絶滅危倶種ホトケドジョウの人工繁殖

(1)

業近畿大学農学部紀要第肘 119~ 凶 (2009)

¹¹⁹

絶滅危倶種ホトケドジョウの人工繁殖

宮本良太 * 勝呂尚之 * * ・細谷和海 *

*近畿大学大学院農学研究科環境管理学専攻柿神奈川県水産技術センター内水面試験場

A r t i f i c i a l p r o p a g a t i o n o f a n e n d a n g e r e d f r e s h w a t e r f i s h ， t h e Hotoke l o a c h Lefua e c h i g o n i a J o r d a n e t R i c h a r d s o n

Ryota MIYAMOTO*

，

Naoyuki SUGURO

^料

andKazumi HOSOYA *

事Programin Environmental Management， Graduate School of Agriculture， Kinki Universi砂

Fisheries Ex.βerimental Station of Kanagawa Prefecture

Synopsis

The spawning of an endangered freshwater fish. the Hotoke loach (Lefua echigonia). was induced by human chorionic gonadotropin (HCG) to establish a method for artificial propagation. Artificial spawning was performed from November to December 2007. which was not the natural regular spawning s巴asonof the loach. The gonads of broodstock fishes were developed in 30 days by raising the water temperature to 20 t^皿dlengthening the photoperiod (14 L‑10 D). Matured fishes were selected at a rate of 5 pairs per section. Sections were prepared in different sets as those injected with HCG (30 IU/g BW)田dnon‑injected controls to represent natural spawning. When fish injected with 30 IU/g BW of HCG did not spawn during the first 24 hours after injection. they were re‑injected at the same dose. The hatching rate of the fish injected with 30 IU/g BW of HCG was lower出anthat of the natural spawning fish. However. many eggs and larvae were obtained in the section of fish injected with 30 IU/g BW of HCG compable to the natural spawning五sh. These findings indicate that HCG injection of Lefua echigonia is useful to induce spawning and to extend their spawning season.

Key words: RDB: Ex situ preservation: HCG: Seedling production

はじめに

ホトケドジョウ

L φ

taechigoniaは，コイ目ドジョウ科フクドジョウ亜科に属する日本固有の淡水魚であり，青森県および中園地方西部を除く本州，四国東部に分布する九本種は，里山に見られる谷戸の代表種とされ2) 湧水を水源にもつ細流や水田に生息する3)。産卵期は3月下旬から6月上旬で，体形は小型で細長く，円形状を基本とする1.4)。同じくドジョウ科のドジョウMisgurnusanguillicaudatusやシマドジョウCobitisbiwaeとは，口ひげの数が異なり，ドジョウが5対10本，シマドジョウが3対6本であるのに対して，ホトケドジョウは4対8本であ

る。体色は地域や個体により変異があるが，一般的に茶褐色または赤褐色で体側に黒点が存在する

ものが多い5)。本種は分布が広範囲で、あるため，

しみずどじょう，やまどじょうなど地方名が多く

4) 昔からなれ親しまれた魚である。しかし，都市化にともない里山周辺の生息地が減少し環境省版レッドリストでは絶滅危慎IB類に指定されている 6)。特に都市近郊の生息地は減少しており，神奈川県では，県のレッドデータブ、ツクにおいて絶滅危慎IB類に指定されている 7)。

そのため，神奈川県水産技術センター内水面試験場ではホトケドジョウの系統保存を進めるために，種苗生産に不可欠な採卵方法や仔稚魚期における最適飼育条件の解明など，技術開発を行なっ

(2)

てきた2.8)。しかし近年，病気の発生による大量へい死や親魚が産卵しないなどの新たな問題が発生している。現在のホトケドジョウの採卵方法はすべて自然産卵によるものであり，産卵誘発ホルモン(ヒト胎盤性生殖腺刺激ホルモン.Human

Chorionic Gonadotropin. 以下.HCG) を投与した例はないoHCG投与による採卵は，同じドジョウ科のドジョウ9.10)やアユモドキ L

ゅ ω

bo白G

curta^1U2)の他，ギパチPseudobagrustokiensis¹³).

