14201 機 05T 本 社 〒540-8605 大阪市中央区道修町三丁目1番2号 TEL:06-6203-2759（機器システム部） 東 京 本 店 〒103-0023 東京都中央区日本橋本町二丁目4 番1号 TEL:03-3270-8124（機器システム部） 北海道営業所 TEL:011-271-0285 東 北 営 業 所 TEL:022-222-3072 筑 波 営 業 所 TEL:029-858-2278 藤 沢 営 業 所 TEL:0466-29-0351 東 海 営 業 所 TEL:052-772-0788 中 国 営 業 所 TEL:082-285-6381 九 州 営 業 所 TEL:092-622-1005 URL:www.wako-chem.co.jp/me/ お問い合わせ先：www.wako-chem.net/bms Web からの機器簡単見積・デモ依頼：www.wako-chem.net/estimate/index.php 2014 年 2 月改訂
1 エンドトキシン試験 基本の「き」 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・4〜7 エンドトキシン測定用試薬 ・ 比濁法 ・ゲル化法 リムルス ES-IIシリーズ ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・8〜9 PYROSTAR™ ES-Fシリーズ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・10〜11 PYROSTAR™ ES-F/Plate・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・12〜13 リムルス ES-Ⅲ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・14〜15 リムルス PS シングルテスト ワコー・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・16〜17 リムルス Jシリーズ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・18 リムルス Fシリーズ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 19 ・ 比色法 リムルス カラー KY シリーズ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・20 Endochrome-KTM・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・21 エンドトキシン試験関連試薬・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・22 乾熱滅菌バリデーション用試薬 「エンドトキシンインジケーター」・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・22 SLP試薬セット・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・23〜25 LPS（リポポリサッカリド）・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・26 エンドトキシン検出用抽出液・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・27 エンドトキシン除去フィルター・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・28 「アクロディスクシリンジフィルター」 「ムスタングEアクロディスク」 選択的エンドトキシン除去用クロマトグラフィー充填剤「セルファインRETクリーン」・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・29 エンドトキシン試験関連器材・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・30 「バイオクリーンチップ ワコーRシリーズ」 エンドトキシン試験機材・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 31 「サーモステーションTS-37S/24」
「VIAL TUBE MIXER VTM-252/VIAL ADAPTER SASAETE30」
エンドトキシン測定システム「トキシノメーター®ET-6000」・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・32〜33 マイクロプレートリーダー法エンドトキシン測定システム「MPRエンドトキシン測定システム」・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・34 簡易型エンドトキシン測定システム「Endosafe®-PTSTM」・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・35 バリデーション・サポート・サービス・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ ・・・・・・・36 リムルス関連試薬、機材・消耗品価格表・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・37
CONTENTS
注）本カタログに収載の製品は試験研究用試薬・機器です。疾病の診断にはご使用になれません。リムルス ES-II シングルテスト：295-51301（表示感度 0.015 EU/mL）
PYROSTAR ES-F シングルテスト：295-72301( 表示感度 0.015EU/mL） シングルテスト（CSE 付） シングルテスト（CSE 付） 比濁法、ゲル化法 エンドトキシン特異的試薬 日本薬局方 FDA 対応 リムルス ES-II テスト：299-51201（表示感度 0.015 EU/mL）
PYROSTAR ES-F マルチテスト：293-72101（表示感度 0.015EU/mL） マルチテスト（CSE 付）
マルチテスト（CSE なし）
マルチテスト（CSE 付） マルチテスト（CSE なし）
カブトガニ血球抽出物 ES-II：292-51213（表示感度 0.015 EU/mL）
PYROSTAR ES-F マルチテスト：299-72201（表示感度0.015EU/mL） リムルスカラー KY シングルテスト：291-53601 シングルテスト（CSE 付） 比色法 日本薬局方 リムルスカラー KY テスト：291-53101 マルチテスト（CSE 付） カブトガニ血球抽出物ES-III：295-51801※1（表示感度 0.03EU/mL） マルチテスト（CSE なし） シングルテスト（CSE なし） リムルス PS シングルテスト：299-54501※2 リムルス J シングルテスト：290-22041（表示感度 0.25 EU/mL） PYROSTAR ES-F/Plate：545-10031 シングルテスト（CSE 付） マルチテスト（CSE 付） ゲル化法専用 比濁法 エンドトキシン非特異的試薬 エンドトキシン特異的試薬 エンドトキシン非特異的試薬 日本薬局方 FDA 対応 リムルス HS ｰ J シングルテスト：292-22241（表示感度 0.03 EU/mL） リムルス F シングルテスト：297-52601（表示感度 0.25 EU/mL） リムルスカラー KY テスト：291-53101 シングルテスト（CSE 付） マルチテスト（CSE 付） FDA 対応 日本薬局方 リムルス HS ｰ F シングルテスト：299-52801（表示感度 0.03 EU/mL） リムルス HS ｰ T シングルテスト：299-53401（表示感度 0.015 EU/mL） シングルテスト（CSE 付） 比濁法、ゲル化法 日本薬局方 リムルス J テスト：290-21941（表示感度 0.25 EU/mL） マルチテスト（CSE 付） マルチテスト（CSE なし） リムルス HS-J テスト：296-22141（表示感度 0.03 EU/mL） カブトガニ血球抽出物 J：298-22341（表示感度 0.25 EU/mL） カブトガニ血球抽出物 HS-J：294-22441（表示感度 0.03 EU/mL） リムルス HS-F テスト：293-52701（表示感度 0.03 EU/mL） マルチテスト（CSE 付） マルチテスト（CSE なし） FDA 対応 カブトガニ血球抽出物 F：298-52511（表示感度 0.25 EU/mL） カブトガニ血球抽出物 HS-F：290-52711（表示感度 0.03 EU/mL）
