多発性硬化症におけるリンパ球亜分画の検討

原  著 〔東女医大誌 第64巻 第1号頁19∼26平成6年1月〕

多発性硬化症におけるリンパ球亜分画の検討

東京女子医科大学 脳神経センター       タ    ナカ

       田 中

神一層科学教室（主任：：丸山勝一教授）  ピサ    エ

 久 恵

（受付 平成5年9月7日） Lymphocyte Subset in Pat量ents with Multiple Sclerosis

      Hisae TANAKA

Department of Neurology（Director：Prof． Shoichi MARUYAMA）， Neurological Institute，        Tokyo Women’s Medical College   Multiple sclerosis（MS）is thought to be a chronlc autoimmune disease of the ceptral nervous system mediated by T cells specific for myelin antigens． Several abnormalities of lymphocyte subsets in the peripheral blood and cerebrospinal fluid of MS patients have previously been reported．   In this study， we determined lymphocyte subsets in the peripheral blood of definite MS patients and of age−matched healthy controls using direct immunofluorescence two・color flow cytometry． The percentages of T cell subsets in MS patients were also measured before and after steroid pulse therapy．   The results showed a decrease in CD4十CD45RA十Tcells in MS patients compared to healthy controls． There was no significant difference in CD5十Bcells in MS patients compared with the controls， but they were lower a week after steroid pulse therapy． HLA−DR十Tcells tended to be h圭gher in patients with MS than in the controls and statistically significantly decreased a week after steroid pulse therapy。   It appears that CD4十CD45RA十Tcells， CD5十Bcells and HLA−DR十Tcells reflect a mechanism of autoimmune abnormality and that CD5十Bcells and HLA・DR十Tcells are possible markers of the effects of stero重d pulse therapy．          緒「 言  近年，多発性硬化症（multiple sclerosis：MS）

は，T細胞を介し，ミエリンを抗原とした自己免

疫疾患であるといわれており1）2），種々のリンパ球

亜分画の異常が指摘されている．MS患者の末梢

血において，CD8陽性T細胞（サプレッサーT細

胞）3）4）やCD4CD45RA陽性T細胞（サプレッサー インデューサーT細胞）の減少5），CD4／CD8比の 上昇，CD4CD29陽性T細胞（ヘルパーT細胞）6）お

よびMLR−27）， Ta1陽性T細胞8）（活性化T細

胞），CD25（IL−2レセプター）陽性細胞，可溶性IL− 2レセプターの増加9）などが指摘されている．ま た，髄液では，自己抗体産生に関与するとされて いるCD5画面B細胞や10），活性化抗原とみなされ

ているCD69陽性T細胞の増加11）が報告され，免

疫抑制系の低下，賦活系の面心が推察されている．  MSの治療に関しては，ステロイドパルス療法， 免疫抑制薬などの効果が報告され12）∼18），特にステ ロイドパルス療法は，今日，MS急性増悪期の治療 として標準化されつつある．ツンパ球に対するス テロイドの作用機序については，ラットの胸腺細

胞において，DNA断片化を伴うアポトーシスを

誘導することが知られている19）∼21）．MS患者のス テロイドパルス療法前後でのリンパ球亜分画につ いて，Compstonら13）は，ステロイド投与後のCD8 の増加を指摘しているが，Kirkら14）は，投与前後

のCD4， CD8， CD45RA， Tac／IL2レセプターα鎖 （CD25）に変化はなかったとしている．また， Dur− elliら22）は，ステロイドパルス療法後に脳脊髄忌

