肝がん治療用ピラルビシン封入肝ターゲティングリ ポソーム製剤の開発

肝がん治療用ピラルビシン封入肝ターゲティングリ ポソーム製剤の開発

著者 川野 久美

雑誌名 星薬科大学紀要

号 45

ページ 23‑29

発行年 2003

URL http://id.nii.ac.jp/1240/00000111/

Proc． Hoshi Univ． No．45，2003

総  説

肝がん治療用ピラルビシン封入肝ターゲティングリポソーム製剤の開発

ーー﹂ 野

久 美

星薬科大学医薬品化学研究所 創剤構築研究室

Development of liver・targeted liposomes entrapping pirambicin

      for liver cancer chemotherapy

Kumi KAWANO

F ηeDrμ9欠αrgezjηg ReseαrcみLαborατoη，1ηs功μτe orルfe耽仇αZ Cんe斑sτワ， Hos万ση》uers》砂

はじめに

 わが国において、がんは1981年以降死亡原因の第1位 を占め、がんの死亡率は増加の一途をたどっている。近 年では死亡者の約3人に1人ががんである現状から、重 要な社会問題の一つとして、がん克服へのさまざまな対 策が講じられている。

 がんの治療には、手術、放射線治療、化学療法を単独 あるいはこれらの方法を併用した治療が行われている。

がん化学療法において抗がん剤は、薬効量と副作用量と が接近しているため、副作用を生じやすく、有効な濃度 まで上げることができない。そこで、抗がん剤を選択的 にがん局所へ到達させて治療効果を高めるために薬物送 達システム（DDS）が必要とされる。

 DDS担体として用いられるリボソームは、リン脂質 やコレステロールのような生体成分から成る脂質二重膜 の閉鎖小胞であるため、生体適合性があり、安全性が高 し㌔また、リボソームは、脂質膜と内水相からなる微粒 子であるため、水溶性・脂溶性の薬物を封入でき、また、

内部に封入された薬物は酵素による分解や代謝を抑制す ることが可能である。さらに、リボソーム成分やその組 成比を変えたり、リボソーム表面を抗体や糖鎖で修飾す ることにより、体内での指向性を持たせることができる ので、安全で有用な薬物担体として期待されている。こ れまでに、抗がん剤や抗菌剤などを封入したリボソーム 製剤がすでに欧米において上市されている。

 日本における肝がんは、ウィルス性肝炎から肝硬変を 経て生じるケースが多い。一般に、肝臓への選択的薬物 送達には、肝実質細胞にガラクトース残基を認識するア シァロ糖タンパクレセプターが発現していることから、

ガラクトース修飾リボソームが用いられている 2）。本研 究室ではこれまでに、大豆由来ステロールグルコシド

（SG）あるいはその主成分であるβ一シトステロールグ ルコシド（Sit−G， Fig．1）により修飾したドキソルビシ ン封入リボソームは、肝臓へ薬物を集積させ、肝がんモ

デルマウスの治療効果を向上することを明らかにした3・4）。

また、これは、Sit−G修飾リボソーム表面のグルコース 残基と肝細胞のアシアロ糖タンパクレセプターとの親和 性による可能性も報告しだ｝。

 抗がん剤ピラルビシン（4 −0−tetrahydropyranyldo−

xorubicin；THP， Fig．2）は、ドキソルビシンの副作用 軽減を目的として合成された誘導体である。THPは、

乳がんや卵巣がん、白血病等に適用を有し、ドキソルビ

。ρ

    OH

Fig．1． Chemical structure ofβ一sitosterolβ一D−glucoside    （Sit−G）

0

OH

COCH20H

OH

Fig．2． Chemical structure of pirarubicin（THP）

シンに比べ心毒性や消化器障害などの副作用の発現は低 く、ドキソルビシン耐性細胞にも有効であり、優れた抗 腫瘍効果を有する6 7）。また、ドキソルビシンに比べ脂溶 性が高いため、組織への移行速度が速く、肝動脈内投与 や門脈内投与といった局所投与では、肝臓中の薬物濃度 が向上し、転移性肝がんや原発性肝がんに有効性を示し ている＆1°｝。しかし、THPの全身投与による肝臓への送 達については、未だ報告されていない。そこで、Sit−G 修飾リボソームにTHPを封入することにより、肝臓へ THPを選択的に送達するリボソーム製剤の構築を試み

