IgM型HLAクラスI抗体の血小板輸血不応状態への関与 PTR患者における免疫グロブリンクラス別HLA抗体陽性率

原 著

IgM型HLAク

ラス1抗 体 の血 小板 輸 血 不 応 状 態へ の 関与

-PTR患

者 にお け る免 疫 グ ロブ リ ンク ラス別HLA抗

体 陽性 率

斉 藤 敏l)3) 玉 井 豊 広2) 太 田 正 穂3) 大 田 智1) 小 松 政 義1) 平 林 盛 人l) 玉 木 啓 子1) 瀬 下 秀 幸l) 清 水 寿l) 浅 村 英 樹3) 福 島 弘 文3) 野 村 節 夫l) l)長野県 赤 十 字血 液 セ ンター 2)オリ ンパ ス株 式 会社 3)信州大 学 医学 部, 法 医学 (平成17年10月20日 受付) (平成l7年l2月19日 受理)

HLAク ラ ス1抗 体 が 血 小 板 輸 血 不 応 状 態(platelet transfusion refractoriness: PTR)に 関 与 す る こ

と に つ い て は 数 多 くの 報 告 が あ る が, IgM型 のHLAク ラ ス1抗 体(lgM-HLA抗 体)のPTRへ の 関

与 に つ い て の 報 告 は ほ と ん ど な い. そ こ で, PTR患 者121人 の 凍 結 保 存 血 清 のHLA抗 体 ス ク リ ー ニ

ン グ を, 磁 性 粒 子 を 用 い たMixed passive hemagglutination assay(M-MPHA)法, F10w cytometric reagents for detecti0n of panel-reactive antibody against HLA C1ass I antigens(F1owPRA)法,

Anti-human immunoglobulin 1ymphocyte cytotoxity test(AHG-LCT)法 に よ り行 い, IgM-HLA抗 体 のPTR

へ の 関 与 に つ い て は, 輸 血24時 間 後 の 補 正 血 小 板 増 加 数(CCI24hours)に よ る 血 小 板 輸 血 効 果 か ら推 測

し た. そ の 結 果, M-MPHA法 に よ り121症 例 中48症 例 か らIgM-HLA抗 体 が 検 出 さ れ た. 一 方,

Flow-PRA法 に よ り検 出 で き たIgM-HLA抗 体 は, そ れ ら48例 中35例, AHG-LCT法 で は20例 の み で あ っ

た. 血 小 板 輸 血 効 果 は, IgM-HLA抗 体 を 保 有 す る, 48症 例 中7症 例74輸 血 に お い て 判 定 で き た. IgM-HLA抗 体 の 特 異 性 に 対 応 す る 抗 原 を 持 た な い 輸 血 で は, CCI24hoursが19.7±4.7(×109/L)を 示 し 輸 血 効 果 を 得 る こ と が で き た が, 対 応 す る 抗 原 を 持 つ 輸 血 で は, CCI24hoursが20±1.9(×109/L)を 示 し 輸 血 効 果 を 得 ら れ な か っ た. PTR患 者 に 高 頻 度 に 存 在 す るIgM-HLA抗 体 は, PTRの 原 因 に な る と 考 え ら れ, そ の 半 数 以 上 はAHG-LCT法 に よ り検 出 で き な か っ た. M-MPHAをHLA抗 体 ス ク リ ー ニ ン グ, 血 小 板 輸 血 の 際 の 交 差 試 験 に 用 い る こ と で, PTR症 例 の 原 因 解 析 と 輸 血 効 果 の 向 上 に 貢 献 で き る 可 能 性 が あ る. キ ー ワ ー ド: IgM-HLA抗 体, IgG-HLA抗 体, 血 小 板 輸 血 不 応 状 態(PTR), 磁 性 粒 子 混 合 受 身 赤 血 球 凝 集 法(M-MPHA), F10wPRA は じめ に 患 者 が 保 有 す るHLAク ラス1抗 体 の 免 疫 グ ロ ブ リ ン(lg)ク ラス につ い て は い くつ か の 報 告 が あ り, IgM型 のHLAク ラ スI抗 体(lgM-HLA抗 体) がHLAク ラ ス1抗 体 全 体 の38∼71%存 在 す る こ と が 報 告 さ れ て い る1)∼3). 一 般 に, IgM-HLA 抗 体 は, リ ンパ 球 細 胞 毒 試 験(LCT)も し くは抗 ヒ ト免 疫 グ ロ ブ リ ン-LCT(AHG-LCT)に よ り検 出 で き る と 考 え ら れ, ま た, 低 温 反 応 性 で あ り1), 多 く は 自 己 抗 体 で あ る こ と か ら4), 血 小 板 輸 血 不 応 状 態(p1atelet transfusion refractoriness: PTR) へ の 関 与 等, 臨 床 的 に は 重 要 視 さ れ て こ な か っ た.