中のCD8h正9hCDllblow陽性T細胞（サプレッサー

エフェクターT細胞）が増加したことを報告して

いる．しかし，ステロイドパルス療法前後でのリ ンパ球亜分画について，いまだ一定の見解は得ら れていない．

 そこで，今回，活動期MS患者のリンパ球面分

画について健常対照者と比較し，特に，ステロイ ドパルス療法前後でその動態を観察し，治療効果 判定における有用性について検討を行った．

       対象および方法

 1．対象

 MS患者群13例（男性3例，女性10例，平均年齢

31．4±2．7歳，Poserらの診断基準23）によりclini− cal de丘nite MS：9例， laboratory supported de且nite MS：4例）と年齢を一致させた健常対照 老14例（男性7例，女性7例，平均年齢31．7±3，4 歳）を対象とした．  2．方法

 MS患者および健常対照者より採取したヘパリ

ン加末梢血から，ファイコール比重遠心法により，

単核球を分離し，2％牛胎児血清添加リン酸緩衝

生理食塩水（2％FCS・PBS）で2回洗浄後，107コ口

mlに調製した．ヒトIgGでFcレセプターをブ

ロックした後，リンパ球膜抗原に対するHuores−

ceinおよびphycoerythrin標識モノクローナル

抗体（表1）を用い，4℃で30分間，二重染色を

した．2％FCS−PBSで2回洗浄後，フローサイト

メトリー（Pr面1e−2， EPICS）により各抗体陽性細 胞の出現率を測定し，全リンパ球に対する割合を 検討した．一部の項目では，さらに詳細に，亜分 画において占める割合を検討した．以下に検討し た項目を示す．

 1）ヘルパーT細胞とサプレッサー／細胞障害

性T細胞との比率であるCD4／CD8比

 2）分画早期あるいは胸腺での分化過程を免れ

たと考えられているCD4CD8陽性T細胞が全リ

ンパ球に占める割合

 3）サプレッサーT細胞と考えられているCD8

表1 抗体の組み合わせ FITC標識抗体 PE標識抗体 1 Control iMsIgG Coulter） Control iMslgG Coulter） 2 CD4 iT4 Coulter） CD8 iT8 Coulter） 3 CD4 iT4 Coulter）

CD45RA

i2H4 Cou玉ter） 4 CD45RO iUCHL・1ニチレ／イ） CD4 iNU−TH／1ニチレイ） 5 CD5 iNU−Tpanニチレイ） CD20 iB−／Coulter） 6 CD28 iKOLT−2ニチレイ） CD8 iT8 Coulter） 7 HLA−DR iL243 Becton・Dickinson） CD3 iT3 Coulter）

