疲 労 に 関 す る 研 究
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(2) 382. 吉. 本. の 変 化 を 考 え る 事 が 出 来 る と 述 べ て お り,田. 辺13). 弘. 満. を 加 え,還 流 冷 却器 を附 して 煮 沸 し各 時間毎 に取 り. は 上 述 の 薬 剤 を 家 兎 に投 与 す る 事 に よ つ てDonag. 出 した原 液 を デ シ ケ ー タに1昼 夜 放 置後pH5.6に. gio反. 中 和後Donaggio反. 応 の 増 強 す る 事 実 を 明 確 に 認 め て い る.. 著 者 は 家 兎 に 対 し塩 化 ア ンモ ンを 投 与 す る 事 に よ りAcidosisを protein量. 生 ぜ し め た 際 にAnderson氏Muco. 第3項 第1目. の増 加す る事 実 を 認 め た ので 併 せ て報 告. す る.. 応 を 行 つ た.. 薬剤投与法 Adrenalin注. 射法. 1,000倍Adrenalin注. 射 液1.0coを. 家兎の背部皮. 下 に注 射 した. 第2章. 実 験 材料 並 び に 実 験方 法. 第1節. 実 験 材料. 第1項. 第2項. 脱. 再 結 晶 し た も の を 実 験 に 供 し た.. 蛋 白 分 解酵 素. Pepsia:石. 使 用 し た.. チ ダ 製 結 晶Trypsinを. Papain:. Merck製. 溶解後経. 使 用 し た.. 粉 末Papainを. 採 尿 法. 導尿 に よ り一定 時 間 毎 に採 尿 した. 第5項 Andersonの. 津 製 濃 淳Pepsinを. Trypsin:モ. 化 ア ンモ ンを 蒸 溜 水10.0ccに. 第4項. 方 法 に 従 つ て 卵 白Albuminを. 水 芒 硝 を 用 い て3回. 塩 化 ア ンモ ン内服 法. 1.0g塩. 口投 与 した.. 結 晶 卵 白Albumin. Kekwick14)の. 第2目. Anderson氏Mucoprotein定. 置法8)9). 方 法 に従 つ て 家兎 尿 を 安息香酸 で吸. 着 せ しめ て精 製 後Diphenylamin試. 薬 で 発 色せ し. め分 光 光電 光 度 計(島 津 製QB‑50型)で. 比色定量. 使 用 し た.. を行 つ た. 第3項. Donaggio反. メ チ レ ン 青:. 応試薬. Merck製. モ リ ブ デ ン 酸 ア ンモ ン:石 第4項. 第6項. 品 を 使 用 し た. 津 製 品 を 使 用 し た.. 実験 動 物. 体 重2kg前. Donaggio反. 応. 佐 藤 氏標 準 法 に よ り実 施 した.即 ち被 検尿の1.4 倍 稀 釈 系列 を作 り メチ レン青並 び に4.0%モ ン酸 ア ンモ ンを加 え1時 間37℃. 後の 家 兎 に オ カ ラ及 び雑 草 の 一定 量. リブデ. の 重湯煎 中に保存. 後 遠心 沈 澱 して 判定 に供 す る.. を 与 え て 飼 育 し た も の を 使 用 し た. 第5項. 第3章. 家兎投与試薬. Adrenalin:合. 成Adrenalinア. ン プ ル 入 り注 射. 薬 を 使 用 し た.塩. 化 ア ン モ ン,局. 使 用 し た. 第2第. Pepsin消. 1%結. 消化 した場合そ 応値 の変化は第. 1表 の 如 く で あ る.即 ち 第1例 に於 て対照 は1.417. 化 法15). 晶 卵 白Albumin. 0.62ccを. 反応. の 消化 時 間経 過 に よ るDonaggio反. 蛋 白 分解 酵 素 消 化 法. 第1目. 蛋 白分 解 酵 素 消化 時 のDonaggio. 結 晶 卵 白AlbuminをPepsinで. 実験方法. 第1項. 第1節. 方 塩 化 ア ン モ ンを. 