そ の た め 多 くの 施 設 で は, HLA抗 体 ス ク リ ー ニ ン

グ に 際 し, non-cytotoxic HLA抗 体 の 検 出 の た め

に, LCT法 に 加 え, Monoclona1 antibody-specific immobilization of platelet antigens(MAIPA),

Lymphocyte immunofluorescence test(LIFT), Flow Cytometric Reagents for Detection of Panel-Reactive antibody against HLA CIass I antigens

(F1owPRA)等 の 高 感 度 法 を 用 い て も, IgG型 の HLAク ラ ス1抗 体(IgG-HLA抗 体)の み を 検 出 の 対 象 と し, IgM-HLA抗 体 は 検 出 対 象 と し て い な

い5).

一 方, Millerら, Godeausら _{は, IgM -HLA抗 体} のPTRへ の 関 与 の 可 能 性 を 示 唆 し1)2), ま た 藤 野 ら は, IgM-HLA-A24抗 体 に よるPTR症 例 を報 告 した6). 今 回, IgM-HLA抗 体 がPTRの 原 因 と して 強 く 関 与 して い る 可 能 性 と, PTRに 関 与 す るlgM-HLA抗 体 の 多 くがAHG-LCT法 で は 検 出 で き な い こ とが 明 らか に な っ た の で 報 告 す る. 方 法 1. 対 象 2002年4月 か ら2005年3月 ま で の3年 間 で, 長 野 県 内 の 医 療 機 関 か らPTRの 原 因 究 明 の た め, 検 査 依 頼 が あ っ た121症 例(男 性49, 女 性72) の 保 存 凍 結 血 清 に つ い て, HLA抗 体, HPA抗 体 ス ク リ ー ニ ン グ を 行 っ た. 2. HLAタ イ ピ ン グ 患 者 お よ び ドナ ー のHLAク ラ ス1タ イ ピ ン グ は, 日 赤 共 通 ト レ イ お よ び 自 家 製 ト レ イ を 用 い, LCT法7)に よ り 行 っ た. 3. 抗 体 ス ク リ ー ニ ン グ 1)HLA抗 体 12種 類 の0型 リ ンパ 球, 血 小 板 を 用 い, 抗 ヒ ト IgM抗 体 感 作 磁 性 粒 子 な ら び に 抗 ヒ トIgG抗 体

感 作 磁 性 粒 子 を 使 用 す るMixed passive hemag-glutination assay(lgM-M-MPHA, IgG-M-MPHA)

法8)∼l0), F1owPRA法11), AHG-CT法12)の4法 に

よ り一 次 ス ク リ ー ニ ン グ を 行 っ た. ま た, 一 次 ス ク リ ー ニ ン グ の 結 果 か ら, 症 例 ご と に 特 異 性 同 定 に 必 要 な 抗 原 を 持 つ パ ネ ル を 新 た に 選 択 し,

IgM-M-MPHA法, IgG-M-MPHA法, AHG-LCT法 の

3法 に よ る 二 次 ス ク リ ー ニ ン グ を 行 っ た.

IgM-M-MPHA法 に お け る 感 作 温 度 と 感 作 時 間

は, AHG-LCT力 価8倍 のIgM型HLA-A2抗 体 を

用 い て 至 適 条 件 を 検 討 後, 37℃60分 と し た.