Endochrome-K™ 256 test kit：519-87321
Endochrome-K™ 256 test kit：519-87321
マルチテスト（CSE 付） マルチテスト（CSE 付） マルチテスト（CSE なし） マルチテスト（CSE なし） 比色法 比色法 比色法 FDA 対応 FDA 対応 Endochrome-K™ 320 tests：513-87341 Endochrome-K™ 320 tests：513-87341 Endochrome-K™ 3200 tests：516-87331 Endochrome-K™ 3200 tests：516-87331
ライセート試薬選択のフローチャート
■試験管法
■プレート法
P.8 P.10 P.8 P.10 P.8 P.10 P.20 P.20 P.14 P.16 P.18 P.12 P.18 P.19 P.20 P.19 P.18 P.18 P.18 P.18 P.18 P.19 P.19 P.19 P.21 P.21 P.21 P.21 P.21 P.21 3 2 ※1: 生物学的製剤に適した試薬 ※2: 水に不溶なサンプルに適した試薬 マルチテスト ： ライセート試薬をエンドトキシン試験用水で溶解し、反応用試験管またはプレートに必要量分注し使用するタイプ シングルテスト ： 1回の測定分のライセート試薬が反応用試験にあらかじめ分注されているタイプ5 4 エンドトキシンとは､グラム陰性菌の細胞壁に存在しているリポ多糖（LPS）のことです。代表的な発熱性 物質であり、ｐｇ（10-12g）やｎｇ（10-9g）という微量でも血中に入ると様々な生体反応を引き起こします。 耐熱性であり､オートクレーブ処理程度では失活しません。完全に失活させるには250℃以上で30 分以上 の乾熱滅菌が必要です。グラム陰性菌が生息する環境中のあらゆる場所（水、空気）に存在し、菌が死んで もLPSは残ります。 図１に構造の模式図を示します。リピドA部分が生物活性を担う本体であり、この部分の分子量は約２千 です。糖鎖部分を含んだ全体は通常分子量5千から8千程度です。ただし、LPSは親水性部分（糖鎖）と 疎水性部分（リピドＡ）を持つ分子であるため、水溶液中で会合し、見かけの分子量が数十万〜数百万の ミセル構造をとります。ミセル構造が変化すると生物活性の強弱も変化することが報告されています。 図2に大腸菌型とサルモネラ型のLipid Aの構造を示します。Lipid Aの基本構造は菌株が異なっても 共通している部分が多くみられます。
エンドトキシン試験 基本の「き」
１．エンドトキシンとは
試験管中でライセート試薬と検体を混合し、37±1℃で60±2分間、振動を与えないようにブロックヒー ターなどで加温します。加温終了後ただちに試験管をゆっくりと180°転倒し、変形したり崩れたりしない ゲルが生じていれば陽性、生じていなければ陰性と判定します。検体を等倍希釈（通常2倍段階希釈）する ことにより、どの希釈倍数まで陽性判定されるかを調べます。陽性判定された最も大きい希釈倍数（あるい は最小濃度）をエンドポイントと呼びます。 Ｊ、Ｆシリーズ Jは日局対応試験が、FはFDA対応試験が行えるライセート試薬です。両者ともに(1→3)-β-D-グルカンにも 反応します。0.03 EU/mLと0.25 EU/mLの2種類のゲル化感度の商品があり、管理したいエンドトキシン 濃度によってどちらかを選択します。 また、1回の測定分の試薬が反応用バイアルにあらかじめ分注されているシングルタイプと、溶解して から反応用試験管に必要量小分けして使用するマルチタイプの2 種類があります。測定検体数が少ない 時はシングルタイプ、多い時はマルチタイプの使用をおすすめします。 マルチタイプでは、反応用試験管に0.1 mLの溶解したライセート試薬を小分けし、続いて0.1 mLの検体 を加えて混合します。シングルタイプでは、凍結乾燥されたライセート試薬が入った反応用バイアルに 0.2 mLの検体を加えて混合します。 ES-IIシリーズ 日局対応試験が行える、エンドトキシン特異的な（(1→3)-β-D-グルカンには反応しない）ライセート試薬 です。ゲル化感度は0.015 EU/mL となります。こちらもシングルタイプとマルチタイプがあります。 ES-FシリーズES-Ⅱシリーズと同じ組成 /製法の試薬ですが、FDA 認証を取得しているので、FDA対応試験が行えます。 エンドトキシン特異的なライセート試薬です。ゲル化感度は0.015 EU/mLとなります。シングルタイプと マルチタイプがあります。 HS-Tシングル 日局対応試験が行えるシングルタイプのライセート試薬です。ゲル化感度は0.015 EU/mL となります。 (1→3)-β-D-グルカンにも反応します。
（1）ゲル化法
対応試薬： エンドトキシン試験には、カブトガニの血球抽出物から作られるライセート試薬を用います。ライセート 試薬の反応を図3に示します。最初に、エンドトキシンにより、セリンプロテアーゼ前駆体であるFactor Cが 活性型に変換されます。同じくセリンプロテアーゼ前駆体であるFactor B、Proclotting enzymeが、順次 活性化を受け、最終的にCoagulogenが水解されてCoagulinとなり、不溶性のゲルを形成します。エンド トキシン試験では、本カスケード反応によるゲル化、比濁増加、もしくは合成基質の切断による黄色発色を 測定することにより、エンドトキシンを定量します。 通常のライセート試薬は、Factor Gを介した反応経路が存在するため、エンドトキシンに加えて(1→3)-β-D-グルカン（真菌の細胞壁構成成分）にも反応します。Factor Gを除くか作用をブロックすることで、 エンドトキシン特異的な試薬を調製する技術が開発されています。 図3の反応機構を利用した種々のライセート試薬や測定システムが市販されています。エンドトキシンを 測定する際には、必要な精度、試験の頻度や検体数などを考慮して適切なものを選びます。 日米欧の薬局方やFDAガイドラインには、エンドトキシン試験法として、ゲル化法、比色法、比濁法の３つ の方法が記載されています。以下、それぞれの方法について解説し、対応する弊社のライセート試薬の特徴、 使用例について述べます。２．エンドトキシン試験の種類と種々のライセート試薬
図１ リポ多糖の構造模式図 図２ Lipid Aの構造 （大腸菌型とサルモネラ型） 陽性（＋） 陰性（−） Endotoxin（LPS） Factor C Factor CFactor B Factor B Factor G Factor G
Proclotting enzyme Clotting enzyme
Coagulogen Coagulin ( ゲル化、濁度増加 ) または Peptidyl-pNA Peptide ＋ pNA（黄色発色） 図3 ライセート試薬の反応機構 内の各因子は活性型を示す (1 → 3)-β-D-Glucan 合成基質
7 6 エンドトキシンによるライセート試薬の活性化を発色合成基質が切断されることで検出する方法です。 P-ニトロアニリンの黄色発色を405 nm 付近の吸光度変化で測定するため、検体が405 nm付近に大きな 吸収を持つと適用できません。 試料の影響の有無は、既知量のエンドトキシンを添加した検体を測定し、添加したエンドトキシン量の 回収率を求める試験によって判断します。局方では反応干渉因子試験と呼ばれている試験です。添加した エンドトキシンの回収率が50 〜200%の範囲であれば試料は測定に影響せず、その試料濃度で測定した エンドトキシンの濃度は正しいということになります。試料の影響が見られた場合、試料を希釈して測定すると 影響を軽減することができます。ただし、試料を希釈すると、原液換算（希釈する前の液）で検出できる エンドトキシンの濃度が高くなってしまいます。希釈可能な倍数（最大有効希釈倍数）は、検出したい エンドトキシン濃度と用いるライセート試薬の検出感度によって決まります（反応干渉因子試験や最大有効 希釈倍数の詳細は、日本薬局方のエンドトキシン試験法を参照して下さい）。 カラー KYシリーズ 日局対応試験が行えるエンドトキシン特異的な比色法用の試薬です。 トキシノメーター®（BL2タイプ）と組み合わせてカイネティック-比色法が行えるシングルタイプと、トキシノ メーター®に加えてマイクロプレートリーダーによるカイネティック-比色法測定にも適用できるマルチタイプ があります。また、弊社の試薬の中では最も低濃度まで測定できる（高感度）という特長があります（検出 限界が、シングルタイプでは0.0002EU/mL、マルチタイプでは0.0005EU/mL）。 Endochrome-K 米国CHARLES RIVER社製でFDA対応試験が行え、(1-3)-β-D-グルカンにも反応する比色法試薬です。 マイクロプレートリーダーもしくはトキシノメーター®によるカイネティック-比色法測定で使用できます。 J、Fシリーズ、ES-Ⅱ、ES-Fシリーズ、HS-Tシングル ゲル化法で紹介した J、FシリーズのマルチタイプやES-Ⅱ、ES-Fシリーズ、HS-Tシングルとトキシノメー ター ®を組み合わせることにより、カイネティック-比濁法による測定ができます。 これらの試薬では、測定時間を60 分とすることで、カイネティック-比濁法のデータを採取しながら、 ゲル化法の判定も行うことができます。 ES-F/Plate FDA対応試験が行えるエンドトキシン特異的な比濁法用の試薬です。マイクロプレートリーダーによるカ イネティック-比濁法測定で使用できます。