た。

 本稿では、Sit−G修飾リボソームにTHPを封入するた めの新規調製法の検討と、調製した製剤によるTHPの 体内動態および肝がんの治療効果について検討したので 報告する。

脱水復水法によるTHP封入リボソームの調製

 静脈内に投与された比較的粒子径の大きい微粒子（約 0．4μm以上）は、肝や脾臓の細網内皮系（RES）に捕 捉されやすい。目的部位までリボソームを送達させるに

は、粒子径を小さくしRESから回避させる必要がある。

種々のリボソーム調製法が開発されているが、リン脂質 がリボソーム構成時にできる内水相に受動的に封入でき る薬物量は一般に少なく、特に粒子径の小さなリボソー ムは内水相容積が小さいために、多くの薬物を封入させ ることは困難である。また、リボソーム内外にpH勾配 をつくり能動的にリボソームへ薬物を封入するpH勾配 法は高濃度に薬物を封入できるが、薬物の分子量、脂溶 性、分子構造など種々の制約を受け、限られた薬物にし か応用できない11）。THPにおいても、 pH勾配法を試み たが、用いた緩衝液中でのTHPの溶解度が低く封入は

困難であった。

 脱水復水法（dehydration−rehydration vesicle法；

DRV法）は、薬物の性質にかかわらずリボソームに封 入可能な調製法である。これまでにDRV法では、低分 子蛍光物質carboxy且uoresceinや、高分子のアルブミン やDNAなどを効率よく封入できることが報告されてい る12）。DRV法の利点としては、薬物が有機溶媒にさら されたり超音波照射されることなく封入できるため、薬 物の分解が少なく、また、リボソーム製剤を凍結乾燥品 として保存できるので、製剤としての安定性が高いこと などがあげられる。しかしながら、調製されたリボソー ムの粒子径は大きく、1μmを超えることもある。そこ で、静脈内投与可能な粒子径の小さいリボソームに THPを封入させるために、 DRV法を改良した。すなわ ち、凍結乾燥時に糖を加えることで、薬物の封入率を維 持したまま、粒子径の増大を抑制することである13）。

 THP封入リボソームの組成には、精製卵黄レシチン

（EPC）、コレステロール（Ch）、 Sit−G、オレイン酸

（OA）を用いた。 phosphatidylcholineを主成分とする EPCはリボソーム膜を構成し、 Chはその膜強度の補強 のために、OAはリボソームに負電荷を与え正電荷薬物 であるTHPの封入率を向上させるために加えた。これ らの脂質成分から成る小さな空の一枚膜リボソーム（粒 子径約80nm）を調製し、これにTHPと糖を加え、凍結 乾燥後、少量の水で復水してTHP封入リボソーム（L−

THP）を得た。 THPの添加量はTHP／EPCニ0．1（w／w）

で調製した場合には、リボソームの平均粒子径が1254 nmと非常に大きくなったが、 THP／EPCニ0．05（w／w）

では約300nmと比較的小さく調製できたので、以後の 検討はTHP！EPC＝0．05（w／w）を用いることにした。

最終的には1．−THPのTHP濃度は0．5mg／mLとした。

 凍結乾燥時に添加する糖の種類や量は、復水後のリポ ソーム粒子径に大きく影響する。そこで、グルコース、

ショ糖、乳糖の各糖をリボソームの脂質と等質量加え、

OA有無の処方について、復水後の粒子径とTHP封入率

を測定した（Table 1）。 L−T且P（EPC：Ch：Sit−G：OA，

モル比）の粒子径は、電気泳動光散乱光度計（ELS−800、

大塚電子）を用いて測定し、薬物封入率は超遠心分離

（100，000×g、60分、4℃）でリボソームと未封入のTHP とを分離後、上清のT且P濃度を蛍光光度計（励起波長4 82nm、蛍光波長550nm）で測定して、以下の式より算