FlowPRA法 は フ ロ ー サ イ トメ ト リ ー(FCM:

FACSCalibur: Becton Dickinson&Co., Sunny-vale, CA)を 使 用 し た. 二 次 抗 体 と し て, FITG conjugated goat F(ab')2 anti-human IgM(Bio-source, CA: IgM-F10wPRA)とFITC-conjugated goat F(ab')2anti-human IgG(Biosource, CA

IgG-F1owPRA)を 用 い, IgM-HLA抗 体

とIgG-HLA抗 体 を 別 々 に ス ク リ ー ニ ン グ し た.

2)HPA抗 体

HPA-la, 2a, 2b, 3a, 3b, 4a, 4b, 5a, 5b,

6a, 6b, Nak・ 抗 原 を 網 羅 し た12種 類 の0型 血

小 板 を ク ロ ロ キ ン 処 理 し, IgM-M-MPHA法,

IgG-M-MPHA法 に よ る ス ク リ ー ニ ン グ を 行 っ た.

4. HLA適 合 血 小 板(HLA-PC)供 給 時 の 交 差 試

験

IgM-M-MPHA法, IgG-M-MPHA法, AHG-LCT

法 を 用 い た. 5. 輸 血 効 果 の 判 定 輸 血24時 間 後 のCCI(補 正 血 小 板 増 加 数)値 を 次 の式 に よ り求 め 判 定 した(CCI24hours). CCI(109/L)=[輸 血 後 血 小 板 数(109/L)-輸 血 前 血 小 板 数(109/L)]× 体 表 面積(m2)÷ 輸 血 血 小 板 数(101l) ま た, IgM-HLA抗 体 が 存 在 した 症 例 に つ い て は, 過 去 に さか の ぼ り, 輸 血 に用 い られ た 血 小 板 製 剤(PCs)のHLA型 とそ のPCsに よる 輸 血 効 果 を調 べ, IgM-HLA抗 体 の 特 異 性 に 対 応 す る 抗 原 を持 つPCsが 輸 血 され た 症 例 のCCI24hoursと, 対 応 す る 抗 原 を 持 た な いPCsが 輸 血 さ れ た 症 例 の CCI24hoursを比 較 検 討 し た. 結 果 1. IgM-M-MPHA検 査 至 適 条 件 の検 討 37℃60分 ま た は37℃90分 の 感 作 条 件 に よ り, 32倍 希 釈 ま で のHLA-A2抗 体 を検 出 で き た が, 4℃, 22℃ で は, そ れ ぞ れ4倍, 8倍 希 釈 ま で の HLA. A2抗 体 しか 検 出 で きな か っ た(Table 1).

2. 抗 体 ス ク リー ニ ン グ

IgM-M-MPHA法 に よ り121症 例 中48症 例 (39.7%)か らIgMH: LA抗 体 が検 出 され, そ の う ち25症 例 で はlgG-M-MPHA法 に よ りIgG-HLA 抗 体 も検 出 され た(Table 2). これ ら48例 中,