ヒナモロコAρhyocyρrischinensis¹⁴⁾^. カワノtタモロコHemigrammocyρrisrasborella¹⁵.l⁶)などの希少性淡水魚でも行なわれており，飼育管理の効率化を図った系統保存を可能としている。ホトケドジョウへのHCGの投与が有効であれば，産卵期にとらわれず，光周期や水温調節による成熟促進と併用することで周年採卵が可能となり，大量へい死などの事故への対処とともに，産卵日時を集中させることで飼育管理の効率化を図れる。そこで本研究では，ホトケドジョウの人工繁殖法の確立の lっとしてHCGを投与しその有効性について検討した。

材料および方法

実験期間

実験は.2007年11月13日から 12月29日までの47日間，神奈川県水産技術センター内水面試験場で実施した。

供試魚

今回の実験に用いた供試魚は，神奈川県鶴見川水系万福寺産の 2007 年 4~5 月に産卵した 2007 年産卵魚(以下，万福寺経産卵群)29尾.2007 年未産卵魚(以下，万福寺未産卵群)60尾および金目川水系三ノ宮産の未産卵魚(以下，三ノ宮未産卵群)60尾の3系統を用いた (Table

1 )

0

これらの供試魚のうち万福寺経産卵群は2007 年に長日処理(明期 14時間+暗期10時間，以下，長日処理はすべて同じ条件)を施し，自然産卵させた系統である。供試魚は，実験開始5ヶ月前から水温17.0~ 28.3 'c (22.6 :!: 2.8 'C.平均値±標準偏差)および自然の日長下で循環ろ過式により飼育した。

親魚養成

親魚養成に先立ち，供試魚の成熟状態を確認するための予備飼育を行なった。予備飼育は，飼育開始から5日間，産卵基質に人工水草(キンラン)を設置し，水温16.4~ 18.9 'c (17.3:!: 0.7 'C)および自然の日長下で飼育した。しかし産卵は確認されなかったため.30日間生殖腺の発達促進飼育を行なった。生殖腺の発達促進飼育は，キンランを取り上げた水槽に100Wヒーターを設置して20'c以下にならないように加温し白色蛍光灯 (20

W)

による長日処理を施した。水槽は56l水槽 (600x 300 x 360 mm)各 2面で，上面ろ過装置(スライドフィルター600. ニッソー製)とスポンジをろ材とした鑑賞魚用ろ過装置(テトラニューブリラントフィルター，テトラジャパン製)を用いた循環ろ過式で飼育した。

給餌は.9時と 13時に熱帯魚用配合飼料(テトラミン，テトラジャパン製)および粒径300

~420μm のアユ用配合飼料(ラーパルフィード 5μD.科学飼料研究所製)を手撒きで.16時に冷凍アカムシ(クリーンアカムシ，キョーリン製)を水で解凍したものをピペットで，それぞれ飽食量を与えた。

水質は，水温を各系統l面の水槽で1日2回， 9時と 13時に測定して代表値とし.pHと溶存酸素量 (DO) を7日に1度.13時に測定した。水換えは7日にl度，水槽容量の2/3を交換し残

Table 1. Morphological characteristics of experimental fishes of the Hotoke loach Manpukuji Manpukuji 5annomiya 5train

spawning自shes not spawning fishes not spawning fishes Number of官shes 29 60

Age 1+ 1+

5tandard length (mm) 48.3::!:: 4.2'2 40.6::!:: 4.6 Body weight (g) 1.8 ::!:: 0.4 1.0::!:: 0.3 Condition factor'l 15.8::!:: 1.4 15.1士1.5

'lW/L³X 10³: W=Body weight (g) • L=5tandard length (cm) '2Mean土50

60 1+

45.2土3.7 1.3::!:: 0.3 14.2::!:: 1.8

(3)