3．使用器具について
エンドトキシン試験を行う際に使用する器具はエンドトキシン、β-グルカンフリーのものを使用しなけれ ばなりません。250℃以上で30 分以上の乾熱がエンドトキシン不活化には必要ですので、通常は乾熱滅菌 したガラス器具を使用します。微量に溶出する金属イオン（Fe、Al、 Ga、Cr 等）が試験に影響するので、 金属製器具の使用は避けて下さい。使い捨てのプラスチック器具等は、メーカーによる保証のあるものを 除いて、❶エンドトキシンの汚染がない、❷エンドトキシンが吸着しない、❸試験結果に影響する溶出物が ないことを、ガラス製器具と比較・確認してからご使用下さい。4．エンドトキシン標準品について
行おうとする試験目的にあったエンドトキシン標準品をご使用下さい。 • 医薬品の最終製品検査など、薬局方に準拠する試験を行う。 →必ず薬局方エンドトキシン標準品をご使用下さい。 • 原料検査、工程検査などを行う。米国で販売する薬剤（FDA規制）の最終試験を行う。 → Control Standard Endotoxin（CSE）の使用が可能です。5．試料の影響
エンドトキシン試験を実施する際には、試料が試験におよぼす影響（反応干渉因子）に注意が必要です。 反応干渉因子は２種類に大別されます。 ❶ライセート試薬に影響するもの ・蛋白変成作用のあるもの（酸、アルカリ、尿素、界面活性剤、有機溶剤） ・プロテアーゼ、プロテアーゼ阻害剤 ・キレート剤（反応に必要なCaやMgが捕捉される） ・比色法の場合、着色物質（405 nm付近に大きな吸収を持つ物質） ・比濁法の場合、濁り ❷エンドトキシンに影響するもの ・金属イオン（Fe、Al、Ga、Crイオン等。μM 程度でも影響あり） ・界面活性剤6．参考資料（もっとよく知るために）
・エンドトキシン試験の実施方法 ❶第16改正日本薬局方 4.01 エンドトキシン試験法 （2011） （http://jpdb.nihs.go.jp/jp16） 第16改正日本薬局方追補 エンドトキシン試験法 （http://jpdb.nihs.go.jp/jp16supp1） ・エンドトキシンの構造や作用機構など全般 ❷棚元憲一『エンドトキシンと医薬品の品質管理』 Bull. Natl. Inst. Health Sci., 126, 19-33（2008）（http://www.nihs.go.jp/library/eikenhoukoku/2008/019-033.pdf） ❸レギュラトリーサイエンス財団HP 技術情報 （http://www.pmrj.jp/hyojun/html/frm071.php）
（2）比色法
エンドトキシンによるライセート試薬の活性化を、ゲル化に伴う濁度変化で検出する方法です。 濁りが大きい検体には適用できません。（3）比濁法
対応試薬：9 8
リムルス ES（エンドトキシン特異的反応試薬）の原理
■ 特長 ●検体中の（1→3）-β-D-グルカンの影響を受けることなく､高感度でエンドトキシンの特異的な検出が可能。 ●日本薬局方収載｢エンドトキシン試験法 ｣に適合したキットおよび試薬。 ●ライセート試薬には和光で検定した日本薬局方標準エンドトキシン（JP-RSE）によるゲル化感度が力価 （EU/mL）として表示。 ●強固なゲルが形成されるよう工夫されているため、ゲル化判定が極めて容易。 ●トキシノメーター®による高感度分析が可能。 ●測定試料のpHの影響を受けにくいため、安定したエンドトキシン測定が可能。 ●水および各種の薬剤に使用可能。動物血液中､ウシ乳汁中のエンドトキシン測定に最適。 ■ トシキノメーターによる比濁法の実験例 ライセート試薬とエンドトキシンの反応カスケード機構は図1 に示すとおりです。反応系に（1→3）-β-D-グルカン * が存在する とファクター Gを活性化し、エンドトキシンがなくてもゲル化する、 いわゆる疑陽性反応が起こります。このままではエンドトキシンに 特異的とは言えません。当社が開発したリムルス ES は反応系に 大過剰の（1→3）-β-D-グルカン（カルボキシメチル化カードラン） を共存させることにより、β-グルカン自身によるライセート試薬の 活性化を阻害し､エンドトキシンを特異的に検出する方法です。 なぜ大過剰のβ- グルカンがそれ自身の反応を阻害するかに ついては、図 2に示すとおりβ-グルカンとライセート試薬の反応 領域が狭い範囲であることによります。しかしながら､エンドトキ シンとリムルスの反応は低濃度から高濃度までの広い領域で反応 し、大過剰のβ-グルカンの共存でも阻害されないことがリムルス ESに応用されています。（図3） 図 1 リムルステストの反応カスケード ＊：（1→3）-β-D-グルカンはカビ（真菌）やセルロース系のろ過膜から由来します。 図2 CM-カードランとLALの反応性 図3 リムルス HSおよびリムルス ESを用いたエンドトキシン測定に及ぼす CM-カードランの影響 トキシノメーター®の測定時間を99 分に設定し、 リムルス HSを用いて測定した ○：99 分以内にゲル化判定されなかったもの ●：ゲル化判定されたもの A ：リムルス HSを使用､B：リムルス ESを使用 測定はトキシノメーター®を用いて、測定時間99 分で行った ○：エンドトキシン希釈系列 ▲：1mg/mLの CM-カードランを含むエンドトキシン希釈系列リムルス ES-
II
シリーズ
エンドトキシン測定用試薬
0.0010 0.0100 0.1000 濃度値(EU/mL) 50.0 100.0 Tg (m in .) ゲ ル化時間 （ mi nCM-カードラン［log（mg/mL）］ エンドトキシン［EU/mL］ エンドトキシン［EU/mL］
） ゲ ル化時間 （ mi n ） A 0.001 0.01 0.1 1 10 0.001 0.01 0.1 1 10 -8 -7 -6 -5 -4 -3 -2 -1 0 1 100 50 50 10 5 ゲ ル化時間 （ mi n ） 50 10 5 10 5 B エンドトキシン 凝固酵素前駆体 凝固酵素 （1→3）-β-D-グルカン 活性化 活性化 活性化 ファクタ ー C ファクタ ー C ファクタ ー G ファクタ ーG ファクタ ー B コアギュローゲン コアギュリン ゲル形成 ファクタ ー B 0.0 25.0 50.0 75.0 100.0 125.0 150.0 175.0 200.0 時間（分） 40.00 50.00 60.00 70.00 80.00 90.00 100.00 透過光量比（％） 上記のCSE（コントロールスタンダードエンドトキシン）はE.coli UKT-Bの菌体から精製したエンドトキ シンの凍結乾燥品で1バイアル中に500ngのエンドトキシンと添加剤マンニトールとグリシンを含有し、 ロットごとに日本薬局方標準エンドトキシンで検定した参考値（EU/Vial）が記載されています。 （リムルス ES-II 試薬 2mL 用 ×3 バイアル、コントロールスタンダードエンドトキシン（CSE） 1 バイアル） （リムルス ES-IIシングル 1 検体 0.2mL 用 ×25 バイアル、コントロールスタンダードエンドトキシン（CSE） 1 バイアル） （リムルス ES-II 試薬 2mL 用 ×5 本） リ ム ル ス 関 連 試 薬 比濁法 ゲル化法 エンドトキシン特異的 日本薬局方 シングルテスト コード No. 品名 ラベル表示ゲル化感度（EU/mL） 内容量 希望納入価格（円） 295-51301 リムルス ES-II シングルテストワコー 0.015 25 回用 33,000 タイムコースデータ 検量線データ マルチテスト 299-51201 リムルス ES-II テストワコー 0.015 60 回用 35,000 マルチ単品 292-51213 カブトガニ血球抽出物 ES-II 凍結乾燥品 0.015 100 回用 55,000