実 験 結 果. 6.2ccにPepsin. 加 え 塩 酸 でPH2.0に. 1%液. 調 整 後37℃. 第1表. の孵. Pepsin消. 化時 に 於 け るDonaggio. 反 応値. 卵 器 中 で 一 定 の 時 間 放 置 後NaOHでPHを5.6に 補 正 後 の 液 を 原 液 と してDonaggio反 第2目. Trypsin消. 1%結. 晶 卵 白Albumin. 7.0). 2.0ccに. 応 を 行 つ た.. 化 法16) Veronal. 結 晶Trypsin粉. Buffer液(PH. 末5mgを. 器 中 で 一 定 の 時 間 放 置 しPH5.6に. 加 え,孵 卵. 捕 正 後Donaggio. 反 応 を 行 つ た. 第3目 1.0%結 液5.0ccを. Papain消. 化 法17). 晶 卵 白Albumin 加 えCystein. 5.0ccに1.0% 10mgを. Papain溶. 添 加 し た 後pH5.0. に 補 正 孵 卵 器 中 で 一 定 の 時 間 放 置 後Donaggio反. 応. を 行 つ た. 第2項 1.0%結. 塩 酸 加 水 分 解 法18) 晶 卵 白Albumin. 3.1ccに6N‑HC10.62cc. 註: 〓 強 陽 性(1点. 以 上), + 弱 陽 性, ±凝陽性.
(3) 疲 の 値 で あ る がPepsln消 1.416に. 化30分. 減 少 しPepoin消. て は1.415に Pepsin消 し て1/4に. 及 び1時. 化2時. に 関. す. る 研 究. 間 に於 て は. 間 及 び4時. 減.少 し 対 照 値 の1/2の. 化24時. 労. 第3表. 383 Papain化. 間に於. 時 に 於 け るDonaggio. 反応値. 値 を 示 し た.. 間 後 の 値 は1.413で. あつ て 対 照 に比. 減 少 し た.. 第2例. に 於 て も 同 様 の 経 過 を 示 しPepsin消. 24時 間 後 に は 対 照 値 の1/4に,更. 1/16に 減 少 して い る こ と が 認 め ら れ た 結 晶 卵 白AlubuminをTrypsinで. Trypsin消. . 消 化 した場 合. そ の 消 北 時 間 経 過 に よ るDonaggio反 第2表. 化. に48時 間 後 に は 約. 応 値 の 変化 は. 化 時 に 於 け るDonaggio. 反 応値. 註: 〓 強 陽性(1点 第2節. 以 上),. +弱 陽 性. 塩 酸 水解 時 のDonaggio反. 結 晶 卵 白Albuminの6N‑HCI水 Donaggio反 第4表. 第2表. 〓 強 陽 性(1点. 以 上).+弱. に 示 し た 如 くで あ る,即. で あ る がTrypsin消 が 無 く,. に 示 す.即. ち 対 照 は1.416の. 1時 間 後 に は1.415に. 更 にTrypsin消. 示 し,対. 化6時. 減 少 し, 12時 間,2. 減 少 し2時. 値. 減 少 し た.. 間 後 に は1.413に. 4時 間 後 に は1.411を. 示 し,対. 結 晶 卵 白AlbnmiuをPapainで. 3表 に 示 し た 如 くで あ る.即. 後 に は1.411と Papai塾 は1.48を. 消 化4時. 消 化 した場合 そ 応値 の 変化 は第. ち 第1例. あ る がPapain消. 応 値 の 変 化 は対 照 は1.417で あ り塩 酸. に減少 を 示 した.又1時. 間 後 には1.44を. な り 対 照 値 の1/2に 間 後 に は1.410と. 示 し 対 照 値 の1/4以. 2例 に 於 て も対 照 値 は1.415で. 第3節. 薬 剤投 与 時 のAnderson氏. 尿 ムコ. 蛋 白の 変 動 家 兎 に対 しア ドレナ リ ンの注 射 及 び塩 化 ア. 値 を 示 し2時. 