IgM-FlowPRA法 の み 陽 性3例, IgM-F1owPRA法 と IgG-F1owPRA法 と も に 陽 性32例, IgG-F1owPRA 法 の み 陽 性8例 で あ っ た. IgM-FlowPRA法 で は, IgM-M-MPHA法 に よ り検 出 さ れ た48例 中13例 のIgM-HLA抗 体 が 検 出 で き な か っ た. 逆 に, IgM-FlowPRA法 に よ り検 出 さ れ た35例 のIgM-HLA 抗 体 は す べ て, IgM-M-MPHA法 に よ り 検 出 す る こ と が で き た. 一方, AHG-LCT法 で は, IgM-M-MPHA法 に よ り検 出 さ れ た48例 の う ち, 20例 の IgM-HLA抗 体 し か 検 出 で き な か っ た. IgM-M-MPHA法 ま た はIgM-Fl0wPRA法 が 陽 性, も し く は 両 法 が 陽 性 の 場 合 をIgM-HLA抗 体 陽 性 と し, IgG-M-MPHA法 ま た はIgG-F10wPRA 法 が 陽 性, も し く は 両 法 が 陽 性 の 場 合 をIgG-HLA 抗 体 陽 性 と す る こ と に よ り ク ラ ス 分 け し たHLA 抗 体 陽 性 数 は, IgM-HLA抗 体 の み 陽 性 が8例 (9%), IgM-HLA抗 体+IgG-HLA抗 体 陽 性 が40 例(43%), IgG-HLA抗 体 の み 陽 性 が45例(48%) で あ っ た(Table3). IgM-M-MPHA法 が 陽 性 で, IgG-M-MPHA法 が 陰 性 の23症 例 中, AHG-LCTに よ り, 既 に 抗 HLA-A2が 同 定 さ れ て い た症 例A22を 除 く12症 例 に お い て, IgM-M-MPHA法 を用 い る こ とで, こ れ まで 同 定 す る こ とが で き な か っ たHLA抗 体 の 特 異 性 を 同定 す る こ とが で きた(Tab1e4). ま た, こ れ ら13症 例 のIgM-M-MPHA法 に よ る 陽 性 反 応 は, 症 例A1を 除 き, 血 小 板 を ク ロ ロ キ ン処 理 す る こ と に よ り全 て 陰性 化 し た.

M-MPHA法 に よ り, IgM-HLA抗 体 とIgG-HLA 抗 体 が 検 出 さ れ た25症 例 中13症 例 に お い て, IgM-HLA抗 体 とIgG-HLA抗 体 の 特 異 性 を そ れ

ぞ れ 同 定 で きた(Tab1e5). IgMELA抗 体 とIgG-HLA抗 体 の 特 異 性 が 同 じ症 例 が5症 例, 特 異 性 が 全 く異 な る症 例 が7症 例, 一 部 が 異 な る症 例 が1 症 例 で あ っ た. IgM-HLA抗 体 とIgG-HLA抗 体 の 特 異 性 が 同 じ症 例 の 男 女 比 は2: 3で あ っ た が, 特 異 性 の 異 な る 症 例 で は 全 て が 女 性 で あ っ た. IgM-, IgG-M-MPHA法 の 全 て の 陽性 反 応 は, 血 小 板 を ク ロ ロ キ ン処 理 す る こ と に よ り陰 性 化 し た. 3-輸 血 効 果 IgM-M-MPHA法 に よ り, IgM-HLA抗 体 の 特 異 性 が 同 定 で き た26症 例 中7症 例 のPCs輸 血 に お い て, IgM-HLA抗 体 の 特 異 性 に 対 応 す る 抗 原 陰 性PCsと, 対 応 す る 抗 原 陽 性PCsの 輸 血 効 果 を 検 討 で き た(Table6). IgM-HLA抗 体 の 特 異 性 に 対 応 す る 抗 原 陰 性 のPCSで は, CCI24hoursが19.7±4.7 (×109/L)を 示 し 輸 血 効 果 を 得 る こ と が で き た が, IgM-HLA抗 体 の 特 異 性 に 対 応 す る 抗 原 陽 性 の PCsで は, CCI24hoursが20±1.9(×109/L)を 示 し輸 血 効 果 を 得 ら れ な か っ た. 抗 体 ス ク リ ー ニ ン グ に よ り, IgM-HLA-B5 Cross Reactive Group Antigen(CREG)抗 体 の み Table 1 Optimum conditions for the