絶滅危慎種ホトケドジョウの人工繁殖 121

餌などは毎日手網で取り除いた。熟の目安として肥満度の高い個体を雌雄10尾ずつ選定した。実験区はもっとも効率的に採卵親魚の選定と HCG投与が可能である雌雄

l

尾ずつを

l

組として8) HCG

ホトケドジョウは外観上の雌雄差がないため，を投与する投与区5組と対照として無投与区5 雌雄の判別は生殖腺の目視によって行ない5) 成組を設定した (Table2)。

Tabel 2. Summary of data on spawning experiments with HCG‑injection and non‑injection to the Hotoke loach

HCG‑injection (30 IU/g BW) HCG‑non‑injection (0 IU/g BW) Manpukuji spawning fishes

Tank No. 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Male

Standard length (mm) 50.9 52.6 50.1 49.3 48.8 53.1 50.4 50.4 50.4 49.3 Body weight (g) 2.1 2.5 2.1 1.9 2.0 2.7 1.8 1.6 1.9 2.0 Condition factor (%)判 16.1 17.0 16.5 15.7 17.0 17.7 13.9 12.7 15.1 16.4 Female

Standard length (mm) 55.4 54.5 54.0 54.2 48.9 50.3 48.1 54.2 49.7 49.5 Body weight (g) 3.4 2.9 3.3 2.6 2.2 1.9 1.6 2.4 1.9 1.8 Condition factor (%) 20.1 17.6 20.8 16.2 19.2 14.8 14.6 15.3 15.4 14.9

Number of injection 2 2 1

。。。。 _o

Total eggs 385 40 632 98 189

。。。 o 。

Total hatched larvae 221 3 339 7 68

o o 。 _{o o}

Total larvae 183 231 5 33

o o 。 _{o o}

Manpukuji not spawning自shes

Tank No. 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Male

Female

Number of injection 2 2 2 2 2

o o 。。。

Total eggs

。

¹⁴⁷^'²

_o

5

。 _o

94 38

。 _o

Total hatched larvae

。 _{o o}

5

o 。

67 38

。。

Total larvae

。 _{o o}

3

。。

57 27

。 _o

Sannomiya not spawning fishes

Tank No. 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Male

Standard length (mm) 46.3 46.7 44.5 45.0 43.3 45.7 46.6 53.9 45.1 48.3 Body weight (g) 1.6 1.5 1.4 1.2 1.3 1.5 1.5 2.0 1.4 1.6 Condition factor (%) 15.9 14.5 15.3 13.2 15.3 15.7 15.0 13.0 15.4 14.0 Female

Standard length (mm) 46.1 51.1 51.3 51.1 56.0 54.9 48.8 53.7 51.9 49.8 Body weight (g) 1圃6 2.0 2.1 2.0 2.5 2.3 2.0 3.0 2.1 1.7 Condition factor (%) 16.1 15.3 15.3 15.1 14.6 14.0 17.3 19.4 14.9 13.5

Number of injection 2 2 2

o o o 。 _o

Total eggs 2 159 143

。。 o o 。。。

Total hatched larvae

。

106 59

。。。 o o o o

Total larvae

。

14 47

。。。。 _{o o o}

'lW/L³X 10³: W=Body weight (g) ，L=Standard length (cm) 可ncludecompressed 135 eggs at HCG injection

(4)