陽性CD28陰性T細胞の全リンパ球に占める割合

 4）前細胞障害性T細胞と考えられているCD8

CD28陽性T細胞の全リンパ球に占める割合

 5）T細胞への抗原刺激伝達時に共同作用する

副刺激シグナルのレセプターを有する，CD8品詞

CD28陽性T細胞が全リンパ球に占める割合

 6）サプレッサーインデューサーT細胞と考え

られているCD4CD45RA陽性T細胞が全リンパ

球に占める割合およびCD4陽性T細胞に占める

割合（CD4十CD45RA十／CD4十）

 7）ヘルパーT細胞とみなされているCD4

CD45RO陽性T細胞が全リンパ球に占める割合

およびCD4陽性T細胞に占める割合（CD4＋

CD45RO÷／CD4一十）

 8）活性化され，自己抗体産生を行うB細胞と

考えられるCD20CD5陽性B細胞の全リンパ球に

占める割合およびCD20陽性B細胞に占める割合

（CD20十CD5十／CD20十）

 9）活性化T細胞として知られるHLA・DR陽

性T細胞が全リンパ球に占める割合およびCD3

陽性T細胞に占める割合（CD3＋HLA−DR＋／

CD3＋）  以上を健常対照群とステロイドパルス療法前の

MS患老群で測定し，一元配置分散法（ANOVA）

を用いて検定を行った．また，MS患者群では，ス テロイドパルス療法（11例はメチルプレドニゾロ

ン1，000mg×3日間を1クールとし，1例はべタ

メサゾン100mg×3日間を1クールとした）前お

よび1週後の各抗体陽性細胞の動向を検討した．

経過を追跡しえた症例では，さらにパルス4週後

にも測定し，各々Wilcoxon signed・rankを用いて 検定した．  また，ステロイドパルス療法前後の各抗体陽性

細胞の変化とIgG indexの変化をPearson相関

係数を用いて検討した．       結  果

 1．各抗体陽性細胞出現率の平均値および標準

偏差

 MS患者群および健常対照群における各項目の

mean±SDを以下に示した．

 1）CD4／CD8比ではMS患者群は2．03±0．70，

健常対照群は1．72±0．72（以下この順）であり， 有意差（p；0．27）は認めなかった．  2）CD4CD8陽性T細胞は，1．09±1．18（％）と 0．78±0．82（％）で有意差（pコ0．43）は認めなかっ た．

 3）CD8陽’性CD28陰性T細胞は，9．60±

10．03（％）と6．45±5．95（％）で有意差（p＝0．31） は認めなかった．  4）CD8CD28陽性T細胞は，15．69±7．98（％） と18．59±5．58（％）であり，有意差（p＝0．27） は認めなかった．

 5）CD8陰性CD28陽性T細胞は，47．01±

8．37（％）と44．63±7．44（％）で有意差（p＝0．44） は認めなかった．

 6）CD4CD45RA陽性T細胞は，18．79±

4．97（％）と22．05±6．28（％）で有意差（p＝0．14）

は認めなかった．しかし，CD4十CD45RA十／

CD4十は，37．55±11．41（％）と48．04±12．17（％） で，MS患者群で有意に低下していた（p＝0．02）．

 7）CD4CD45RO陽性T細胞は，22．62±

8．63（％）と20．11±4．38（％），また，CD4十CD45 RO十／CD4十は，47．58±17．38（％） と45．48± 11．11（％）であり，有意差（各々p＝0．33，p＝0。70） を認めなかった．  8）CD20CD5陽性B細胞は，1．44±1．07（％） と1．67±0．94（％）1また，CD20十CD5十／CD20十 は，20．76±13．56（％）と25．60±7．89（％）でい ずれも有意差（各々p＝0．56，p＝0。26）は認めな かった．  9）HLA−DR陽性T細胞では8．84±7．19（％） 表2 全リンパ球に対する各抗体陽性細胞の割合  （％）の平均値および標準偏差 健常対照群 _MS患者群 P mean士SD mean±SD CD4／CD8 ！，72±0．72 2，03±0．70 0．27 CD4十CD8＋ 0．78±0．82 1．09±1，18 0．43 CD8＋CD28一 6．45士5．95 9．60±10．03 0．31 CD8十CD28＋ 18，59±5，58 15．69±7．98 0．27 CD8−CD28十 44．63±7．44 47，01±8．37 0．44 CD4十CD45RA十 22．05±6．28 18．79±4．97 0．14 CD4＋CD45RO十 20．11士4．38 22．62±8．63 0．33 CD20＋CD5＋ L67±0．94 1．44±1．07 0．56 CD3十HLA−DR十 5．74±4．05 8．84±7．19 0．17 80

§70

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0 「一一一 p＝0．02 

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o 健常対照群 MS患者群

図1 対照群とMS患者群におけるCD4＋CD45

 RA＋／CD4＋の検討 80

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      健1常対照群      MS患者群

図2 対照群とMS患者群におけるCD4＋CD45

 RO＋／CD4＋の検討  N．S．：Not signi丘cant．

コ口

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  言 「一一一一p＝0．26 δ「     N．S．

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e 健常対照群 MS患者群 図3 対照群とMS患者群におけるCD20十CD5＋／  CD20十の検討  N，S．：Not significant． 値は示さなかった（p＝0．50）（表3）．