11 10 ■ 特長 ●検体中の（1→3）-β-D-グルカンの影響を受けることなく、高感度でエンドトキシンの特異的な検出が可能。 ●米国輸出品目の最終製品試験に適用可能なキットおよび試薬。 ●ライセート試薬はFDAより製造承認。（U.S. License No.1762） ●本品はロットごとにUSP標準エンドトキシン（USP-RSE）によるゲル化感度検定力価（EU/mL）が表示。 ●強固なゲルが形成されるよう工夫されているため、ゲル化判定が極めて容易。 ●トキシノメーター ®による比濁法では1 ～ 0.001EU/mLまで広範囲・高感度に検出可能。 ●測定試料のpHの影響を受けにくいため、安定したエンドトキシン測定が可能。 ■ 比濁法における添加エンドトキシンの回収率 ■ 検量線情報
（PYROSTARTM ES-F 試薬1検体 0.2mL 用×25バイアル、コントロールスタンダードエンドトキシン（CSE）1バイアル）
（PYROSTARTM ES-F 試薬5.2mL 用×3バイアル、コントロールスタンダードエンドトキシン（CSE）1バイアル）
（PYROSTARTM ES-F 試薬5.2mL 用×5バイアル）
PYROSTAR ™ ES-F シリーズ
エンドトキシン測定用試薬
シングルテスト コード No. 品名 表示感度（EU/mL） 内容量 希望納入価格（円） 295-72301 Limulus Amebocyte Lysate 0.015 25 回用 39,000 PYROSTARTM ES-F SINGLE TEST リ ム ル ス 関 連 試 薬 50.0 0.0010 0.0100 0.1000 1.0000 100.0 回 帰 式 : log(Tg) = -0.289200 log(C) +1.13012 相関係数 : -0.9984 範囲 : 14.07-103.73min.(0.001-1 EU/ml, m=0.031623) 単位 : EU/mL 0.001000 0.01000 0.1000 1.000 103.8 103.8 103.6 49.2 49.0 48.8 25.2 25.2 25.2 14.0 14.0 14.2 濃度値（EU/mL） Tg ( 濃度値（EU/mL） min.) Tg ( min.) 比濁法 ゲル化法 エンドトキシン特異的 FDA 承認 マルチテスト 293-72101 Limulus Amebocyte Lysate 0.015 150 回用 90,000 PYROSTARTM ES-F MULTI TEST マルチ単品 299-72201 Limulus Amebocyte Lysate 0.015 250 回用 140,000 PYROSTARTM ES-F MULTI TEST13 12 PYROSTARTM ES-F/Plateは96ウェルマイクロプレート専用の比濁法ライセート試薬です。 吸光プレートリーダーを用いることにより、簡単に短時間で多検体の同時測定が可能です。 定量範囲は10～0.01EU/mLと幅広く、水の試験はもちろん希釈が必要な各種薬剤の試験にも適用できます。 ■ 特長 ●米国食品医薬品局（FDA）の認可を取得（U.S. License No.1762）。 ●米国輸出品目における最終製品試験にも適用可能。 ●検体中の（1→3）-β-D-グルカンの影響を受けず、エンドトキシンを特異的な検出が可能。 ●1well当たりサンプル量50ulで測定できるため、貴重なサンプルでも少量で測定可能。 ■ 検量線情報 ■ 比濁法における添加エンドトキシンの回収率
（PYROSTARTM ES-F/Plate試薬 2.0ml×4バイアル（160 回用）、Control Standard Endotoxin（CSE）1バイアル）
PYROSTAR ™ ES-F/Plate
エンドトキシン測定用試薬
リ ム ル ス 関 連 試 薬 回帰式 log(Ta)= 0.250983 log (C) +1.10963 相関係数 0.9955 範囲 7.66ー 43.60 min.( 0.01 ー 10 EU/mL, m=0.31623 ) 単位 EU/mL 0.0100 0.1000 1.0000 10.0000 濃度値(EU/mL) 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 45.0 Ta(m in .) : : : : 比濁法 エンドトキシン特異的 FDA 承認 94 81 105 106 96 87 127 90 96 89 87 103 65 85 コード No. 品名 検量範囲（EU/mL） 内容量 希望納入価格（円） 545-10031 Limulus Amebocyte Lysate 0.01-10 EU/mL 160 回用 56,000 PYROSTARTM ES-F/Plate14 15 平行線定量法とは ■ 特長 ●生物学的製剤、特にアルブミン製剤やアルブミンを含有した製剤に最適な試薬。 ●アルブミン含有量6%から測定可能。 ●生物学的製剤基準の「エンドトキシン試験法」で要求される「平行線定量法」に適用可能な試薬。 ●日本薬局方収載「エンドトキシン試験法」に適合したキットおよび試薬。 ●日本薬局方のエンドトキシン標準品（JP-RSE）で検定したゲル化感度（EU/mL）をラベル表示。 ●強固なゲルが形成されるよう工夫されているので、ゲル化判定が極めて容易。 ●トキシノメーター ®法（比濁時間分析法）による高感度分析が可能。 ●測定試料のpHの影響を受けにくいため、安定したエンドトキシン測定が可能。 ■ 実験例 アルブミン製剤（25%）にエンドトキシンを添加後、注射 用水で希釈し、アルブミン濃度 6.25 ～ 0.1%までの 測定結果を平行線定量。 （平行線定量法ソフト LS-MAXMASTER BP1.0 使用） ■ 測定レポート ■ 専用ソフトウェアの設定画面 専用ソフトウェア「トキシマスター® QC7」または「トキシマスター® QC7 ER/ES」では、生物学的製剤基準のエンドトキシン 試験法に記載された平行線定量法によるデータ処理機能をサポートし、HSAやインターフェロンのほか、様々な生物学的 製剤のエンドトキシン試験に利用できるように設計されています。分散分析の結果と製剤内在エンドトキシンの定量値 および生データを、画面およびプリンタに出力できます。 一般には、あるサンプルの内在エンドトキシンを定量するには検量線 法が用いられています。この方法では、標準品のエンドトキシンの各濃 度に対するゲル化時間をプロットし、用量反応直線（検量線）を作成 し、これに希釈サンプルによるゲル化時間を当てはめ希釈サンプルの エンドトキシン量を求めます。そして求められた希釈サンプル中の エンドトキシン量に希 釈 倍率を乗じて、サンプルの内在エンド トキシン定量値としています。 この方法には、エンドトキシン濃度の変化にともなうゲル化時間の 変化はサンプルでも標準品でも同じ割合であり、サンプルをどんな 希釈倍数（ただしエンドトキシンの検出限界内）で定量しても求めら れるサンプル中のエンドトキシン定量値は同じになる、という仮定が 含まれます。これはすなわち、標準希釈系列の用量反応直線とサンプ ル中のエンドトキシン濃度による用量反応直線は平行であるという ことを暗黙的に認めていることに相当します。 しかし、生物学的製剤等では反応系によっては、前述の仮定が正しく ないこともあります。2つの用量反応直線が平行でない場合、測定に 用いたサンプルの希釈率によって、製剤の内在エンドトキシン量の 計算値が大きく異なってしまうことになります。平行線定量法は、標準 品とサンプルのそれぞれの希釈系列による用量反応直線を作成し、 統計的手法を用いて標準品とサンプルの用量反応直線の平行性を 検定することによって、両用量反応直線が互いに平行である場合に、 サンプル中の被検物質（エンドトキシン）量を標準品に対する相対価 値として定量する方法です。 検体の濃度点数や繰り返し数など、検体設定内容をチェックするテンプレート。 チェック機能で各種試験項目に準拠した試験をサポートします。 測定終了後に、必要な試験結果を表示・プリントアウト。平行線定量法に準拠した レポートを作成できます。 ● 10 希釈→ 1/10 濃度とならない場合
リムルス ES-
Ⅲ
エンドトキシン測定用試薬