出した。

 薬物封入率二（1−C，。p＿。、an，／C，。、。1）×100（％）

ここで、C、upern。、an、は上清の未封入薬物濃度を示し、 C、。，。1 は添加した総薬物濃度を示す。

 凍結乾燥前の空リボソームの粒子径が約80nmであっ たのに対し、糖を添加せずに凍結乾燥を行うと、薬物封 入リボソームの平均粒子径は約1μmとなった。一方、

各糖を加えると粒子径は大きくならず、特にグルコース とショ糖では乳糖に比べて粒子径増大を抑制することが 明らかになった。Croweら14｝やZadiら 3）は、単糖（グル Table l The ef丘ct of sugars on the average particle size    and entrapment e伍ciency of L−THP at sugar／

   lipid＝1（w／w）．

 Molar ratio

         Sugar

（EPC：Ch：Sit−G：OA）

Average particle size Entrapment   （㎜）  e笛ciency（％）

L−THP（7：3：2：0）

L−THP（7：3．2：1）

Without sugar  Glucose  Lactose  Sucrose Without sugar  Glucose  Lactose  Sucrose

1113．7 ± 146．3 187．3 ±6．1 389．5 ± 18．l l47．2± 0．9

1510．3 ± 52．3 675．5 ± 72．8 1245．4 ±236．7

768．1 ± 102．7

31．7 ± 1．3

31．4 ±4．2 33．8±2．9 35．0±0，1

84．8 ± 8．0

87．0 ± 0．4

77．7 ± 1，1

83．9 ± 8．7

THP／EPC＝0．05（w／w）

Each value represents the mean±S．D．（n＝3），

Proc． Hoshi Univ． No．45，2003

コース）より二糖（ショ糖）の方が粒子径増大の抑制作 用が大きく、ショ糖はトレハロースと同等の強い保護作 用を有することを報告している。そのため以後の検討は ショ糖を用いて行った。薬物封入率については、OA無 添加のLTHP（EPC：Ch：Sit−G：OA＝7：3：2：0）では30

−35％程度であるのに対し、OA添加のL−THP（EPC：

Ch：Sit−G：OA＝7：3：2：1）では約80％の封入率が得ら れた。同じ組成から成るリボソーム懸濁液をTHP溶液 と混合しただけでは、約10％程度しか薬物は封入され なかった。すなわち凍結乾燥後復水することでTHPの 薬物封入率は向上し、さらにOAとの親和性により80％

まで封入率が増加することが明らかとなった。

 次にL−THP（EPC：Ch：Sit−G：OAニ7：3：2：1）におい て、ショ糖の添加量を変えて調製し、粒子径の調整を試 みた（Table 2）。凍結乾燥時に加えるショ糖の量を増 すと共に薬物封入リボソームの粒子径は小さくなり、ショ 糖／脂質＝8（w／w）のときに80％の薬物封入率で、約340 nmのリボソームとなった。

 リボソームへのTHP封入率は、組成中のOA量に大き く影響されることがわかった。そこで他の組成は固定し てOA比を変えてリボソームを調製した（Fig．3）。 OA 比を増加させるとTHP封入率は増加し、 EPC：Ch：Sit−

G：OA＝7：3：2：3（モル比）ではほぼ100％近くになった。

これは、OAの割合を増加させると、リボソームの表面 電位が大きく負に帯電し、そのため正電荷薬物である THPが電気的に吸着したためと推察された。しかし、

薬物封入率が向上すると共に粒子径も大きくなった。こ れはリボソーム表面に吸着したTHPがリボソームの表 面電荷を打ち消したために電気的反発が弱くなって凝集 が起こり、粒子径が大きくなったと推察された。