 CD20陽性B細胞に対するCD20CD5陽性B細

胞の割合（CD20十CD5十／CD20十）は，20．76±

13．56（％）から1週後に13．46±6．13（％）へ有 意に低下し（p＝0．03），4週後でも同様に低下し 表3 CD4＋CD45RA＋／CD4＋（％）の推移   怨

婁ll

§・・

琴25

5 20

等 15 器 10

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「 p＝0．06  一一一一         〇     N．S．

8

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      健常対照群      MS患者群

図4 対照群とMS患者群におけるCD3十HLA−

 DR十／CD3十の検討  N．S．：Not significant． と5．74±4．05（％）（p＝0．17）であったが，CD3十

HLA−DR十／CD3十では15．32±10，31（％）と

9．42±4．6（％）（p＝0．06）で，MS患者群におい

て高値の傾向がみられた（表2，図1∼4）．

 2．MS患者群におけるステロイドパルス療法

前後の検討

 前述のごとぐ，MS群で健常対照群に比べて有

意差かあるいは2群間の差が大きい項目を中心に

検討を行った．

 CD4陽性T細胞に対するCD4CD45RA陽性T

細胞の割合（CD4十CD45RA十／CD4十）は，パル

ス前払37．55±11．41（％）からパルス1週後に

40．61±12．61（％）に上昇していたが有意な変動 Case パルス療法前 1週後率 4週後 治療効果 1 _{35．36 26．78 14．62} 2 40．04 31．70 39．27 3 12．60 21．10 4 _48．33 49．11 68．37 5 _{40．95 35．39 有 効} ．6 _{33．00 42．00 41．02} 7 _{28．54 52．86} 8 45．00 39．47 51．21 9 _{54．03 61．73 60．21} 10 24．10 33．41 11 49．72 55．11 26．12 12 33．65 53．36 無 効 13 _{42．83 30．45 25．20} ・：全MS患者群  有効群  無効群 p＝0．50， p＝0．76， p＝0．46． 表4 CD20＋CD5＋／CD20＋（％）の推移 Case パルス療法前 1週後＊ 4週後 治療効果 1 11．16 10．59 10．26 2 11．67 12．50 16．67 3 10．61 8．64 11．76 4 16．42 8．33 有 効 5 45．65 18．37 18．06 6 28．57 7 6．59 3．88 4．11 8 30．88 23．26 24．05 9 5．49 11．28 8．74 10 20．00 12．QO 11 18．80 20．00 無 効 12 43．24 10．18 17．70 ・：全MS患者群  有効群  無効群 p＝0．02， p＝0。02， p＝0．46．

表5 CD3＋HLA・DR＋／CD3＋（％）の推移 Case パルス療法前 」 1週後＊ _4週後 治療効果 1 11．01 6．85 9．45 2 5．69 5．58 10．36 3 23．63 10．61 4 _{5．87 3．02} 5 _{14．30 12．40 有 効} 6 18．68 17．05 17．52 7 17．37 14．54 8 _44．27 22．92 24．33 9 14．62 11．10 9．56 10 _{4．04 5．39 3．32} 11 11．86 13．15 12 12．06 8．51 無 効 13 15．75 7．39 7．34   40 § 35 §・・ 挙  25 着 ぐ 20 最 15 よ