（リムルス ES- Ⅲ試薬 2mL×5 本） 例えば、10 倍に薄めたサンプルに標準検量線を適用して、 本当に 1/10 の濃度値が導出されるかどうかを確認後、 標準検体に対する 相対力価としてサンプル中の被検物質の濃度を求めます。 図 2 検量線法によるエンドトキシンの測定 ● 10 希釈→ 1/10 濃度となる場合 図 3 平行線定量法によるエンドトキシン量の測定 図1 平行線定量法の実験例 平行 平行でない リ ム ル ス 関 連 試 薬 比濁法 ゲル化法 エンドトキシン特異的 日本薬局方 生物学的製剤基準 マルチ単品 コード No. 品名 表示感度（EU/mL） 内容量 希望納入価格（円） 295-51801 カブトガニ血球抽出物 ES-III 凍結乾燥品 0.03 100 回用 55,00017 16 アクセサリーキット 294-33311 PS アクセサリーキット 1 セット 20,000 シングルテスト コード No. 品名 内容量 希望納入価格（円） 299-54501 リムルス PS シングルテストワコー 20 回用 98,000 ■ 特長 ●パイロセップ™に試料中のエンドトキシンを吸着させて濃縮するので、共存物質の影響を受けずに、 微量のエンドトキシンを特異的に測定することが可能。 ●エンドトキシンはエタノール中でもパイロセップ™に吸着するため、通常のリムルステストでは検出不可能 な脂溶性試料でも、エタノールに溶解できればエンドトキシンの測定が可能。（例：脂溶性ビタミン、油脂） ●ライセート試薬は測定に必要な数だけ使用できるので、無駄がありません。 ■ 測定原理 パイロセップ™（水不溶性担体にスペーサーを介して ヒスチジンを結合させたアフィニティー吸着体で、エン ドトキシンを特異的に吸着する）を充てんしたキャピラ リーカラムに、試料中のエンドトキシンを吸着させます。 試料を洗い流した後、吸着したエンドトキシンをライセ ート試薬と反応させて、試料中のエンドトキシンの定量 を行います。測定はトキシノメーター®で行います。 ■ 応用例 A．透析液中エンドトキシン測定への応用 市販の腹膜透析液ダイアニールPD4（バクスター社）、人工腎臓用補液サブラッドA 及びB（扶桑薬品）各 5.0mLにUSP標準エンドトキシンを添加した後、0.1M酢酸でpHを5付近に調製して検体としました。これ らのエンドトキシン濃度をパイロセップ™法で測定し、添加エンドトキシンの回収率を求めました。 パイロセップ™法を使用することにより、透析液中のエンドトキシンが0.1EU/Lから検出可能となりました。 ■ その他の応用例 エタノール、シリコンオイル、大豆油、オリーブ油、ステアリン酸、卵黄レシチン、オイルアジュバンドのワクチン、 アルブミン製剤、凝固因子製剤（第8因子）、インターフェロン製剤、アンチスロンビンIII 製剤、免疫グロブリ ン製剤、その他、エタノールに溶解できる試料は測定可能。 B. 脂溶性ビタミン中のエンドトキシン測定の応用 脂溶性ビタミンであるビタミン D、E、Kをエタノール で溶解し、USP 標準エンドトキシンを添加した後、パ イロセップ™法でエンドトキシン濃度を測定、添加 したエンドトキシンの回収率を求めました。 パイロセップ™法を用いることにより、これまでリム ルス試薬では測定不可能だった脂溶性ビタミン中の エンドトキシンが測定可能となりました。 パイロセップ ™ 懸濁液を軽く 振り混ぜながら吸引し、内容液 全量をキャピラリーカラムに充 てんする。 試料を吸引したキャピラリーカラムに、 LAL 溶解液で溶解したLAL ES 試薬を 吸引する。 LAL ES 試薬をパイロセップ ™ ゲルと一緒に、LAL ES 試薬が 入っていた試験管にゆっくり 排出する。 パイロセップ ™を充てんしたキャピラリー カラムに、試料を吸引する。 ・エンドトキシンは吸着され、共存物質は パイロセップ ™を素通りして除かれます。 ・試料のpHは3～7に、イオン強度は0.05 以下になるようにしてください。 ・試料がリムルス反応に阻害などの影響を 与える場合は、洗浄液を通して洗浄します。 検量線（検体量：5.0mL）
No. 設定濃度値（EU/L） Tg（min.） 平均 Tg（min.） 1 1.000 53.0 53.60 53.4 54.4 2 2.000 41.6 41.53 41.2 41.8 3 10.00 26.6 26.07 26.0 25.6 4 100.0 14.6 14.60 14.8 14.4 表1 パイロセップ™法における腹膜透析液・補液の エンドトキシン回収率 検体 エンドトキシン エンドトキシン 添加量（EU/L） 回収率（％） ダイアニールPD4 0.1 80 1.0 72 サブラッドA 0.1 144 1.0 102 サブラッドB 0.1 108 1.0 118 表2 パイロセップ™法におけるエタノール溶解脂溶性 ビタミン のエンドトキシン回収率 ビタミン 濃度 エンドトキシン （mg/mL） 回収率（％） D2 10 170 E 10 91 20 83 K 10 99 20 68 （内容） 20mL注射器（針なし）×12本、三方コックR 型×12個、専用アダプター× 20 個、目玉クリップ×12個、FALCON 2058ポリスチレンチューブ（5mL）× 25本、FALCON 2057ポリスチレンチューブ（14mL）×25本、試験管立て（50 穴）×1個、手順書 1部
リムルス PS シングルテスト
ワコー
エンドトキシン測定用試薬
256 16 4 2 0.1 1 10 EC-6 濃度値（EU/L） 100 1000 ゲ ル 化 時 間 （min ） 測定原理 パイロセップ™の模式図 測定方法 ■ 内容 （1）LAL ESシングル試薬：カブトガニ血球抽出物の凍結乾燥品 20バイアル（0.3mL用） （2）パイロセップ™懸濁液（リン酸緩衝液に懸濁） 20バイアル（0.77mL） （3）LAL溶解液 2バイアル（7mL） （4）洗浄液 4バイアル（11mL） （5）検体希釈用緩衝液 4バイアル（10mL） （6）キャピラリー（シリコンチューブ付き） 20本 ・本品には、注射器、3方コック、専用アダプターは入っておりません。 別途、PSアクセサリーキット（294-33311)をお求めください。 ・エンドトキシンは終濃度が 0.05EU/mLとなるように添加 リ ム ル ス 関 連 試 薬 比濁法 エンドトキシン特異的 日本薬局方19 18 ■ 特長 ● 日本薬局方収載「エンドトキシン試験法」に適合したキットおよび試薬。 ● ライセート試薬には日本薬局方標準エンドトキシン（JP-RSE）によるゲル化感度検定力価（EU/mL）が表示。 ● 強固なゲルが形成されるためゲル化転倒法による判定が容易です。 ● （1→3）-β-D-グルカンにも反応。
リムルス J シリーズ
エンドトキシン測定用試薬
（リムルス J/HS-J 試薬5.2mL 用 1バイアル、コントロールスタンダードエンドトキシン（CSE） 1バイアル） シングルテスト ※ ゲル化法専用 290-22041 リムルス Jシングルテストワコー 0.25 25 回用 26,000 292-22241 リムルス HS-Jシングルテストワコー 0.03 25 回用 30,000 （リムルス J/HS-J 試薬 1 検体 0.2mL 用 ×25 バイアル、コントロールスタンダードエンドトキシン（CSE） 1 バイアル） （リムルス J/HS-J 試薬5.2mL 用 1バイアル） （リムルス HS-T 試薬 1検体 0.2mL 用×25バイアル、コントロールスタンダードエンドトキシン（CSE） 1バイアル） （リムルス F/HS-F 試薬5.2mL 用 1バイアル）リムルス F シリーズ
エンドトキシン測定用試薬
■ 特長 ● 米国輸出品目の最終製品試験に適用可能なキットおよび試薬。 ● ライセート試薬はFDAより製造承認。（U.S. License No.1197） ● 本品はロットごとにUSP標準エンドトキシン（USP-RSE）によるゲル化感度検定力価（EU/mL）が表示。 ● 強固なゲルが形成されるためゲル化転倒法による判定が容易です。 ●（1→3）-β-D-グルカンにも反応。 （リムルス F 試薬5.2mL 用 1バイアル、コントロールスタンダードエンドトキシン（CSE） 1バイアル） （リムルス F/HS-F 試薬 1検体 0.2mL 用×25バイアル、コントロールスタンダードエンドトキシン（CSE） 1バイアル） リ ム ル ス 関 連 試 薬 比濁法 ゲル化法 日本薬局方 ゲル化法 日本薬局方 比濁法 ゲル化法 FDA 承認 ゲル化法 FDA 承認 シングルテスト コードNo. 品名 表示感度（EU/mL） 内容量 希望納入価格（円） 299-53401 リムルス HS-Tシングルテストワコー 0.015 25回用 30,000 マルチテスト 290-21941 リムルス Jテストワコー 0.25 50回用 23,000 296-22141 リムルス HS-Jテストワコー 0.03 50回用 24,000 マルチ単品 298-22341 カブトガニ血球抽出物J 0.25 50回用 18,000 294-22441 カブトガニ血球抽出物HS-J 0.03 50回用 19,000 シングルテスト ※ゲル化法専用 297-52601 リムルス Fシングルテストワコー 0.25 25回用 26,000 299-52801 リムルス HS-Fシングルテストワコー 0.03 25回用 30,000 マルチ単品 298-52511 カブトガニ血球抽出物 F 0.25 50回用 18,000 290-52711 カブトガニ血球抽出物 HS-F 0.03 50回用 19,000 マルチテスト コードNo. 