IgM-M-MPHA screening test using IgM anti-HLA-A2 se-rum

が 検 出 さ れ, 輸 血 に 際 し交 差 試 験 を 実 施 し た 症 例

A6に お い て, IgG-M-MPHA法 とAHG-LCT法 が

と も に 陰 性;IgM-M-MPHA法 が 陽 性 を 示 し た3 例 のPCs輸 血 で は, い ず れ もCCI24hoursが0を 示 し 輸 血 効 果 が 得 ら れ な か っ た が, 陰 性 を 示 し た3例 のPCs輸 血 で はCCI24h。ursが そ れ ぞ れ, 22.7, 19.6, 27.8(×lO9/L)を 示 し 輸 血 効 果 を 得 ら れ た (Table7). 考 察 1. IgM-HLA抗 体 の 検 出 至 適 温 度 IgM-HLA抗 体 の 検 出 至 適 温 度 に つ い てMil1er らは, ア イ ソ トー プ を用 い た抗 グ ロ ブ リ ン試 験 に お い て4℃ が 最 適 で あ っ た と報 告 し て い る が1), 今 回, 我 々が 用 い たIgM-M-MPHA法 で は, 比 較 を 行 っ た3種 類 の温 度 の うち, 37℃ に お い て 最 も検 出 感 度 が 高 か っ た. しか し, 検 討 に 用 い たIgM-HLA抗 体 がHLA-A2抗 体1種 類 だ け で あ る こ と か ら, さ らに多 数 のIgM-HLA抗 体 を 用 い た 検 討

Table 3 Summary of the estimated immunoglobulin classes of 93 HLA antibodies detected in 121 sera samples from PTR patients

Table 4 Specificities of IgM-HLA antibodies positive on IgM-MPHA and negative on IgG-M-MPHA

+: M-MPHA with chloroquine-untreated platelets +: M-MPHA with chloroquine-treated platelets

が 必 要 と考 え られ る. 2. 抗 体 ス ク リ-二. ン グ IgM-HLA抗 体 は, AHG-LCT法 に よ り検 出 で き る と考 え られ て い た が, 今 回 の解 析 に よ り, AHG-LCT法 で はIgM-M-MPHA法 で 検 出 で き た48例 中20例 し か 検 出 す る こ とが で き な か っ た. IgG-HLA抗 体 検 出 に お い て はF1owPRA法 が 最 も感 度 が 高 く, M-MPHA法 はFCMを 用 い たLIFT 法 と 同 程 度 と 報 告 さ れ て い る13). し か し, IgM-HLA抗 体 検 出 に お い て のIgM-F10wPRA法 で は, IgM-M-MPHA法 で 検 出 で き た48例 中35例 が 検 出 で き た だ け で あ っ た.

HLAク ラ スI抗 体 のIgク ラ ス 別 検 出 頻 度 に つ

い て は, Mi11erら1), Godeauら2), Laundyら3)に

よ り, IgM抗 体 の み 陽 性 が そ れ ぞ れ28%, 46%,

23%, IgM抗 体+IgG抗 体 と も に 陽 性 が そ れ ぞ れ

Table 5 Specificities of IgM- and IgG-HLA antibodies positive on IgM- and IgG-M-MPHA

+: M-MPHA with chloroquine-untreated platelets +: M-MPHA with chloroquine-treated platelets

*: Number of positive panels/Number of tested panels

Table 6 Response (mean+SD) to platelet transfusion in patients with IgM HLA antibodies