間. ン モ ン を 内 服 せ し め た 際 の 尿 中Anderson氏. 減 少 し た.更. に. Mucoproteinの. な り24時 間 後 に. 投 与 前 の 量 に対 す るMucoprotein. 比 は 第5表 の如 くで あ る.即 ち ア ドレナ リン注 射 に. 下 に 減 少 し た.又. 第. 於 て は投与 後1時 間 屋の 尿 に於 て234%を. あ る がPapain消. 化. 時 間 後尿157%,. な り 第1例. 1/4に減 少 す る こ と を 認 め た.. 後 に は1.413. 示 し, 2. な り 殆 ん ど完 全 に水. 解 され て い る事 を 示 した.. 例 に於て は 対. 化30分. 間 後 に は1.412の. 24時 間 後 に は1.411と. Donaggio反. 陽 性, ±凝陽 性. 時 間 乃至4時 間 後 には1.41と. の 消 化 前 間 経 過 に よ るDonaggio反. で 変 化 が な く1時. 註: 〓強 陽 性,+弱. 水 解30分 後 に は既 に1.45の 値 を 示 し対 照 値 の1/32 照. 値 の1/4に 減 少 した.. 照 値 は1.413で. 6N HCI水 解 中 和 液 のDonaggio 反応 値 の 変化. 変化. 間 及 び4. 照 値 の1/2に. 間 及 び8時. ち塩 酸 に よ る水 解 中和 液 の. 陽性. 化30分 後 に 於 て は1.416で. 時 間 後 に は1.414を. 解 中和液の. 応 を 水解 時 間 に従 つ て 測 定 した結 果 を. 第4表. 註:. 応. と 同 様 対照 値 の. 3時 間 後 尿172%,. 示 し, 2. 4時 間 後 尿121. %を 示 した.又 塩 化 ア ンモ ン内服 に於て は1時 間 後 尿 に於 て は変 動 な く, 2時 間 後 尿 に 於て236%, 時 間 後 尿 に於 て164%を. 3. 示 し, 4時 間 後 には正 常 に復.
(4) 384. 吉. 第5表. 本. ア ドレ ナ リ ン 注 射 及 び 塩 化 ア ン モ ン 内 服 時 の 定 兎 尿 のAnderson 時 間 排 泄 量 の 変 動(注. Mucoprotein. 満. 山 添 等 は 人 体 にAdrenalin,塩. 花 ア ン モ ン, ACTH. 等 を 投 与 し た 場 合 に 尿Donaggio反. 射前 の平 均値 に. 対 す る 百 分 率) A.ア. 弘. 実 よ り,作. 業 中 の 血 圧 上 昇,. Hormoneの. ドレ ナ リン 注 射. 応 の 上 昇 す る事 Aoidosis,副. 変 動 等 が 原 因 に な る と述 べ,田. 腎皮質 辺 は家. 兎 に 是 等 薬 剤 の 大 量 投 与 に よ つ て 上 述 の 結 果 を更 に 明 解 に して い る. 著 者 はAnderson氏. 尿MucoproteinがDonaggio. 反 応 強 陽 性 物 質 で あ る と す れ ば 家 兎 に 於 てAdre nalin注. 射 後 並 び に 塩 化 ア ン モ ン 内 服 後 のAnder. son氏Mucoprotein値. が 増 加 す る は ず であ る と考 え. て 本 実 験 を 行 つ た の で あ る が,. Adrenalin注. 時 間 内 に 又 塩 化 ア ン モ ン 内 服 後2時 Anderson氏Mucoprotein量. して い るの が認 め られ た. 第4章 Donaggio反. 第5章. 応 陽 性 物質 と し て 現 在 まで に蛋 白, が挙 げ ら れ て い るが 何 れ も高. 分子 物 質 が 関 与 して い る よ うに思 わ れ る.そ れ故 蛋 白 質 の 分解 産 物 の 場 合 にDonaggio反. 応 値 が低 下. した事 実 か ら少 くと も高 分子 で あ る蛋 白質 分 子が 分 解 産 物 よ り も高 いDonaggio反. 