbnate水溶液のpHを2％リン酸水溶液で3．0，3．5 および4．0に調整し，ピークの半値幅に対する影響を調査した。
pH 3．5において，抽出試料におけるCPおよびEMピークの半値幅は標準品 におけるピークの半値幅とほぼ同等で，安定した分析を行なうことができると 判明した（Fig．24）。以後の実験において，カウンターイオン溶液のpHは3．5
とした。
（3）カウンターイオンの種類
催吐アルカロイドのHPLC分析に最適なカウンターイオンを決定するため，
20mMの濃度， pH 3．5で調製した種々のカウンターイオン溶液をエタノールと 混合し，HPLC分析を行なった。 CPの保持時間が10．7〜13．5分の範囲になるよ
う混合比および流速を調節した。Sodium 1 −heptanesul fo nate水溶液とエタノー
ルの混合液を用いた際に，検出された未知化合物数が6で最も多く，不定根抽 出試料中の化合物の分離が最も良好であった（Fig．25）。加えて，標準品および 抽出試料におけるCPおよびEMピークの半値幅がほぼ一致しており，安定し
た分析を行なうことができた（Fig．26）。
1。ooo〔 ． ＿一一 。如
A）Pentane
s cp
I50CO l
EM
−… ・一鳥・・．∴e．．・。，
｜。。。。pv 。hl C）Heptane 6
1 CP
6000− r
コ（⊃re 8もぷ
Fig．25
ポ 1 Bl A6．ahe 51而l
s・c・1 9P
L≦）会○も…一謝
100co蜻@ eh l
D）Octane 4
CP
Go oo
4⊇＝昼劉．㌔譜
トコン不定根抽出試料のHPLCクロマトグラム 各クロマトグラムの右上の数字は，検出された未知化合物数を表す。
赤丸は，検出された未知化合物のピークを示す。カラム：TSKgel ODS−120A（東ソー），カウンターイオン：A）pentane；sodium
1−pentanesulfonate， B）hexane；sodium 1−hexanesulfonate， C）heptane；
︵︒旦工壱言出邸＝
050く︼0 3︵∠︹∠11▲ く∨0 ●● ●● ●● ●●
●● ●●●●
●●●EM
●CP
STD Extract STD Extract STD Extract STD Extract pentane hexane heptane octane
Fig．26 CPおよびEMピークの半値幅に対するカウンターイオンの影響
カラム：TSKge10DS・120A（東ソー），カウンターイオン：A）pentane；sodium I−pentanesulfbnate， B）hexane；sodium 1 −hexanesul fonate， C）
heptane；sodium 1−heptanesulfonate， D）octane；sodium i−octanesulfonate，
移動層：A）pentane−EtOH（75：25）， B）hexane−EtOH（70：30）， C）heptane，
D）octane−EtOH（65：35）流速：A）pentane；0．8 m1／min，他B−D；1．O ml／min，カラム温度：60°C，検出波長：285 nm。
移動層に20mM sodium 1−heptanesulfonate（2％リン酸でpH 3．5に調整）一エ
タノール（65：35）を用い，カラム温度60°Cで分析を行なった際に，催吐アル カロイドを最もよく分離できた。また，抽出試料と標準品とで生じるCPおよ びEMの保持時間の差も， CPで0．9秒， EMで3．3秒と，非常に小さい値になった（Table 8）。
Table 8 根抽出試料と標準品におけるCPおよびEMの保持時間の違い
Retention time（min）
Standard
Extract Difference（sec）New condition CP 11、41±0．009
EM l3．83±0．010
11．42±0．001 13．89±0．001
0．9±0．009 3．3±0．010
移動層：20mM sodium 1 −heptanesul fonate（pH 3．5）一エタノール（65：
35），流速：1．2ml／min，カラム温度：60°C検出波長：285 nm。＊Difference
（sec）は，標準品および抽出試料におけるCPおよびEMの保持時間の
差を示す。第三項 分析カラムの検討
60°Cという比較的高いカラム温度において，CP， EMおよび未知化合物の分 離に最適なカラムを検討するため，60°Cでの使用がメーカーにより保証され ているCAPCELL PAK CI8 MGII， ACRおよびUGI20を試験した。 MGIIを用い た場合にのみ，CPピークの直後に未知化合物の小さなピークを検出することが できた（Fig．27）。標準品との保持時間の差は， uGl20を使用した際にcPは 0．4秒と非常に小さい値であったが，EMは65．3秒も差があった。 MGIIでは，
CP， EM共におよそ4秒と小さい値であった（Table 9）。以上の結果より，MGII
を用いることとした。
mV
，2°°°P−丁二11 石可一 −i JEM 一一 r 一一一一一一戸1
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Fig．27トコン不定根抽出試料のHPLCクロマトグラム
カラム：CAPCELL PAK C18 MGII（資生堂），移動層120 mM sodium
1−heptanesulfonate（pH 3．5）一エタノール（65：35），流速：1．2 ml／min，
カラム温度：60°C，検出波長：285nm。
Table 9 トコン培養不定根抽出試料と標準品におけるCPおよびEMの保持時間の違い
Retention time（min）
Standard