36%, 8%, l5%, IgG抗 体 の み 陽 性 が そ れ ぞ れ 28%, 46%, 62%と 報 告 さ れ て い る. 今 回 の解 析 に お い て は, IgM抗 体 の み 陽 性 が8例(9%), IgM 抗 体+IgG抗 体 と も に 陽 性 が40例(43%), IgG 抗 体 の み 陽 性 が45例(48%)で あ り, IgM抗 体 単 独, あ るい はIgG抗 体 を伴 っ たIgM-HLA抗 体 が 52%の 高 率 で検 出 さ れ た. 単 独 のIgM抗 体 が9% と他 の 報 告 に比 べ 少 な い の は, IgG-HLA抗 体 検 出 に, 検 出 感 度 の 高 いFl0wPRA法 を用 い た こ とに よ る と考 え ら れ る. またMi1lerらl)は, HLAク ラ ス1抗 体 の7%にIgM+IgA抗 体 が 存 在 す る こ と も 報 告 し て い る が, 本 研 究 に お い て はIgAの HLAク ラ ス1抗 体 に つ い て は 検 討 を加 え な か っ た. 血 小 板 を ク ロ ロ キ ン処 理 して も 陰 性 化 し な い IgG-HLA抗 体 の 存 在 が 知 ら れ て い る が, IgM-HLA抗 体 に お い て も, 血 小 板 を ク ロ ロ キ ン処 理 し た 後 に 反 応 が 陰 性 化 し な いHLA抗 体 が 存 在 し た. 症 例A1で は, リ ンパ 球 に よ る吸 収 試験 に よ り HPA-3b抗 体 が 同 定 さ れ, HPA-3b陰 性 血 小 板 を 用 い た ス ク リー ニ ン グ に よ りHLA-A2抗 体 の 存 在 が 推 定 さ れ た が, ク ロ ロ キ ン処 理 後 に もHLA-A2抗 体 に対 す る反 応 は 陰 性 化 し な か っ た(デ ー タ未 提 示). 一 次 ス ク リー ニ ング にお い て は, 用 い た20パ ネ ル のHPA-3b陰 性 パ ネ ル が 全 てHLA-A2抗 原 陽 性 で あ っ た た め, ク ロ ロ キ ン処 理 後 も 全 パ ネ ルが 陽性 反 応 を示 し, 抗 体 の 同定 が で き な か っ た. 多 くの症 例 にお い て は, HLA抗 体, HPA 抗 体 の識 別 に ク ロ ロキ ン処 理 血 小 板 を用 い る こ と は有 用 と考 え られ る が, こ の よ うな 珍 しい症 例 も 存 在 す る た め, ク ロ ロキ ン処 理 血 小 板 の 反 応 だ け でHLA抗 体, HPA抗 体 の 識 別 を行 うべ きで は な い と考 え られ る. IgMELA抗 体 とIgG-HLA抗 体 が と も に 検 出 され, そ れ ぞ れ の 特 異 性 が 同 定 で き た13症 例 に お い て, IgM4{LA抗 体 とIgG-HLA抗 体 の 特 異 性 が 同 じ症 例, 全 く異 な る 症 例, 一 部 が 異 な る症 例 の 3群 が 存 在 した. 免 疫 抗 体 産 生 機i序に お い て, IgM 抗 体 が 最 初 に 産 生 さ れ, そ の 後IgGに ス イ ッチ す るの が 一 般 的 と考 え られ て い る こ とか ら, 今 後, IgMELA抗 体 の 不 変 性 も し く はIgG-HLA抗 体 へ の ス イ ッチ につ い て, 症 例 ご との経 時 的 変 化 を 追 う こ と に よ っ て, 3群 の 詳 細 につ い て 検 討 を加 え る 必 要 が あ る と考 え る. 3. 輸 血 効 果 血 小 板 輸 血 効 果 の 判 定 は, 輸 血1時 間 後, 16∼ 24時 間 後 の 血 小 板 増 加 数 の 比 較 をCCIも し く は%recoveryに よ り行 う こ と が 一 般 的 で あ る14). Bishopら は, 輸 血 後1時 間 と20時 間 の 血 小 板 増 加 数 を 比 較 し, 両 者 に お い て 血 小 板 増 加 数 に 影 響 を 与 え る 臨 床 要 因 に 差 は な く, CCI20h。ursはCCIlhour の 約64%(r=0.67, P<0.0O1)と 報 告 し て い る がl5), 免 疫 学 的 要 因 に よ るPTRを 正 し く 評 価 す る た め に は, CCI1hourとCCI24hoursの 解 析 を 行 う 必 要 Table 7 Response to platelet transfusion in patient A6 with IgM-HLA-B5CREG antibodies

+: M-MPHA with chloroquine-untreated platelets +: M-MPHA with chloroquine-treated platelets