応値 を 有 すること. が判 明 した. 蛋 白 質 と して は純 粋 な 結 晶卵 白Albuminを. 用い. 蛋 白発 解 酵 素 と し て は動 物 性Proteinaseと 物性Proteinaseと. を 使 用 した. Pepsinは. して. してPapain. 長 時 間 作 用 せ しめ た場合 殆. ん ど全 て の蛋 白 質 を 分 解 しPeptideの30%が. 分解. さ れ る と云 わ れ18),ま たPapainはCystein,青. 酸,. 硫化 水 素,グ ル タ チオ ン等 の還 元 剤で 活 性 化 さ れ基 質特 異性 は可 成 り強 く極 め て 多数 のPeptideが 解 さ れ る と云 う. 24時 間 消 化 後 もDonaggio反. 水 応. の 多 少 残存 す る事 実 は蛋 白 の 消化 不 完 全 な蛋 白の存 在,中 間 分 解 産 物 で あ るPeptideな. 結. 論. 著 者 は 結 晶 卵 白Albuminを. 蛋 白 分 解 酵 素 によ る. 消 化 及 び塩 酸 水 解 を 行 つ た 際 のDonaggio反 化 を 追 求 し 併 せ て 家 兎 にAdrenalin及 モ ン 投 与 後 のAnderson氏Mucoprotein量. 応 の変 び塩 化 ア ン を定 量. し 以 下 に 示 す 如 き 結 果 を 得 た. 1.結 Papainで. Pepsin, Trypsin植. が 増 加 す る事 実 は よ く. 田 辺 の 得 た 成 績 と 一 致 を 示 した.. 総 括 並 び に 考 按. ム コ蛋 白, Pepton等. 射 後1. 間 後 に於 て. 晶 卵 白AlbuminをPepsin,. Trypsin,. 消 化 せ し め た 場 合 に は そ の 消 化 時 間 に併. 行 してDonaggio反. 応 値 の減 少 す る ことを認めた.. 2.結 晶卵 白Albuminを. 塩 酸 水 解 させ た場合に. は そ の水 解 時 間 に併 行 してDonaggio反. 応値は減少. を示 す が,そ の 減 少 の程 度 は蛋 白分解 酵素 による消 化 の 場 合 に比 して大 で あつ た. 3.上 述の 結 果 よ りDonaggio反. 応 には 蛋 白質分. 子 の 存在 が少 くと も必 要 で あ る と推定 され る. 4. Adrenalin,塩. 化 ア ンモ ン投 与 後 に於てAneer. son氏 尿Mucoproteinの. 時間 排 泄 量 は増加 を示 し. た.. どの 存 在 に よ. る もの と 思 わ れ る.酸 水 解 はPeptide基 全部 を 水解 す る方法 で あ るか らDonaggio反. の殆んど 応値 も. 擱 筆す るに 当 り,終 始 御 懇篤 な る御 指導 並びに御. ま た酵 素分 解 の 場合 よ り も低 値 を 示 す事 実 も当然 な. 校 閲 を賜 つ た 恩節 大 田原 教授 に対 し深甚 の謝意を表. 結 果 と考 え られ る.. す る と共 に 併 せ て有 益 な 御助 言 を 仰い だ緒方助教授. Anderson氏. 尿MucoproteinがDonaggio反. 応. 強 陽 性 物 質 で あ り産 業 疲労,ス ポ ー ツ疲 労 に於て そ の排 泄 量が 増 加 す る 事 実 は緒 方10)11)に よ り明 らか に され た もの で あ る が本Mucoproteinの Donsggio反. 定 量値 は. 応 値 に比 較 して 比 色 定 量 に よつ て求 め. 得 る値 で あ る点 に於 て 優 れ てい る と考 え られ る. Donaggio反. 応 が疲 労 時 に増 強 され る原 因 と して. に深 謝 す る. (本論 文 の要 旨は 昭 和31年10月 第11回 日本公衆衛 生学 会 に 於 て発 表 した).