を行なった。その後は再投与を行なわず

¥6

日間産卵の有無を確認した。産卵が確認された水槽は，魚を取り上げた後に卵をピペットで回収して卵数を計数した。 9時に産卵を確認した場合は，

キンランを交換して再ぴ親魚を水槽へ戻し.16 時に産卵の有無を確認した後，実験を終了した。

卵は21プラスチック水槽 (207 x 132 x 136 mm)へ100粒を上限として小分けに収容し 20

℃に設定した恒温器 (MIR‑252.三洋電機製)を用いて管理した。卵と仔魚の状態は毎日観察し，

ふ化数と浮上数を計数した。卵を収容した水槽の水質測定は，水温.pHおよび

DO

を，恒温器内の左端に置いた水槽を代表として9時に測定した。水換えは卵への影響を考慮し，水面に油膜が認められた場合に適宜行ない，同じ恒温器内で一晩汲み置きした水道水を用いて水槽容量の1/3を交換した。

結果投与方法は，近縁種のドジョウに準じ.0.6

%

NaCl 溶液に溶解したHCG(ゴナトロピン5000. 帝国臓器製薬製)を，選定した親魚に対して体重

19あたり 30IU腹腔内に注射(テルモシリンジツベルクリン用1ml.注射針26G x 1/2.テルモ製)した9.10)。注射の際には，魚体への負担を最小限にするため，オイゲノール (FA100. 田辺製薬製)を水で1/5000の濃度に希釈して麻酔した。麻酔により横転した親魚は体重を測定し湿らせたタオルの上にのせて標準体長を測定した後，上顎から総排j世口までの距離を 100%として，総排

t

世口から上顎側約20%の位置から体軸に沿って針を刺し，腹腔内へHCGを投与した。

投与は21時に行なった。

産卵用水槽には 121ガラス水槽 (315x 185 x 244 mm) を使用し，鑑賞魚用ろ過装置を用いた循環ろ過式で飼育した。水温は100Wヒーターを設置して20

t

に保ち，白色蛍光灯(15 W)を使用して長日処理の条件下で飼育した。産卵基質には，キンラン(乾燥重量20g)を1本

ずつ設置した。親魚養成

実験開始時の供試魚は，生殖腺が未発達で雌雄判別が困難で、あったが 30日間の親魚養成によ

り雌雄判別が可能となった。

実験期間中の水質は，万福寺経産卵群で水温 19.2 ~ 20.9

t

(19.9 :t 0.5

t ) .

pH 7.6 ~ 8.7 (8

. 1

産卵の確認

産卵の確認は.9時と 16時に卵の有無を目視で行なった。 I回目のHCG投与から 24時間後に産卵が確認されなかった投与区の個体には再投与

14

∞

12

∞

1 0 0 0

8

∞

6ω

4

∞

2

∞

s s

弓 s

按

a

﹄ ︒

Z

﹄

g s z

30 IU/g 8 W 0 IU/g 8 W Sannomiya

not甲awning自由es 30 IU/g 8 W 0 IU/g 8 W

Manpukuji not勾加awningfishes 30即Ig8W 0 IU/g 8 W

Mar司pukuji spawning fishes

o

HCGunit

Fig. 1. Effect of HCG injection of the Hotoke loach.

口:

Total eggs. ~: Total hatched larvae.図:Total larvae. Asterisk: lncluding 135 eggs when the belly of an adult female was compressed at HCG injection.

(5)