 調製のそれぞれの段階におけるリボソームの構造を、

走査型電子顕微鏡により観察した（Fig．4）。ショ糖無 添加でリボソームを凍結乾燥後では脂質の凝集体が見ら れ（Fig．4（a））、これが復水後のリボソーム粒子径増 大を引き起こすと考えられた。ショ糖添加の凍結乾燥後 では（Fig．4（b））、リボソームがショ糖中に包埋され

Table 2 The ef］もct of the sucrose to lipid ratio on the aver−

   age particle size and entrapment e伍ciency of L−

   THP．

高倍率においてもリボソームは観察されなかったが、復 水後は小さな粒子が確認され（Fig．4（c））、リボソー ムが再構成される可能性が示唆された。

 一般に、糖は多価アルコール（グリセロール）等と同 様に凍結保護物質（cryoprotectant）として、リボソー ムを凍結乾燥する場合に用いられている14｝。リボソーム を凍結乾燥すると、親水性基から水分子が取り除かれて 脱水和が起こることにより、リン脂質膜の不安定化が起 こり、リボソーム同士の融合が起きたり、封入物の漏出 が起きる。しかし、リボソーム内外の水相に糖を存在さ せると、糖がリボソーム表面に水和した水分子と置き換 わるために、リポソームニ重層の再配列を抑えられ、融 合を防ぎ、封入物の漏出を防ぐことができる15｝。ここで は、糖をリボソームの外液のみに存在させることにより、

リボソーム膜を揺らがせて薬物の封入を充進させると共 に、適切な量の糖を用いることでリボソームの融合を抑 制して、粒子径の増大を抑制したと考えられる鋤。

 以上のように、粒子径が小さく薬物封入率の高いL−

THP（EPC：Ch：Sit−G：OA＝7：3：2：1）は、脂質の8倍 量のショ糖を用いたDRV法により調製できた。以下こ のリボソームをL−THPと表わす。次にL−THPの肝臓へ の薬物送達能を検討するために、L−THPの体内動態と、

肝がんでの抗腫瘍効果を検討した。

L・THPの体内動態と抗腫瘍効果

 転移性肝がんモデルマウスは、C57BL！6Jマウス（雌 性、体重約17g）にマウス組織球腫M5076細胞を移植し て作成した。M5076細胞はマウス卵巣がん由来の肉腫 で16）、マウス皮下、腹腔内もしくは静脈内移植後、いず れも主に肝臓や脾臓に転移し、マウスを致死させるため、

1000

官800

ε

．》…

壱

モ400

 200

 Molar ratio  Sucrose／1ipid Average particle size Entrapment

（EPC：Ch：Sit−G：OA） （w／w）   （㎜）   emciency（％）

120

1・・

§

・・

§

60ご

  9．

40 窪   口

20§

L−THP（7：3：2：1）

0

1258

84．8± 8．0 83．9±8．7 82．4± 10．7 82．6±4，9 80．7± 11．3 THP／EPC＝0．05（w／w）

Each value represents the mean±S．D，（n＝3）．

   0       0        0     1    3          0A in L−THP（X）

   （EPC：Ch：Sit−G：OAニ7：3：2：X in molar ratio）

Fig．3． The effbct of OA ratio in LTHP on the particle    size of liposomes（bar）and the entrapment ef五・