(5) 疲. 労. に. 関. す. る. 文 1) Donaggio. A.:. Bull.. Soc. Ital.. 究. 385. 献. Biol. Sper.,. 中. 11). 8. 1436, 1933. 下 川 末 夫=医. 学 と 生 物 学,. 3). 中 山 達 夫:日. 本 生 理 誌,. 18,. 533(1956).. 12). 出 添 三 郎=医. 4). 中 山 達 夫:日. 本 生 理 誌,. 18,. 537(1956).. 13). 無 辺 昇 平:第5回. 緒 方 正 名 ・望 月 義 夫:日 Vol. 13,. 本 衛 生 学 雑 誌,. 181,. 学 と 生 物 学,. Kekwick,. 188,. 15). 伊 藤 良 二:化. 194,. 16). 8) Anderson, A. J. & N. F. Maclagan: J. 59 (1), 1955.. Biochem.. 17). 9) Anderson, A. J. & N. F. Maclagan:. Biochem.. 18). 日本 衛 生学 会 総 会発 表,印 刷. 19). Vol. 13,. No.2,. 1958.. No.2,. 本 衛 生 学 雑 誌,. 1958.. 2.. 日 本 公 衆 衛 生 学 会 中 国,四. . 国. R. A.:. Biochem.. J.. 30,. 学 実 験 学 第2部12巻,. 227 . 736,河. 出. 伊 藤 良 二:化. 学 実 験 学 第2部12巻,. 74,河. 出書. On. 伊 藤 良 二:化. 学 実 験 学 第2部12巻,. 755,河. 出. 書 房,昭19. 赤 堀 四 郎 ・ア ミ ノ 酸 及 び 蛋 白 質,. 100,共. 立出. 版 株 式 会 社 発 行,昭22.. Studies Part. 166(26.8). 房,昭19.. J. 59 (4), 638, 1955. 10) 緒 方正 名:第27回. 20(4),. 書 房,昭19.. 7) 緒 方 正 名 ・望 月 義 夫:日 Vol. 13,. 刷. 地 方 学 会 発 表.. 1958.. 緒 方 正 名 ・望 月 義 夫 ・ 日 本 衛 生 学 雑 誌,. 日本 衛 生 学 会 総 会 発 表,印. 中.. 14). 6). No.2,. 116(1953).. 緒 方 正 名:第29回. 2). 5). 27(3),. 研. the. of Enzyme Changes. Changes Digestion in the. Mucoprotein. on. Donaggio. Acid. Contents after. 体 育 研 究,. 8,. 56(1941). .. Fatigue. in the and. 佐 藤 徳郎. Reaction. Hydrolysis of Anderson's. the. at the. and. on. Time. the. Urine. Administration. of Adrenalinammonium. Chloride. By Hiromitsu. Yoshimoto. Department of Public Health Okayama University Medical School (Director: Prof. Kazuyoshi Ohtawara, M. D.) By Observing the changes in the Donaggio reaction at the time of digestion and hydro chloric acid hydrolysis of crystal egg-white albumin by proteolytic enzymes and performing the quantitative analysis of Anderson's mucoprotein in the rabbits administered with adrenalin and ammonium chloride, the author obtained the following results. 1. When crystal egg-white albumin is digested with pepsin, trypsin, or papain, it has been recognized that the Donaggio reaction value decreases in parallel with the lapse of the digestion times. 2. When crystal egg-white albumin is hydrolyzed with hydrochloric acid , the Donaggio reaction value decreases along with the lapse of hydrolysis time, but the decrease in this instance is greater than that in the case of the digestion by proteolytic enzymes. 3. From these results it is assumed that for the Donaggio reaction at least protein molecules must be present . 4. The hourly excretion of Anderson's mucoprotein reveals an increase in the amount after the administration of adrenalin or ammonium chloride..
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