品名 表示感度（EU/mL） 内容量 希望納入価格（円） 293-52701 リムルス HS-Fテストワコー 0.03 50回用 24,00021 20 ■ 特長 ●ライセート試薬と発色合成基質が一体製剤されており、試薬溶解後（シングルテストは試料を混合する だけ）試料と混合するだけで反応を開始させることが可能。 ●溶解後の試薬の安定性にすぐれ、ブランクの反応性が低く抑制。 ●検体中の（1→3）-β-D-グルカンの影響を受けず、エンドトキシンを特異的に検出可能。 ●検量範囲が広く、ほとんどの場合、試料の希釈が不要。（検出限界がシングルタイプは0.0002 EU/mL） ●高感度のため、希釈法により試料中の反応阻害・促進物質の影響を低減。 ●トキシノメーター®ET-6000 他（ET-301 BL2 以降の機種）による定量が可能。また、マイクロプレート リーダーによる測定も可能。 ■ 原理 エンドトキシンによる本試薬の発色機構は、ライセート中に含まれるセリンプロテアーゼ前駆体が順次活 性化され、最後に凝固酵素が黄色発色合成基質を水解し、発色基（pNA）が遊離して、黄色の発色を呈する 原理に基づいています。（エンドトキシン特異的検出の原理は9ページ参照）
リムルスカラー KY シリーズ
エンドトキシン測定用試薬
（リムルスカラー試薬 2mL 用×3バイアル、コントロールスタンダードエンドトキシン（CSE） 1バイアル） ※プレートリーダー法で120 回用（1well当たり50μL） （リムルスカラー試薬 1検体 0.2mL 用×25バイアル、コントロールスタンダードエンドトキシン（CSE） 1バイアル） （ 内の各因子は活性型を示す） 発色基 Boc-Thr-Gly-Arg-pNA pNA エンドトキシン リポ多糖 LPS B因子 凝固酵素 C因子 B因子 凝固酵素 前駆体 発色 合成基質 C因子 リムルスカラー試薬の発色カスケード機構 トキシノメーター® エンドトキシン濃度（EU/mL） マイクロプレートリーダー エンドトキシン濃度（EU/mL） 活性化時 間（ min .） 活性化時 間（ min .） リ ム ル ス 関 連 試 薬 比色法 エンドトキシン特異的 日本薬局方 プレートリーダー法 トキシノメーター法 トキシノメーター法 ■ 特長 ● 米国輸出品目の最終製品試験に適用可能なキットおよび試薬。 ● ライセート試薬はFDA製造承認。 ● ライセート試薬と発色合成基質が一体製剤されており、試薬溶解後、試料と混合するだけで反応を開始 させることが可能。 ● ライセート試薬＋ CSEとライセート試薬のみの2種類の商品形態が選択可能。 ● 検量範囲が広く、ほとんどの場合、試料の希釈が不要。 ● 高感度のため、希釈法により試料中の反応阻害・促進物質の影響を低減。 ● トキシノメーター®、マイクロプレートリーダーによる測定が可能。 ● （1→3）-β-D-グルカンにも反応Endochrome -K
TMエンドトキシン測定用試薬
トキシノメーター® エンドトキシン濃度（EU/mL） マイクロプレートリーダー エンドトキシン濃度（EU/mL） 活性化時 間（ min .） 活性化時 間（ min .） プレートリーダー法 トキシノメーター法 比色法 FDA 承認チャールス・リバー・ラボラトリーズ
CHARLES RIVER LABORATORIES
マルチテスト
コード No. メーカーコード 品名 検量範囲（EU/mL） 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 519-87321 R1708K Endochrome-K™ 50-0.005 256 test kit 96,000 (Endochrome- K™ 試薬 3.2mL 用 ×8 バイアル、コントロールスタンダードエンドトキシン (CSE)×2 バイアル、LAL 溶解液 30mL×3 本 )
513-87341 R1710K Endochrome-K™ 50-0.005 320 tests 110,000 (Endochrome- K™ 試薬 3.2mL 用 ×10 バイアル ) 516-87331 R17100K Endochrome-K™ 50-0.005 3200 tests 980,000 （Endochrome- K™ 試薬 3.2mL 用 ×100 バイアル） マルチテスト 291-53101 リムルスカラー KY テストワコー 5-0.0005 60 回用※ 54,000 シングルテスト コード No. 品名 検量範囲（EU/mL） 内容量 希望納入価格（円） 291-53601 リムルスカラー KYシングルテストワコー 5-0.0002 25 回用 50,000
23 22 バッファー、各種標準品 コードNo. 品名 規格 内容量 希望納入価格（円） 201-10421 0.1Mトリス-塩酸緩衝液（PH7.3） LAL溶解用 5mL×10 12,500 293-16541 コントロールスタンダードエンドトキシン（CSE） E.coli UKT-B株製 500ng 6,000 531-13371 USP標準エンドトキシン E.coli 0113：H10株 10000EU 照会 638-01021 エンドトキシン標準品 E.coli UKT-B株製 ※ 照会 ※ロットにより変動 エンドトキシンインジケーター コード No. メーカーコード 品名 内容量 希望納入価格（円） 517-87121 EVV2K エンドトキシンインジケーター2,000EU 12バイアル 32,000 513-87081 EVV10K エンドトキシンインジケーター10,000EU 12バイアル 32,000 516-87071 EVV100K エンドトキシンインジケーター100,000EU 12バイアル 32,000 513-87101 EVV1M エンドトキシンインジケーター1million EU 1バイアル 8,500 510-87111 EVV2.5M エンドトキシンインジケーター2.5million EU 1バイアル 12,500 510-87091 EVV10M エンドトキシンインジケーター10million EU 1バイアル 12,500
エンドトキシン試験関連試薬
エンドトキシンインジケーター
乾熱滅菌バリデーション用試薬
チャールス・リバー・ラボラトリーズ
CHARLES RIVER LABORATORIES
エンドトキシンインジケーターは、乾熱滅菌のバリデーションやモニタリング用として開発されました。 乾熱滅菌工程の有効性は、乾熱滅菌前後のエンドトキシン値を測定することで確認できます。
SLP 試薬セット
Silkworm Larvae Plasma 試薬
ペプチドグリカンおよび β- グルカン検出用
カイコ（Bombyx morui）の体液中にはフェノール酸化酵素前駆体（ProPO）カスケードと呼ばれる生体 防御機構が存在し、ペプチドグリカン（PG）および（1→3）-β-Dグルカン（β-グルカン）によって反応が 開始され、最終的にフェノール酸化酵素（PO）が活性化されます。POの活性化の機構は、複数のセリンプ ロテアーゼの活性化を含むカスケード機構であると推測されておりますが、現在のところ十分には解明され ておりません。このカスケード機構は、異物侵入の際に昆虫体内で認められるメラニン形成に重要な役割を 果していると考えられております。 SLP試薬は、カイコの体液を無菌的に採取・調製した、ProPOカスケードの因子をすべて含んだ凍結乾燥 品です。本試薬はPGおよびβ-グルカンによって活性化され、基質剤に含まれるDOPA（L-3,4-ジヒドロキシ フェニルアラニン）を酸化し、メラニン色素を生成します。PGはほとんどの細菌の細胞壁に、β-グルカン も多くの真菌の細胞壁に認められる成分であることから、生成したメラニン色素を指標として、各種微生物 の検出が可能です。 SLP試薬の活性化機構は図1のように考えられております。すなわち、PGまたはβ-グルカンがそれぞれ の認識タンパク（PGRPおよびβGRP）と結合することにより、ProPOカスケードの反応が開始され、最終的 にPOが活性化されます。活性化したPOによって基質剤中に含まれるDOPAが酸化され、結果として黒色の メラニン色素が生じます。カブトガニ血球抽出物（ライセート試薬）で検出することのできるエンドトキシン はSLPのカスケード機構を活性化しませんが、ライセート試薬では検出できないPGをSLP試薬で検出する ことができます（図1）。 SLP試薬は、各種細菌由来のPGおよびβ-1、3-グルコシド結合を持つβ-グルカンに強く反応しますが、 グラム陰性菌の細胞壁成分であるリポ多糖（エンドトキシン）にはほとんど反応しません。 βGRP 未知の因子 PPAE PGRP Pro-PPAE ProPO DOPA ドーパクロム メラニン PO （1→3）-β-D - グルカン ペプチドグリカン原理