絶滅危慎種ホトケドジョウの人工繁殖 123

:t 0.5)， DO 7.8 ~ 7.9 glml (7.9 :t 0.04 glml) ，

万福寺未産卵群で水温19.8~ 20.8 t (20.4 :t 0.2)， pH 7.7 _~8.4 (7.9 土 0.3)，DO 7.7 _~7.9 glml

(7.8 :t 0.05 glml) ，三ノ宮未産卵群で水温 20.0~

20.9 t (20.7:t 0.3 t) ， pH 7.4 _~8.0 (7.7 :t 0.2)， DO 7.5 ~ 7

. 8

glml (7.7 :t 0.15 glml) であった。

HCG投与による産卵状況

各実験区の産卵結果を Table2およびFig.1に示した。 HCGを投与した親魚の産卵行動は，自然産卵と同様に雄が雌を追尾し，産卵基質へ数粒の卵を産卵・放精する行動を繰り返した。投与区は，万福寺経産卵群では5組すべてで産卵が確認され，平均268.8士 241.5粒，合計1344粒の卵から平均127.6:t 147.5尾，合計638尾がふ化し(ふ化率47.5%)，平均90.6:t 108.3尾，合計453尾の浮上仔魚を得た(浮上率71.0%)。万福寺未産卵群では2組で産卵が確認され，平均 76.0粒，合計152粒の卵から平均2.5尾，合計5 尾がふ化し(ふ化率29.4%)，平均1.5尾，合計 3尾の浮上仔魚を得た(浮上率60.0%)。三ノ宮未産卵群では3組で産卵が確認され，平均101.3

士 86.4粒，合計304粒の卵から平均55.0:t 53.1 尾，合計165尾がふ化し(ふ化率54.3%)，平均 20.3 :t 24.1尾，合計61尾の浮上仔魚を得た(浮上率37.0%)。万福寺未産卵群のNo.2水槽においては，再投与の際腹部を圧迫し， 135粒の卵を搾出してしまったが，これも産卵数に含めた。ただし，ふ化率と浮上率の算出では除外した。無投与区では，万福寺未産卵群の2組のみで産卵が確認され，平均66.0粒，合計132粒の卵から平均 52.5尾，合計105尾がふ化し(ふ化率79.5%)，平均42.0尾，合計84尾の浮上仔魚を得た(浮上率80.0%)。

卵を収容した水槽の水質は，水温18.7~ 19.2 t (19.0 :t 0.1 t)， pH 7.4 ~ 8.3 (7.8 :t 0.2)， DO 6.6 ~ 7.9 glml (7.5 :t 0.28 glml)であった。

投与区ではすべての系統が産卵し，無投与区では万福寺未産卵群のみ産卵した。 1回目の投与から12時間後の9時には産卵は確認されなかったが， 19時間後の16時に投与区において万福寺経産卵群の3組 (No.1

，

3， 5) と三ノ宮未産卵群の2組 (No.1

，

3)で産卵を確認した (Fig.2) 0

2回目の投与から 24時間以内に産卵したのは，

万福寺未産卵群の無投与区の l組 (No.7)のみ

で，万福寺経産卵群の投与区の2組 (No.2， 4)，万福寺未産卵群の投与区の2組 (No.2， 4)と無投与区の l組 (No.8)および三ノ宮未産卵群の投与区の l組 (No.2)はそれ以降に産卵した。

無投与区で唯一産卵した万福寺未産卵群で，投与区と無投与区間のふ化率と浮上率を比較する

と，ふ化率で投与区が劣り (Fisher'sexact test， P < 0.05)，浮上率では有意な差は認められなかった (Fisher'sexact test， P

>

0.05)。

考察

親魚選定方法の検討

今回供試魚とした万福寺産の両系統では，採卵に用いた個体と採卵に用いない個体とで産卵期の飼育方法が異なっていた。採卵した経産卵群に

HCGn側・inj倒 ion (0 IU/g 8W) r一九ー「

O

12

19

24

36

①

43

48

HCG injection (30 IU/g BW) 1st injccri叩

.

₂

.

_n

.

_d_i

ム

_n_i

ム

_e_c_t_i_o_n

A

①

132

十 8 .

Fig. 2. Experiment fiowchart of HCG injection of the Hotoke loach， and result of spawning time， after HCG injection.

: ・

^Mâⁿ^pû^kû^jⁱ^s^pâ^wⁿⁱⁿ^g^fⁱ^s^hê^s^，

^0 :

Manpukuji not spawning fishes，ム:Sannomiya not spawning fishes. Numbers in marks show the tank numbers^目

(6)

は，通常の給餌体制である 1日2回のテトラミン給餌に加えて冷凍アカムシを与え，肥満度を高くして生殖腺をよく発達させた。その影響から，採卵時期を過ぎた 11月でも両系統の肥満度は同程度であったが(一元置分散分析.P > 0.05).経産卵群が未産卵群と比較して雌雄判別も比較的容易で，生殖腺が発達していた。そのため，得られた卵数は経産卵群が未産卵群と比較して多かった

と考えられるO

HCG投与区と無投与区で産卵した万福寺未産卵群の雌において，産卵の有無で肥満度を比較すると，産卵した雌は16.5:t 2

. 1 ( n

= 4).産卵しなかった雌は 17.3:t

1 .