   ciency（◇）． LTHP was prepared伽m EPC：Ch：Sit−

   G：OA＝7：3：2：X（molar ratio）at sucrose！1ipid＝8（w／w）

   and THP／EPC＝0．05． Each value represents the    mean±SD．（n＝3）．

（a）

（b） （×1，000）

（c）

（×1，000）

り1x105細胞のM5076細胞を尾静脈から移植後、10H 目にTHPとして5mg／kgを尾静脈内投与し、0．5、1、2、

6、24時間後の血清および各臓器中（肝臓、脾臓、心臓、

腎臓、肺）の薬物濃度をHPLC法17・18により測定した。

各時間における血清中および各臓器内THP濃度をFig．

5に、0−24hにおける濃度一時間曲線下面積（AUC，、2、h）

をTable 3にまとめた。 THP溶液（F−THP）投与では THPは血中から速やかに消失し、心臓、肺、脾臓に分 布した。一方、L−THP投与ではTHPの分布が大きく変 化し、心臓や肺への薬物分布が抑制され、肝臓への集 積量が増加した。LTHPは肝臓でのAUCを約4倍上昇

し、心臓でのAUCを約半分に減少させた。 THPの重大 な副作用として心筋障害があげられるが、L−THPは心 臓への薬物分布を抑制し、さらに肺や腎臓等、iE常組 織への薬物分布を抑制しているため、副作用の軽減が 示唆された。

 次に、L−THPの肝がん治療効果の評価には、 M5076 細胞（1×105細胞）を尾静脈から移植後3日目にTHPと して10mg／kgで投与し、その後の生存日数より延命率

（ILS）を以下の式より算出した。

 ILS＝ （T／C−1） ×100 （％）

ここでTは治療群の生存日数を、Cは対照群の生存日数 を示す。また、Kaplan−Meier法により生存率曲線を作 成し、lo昔rank検定により生存率の比較を行った。5％

ブドウ糖液を投与した対照群の生存日数は約14日であっ

Table 3 Tissue AUC。24 values after i両ection of F−THP and    L−THP in mice bearing M5076 at a dose of 5    mg／kg at 10 days after tumor inoculation（n＝4）．

「issue AUCI）．24（μ9・h／gj

Serunl a｝  Li、er    Heart Lung Kidnc｝「    Spleen F−THP    1」3   6．6 〔08）  7．7 n．0）  4851 79．5）  90、2｛505｝

       ホ         ゆ

L−TliPh｝  1．45  244 〔3．2［  37（0．9｝  ホ      ホ 93．0  （4、3）  24．0 （1．8）

｜30．7（24．4｝

10｜，3｛209）

（×20，000）

Fig．4． Scanning electron micrographs of L−THP（7：3二2：1）．

  （a）Freeze−dried without sugar and befbre rehydration   （b） Freeze−dhed with sucrose at sucrose／1ipid＝8   （w／w｝and befbre rehydration （c）Freeze−dHed with   sucrose at sucrose／1ipidニ8（w／w）and after rehydration

a｝Serum AUC is given as↓↓g・h／mL b）L−THP consisted ofEPC：Ch：Sit−G：OA＝7：3：

2：1（molar ratk⊃）and prepared with sucmsc／1ipid＝8（w／w）． The numbers in parentheses represen1 S．D

＊：P＜0．05、compared with卜rHP

Table 4 Antitumor e脆cts of F−THP and LTHP in mice    bea亘ng M5076 treated at 10 mg／kg at 3 days負）1−

   Iowing tumor inoculation（n；7）．

Median survival time   （days）

ILS a）

（％）

Contro1

F−THP

L−THP b）

14．0

18．0

2α0

28．6吟

42．9寧

転移性肝がんモデルとして用いられている。なお、尾静 脈より細胞移植後14日目に肝臓は肥大し、多くの結節 が観察され、肝がんになっていることが確認された。

 L−THPの体内動態を検討するために、マウス1匹あた

a）Percentage increase in lif＞span．（T／C−1）×100（％）． where T and C represent the median survival time of the treated and control animals． respectively．  b） L−THP consisted of EPC：Ch：Sit−G：OA＝7：3：2：1（molar ratio）．