図1 カイコ血液のフェノール酸化酵素前駆体カスケード リ ム ル ス 関 連 試 薬25 24 PGはグラム陽性菌のみならずグラム陰性菌にも存在するため、SLP試薬は、グラム陽性・陰性にかかわら ず、広く一般の細菌に反応します。また、真菌由来のβ-グルカンにも反応することから、SLP試薬は微生物 全般に反応すると考えられます。これらのことにより、エンドトキシン及びβ-グルカンに反応するライセート 試薬とSLP試薬の併用で、検体中の微生物の種類を予測できる可能性が考えられます。 ■ 特長 1．高感度でペプチドグリカンおよびβ-グルカンを測定可能。 2．特別な測定装置を必要としない目視判定法による測定可能。 3．マイクロプレートリーダーや並列型比濁時間分析装置トキシノメーター®を用いることにより、 精度よく、高感度にペプチドグリカンおよびβ-グルカンの定量が可能。 4．本品は、冷蔵（2～10℃）で18か月以上安定。 ■ 用途 1．ペプチドグリカンの構造活性相関、生合成、代謝、病因的意義の解明 2．水質汚染の指標 3．人工透析液の微生物汚染対策 4．医薬品、生物製剤、遺伝子工学製品などの菌体成分混入の検出 5．昆虫の生体防御反応機構の解明 ■ 内容 ● SLP試薬セット 1．SLP 試 薬 1バイアル 3mL用 感度：目視判定法（30℃、1時間反応）によるエンドポイント（PG及びβ-グルカン）をロット ごとに表示。 2．基 質 剤 1バイアル 3mL用 DOPAを含有 3．基質溶解液 1バイアル 3mL用 グッド緩衝液を含有 ● SLP-HSシングル試薬セット 1．SLP-HS（Silkworm Larvae Plasma High Sensitive） 0.2mL用×20バイアル 感度： 10pg/mL（PG） 1pg/mL（カードランアルカリ溶解液） （トキシノメーター®（30℃）で100 分以内に検出） 2．SLP-Diluent 1.0mL用×20バイアル 3．Standard（Digested Peptidoglycan from S. aureus） 0.5mL用×1バイアル 価格 コード No. 品名 規格 内容量 希望納入価格（円） 297-51501 SLP 試薬セット 微生物検出用 3mL 用 39,000 293-58301 SLP-HS シングル試薬セット 微生物検出用 20 回用 51,000 （*1）: （1→3）-β-D-グルカン （*2）: Micrococcus luteus 由来のペプチドグリカン 1μg/mLを含有 SLPを用いたPG並びにβ-グルカンの測定法として、トキシノメーター®法、マイクロプレートリーダー法、 目視判定法があります。 トキシノメーター®およびマイクロプレートリーダーでは、活性化に伴って生じる色素量を吸光度変化とし て捉え、吸光度があらかじめ設定したしきい値に達するまでの反応時間を活性化時間（Ta、またはonset time）とし、Taを指標にSLP活性化物質（PGおよびβ-グルカン）を定量します。この原理は、トキシノメータ ー®を用いてエンドトキシンを測定する場合と同様です（図2）。トキシノメーター®法を用いた測定例を図4 に、マイクロプレートリーダーを用いた原理（図3）と測定例を図5に示します。 目視判定法では、一定時間反応させた後、反応液の色調の変化を観察することにより判定を行ないます。 この方法は、ライセート試薬におけるゲル化転倒法と同様の方法ですが、反応液の色が変化するため判定 が容易であること、振動の影響を受けないこと等で優れています。
測定方法
図2 測定原理： 測定開始からR（t）がRthになるまでのTaを 測定します。（Th： 判定しきい値） 図 3 測定原理：測定開始から OD ＝ 0.01 に達する時間を測定 図4 トキシノメーターR法 図5 マイクロプレートリーダー法SLP 試薬セット
リ ム ル ス 関 連 試 薬 関連商品 コード No. 品名 規格 内容量 希望納入価格（円） 030-09903 カードラン（*1） 生化学用 1g 1,800 162-18101 ペプチドグリカン（*2） 生化学用 2mL 5,40027 26
LPS（リポポリサッカリド）
LPS（リポポリサッカライド、リポ多糖、内毒素）はグラム陰性菌の外膜に存在している成分です。様々な生物 活性発現や細胞間コミュニケーションに大きな役割を果たしており、LPSを用いた自然免疫研究、生体防 御機能の研究が盛んに行われています。 1500 Product A (Pipet) Water 0.05％ TEA 本品 Solution for ExtractionWater 0.05％ TEA 本品 Solution for Extraction
Water 0.05％ TEA 本品 Solution for Extraction
Water 0.05％ TEA 本品 Solution for Extraction
Endotoxin(mEU/product ) Endotoxin(mEU/product ) Endotoxin(mEU/product ) Endotoxin(mEU/product
) Product C (Pipet) Product D (Serum tube) Product B (Pipet) 1000 500 50 100 50 0 25 0 50 25 0 0 ■ 使用方法 1．エンドトキシン検出用抽出液の調製 本品1バイアル（10mL）をエンドトキシンフリー水190mLと混合し、20 倍希釈して使用します。 2．使用方法 エンドトキシン検出用抽出液を一定量とり、用具等の検体を浸漬、または検体に添加し軽く攪拌した後、 約1時間室温で放置します。再び軽く攪拌し、抽出されたエンドトキシンを測定します。 ■ 参考文献 1）井上勝二、高岡文、土谷正和、松浦脩二：日本動物実験代替法学会第6回大会要旨集、110（1992） 2）井上勝二、原田和明、土谷正和、松浦脩二：日本防菌防黴学会第21回大会要旨集、44（1994） 医療用具等のエンドトキシン試験には従来、水や生理食塩水による抽出法が用いられていますが、これら の方法では必ずしも有効に抽出されていないことが判ってきました。本品は人血清アルブミン（HSA）を含有 したエンドトキシンフリーの抽出液（20 倍濃縮液）で、水や生理食塩水では抽出できないエンドトキシンも 抽出することが可能です。特に血液やたんぱく質を含有した液体と接触する用具のエンドトキシン試験に は、本品の使用を推奨します。
医療用具等のエンドトキシン試験に最適
各種抽出液を用いた市販滅菌済用具のエンドトキシン汚染検出エンドトキシン検出用抽出液
リ ム ル ス 関 連 試 薬 Porphyromonas gingivalis LPS超遠心品 120-06351 Lipopolysaccharide, from P. gingivalis ATCC33277 — 2mg 35,000 Salmonella LPS超遠心品 124-05651 Lipopolysaccharide, from S. minnesota 1114 細胞生物学用 5mg 18,000 121-05661 Lipopolysaccharide,from S. minnesota R595 (Re mutant) 細胞生物学用 5mg 18,000 コードNo. 品名 規格 内容量 希望納入価格（円） 293-51601 エンドトキシン検出用抽出液（20倍濃縮液） エンドトキシン検出用 10mL×4 15,000 ■ 特長 ● 精製法により2種類の製品を用意。 フェノール抽出品： Westphal法（フェノール抽出法）による精製品 超遠心品： フェノール抽出品をさらに超遠心で2回精製した製品 Escherichia coli LPS フェノール抽出品 コード No. 