4 (n = 6)で，両者に有意な差は認められなかった(一元配置分散分析，

P > 0.05)。本実験では親魚の成熟状況を，目視による生殖腺の発達状況と肥満度から判定したが，肥満度が同程度でも産卵する個体と産卵しない個体が確認された。このことから，これらの判別方法では親魚の選定が不十分であることが示唆された。そのため，今後はより確実な親魚の成熟度判定の方法を改善，開発する必要がある。

HCG投与の有効性

ホトケドジョウの自然下の産卵期は.3月下旬から6月上旬であるとされている1)。今回.30

日間の親魚養成と HCGの投与によって，春産卵魚を 12月に産卵させることが可能で、あった。万福寺経産卵群と三ノ宮未産卵群では.HCGの投与により産卵誘発効果が高く示された。特に万福寺経産卵群においては，投与区のすべての組で産卵を誘発し，無投与区ではまったく産卵しなかった。万福寺未産卵群においては，投与区と無投与区の間で産卵した組数が同じであったことから，

HCG投与の産卵誘発効果を確認できなかった。

以上のことから，同系統である万福寺の経産卵群と未産卵群を比較した場合，産卵期を過ぎた親魚へのHCG投与は経産卵群では特に有効であったが，未産卵群では効果の有無が判断できなかった。

HCGの投与回数について検討すると.1回目ではHCGの産卵誘発効果が高く，特定の時間に産卵させることができたが.2回目以降は産卵を誘発しても産卵するまで、の時間は一定で、はなかった。その理由として，雌の成熟度合いに個体差があったと考えられる。しかし HCGには産卵を

誘発させるだけではなく，親魚の成熟を促進させる作用もあることから再投与の間隔を今回の

2 4

時間よりも空けることでより確実に産卵を誘発できることが予想される。

近年，飼育下において春に採卵したホトケドジョウの親魚が，自然光・無加温の飼育下で秋に再び産卵することが確認されている 17.18)。産卵の誘発要因は不明だが，本実験では産卵期である春に採卵した万福寺経卵産群において. 11 _~12月に再び成熟させることができたが.HCGを投与しなければ産卵しなかった。このことは，産卵期外に成熟しても，何らかの排卵要因がなければ産卵に至らないことを示唆している。淡水魚において，成熟と産卵に影響を及ぼすと思われる主な環境要因は，光と水温とされている 19)。そのためホトケドジョウの採卵でも，長日処理と加温によって親魚を養成しているお)。しかし，秋に産卵した事例では，水温が一度低下した後，再び上昇する際に産卵が行なわれることから，長日処理については検討が必要であることを報告している17.18)。本実験では，水温と日長はすべて同条件であることから，この点については言及できないが，今後ホトケドジョウの詳細な産卵条件が明らかとなれば.HCG投与による産卵誘発がより効果的な手法になると考えられる。

ホトケドジョウの1尾当たりの産卵数は約 1500粒と推定されている8)。この事例では，産卵期中に86日間採卵しているが，これを l日当たりの産卵数に換算すると，約17粒である。同様に今回のHCG投与により得られた平均産卵数は180粒になり，自然産卵よりも多い。しかし無投与区で唯一産卵した万福寺未産卵群を見ると無投与区と比較して投与区のふ化率が低かった。 HCGを投与しない自然産卵による採卵では，