が あ る. し か し 多 くの 医 療 機 関 で は, HLA-PC 輸 血 効 果 の 向上, 患 者 の 負 担, 血 算 の保 険 点 数 等 の 理 由 か ら, 輸 血 後l時 間 の血 小 板 数 測 定 が 行 わ れ て い ない. そ の た め, 本 研 究 にお い て はCCI24hours の み の 解 析 し か 行 え な か っ た. 今 後, 免 疫 学 的 PTRと 考 え られ る症 例 の 解 析, 改 善 の た め に は, 更 な る 臨 床 サ イ ド との 密 接 な 連 携 が 必 要 と考 え る. 抗 イ デ ィ オ タ イ プIgM抗 体 は, 移 植 免 疫 学 にお い て重 要 な 役 割 を果 た す こ とが 知 られ て お り, 腎 臓 移 植 に お い て は, IgM-HLA抗 体 が 原 因 の 交 差 試 験: 陽性 は 拒 絶 に影 響 せ ず, む しろ 安 全 で 長 期 生 着 の成 功 の 可 能 性 を示 唆 して い る と さ え言 わ れ て い る16). 一 方, 肝 臓 移 植 に お い て のIgM-HLA抗 体 が 原 因 の 交 差 試 験 陽性 は, 悪 影 響 を与 え る こ と が 報 告 さ れ て い る17). 血 小 板 輸 血 にお け るIgM-HLA抗 体 の 臨 床 的 意 義 につ い て は, Godeauら が, 50人 の血 小 板 輸 血 患 者 につ い て, prospectiveにHLA抗 体 の 産 生 を解 析 し た結 果, PTRへ の影 響 に つ い て は 更 な る検 討 が 必 要 で あ る と報 告 し て い る2). ま た, Mi11erら は, 赤 血 球 抗 体 同 様 に, 低 温 反 応 性 のHLA抗 体 は 臨 床 的 に意 味 が な い 可 能 性 が あ る と しな が ら も, IgMaLA抗 体 の み が 検 出 さ れ た4症 例 に お い て PTRが 存 在 した こ とか ら, IgM-HLA抗 体 がPTR に 関 与 して い る 可 能 性 もあ り, 更 な る検 討 が 必 要 で あ る と コ メ ン ト して い るl). わ が 国 に お い て は 藤 野 らが, IgM-HLA. A24抗 体 に よ るPTR症 例 を 大 変 ま れ な 症 例 と して 報 告 し て い る が6), 今 回 の 解 析 に よ り, 輸 血 効 果 が 検 討 で き たIgM-HLA抗 体 を持 つ7症 例 全 て にお い て輸 血 効 果 が 得 られ な か っ た こ とか ら, IgM-HLA抗 体 は 多 くの 症 例 に お い てPTRの 原 因 と な る可 能性 が 高 い. CCI24hoursが5.4(×109/L)で, 標 準 偏 差 が ±4.7 と大 き い症 例B23で は, 患 者 がIgG-HLA抗 体 を 有 し て い た こ と か ら, 患 者 のHLA-B61抗 原 の CREG抗 原 で あ るHLA-B60のHLA-PCが 輸 血 さ れ, は じめ の4回 は輸 血 効 果 が 得 られ た. しか し, 5回 目以 降 のHLA-B60のHLA-PCで は 輸 血 効 果 を得 る こ とが で きな か っ た(デ ー タ未 提 示). これ は, 新 た にIgM-HLA-B60抗 体 が 産 生 さ れ た た め と考 え られ る. この よ うに, 頻 回 にHLA-PC輸 血 が され る患 者 に お い て は, CREG抗 原 に対 して も 抗 体 が 産 生 さ れ る場 合 が あ り, IgM-M-MPHA法 を 用 い る こ と で, 新 た に 産 生 し は じ め たlgM-HLA抗 体 を検 出 で きる 可 能 性 が あ る. ま た, PTR患 者 に お い て 検 出 さ れ た48例 の IgM-HLA抗 体 の う ち, 特 異 性 が 同 定 で き た の は 26例 で, 残 りの22例 で は 特 異 性 が 同 定 で き な か っ た. この よ う に抗 体 の特 異 性 が 同 定 で きな い 症 例 や, 症 例A6の よ う に, 他 の 方 法 で は 検 出 で き な いHLA抗 体 を保 有 して い る 症 例 に対 す るPCs 輸 血 に 際 し, IgM-M-MPHA法 を 交 差 試 験 に 用 い る こ とで, これ ま で 輸 血 効 果 を予 測 で き なか っ た 症 例 に お い て も, 有 効 な輸 血 が で きる と考 え られ る. 結 語 IgM-HLA抗 体 がPTR患 者 の52%に 存 在 し, IgG-HLA抗 体 と 同様 にPTRの 原 因 に な る可 能 性 が あ る こ と が 示 唆 さ れ た. IgMELA抗 体 の 半 数 以 上 がAHG-LCT法 で は 検 出 で き な か っ た こ と か ら, IgM-M-MPHAをHLA抗 体, HPA抗 体 ス ク リー ニ ン グ, 血 小 板 輸 血 の 際 の 交 差 試 験 に用 い る こ とで, PTR症 例 の 原 因 解 析 と輸 血 効 果 の 向 上 に 貢 献 で き る可 能 性 が あ る. 謝辞: 論文の ご高閲 を賜 りま した メルボル ン赤十字血 液 センターのLindaCantwe11先 生, HLA適 合血小板輸血 に際 し, 輸血効果の判定 にご協力 くださいま した長野県 内 13病 院の先生方に感謝 いたします. 第53回 総会推薦論文(本 論文の要 旨は平成17年5月28 日, 第53回 日本輸血学会総会(浦 安)で 発 表 した.) 文 献