8 10

  5

  0

躍

o o o ◎

：1

8

・：全MS患者群  有効群  無効群 p＝0．04， p＝0．01， p＝0．46． ている例が多く認められた（表4）．

 また，CD3陽性T細胞に対するHLA−DR陽性

T細胞の割合（CD3十HLA−DR十／CD3十）につい

ても15．32±10．31（％）から1週後に10．66±

5．46（％）へ有意に低下し（p＝0．04），4週後に も同様の傾向がみられた（表5）．  その他の各抗体陽性細胞についても治療前後で

検討を行ったが明らかな変動を認めたものはな

かった．  3．IgG indexとの関連

 さらに，CD4十CD45RA十／CD4÷， CD20十

CD5十／CD20十，CD3十HLA・DR十／CD3十のステ

ロイドパルス療法前後の変化とIgG indexの変

化（∠IgG lndex）について検討したが，これらの 間に有意な相関はみられなかった．

 4．ステロイドパルス療法有効群および無効群

における各項目の検討  次に，MS患老群13例について，ステロイドパル ス療法前後において，重症度を表すneurological

rating scale（NRS）を検討した＿姻RSが5点以

上改善した症例と，3点以上改善し，かつ自覚症

状の改善があった症例を有効群とし，NRSの変

23 健常対照群   MS有効群 MS無効群 星5 対照群およびステロイド有効MS群，ステロイ  ド無効MS群におけるCD3十HLA−DR十／CD3十の  検討  NS．：Not significant．

化が3点未満で自覚症状不変の症例を無効群とし

た．なお，ステロイドパルス療法後にNRSが悪化

した症例はなかった．

 有効群8例では，パルス1週後，臨床症状の改

善とともに明らかにCD20＋CD5／CD20＋の低下

を認めた（p＝0．04）．また，有効群9例において

CD3＋HLA−DR＋／CD3＋は，パルス1週後，臨床

症状の改善とともに有意に低下していた（p＝

0．01）しこれらはMS患者全体に比べてより顕著

であったが，無効群4例では一定の傾向は認めら

れなかった（表4，5）．また，CD3十HLA−DR十／

CD3＋のステロイドパルス療法前の値は，有効群

において健常対照群に比し，有意に高値を示して いたことが明らかになったが（p＝0．03）（図5）， その他の抗体陽性細胞では有意差はなかった．       考  察