品名 規格 内容量 希望納入価格（円） 120-05131 Lipopolysaccharide, from E.coli O26 細胞生物学用 25mg 14,000 127-05141 Lipopolysaccharide, from E.coli O55 細胞生物学用 25mg 14,000 125-05201 Lipopolysaccharide, from E.coli O111 細胞生物学用 25mg 14,000 124-05151 Lipopolysaccharide, from E.coli O127 細胞生物学用 25mg 14,000 Escherichia coli LPS 超遠心品 121-05161 Lipopolysaccharide, from E.coli O26 細胞生物学用 5mg 18,000 128-05171 Lipopolysaccharide, from E.coli O55 細胞生物学用 5mg 19,000 222-01901 Lipopolysaccharide, from E.coli O86a 細胞生物学用 5mg 20,000 126-05471 Lipopolysaccharide, from E.coli O103 細胞生物学用 5mg 17,000 125-05181 Lipopolysaccharide, from E.coli O111 細胞生物学用 5mg 18,000 122-05191 Lipopolysaccharide, from E.coli O127 細胞生物学用 5mg 17,000 129-05461 Lipopolysaccharide, from E.coli O157 細胞生物学用 5mg 19,000 Proteus LPSフェノール抽出品 124-05271 Lipopolysaccharide, from P.vulgaris OX2 細胞生物学用 25mg 15,000 121-05281 Lipopolysaccharide, from P.vulgaris OX19 細胞生物学用 25mg 15,000 128-05291 Lipopolysaccharide, from P.mirabilis OXK 細胞生物学用 25mg 15,000 Campylobacter jejuni LPSフェノール抽出品 128-05671 Lipopolysaccharide, from C. jejuni Penner O:19 細胞生物学用 5mg 17,000 Helicobacter pylori LPS超遠心品 120-05871 Lipopolysaccharide, from H. pylori CA2（胃がん患者由来菌） 細胞生物学用 2mg 30,000 229-01911 Lipopolysaccharide, from H. pylori GU2（胃潰瘍患者由来菌） 細胞生物学用 2mg 30,000
Berdetella pertussis Tohama 超遠心品
29 28 ■ 特長 ● 優れた流量特性と他社デバイスより高いろ過処理量。 ● 低タンパク吸着性でサンプルロスが最少化。 ●γ線滅菌により、残留EOGによる潜在的汚染を排除。 ● 水溶液中のバイオバーデンとパイロジェンの除去性能を高めたポジダインフィルターを使 用。
アクロディスクシリンジフィルター
エンドトキシン除去フィルター
日本ポール（株）
■ 特長 ●水、バッファー、中性糖液、一部の生物溶液からエンドトキシンを除去可能。 ●USP生物学的安全性試験、In Vivo <88>に適合。 ●γ線滅菌済み。ムスタング E アクロディスク
エンドトキシン除去フィルター
日本ポール（株）
アクロディスクシリンジフィルター コード No. 品名 内容量 希望納入価格（円） 360-02571 P-L 4908アクロディスクシリンジフィルター（ポジダイン0.2μM） 50個 20,000 ムスタング E アクロディスク コード No. 品名 内容量 希望納入価格（円） 365-06161 MSTG25E3 ムスタングEアクロディスク 10 個 19,000 仕様 ポアサイズ 0.2μm 材質 フィルター ムスタングE ハウジング ポリプロピレン 接続 メス・ルアーロック（入口） オス・ルアースリップ（出口） メンブレンベッドボリューム 0.12ｍL 許容使用温度 21～24℃（0.55MPa） 38℃（0.21MPa） 標準的な差圧 1mL/分時、0.07bar（7kPa、1psi）以下 仕様 ポアサイズ 0.2μm 材質 フィルター ポジダイン（正荷電ナイロン6,6） ハウジング ポリプロピレン 接続 メス・ルアーロック（入口） オス・ルアースリップ（出口） 有効ろ過面積 2.8cm2 許容使用温度 60℃（210kPa） ● テニクニカルデータ 品名 粒子サイズ（μm） 吸着容量（μg/mL） 排除限界分子量 ET クリーン S 45-105 185 <103 ET クリーン L 53-125 480 ≧ 2×106 セルファイン®シリーズの選択的エンドトキシン除去ゲル「ETクリーン」は、セルロース粒子に安全性の高 いε-ポリリジンを共有結合で固定化した、工業的スケールでの使用が可能な新しいタイプのエンドトキシン 除去剤です。 ■ 特長 ● セルロースベースゲルの水酸基にスペーサーを介し、リガンドのアミノ基が共有結合され、アルカリ処理 においても高い耐久性。 ● エンドトキシンのみを吸着して、目的とするタンパク質は通過させる高い選択性。 ● リガンドであるε-ポリリジンはStreptomyces albulusが発酵生産する、リジンのホモポリマーで食品 添加物としても幅広く利用されており、安全性が高い。 各種タンパクを汚染しているエンドトキシンの除去をバッチ法で行った結果セルファイン
®ETクリーン
選択的エンドトキシン除去用クロマトグラフィー充填剤
Removal of LPS from a Protein Solution by ET-Clean
Sample solution ET-Clean S ET-Clean L
（μ=0.05, pH7.0） （μ=0.40, pH7.0）
Protein pI LPS conc. Remain Recovery of Remain Recovery of in protein LPS Protein LPS Protein solution (pg/mL) (%) (pg/mL) (%) (pg/mL) BSA 4.9 32000 45 99 <10 97 γ-Globulin 8.4 5600 20 99 <10 97 CytochromeC 10.6 1500 15 99 <10 98
JNC（株）
コード No. 品名 内容量 希望納入価格（円） 635-10181 682 985 324 セルファイン® ETクリーンS 10ｍＬ 23,700 638-10171 681 984 324 セルファイン® ETクリーンL 10ｍＬ 23,700 631-10183 682 985 326 セルファイン® ETクリーンS 50ｍＬ 43,300 634-10173 681 984 326 セルファイン® ETクリーンL 50ｍＬ 43,300 637-10185 682 985 328 セルファイン® ETクリーンS 500ｍＬ 257,500 630-10175 681 984 328 セルファイン® ETクリーンL 500ｍＬ 257,500 634-14791 ミニカラムセルファイン® ETクリーンS 1mL×5 22,700 637-14781 ミニカラムセルファイン® ETクリーンL 1mL×5 22,700 635-16781 ミニカラムセルファイン® ETクリーンS 5mL×1 22,700 638-16771 ミニカラムセルファイン® ETクリーンL 5mL×1 22,700 周 辺 機 器31 30 ■ 特長 ● エンドトキシンフリー。 （ご要望により試験成績書を発行） ● 個別包装。 ● 包装フィルムから粉塵が出ないのでクリーンルームで 安心して使用可能。 ●γ線照射済み。 エンドトキシン試験用試験管、アルミキャップ及びホールピペット コード No. 品名 規格 内容量 希望納入価格（円） 292-32751 リムルステストチューブ-S（アルミキャップ付） φ12×75mm 10本×8 16,000 293-26551 リムルステストチューブ-S（エンドトキシンフリー） φ12×75mm 100本 12,000 293-28251 アルミキャップ-S（エンドトキシンフリー） φ14.7×75mm 10個×10 11,200 295-25151 ホールピペット（エンドトキシンフリー） 5.2mL 用 5 本 20,000 ピペッター コードNo. 品名 可変ステップ 内容量 希望納入価格（円） 513-64901 フィンピペットF2 2～20μL 0.1μL 1本 29,800 517-64921 フィンピペットF2 20～200μL 1.0μL 1本 29,800 514-64931 フィンピペットF2 100～1000μL 1.0μL 1本 29,800 スターターキット コード No. 品名 内容量 希望納入価格（円） 291-49051 エンドトキシン試験スターターキット 1セット 65,000 （内容） フィンピペットデジタル20～200μL×1、フィンピペットデジタル100～1000μL×1、 バイオクリーンチップ ワコー ®200（100本入）×1、 バイオクリーンチップ ワコー ®1000（100本入）×1、試験管立て（50穴）×1 ・なお、本キットには測定用試薬は含まれておりません。