＊：P＜0．05、compared with contro1

Proc． Hoshi Univ． No．45，2003

（§ヨ︒︒・盲＼boユ︶．88エ＝↑

1．0

0．8

0．6

0．4

0．2

0．0

0 5

（a）Serum

  10   15

Time（h）

20 25

（^{お主bo＼bo5エ}

2．5

2．0

1．5

LO

05

0．0

0 ⁵

（b）Liver

10 15

Time（h）

20 25

（口OO一亀uりbo＼boユ︶ら＝﹄い

14 12 10 8 6 4 2 0

0 5

（c）Spleen

 10   15 Time（h）

20 25

（起dOぷbo＼boi︶工

4．0

3．5

3．0

2．5

2．0

1．5

LO

0．5

0．0

0 ⁵

（d）Heart

 10   15 Time（h）

20 25

（bo

自三b⑩＼bo己工＝

600 500 400 300 200 100 0

0 5

（e）hmg

10 15

Time（h）

20 ²⁵

（_ら

O

40 35 30 25 20 15 10 5 0

0 5

（f）Kidney

10   15 Time（h）

20 25

Fig．5． THP levels in serum（a）and tissues（b；liver， c；spleen， d；heart， e；hmg， C kidney）after i，v． i可ection of L−THP     （▲）and F−THP（○）in mice bearing M5076 at a dose of 5 mg／kg at 10 days a庇er tumor inoculation．

    THP levels in the serum were simulated by the two−compartment model． Each value represents the mean±

    S．D．（n＝4）．

たが、各治療群では延命効果を示し、生存日数が延長し た（Table 4）。 THP溶液（F−THP）投与群に比べL−

THP群において生存日数の延長が見られ、生存日数中 央値は20日であった。延命率を算出すると、F−THPで は28．6％、L−THPでは42．9％となり、いずれも対照群 に比べ有意に延長した。LTHPは肝臓へのTHP集積を 増加させたために、肝がんの治療効果が向上したと考え られた。THP投与後のマウスの体重変化を比較すると、

F−THP群では約10％程度の体重減少を示したのに対し、

L−THP群では体重の変化はほとんど見られず、対照群 と有意な差は見られなかった。これは、L−THPは正常 組織への薬物移行を抑制し、有害作用を抑制したためと 推察された。

 以上のことから、DRV法により調製されたL−THPは、

静脈内投与後、肝臓にTHPを集積して肝がんの治療効 果を向上させ、他の組織への分布を抑制して有害作用を 軽減することが明らかとなった。

まとめ

 リボソームの組成にOAを加え、 DRV法の改良によっ て、静脈内投与可能な薬物封入率の高いTHP封入リポ ソームの調製を可能にした。このリボソームは、静脈内 投与後、肝臓へTHPを集積して肝がんの治療効果を向 上させることを明らかとした。THPのように肝臓への 分布が低い薬物もSit−G修飾リボソームに封入すること

により肝臓へ送達することが可能となり、肝がんに対す るTHPの新たな有用性を見いだすことができた。

謝辞

 本研究に対し、平成14年度星薬科大学大谷記念研究 助成金を賜りましたことに深く感謝いたします。また、

本研究の遂行にあたり終始ご指導をいただきました創剤 構築研究室米谷芳枝教授に心より感謝いたします。最 後に、本研究に御協力いただきました薬剤学教室ならび

に創剤構築研究室の皆様に深く感謝いたします。

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  J Cαηcθr Cんeη膓oτん￠r．，11，902−911 （1984）．

7）Saito， T．， Kasai， Y．， Wakui， A．， Furue， H．， Majima， H．， Nitani， H．， Ni亘ima， T．， Takeda， C．， Abe，0．， Koyama， Y．，

  and et al．， Phase II study of（2 R）−4 −0−tetrahydropyranyladriamycin（THP）in patien七s with solid tumors． Multi−

  Ins七itutional Cooperative Study．，♂pη． J Cαπc￠r Cんθητo〃Ler．，13，1060−1069（1986）．

8）Izumi， N．， and Goto， Y．， A clinical trial of transarterial chemoembolization fbr hepa七〇cellular carcinoma using 4 −   0−tetrahydropyranyladriamycin．，吻η． J Cαπcer Cんαηoτんer．，17，1303−1307（1990）．