99 %以上の高いふ化率が報告されている8)。このような自然産卵と HCG投与による産卵数とふ化率の違いは.HCGの排卵促進にともない，過熟卵や未熟卵を含んだ産卵に適していない卵も排卵されたことが原因でふ化率が低下したものと考えられる。

万福寺経産卵群は，春に採卵したにも関わらず.HCGの投与により再度採卵し，多くの浮上仔魚を得ることができた。このことから，系統保存の現場において疫病や水質事故などによって大量へい死が起きた場合に，産卵期以外でも約1ヶ

(7)

絶滅危倶種ホトケドジョウの人工繁殖 125

月という短期間で親魚を成熟させ，採卵が可能で、

あることが明らかとなった。絶滅危倶種の系統保存においては，想定外の大量へい死など緊急時の対応策が不可欠であり，本実験の結果は系統保存の応用技術として活用できる。

ホルモンを使用した催熟技術は，水産有用魚種の増養殖において古くから行なわれており，魚類の採卵方法として広く利用されている加)。しかし希少性淡水魚の採卵方法としてホルモンを用いた人工繁殖の事例は少ない。その理由としてはホルモン投与時の内臓損傷，投与後の生理的変調など，親魚をへい死させる危険性が高いことが挙げられ，希少魚、の採卵方法には適さないと考えられている21)。しかし日本でもっとも絶滅が危倶されているヒナモロコ 22)では，的確なホルモン投与を行なえば，へい死を招くことなく高い確率で産卵を誘発できる 14)。本実験においても，

HCGを投与した親魚に異常は認められず，へい死魚もなかった。このことから，的確なHCG投与による採卵は，ホトケドジョウの新たな種苗生産技術として有効な手法と考えられる。

本研究によって，ホトケドジョウの採卵が自然下の産卵期にとらわれず，人工的に周年採卵が可能であることが明らかとなった。しかし今回は投与量，投与回数および効果の現れる時間に関しての調査は不十分であるため，今後も継続した調査を行なう必要がある。

要約

絶滅危倶種のホトケドジョウにおける系統保存技術開発のため，産卵誘発ホルモン (HCG)を用いた人工繁殖実験を行なった。実験は，春の産卵期を経過した11月から 12月にかけて行なった。親魚養成として， 30日間の長日処理と加温による水温上昇で生殖腺を発達促進した後，親魚を選定した。実験区は， HCGを腹腔内へ注射して30IU/g BW投与する区と無投与区を設定した。 1回目の投与から 24時間以内に産卵しなかった親魚には， HCGの再投与を行なった。自然の産卵期に採卵しなかった親魚では，投与区と無投与区で産卵した組数が同じであったため有効性は不明であった。一方，自然の産卵期に採卵した親魚では投与区ですべて産卵し無投与区では産卵しなかったため， HCGの産卵誘発効果が高く示

された。投与区ではふ化率が無投与区と比較して劣るが，得られる卵数と仔魚数が多く，人工繁殖の技;術として活用できることが明らかとなった。

また，短期間の親魚養成と HCG投与を併用することで，自然下の産卵期にとらわれず人工的に周年採卵が可能であることが明らかとなった。

謝辞

本研究を行なうにあたり，神奈川県水産技術センター内水面試験場の水津敏博場長，相津康主任研究員，蓑宮敦技師，中島睦子氏，安斉俊氏，西巻多香子氏ならびにその他職員の方々，日本大学の湯浅航平氏，帝京科学大学の田中祐介氏，東京海洋大学の古川大恭氏，田中友樹氏には飼育およびデータ収集に協力，助言をいただいた。また，三重大学の高久宏佑氏には有益な'情報をいただいた。ここに記して感謝の意を表する。

なお，本研究は近畿大学農学部「里山修復プロジェクト」の教育プログラムの一環として実施され，実験の一部は環境省試料タイムカプセル化事業の助成金によって行なわれた。

文献

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絶滅危倶種ホトケドジョウの人工繁殖

業近畿大学農学部紀要第肘 119~ 凶 (2009)