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スI抗 体 の 方 法 別 検 出感 度 と血 小 板 輸 血 患 者 に お け る 方 法 別 抗 体 検 出率-AHG-LCT, LIFT,

PIFT, M-MPHAお よびFlowPRAの 比 較 日輸

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PLATELET TRANSFUSION REFRACTORINESS ASSOCIATED WITH IGM-HLA-CLASS I ANTIBODIES

-IMMUNOGLOBULIN CLASS HETEROGENEITY OF HLA CLASS I ANTIBODIES IN PTR PATIENTS

Satoshi Saito1)3), Toyohiro Tamai2), Masao Ota3), Satoshi Ota1), Masayoshi Komatsu1), Morito Hirabayashi1), Keiko Tamaki1), Hideyuki Seshimo1), Hisashi Shimizu1),

Hideki Asamura3), Hirofumi Fukushima3)and Setsuo Nomura1) 1)Japanese Red Cross Nagano Blood Center

2)Diagnostic Systems Department, Olympus Corporation 3)Department of Legal Medicine, Shinshu University School of Medicine

Although HLA-class I antibodies (Abs) are considered one of the major obstacles in

posttransfu-sion platelet increments for platelet transfuposttransfu-sion refractory (PTR) patients, whether IgM-HLA-class

I Abs are associated with accelerated platelet destruction and transfusion failure remains unclear.

Ac-cordingly, we assessed the frequency of IgM-HLA-class I Abs development in 121 PTR patients using

the magnetic-mixed passive hemagglutination assay (M-MPHA), flow cytometric reagents for

detec-tion of panel-reactive antibody against HLA Class I antigens (FIowPRA) and the anti-human

immu-noglobulin lymphocyte cytotoxity test (AHG-LCT). The relationship between IgM-HLA-class I Abs

and PTR was assessed by calculating 24 h post-transfusion corrected platelet count increments

(CCI24hours).

Result showed that IgHLA-class I Abs were detected in 48 of 121 patients using the

M-MPHA. Only 20 and 35 of these 48 IgM-HLA-class I Abs were detected using the AHG-LCT and

F1owPRA respectively. In 7 of 48 patients positive for IgM-HLA-class I Abs, 74 transfusions without

corresponding antigen for specificities of IgM-HLA-class I Abs had CCI24hours of 19.7+4.7 (x109/L). In

contrast, 38 transfusions with corresponding antigens for specificities of the same Abs had CCI24hours

of

2.0+1.9 (x109/L). Collectively, IgM-HLA-class I Abs were detected in 39.7% of PTR patients, and

were considered to play a role in mediating refractoriness to platelet transfusions. In 28 of 48 cases,

IgM-HLA-class I Abs could not be detected by the AHG-LCT. Detection of IgM-HLA-class I Abs

us-ing the M-MPHA may clarify the as yet unknown mechanism of the pathogenesis of PTR.

Key words: IgM-HLA-class I antibodies, IgG-HLA-class I antibodies, Platelet transfusion refractori-ness (PTR), Magnetic-mixed passive hemagglutination assay (M-MPHA), Flow Cy-tometric Reagents for Detection of Panel-reactive antibody against HLA Class I antigens