9）Rougier， P．， Munck， J． N．， Elias， D．， Herait， P．， Bognel， C．， Gosse， C．， and Lasser， P．， Intra−arterial hepatic   chemotherapy with pirarubicin． Preclinical and clinical studies．， Am．」α」η．0πcoZ．，13 Supp11， S1−S4（1990）．

10）Ramirez， L． H、， Munck， J． N．， Bognel， C．， Zhao， Z．， Ardouin， P．， Poupon， M． R， Gouyette， A．， and Rougier， P．，

  Pharmacology and antitumour e丑bcts of intraportal pirarubicin on experimental liver metastases．， Br． eλCαηcer，

  68，277−281 （1993）．

11）Maurer−Spurqi， E．， Wong， K F．， Maurer， N．， Fenske， D． B．， and Cullis， P． R．， Factors in且uencing uptake and   retention of amino−containing drugs in large unilamellar vesicles exhibi七ing transmembrane pH gradients．，

  B oc九」πτ． Bjqρんy8． AcZα，1416，1−10 （1999）．

12）Kirby， C． J．， and Gregoriadis， G．， Dehydration−rehydration vesicles（DRV）：Anew method fbr high yield drug   entrapment in liposomes．， Bjo ecんπo膓qgy，2，979−984（1984）．

13）Zadi， B．， and Gregoriadis， G．， A novel method fbr high−yield entrapment of solutes into small liposomes．， J   Lψosoη1e Res．， 10，73−80 （2000）．

14）Crowe， J． H．， and Crowe， L M．， Preservation of liposomes by丘eeze−drying．，砿G． Gregor α伽〔E（0， L輌sαπe   恥c加τoZ（樫y， VbL L 2π（〕E∂琵Zoη，（頂C Press， Bocα1〜ατoπ，」FL，，229−252（1993）．

15）Madden， T． D．， Bally， M． B．， Hope， M． J．， Cullis， P． R．， Schieren， H． P， and Janof￡A． S．， Protection of large   unilamellar vesicles by trehalose during dehydration：retention of vesicle contents．， Bjoc疏m． Bi（〜ρ九ys． Acτα，817，

  67−74 （1985）．

16）Talmadge， J． E， Key， M． E．， and Hart，1． R．， Characterization of a Inurine ovarian reticulum cell sarcoma of   histio（加ic origin．，（泡1τcθr 1〜es．，41，1271−1280（1981）．

Proc． Hoshi Univ， No．45，2003

17）Matsushita， Y．， Iguchi， H．， Kiyosaki， T．， Tone， H．， Ishikura， T．， Takeuchi， T．， and Umezawa， H．， A high    perfbrmance liquid chromatographic method of analysis of 4 −0−tetrahydropyranyladriamycin and their    metabolites in biological samples．， J Aπ励εo彦．，36，880−886（1983）．

18）Morikawa， N．， Mori， T．， Takeyama， M．， and Hori， S．， Pharmacokinetics of intra−arterially administered    pirarubicin in plasma and cerebrospinal nuid of patients with glioma．， BjoZ． P九αm． B捌．，21，297−299（1998）．

Development of liver−targeted liposomes entrapping pirambicin fbr liver cancer chemotherapy

Kumi KAWANO

Fine Drug Targeting Research Laboratory， Institute of Medicinal Chemistry，

      Hoshi University

   For liver targeted cancer chemotherapy，β一sitosterolβ一D−glucoside contained liposomes entrapping pirambicin（THP，

L−THP）were prepared by the modi6ed dehydration−rehydration vesicle（DRV）method． A丘er intravenous i吋ection of L−

THP， the accumulation of THP in the liver was approximately 4−fbld higher than that of fセee THP． L−THP had superior antitumor eflbct with皿t significant adverse ef丘cts． Liver−targeted L−THP is a potential drug dosage負）rm of liver cancer treatment．