471
平成20年 9 月20日
Table 1 GeneticalanalysisofV.parahaemolyticusO1:K36
ORF8 GS-PCR
trh1,2 tdh Serotype Country visited
Date ofIsolation Strains(RIMD)
＋
＋
－
＋ O1:K36 Vietnam
2006/1/5 22123040
＋
＋
－
＋ O1:K36 Vietnam
2006/1/7 22123042
＋
＋
－
＋ O1:K36 Vietnam
2006/1/21 22123048
＋
＋
－
＋ O1:K36 Thailand
2006/3/24 22123133
＋
＋
－
＋ O1:K36 Vietnam
2006/7/2 22123267
＋
＋
－
＋ O3:K6 Thailand
1996/5/22 2210633a)
a)RIMD 2210633 wasused ascontrolofpandemicstrain.
海外旅行者から分離された新しい血清型組み合わせを 有する腸炎ビブリオ
1）
大阪大学微生物病研究所感染症国際研究センター・病原微生物資源室，
2）同 細菌感染分野
松山 純子
１）余 明順
１）本田 武司
２）（平成 20 年 3 月 4 日受付）
（平成 20 年 5 月 14 日受理）
Key words : Vibrio parahaemolyticus, serotype, travelerʼs diarrhea
序 文
われわれは関西空港検疫所の協力のもとに，海外旅 行帰国者から分離された腸炎ビブリオの解析を継続的 に行ってきた．2006 年に分離された腸炎ビブリオ 228 株の中に，従来報告のない O : K 血清型組み合わせを 持つ株が複数見られた．患者由来神奈川現象陽性株に ついては，既知の O : K 血清型の組み合わせが報告さ れ，まとめられている
１）が，今回新しい組み合わせ O1 : K36 を有する株が 5 株見つかった（分離日も分離した 個人も異なる）ので報告する．
方 法
関西空港検疫所で 2006 年に海外旅行帰国者から分 離された腸炎ビブリオについて，PCR で tdh，trh 遺 伝子（primer : TAKARA の VPD，VPR，VPS）の 存 在 お よ び 逆 受 け 身 ラ テ ッ ク ス 凝 集 反 応（KAP- RPLA：デンカ生研）による耐熱性溶血毒（TDH）産 生性，市販血清（デンカ生研）を用いた凝集反応で O : K 血清型を調べた．血清型 O1 : K36 を有する 5 株に ついては，新興流行株の特色の一つと考えられる ORF 8
２）の存在を確かめるための PCR（primer : 8S : 8A
２）），
及び Group-specific-PCR
３）（GS-PCR）（primer : gs-vp 1，gs-vp2
３））を行った．また，5 株が同一クローンで ある可能性を考えて Arbitrarily primed-PCR
４）（AP- PCR）（アマシャムファルマ シ ア：RAPD-PCR キ ッ ト）及びパルスフィールドゲル電気泳動
５）（PFGE : Not I digestion）を行った．
結 果
各 種 PCR の 結 果 を Table 1に ま と め た．O1 : K36 血清型を有する 5 株は全て TDH 産生株（PCR におけ る tdh 遺伝子陽性および RPLA キットによる TDH 産 生を確認した）で，遺伝子解析の結果，新興流行株の 特 徴 を 示 し た．ま た，AP-PCR（primer1〜6 の 6 種 類の primer を用いた結果，5 株はいずれも同一パター ンを示した），PFGE の結果（Fig. 1）より 5 株は同一 クローンであることが強く示唆された．
考 察
O3 : K6 をはじめとしていくつかの血清型（O4 : K 68，O1 : KUT 等）を有する新興流行株が報告されて いるが，今回分離した O1 : K36 血清型を有する腸炎 ビブリオもそれらの一つであると考えられた．今回の
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大阪大学微生物病研究所感染症国際研究セン
ター・病原微生物資源室 余 明順
松山 純子 他 472
感染症学雑誌 第82巻 第 5 号
Fig. 1 PFGE ofNotI-digested genomicDNAofV.parahaemolyticusO1 :K36 strains. Lane M :Molecularsize markers(BIORAD λ ladder), 1 : RIMD 22123040, 2 : RIMD 22123042, 3 : RIMD 22123048, 4 : RIMD 22123133, 5 : RIMD 22123267, 6 : RIMD 2210633
5 株が同一クローンであったことと，同血清型を有す る株は 2005 年分離株 229 株には見られなかった事か ら，この血清型が出現してそれほど時間が経過してい ないと推測されるが，感染推定国から考えてベトナ
ム・タイ周辺国に拡散しており，今後国内でも分離さ れることが予測される．
謝辞：菌株分離に多大な協力をいただいた関西空港検疫 所検査課の諸先生方および性状解析に協力していただいた 岡本公子氏に深謝致します．
文 献
1
）石橋正憲，太田建爾，島田俊雄，本田武司，杉
山純一，三輪谷俊夫，他：腸炎ビブリオ OK 血 清型組み合わせの現況．日本細菌学雑誌 2000；
55（3）：539―41.
2
）Nasu H, Iida T, Sugahara T, Yamaichi Y, Park KS, Yokoyama K, et al.：A filamentous phage associated with recent pandemic Vibrio para- haemolyticus O3 : K6 strains. J Clin Microbiol 2000；38（6）：2156―61.
3
）Matsumoto C, Okuda J, Ishibashi M, Iwanaga M, Garg P, Rammamurthy T, et al.：Pandemic spread of an O3 : K6 clone of Vibrio parahaemo- lyticus and emergence of related strains evi- denced by arbitrarily primed PCR and toxRS sequence analyses. J Clin Microbiol 2000；38
（2）：578―85.
4
）Williams JGK, Kubelik AR, Livak KJ, Rafalski JA, Tingey SV：DNA polymorphism amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers. Nucleic Acids Res 1990；18：6531―5.
5
）Iida T, Suthienkul O, Park KS, Tang GQ, Yamamoto RK, Ishibashi M, et al.：Evidence for genetic linkage between the ure and trh genes in Vibrio parahaemolyticus. J Med Microbiol 1997；46：639―45.
Isolation of Vibrio parahaemolyticus Having New Combination of O and K Serotypes from Travelerʼs Diarrheal Patients
Junko MATSUYAMA
１）, Myonsun YOH
１）& Takeshi HONDA
２）1)
Pathogenic Microbes Repository Unit, International Research Center for Infectious Diseases,
2)