 CD4CD45RA陽性T細胞は，機能的にはサプ

レッサーインデューサーT細胞と考えられてお

り，Morimotoらは全身性エリテマトーデスや進

行性MSにおいてのCD4CD45RA陽性T細胞の

選択的減少を報告している5）24）．また，Eoliら25）も

未治療の活動期MS患者での検討でCD4＋CD45

RA一／CD4＋CD45RA＋の高値を指摘している．

 今回の検討においても，健常対照群に比し，MS

患者群ではCD4十CD45RA十／CD4十が有意に低

下しており，これまでの報告に一致していた．し かし，MS患者において，ステロイドパルス療法前

後で検討したところでは明らかなCD4CD45RA

陽性T細胞の変動は見られず，ステロイドパルス

療法の効果との相関はなかった．前述のEoliら25）

の報告でも，CD4十CD45RA一／CD4十CD45RA十

の値は臨床症状の活動性と時；期的な関連がなかっ たとしている．CD45RAは， CD45（白血球共通抗

原）の1つのアイソフォームとして知られ，自己

免疫疾患におけるサプレッサーインデューサーの

マーカーとしての意義以外に，抗原未感作のナ

イーブT細胞から抗原刺激を受けたメモリーT

細胞へのアイソフォームスイッチングなどの細胞 分化における役割が論議されている26）．今回，

CD4十CD45RA十／CD4十がステロイドパルス療

法の効果と一致しなかったことについては，この

CD45RA分子の複：雑な動態が関与している可能

性が考えられた．  MSの活動期には，髄腔内で免疫グロブリン，特

にIgGの産生が充進ずることが知られてい

る27｝28）．さらに，直接IgG産生に関与するB細胞

の検討として，Mixら10》がMS患者の脳脊髄液中

でのCD5陽性B細胞の増多を指摘し， Linkら29） はミエリン抗原に対する免疫グロブリン産生細胞 の存在を指摘している．また，Gambiら6）はMS患

者の末梢血で，B細胞の活性化の後に減少すると

されているB2抗原のマーカーであるCD21の減

少を報告している．  さらに，慢性関節リウマチ30），シェーグレン症候

群31）等の自己免疫疾患においてもCD5陽性B細

胞の増加が報告され，また，Sthoegerら32）は慢性

リンパ球性白血病（CLL）でのCD5陽性B細胞の

自己抗体産生について言及している．  今回の検討では，末梢血において，健常対照群

とMS患者群間で， CD20＋CD5＋／CD20＋に有意

差は認めなかった．Gadolら33）は，健常者のCD5

陽性B細胞は機能的には通常のB細胞と同様で，

CLL患者や骨髄移植患者のCD5陽性B細胞との

間には機能的差異があることを示唆している．一

方，ステロイドパルス療法後のMS患者の

CD20＋CD5＋／CD20＋は，言値に比べ1週後に有

意に低下していた．さらに，ステロイドパルス療 法有効群でより明らかであったことから，CD20＋

CD5＋／CD20＋はステロイド治療によるMSの

活動性が抑制されたことを反映している可能性が 示唆された．しかし，今後，自己免疫疾患におけ

るCD20CD5陽性細胞の機能について，さらに詳

細に解明する必要があると思われる．

 ヒト主要組織適合抗原クラスII分子である

HLA−DRは，主に抗原提示細胞に認められるが，

抗原刺激を受け，活性化したT細胞上にも発現す

ることから，T細胞の活性化マーカーとして知ら

れており34），活動期のGraves病35），円形脱毛症36） など自己免疫異常の関与が示唆されている疾患で の上昇が報告されている．一方，Fredriksonら37） は，MSについて，増悪期10例，寛解期16例，慢性

進行性4例の末梢血中でのHLA−DR陽性単核球

の割合を検：熟し，健常対照群との間に有意差がな かったとしている．しかし，彼らの対象には約半 数の寛解期の患者が含まれており，この点におい

て，前述の2疾患での検討や本研究と異なってい

る．また，MS患者の末梢血単核球中の他の活性化 マーカーの報告として，Golazら7）はMLR−2の上 昇を，Ha且erら8）はTalの増加を指摘している．ま た，Perrellaら11＞は髄液中のCD69抗原陽性細胞

の増加を挙げておりMS患者には多様な活性化

T細胞の存在が示唆されている．

 今回の検討において，CD3十HLA−DR十／

CD3＋は， MS患者群で健常対照群に比し高値の

傾向を認めた．またこのなかで，ステロイド治療

有効群では治療前のCD3＋HLA−DR＋／CD3＋の

値が健常対照群と比較し，有意に高値を示してい た．さらに，ステロイドパルス療法後には，対照

群のmean＋2SD以下には至らなかったが，有意

な低下がみられ，特にそれがステロイドパルス療 法有効群で顕著であった．以上から，CD3＋HLA・

DR十／CD3十は疾患の活動性およびステロイドパ

ルス療法による効果の予測と判定に有用なマー

カーと考えられた，

 HLA−DRを発現するT細胞は，抗原刺激など

により，活性化され，活発に分裂を繰り返してい る細胞と考えられている．ステロイドパルス療法

は．前述のごとくDNA断片化などT細胞のアポ

トーシスを誘導することから，HLA・DRを表現し

分裂しているT細胞がより選択的に薬理作用を

受けたと推察される．       結  論

 MS患者における各種リンパ球亜分画の検討を

行った．

 CD4十CD45RA十／CD4十は， MS群で，健常対

照群に比べて有意に低下しており，疾患との関連 が示唆されたが，ステロイドパルス療法による活 動性の抑制を反映する変化はみられなかった．

 また，CD20十CD5十／CD20十は，ステロイドパ

ルス療法後に臨床症状の．改善とともに有意な低下 を示し，治療効果判定に有用と考えられた．

 CD3十HLA−DR十／CD3十は，ステロイドパル

ス．ﾃ法後に有意な低下を．示すとともに，ステロイ ドパルス療法有効群の呼値は健常対照群に比べて 高値であったことが明らかになった．

 以上の結果よ．り，CD20十CD5十／CD20十と

CD3十HLA−DR十／CD3十とは，ステロイドパル

ス療法の効果の予測および判定に有用．と考え．られ た．

 MSの活動性や予後を検討するうえで，これら

の抗体陽性細胞を組み合わせて末梢血および髄液 での検討を行うことによって，より詳細な免疫学 的評価が可能になると思われた．  稿を終えるにあたり，御指導，御校閲を賜りました ：丸山勝一主任教授ならびに竹．宮敏子教授に深謝いた します．さらに，終始，直接御指導を頂き．ました太田 宏平博士に御礼申し上げます．  本論文の要旨は，1993年q月，第34回日本神経学会 総会において報告した．       文  献  1）Waksman B， R臼ynolds W：Multiple sclerosis    as a disease of immune fegulation， Proc Soc    Exp Biol Med USA 175：282−294，1984  2）Haner D， Weiner H：Tcells in multiple    sclerosis and inHammatory central nervous    system diseases． Immunol Rev 100：307−332，    1987  3） Ilonen J， Surcel M， J乱gerroos I｛ et al：    T−1ymphocyte subsets de丘ned by double   imm．uno且uorescence in multiple sclerosis． Acta   Neurol Scand 81：128−130，1990 4）Bach M，．Martin C， Cesaro P et al：Tcell   subsets in multiple sclerosis． A longitudinal   study．of exacerbating・remitting cases．． J Neuro−   immunol 7：33｝343，1985 5）Morimoto C， Ha血er D， Weiner H et a1：   Selective loss o．f the suppressor−inducer T−cell   subset in progressive multiple sclerosis． N Engl   JMed 316：67−72，1987 6）Gambi D， Porrini A， Giampietro A et a1：   CD21十（B2 antigen十）． cell decrement an4   CD4十CD29．十（helper・inducer）cell increment   suggest an activati6n of cell immune reactivity   in mu｝tiple sclerosls． J Neuroilnmunol 33：   97−102， 1．991 7）Go董az J， Steck A， M．oretta L：Activated T   lymphocytes in patients with multiple sclerosis．   Neurology 33．：137｝1373，1983 8）Haf量er D， Fox D， Manning M et al：In vivo   activated T lymphocytes in the peripheral   blood and cerebrospinal fluid． of patients with   multiple sclerosls． N Engl J Med 3．12：   1405−1411， 1985 9）Bansil S， Tmiano R， Cook SD et al：Serum   soluble inter王eukin−2receptor level．s in chronic   progressive， stable and steroid−treated multiple   sclerosis． Acta Neurol Scand 84：282−285，1991 10）Mix E， Olsson T， Correale J et al：Bcells   expressing CD5 are increased in cerebrospinal   Huid of patients with multiple sclerosis． Clin   Exp Inlmunol 79：21−27，1990 11）Perrella O， Carrieri P， Mercato R et al：   Markers of activated T lylnphocytes and T cell   receptor gamma／delta十in patlents with multi−   ple sclerosis． Eur Neurol 33．：152−155，1991 12）Milligan NM， Newcombe R， Compston DAS：．   Adouble−blind controlled trial of high dose   methylprednisQIQne in pat三ents with multiple   sc玉erosis：1． Clinical effects， J Neurol Neuro−   suτg Psychiatry 50：511−516， 1．987 13）Compston DAS，．Milligan NM， Hughes PJ et   al：Adouble−blind controlled trial of high   dose methylprednisolone in patients with multi−   ple sclerQsis：2． Laboratory results． J Neurol   Neurosurg Psychiatry 50：517−522，1987 14）Kirk P， Compston DAS：The ef匠ect of meth・   ylprednisolone on lymphocyte phenotype and   function in patients with m．ultiple sclerosis． J   Neuroimmuno126：1−8，1990 15）Dowling PC， Bosch VV， Cook SD et al：   Possible beneficial effect of high・dose intra一

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